超敏乙肝詳解

1、附件二項目編號口上海市醫(yī)療技術臨床應用能力技術審核申請書技術名稱：高靈敏度HBVDNAW毒載量檢測（PCR法）申請單位：上海市普陀區(qū)中心醫(yī)院主管部門：上海市普陀區(qū)衛(wèi)生局申請時間：2015年J月9日上海市醫(yī)學會二0年月申請須知一、本申請表的內(nèi)容均為真實信息；二、嚴格按照醫(yī)療技術臨床應用管理辦法的有關規(guī)定，建立和完善技術應用的規(guī)章制度和操作規(guī)范，確保醫(yī)療安全；三、注意病例資料的整理和分析，及時總結臨床應用信息，按期接受評估；四、如應用期間發(fā)生醫(yī)療技術臨床應用管理辦法第四十一條所規(guī)定情形的，立即暫停臨床應用并上報市衛(wèi)生局；五、如應用期間發(fā)生醫(yī)療技術臨床應用管理辦法第四十四條所規(guī)定情形的，報請市衛(wèi)生局

2、決定是否需要重新進行醫(yī)療技術臨床應用能力技術審核。六、申請的醫(yī)療技術距上次同一醫(yī)療技術未通過臨床應用能力技術審核時間未滿12個月的不得申請。項目負責人閱知并簽章日期填表說明一、本市轄區(qū)內(nèi)凡申請醫(yī)療技術臨床應用的醫(yī)療機構，均應填報本表。二、申請書各項內(nèi)容，必須實事求是，內(nèi)容真實，表達要明確、嚴謹，字跡要清晰易辨。三、所有填寫入表格的技術人員必須是取得執(zhí)業(yè)資格，經(jīng)衛(wèi)生行政部門注冊在本單位的在編或正式聘用人員。四、本申請書一式八份，用A4紙打印。五、電子版申請書一份（刻錄成光盤）。六、本申請書應附如下資料：1. 醫(yī)療機構執(zhí)業(yè)許可證副本及其復印件（加蓋單位公章）2. 醫(yī)療機構醫(yī)學倫理審查報告（附：倫理

3、委員會成員姓名、專業(yè)、職務、職稱等情況）3. 該技術的相關管理制度和風險防范預案4. 與本項目相關的醫(yī)療器械或藥品注冊證書、經(jīng)營廠商營業(yè)執(zhí)照及經(jīng)營許可證復印件（加蓋公司及醫(yī)療機構公章）5. 國內(nèi)外有關該項技術研究和使用情況的檢索報告及技術資料6. 衛(wèi)生行政部門要求的其他相關文件。七、項目編號由上海市醫(yī)學會填寫。、醫(yī)療機構基本情況名稱上海廿普陀區(qū)中心醫(yī)院性質，綜合性醫(yī)院口?？漆t(yī)院其它：醫(yī)院等級三4及乙等其它：總占地面積27163平方米床位數(shù)1000張在編人員1352人單位地址上海市蘭溪路164號郵政編碼200062醫(yī)療機構主管部門普陀區(qū)衛(wèi)生局醫(yī)療機構聯(lián)系人聯(lián)系電話（手機

4、目聯(lián)系人康向東聯(lián)系電話（手機子郵箱pzxywk傳應診療科目登記情況HBVDNA定量檢測相應科室設置情況檢驗科分為：生化室、免疫室、細菌室、分子生物學室、臨檢室（門診、急診）二、申請單位相關學科基本情況（一）項目負責人姓名康向東性別男出生年月1959.2所在科室檢驗科執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格證書編號畢業(yè)學校上海交通大學醫(yī)學院學歷博士學位博士專業(yè)檢驗專長腫瘤免疫工作年限29相應技術工作年限12職稱主任技師獲得職稱時間20041 .何時何地開始從事本項目的專業(yè)工作2003年上海市普陀區(qū)中心醫(yī)院檢驗科2 .本項目專業(yè)培訓（進修）情況時間地點指導醫(yī)師操作例數(shù)參與

5、例數(shù)其他需說明情況個人專業(yè)工作簡述含主要科技成就:康向東，男，主任技師，醫(yī)學（內(nèi)科學）博士學位，碩士生導師。現(xiàn)任上海中醫(yī)藥大學附屬普陀醫(yī)院檢驗科主任兼實驗中心副主任，上海市核學會理事，上海醫(yī)學會檢驗分會委員、上海市免疫學會第十屆理事會免疫技術專業(yè)委員會委員，上海市科委2011年度“科技創(chuàng)新行動計劃”生物醫(yī)藥領域產(chǎn)學研醫(yī)合作項目專家委員會委員，檢驗醫(yī)學編委會委員。已在美國國立生物技術信息中心GenBank數(shù)據(jù)庫注冊7條新基因。主要從事自身免疫性疾病及腫瘤的發(fā)病機理、診斷及實驗治療的研究，在腫瘤標志物的篩選、抗腫瘤抗體的制備上已取得初步研究成果。曾今主持完成了國家自然科學基金項目、衛(wèi)生部科學研究課

6、題，上海市科委重點項目等多項課題研究，目前在研課題為上海市科委課題。長期從事分子生物學、免疫學和細胞生物學研究。近期發(fā)表論著30余篇，SCI論文4篇。擔任系統(tǒng)性紅斑狼瘡及實用風濕病學等書的編委。帶教碩士研究生5名，主要研究方向為中藥在腫瘤治療中的作用機制研究，其中一篇獲得上海市中醫(yī)藥大學優(yōu)秀畢業(yè)論文二等獎。其他近三年內(nèi)是否發(fā)生與同類技術有關的醫(yī)療事故：是（）否（V）（二）學科人員學歷結構總計人數(shù)博士碩士本科?？萍耙韵?0120人員情況姓名性別年齡學歷職稱專業(yè)從事本專業(yè)年限康向東男56博士教授免疫學12吳蓉女45本科主任技師微生物學23鄭瑾女42本科副主任技師免疫學20相芥芥女28碩士技師分子生

7、物學3（三）項目所在科室的專用設備、設施及工作基礎場所情況獨立病區(qū)_個獨立病床張其他場所情況（包括專用實驗室等）場所名稱面積（平方米）上海臨床檢驗中心批準的臨床基因打增檢測實驗室120專用設備情況設備名稱型號及產(chǎn)地臺數(shù)必備設備全自動核酸檢測工作站QIAsymphonyRGQ,德國1套應有設備采血管離心機目刖已開展向類技術應用情況已開展項目（具體名稱）開展時間（年）工作量（例/年）手術成功率（%）生存率（%）HBVDNA12000三、開展該項技術的目的、意義和實施方案（一）目的和意義（需包括醫(yī)院的總體業(yè)務量與此項技術相關醫(yī)療需求等）：1、實施項目的意義：（1）項目背景及意義中國是乙型肝炎高發(fā)區(qū)，

8、根據(jù)衛(wèi)生部2002年統(tǒng)計資料顯示，我國乙型肝炎的現(xiàn)患率為277/萬，是美國的40多倍（年發(fā)病率為95/萬）。流行病學調查表明，我國至少有8億人感染過乙型肝炎，人群中的乙肝表面抗原的攜帶率高達10.34%,即約有1.3億人為乙肝病毒攜帶者，幾乎占全世界總數(shù)的一半，這些乙肝病毒攜帶者中的四分之一最終將發(fā)展成慢性肝炎、肝硬化或原發(fā)性肝癌。全國1200多萬的慢性肝炎病人中，每年死亡人數(shù)達30萬之多，其中約半數(shù)為肝癌。在傳統(tǒng)的慢性乙型肝炎?B療中，通常以HBVDNA<2,000IU/ml作為治療結束的標準之一，在停藥以后，往往會出現(xiàn)病毒反跳的狀況，并沒有真正達到預期治療的效果，同時也容易導致病毒變

9、異和耐藥的發(fā)生。由于受常規(guī)的HBV-DNA檢測靈敏度所限，無法真正反應治療終點病人的狀況。慢性乙型肝炎的治療急需要一個更靈敏的病毒載量檢測方法，用于確定治療的終點，最大程度降低治療后病毒反跳以及發(fā)生變異耐藥的可能。（2）項目需求A.臨床需求：“329n=250A HBV DNA 濃度越低.藥物更容易應答.治療效果a）高靈敏度HBVDNA定量檢測對抗病毒治療的預后監(jiān)測：2001-2005年，不斷有學者在肝病專業(yè)雜志中發(fā)表文章，指出慢性乙肝藥物治越好.耐藥率亦更低。*LaiCL,etal.Hepatology2005;42(suppl1):232AW33A(Abstract92)作者將HBeAg(

10、+)、經(jīng)LdT或LVD治療24周時不同HBVDNA水平的患者在52周時做了四項評估，從上圖可以看出：病毒濃度：24周時HBVDNA濃度<300copies/ml時，在52周時有91%的病人仍然維持在<300copies/ml，但是隨著濃度區(qū)間的升高，在52周HBVDNA濃度能夠下降到300copies/ml的病人比例卻逐漸減少，尤其24周濃度高于104copies/ml的病人只有6%f歸夠下B至300copies/ml以下；HBeAg轉換：情況與24周時HBVDNA的濃度有顯著相關性，濃度越低，轉陰比例越高。<300copies/ml時，有約47%W人HBeAg轉陰，濃度&g

11、t;104copies/ml時，只有約5%W人的HBeAg轉陰；ALT復常：24周時濃度越高，ALT復常率越低；病毒反彈：24周時病毒濃度低于300copies/ml的病人只有1%發(fā)生反跳，隨著濃度區(qū)間的上升，反跳率逐漸升高，當濃度>104copies/ml時，反彈率達到14%。綜合以上數(shù)據(jù)，可以看出，治療24周時，如果病毒載量越低(<300copies/ml),病人的抗病毒治療預后效果越好。b)高靈敏度HBVDNA定量檢測在抗病毒治療過程中對耐藥突變的預防：在慢性HBAa-positiv«patients (n=159BO -64<200 <3 log &l

12、t;4 log >4 logHBV DNIA level at week 24, copies/mL阿德福韋144周耐藥vs 48周病毒載量HBV DNA lev«l at week 48n copies/mL乙肝治療過程中最大的難題是耐藥的產(chǎn)生,而與治療耐藥相比，預防耐藥則顯拉夫定明月耐藥行冽周病赤餞董得尤為重要?？焖僖种撇《緩椭浦敛豢蓽y水平，會有效降低耐藥的發(fā)生。*YuenMF,etal.Hepatology2001;34(4):785-791*LocarniniS,etal.JHepatol2005;42(Suppl2):17(Abstract36)研究對24周病毒載量不

13、同濃度分布的HBeAg陽性病人進行跟蹤，發(fā)現(xiàn)在第29個月時，濃度低于檢出限(<200copies/ml)的病人耐藥發(fā)生率只有8%,而濃度高于104copies/ml的病人發(fā)生耐藥的機率高達64%。研究同時對48周病毒載量1000copies/ml分界的HBeAg陰性病人隨訪，發(fā)現(xiàn)在144周時耐藥率分別為6%(<1000copies/ml)和49%(>1000copies/ml)。結果表明，抗病毒治療后病人體內(nèi)病毒濃度越低，發(fā)生耐藥的機率越低。c)高靈敏度HBVDNA定量檢測對肝硬化及肝癌的風險評估：2006年，一項前瞻性研究，跟蹤調查了臺灣地區(qū)從1991年到2004年，大約3

14、600名HBsAg-positive的乙肝感染者，分析了HBVDNA,HBeAg,ALT等一系列指標，發(fā)現(xiàn)HBVDNA的水平與肝硬化和肝癌發(fā)生的風險顯著相關，是最具有價值的指標，且HBVDNA水平越低，則肝硬化和肝癌風險越低。HBVDNA基線肝硬化相對風險值肝癌相對風險值(copies/ml)(n=3582)(n=3653)<3001.01.0300-9.9x1031.4(0.9-2.2)1.1(0.5-2.3)41.0-9.9x102.5(1.6-3.8)2.3(1.1-4.9)51.0-9.9x105.6(3.7-8.5)6.6(3.3-13.1)，一，一6>1.0x106.5

15、(4.1-10.2)6.1(2.9-12.7)1.IloejeUHetal.Gastroenterology.2006;130:678686.2.ChenCJetal.JAMA.2006;295:6573.d)高靈敏度HBVDNA定量檢測對抗病毒治療終點的確認：2007年由美國斯坦福大學和全球多個醫(yī)學院和肝病研究中心共同制訂了“核昔類藥物治療慢性乙型肝炎路線圖”，發(fā)表在臨床腸胃及肝臟病學雜志，強調了：定期檢測血清HBVDNA是評價治療療效的基礎定義了不同治療應答和監(jiān)測時間點(完全應答為HBVDNA僉測為陰性(<60IU/ml)高靈敏HBVDNA定量檢測試劑對于治療評估具有重要的臨床價值1

16、9乙肝曙磐學合作盥普?學叁(AASLD)治打指南"The primary aim of antiviral therapy should be to f白due白a門d maintain 如白rum HBV 口琳 Ht，the lowest 口白呂甘ibl號 1匕丫已1片慢性乙肝治療 的總體目標是 最大限度地長 期抑能HB% 減輕肝細胞炎 癥壞死及肌纖 維化，延緩和 減少肝臟失代 償、肝硬化、 HCC及其并發(fā) 癥的發(fā)生The primary airn cf chronic hepat i t i s B treatment i s to 口日 nnanently ssu口口res m

17、 HEV 了金口 Licatiori.A maintained v irological remi sslon （und白t整ct&bl 它HBV DPI伊匕 a sensitive PCR assay） under longterm antiviral therapy in HBeAg- positive 隨著國際上慢性乙型肝炎(CHB)治療手段和檢測技術的不斷發(fā)展，以及相關臨床研究的不斷深入，高敏的HBVDNA定量檢測在治療預后和藥物療效評價方面的臨床價值被越來越多的臨床醫(yī)生所重視，并被相繼寫入了美國和歐盟的慢性乙型肝炎治療的指南，用于指導個體化的治療方案。在國內(nèi)，越來越多的臨床醫(yī)

18、生也開始重視高敏HBV病毒載量檢測的臨床價值。以上關于慢性乙肝治療指南中均指出：治療慢性乙肝的目標是持續(xù)性抑制HBV病毒的復制，直至HBVDNA水平減少到未檢出(高敏熒光定量PCR法)。2、醫(yī)院現(xiàn)有總體業(yè)務量目前我院常規(guī)乙肝DNA檢測每月有800例，其中低于檢測水平(500IU/ml)即當前意義的“陰性”樣本約占整體樣本的2030%左右，這部份樣本都需要通過更高敏感性的檢測試劑進行測定，以幫助判定這些樣本中有多少可以滿足臨床指南要求。2012年6月份的中華人民共和國醫(yī)藥行業(yè)標準YY-T1182-2010核酸擴增檢測用試劑盒規(guī)定了需要使用全程參與的內(nèi)標、對核酸進行提取和純化、要求加樣體積不少于2

19、0ul/反應體積不低于40ul的要求。2013年5月發(fā)布的乙肝定量檢測試劑注冊指導原則也明確了高靈敏HBVDNA檢測試劑的檢測下限不得高于30IU/ml。這些要求的提出將高靈敏度HBV檢測的平臺提升到一個前所未有的水平。由于新行業(yè)標準提出HBVDNA核酸需要經(jīng)過提取和純化才能夠被使用，且檢測下限不能高于30IU/ml,這意味著傳統(tǒng)的煮沸方法已不再適用。目前核酸純化的方法主要有硅膠膜柱提取法和磁珠吸附法，這兩種方法相比較煮沸法而言，操作步驟更為復雜，一方面增加了人工操作的難度，耗時較長，另一方面也容易出錯并導致污染的機率增加，考慮到報告的及時性和結果的準確性、重復性，需要采用全自動方案來進行高靈

20、敏度乙肝病毒的檢測。（二）實施方案：1、從臨床應用的角度而言，綜合2007年由美國斯坦福大學和全球多個醫(yī)學院和肝病研究中心共同制訂了核昔類藥物治療慢性乙型肝炎路線圖：2009年美國肝病研究學會（AASLD）,2012年亞太地區(qū)肝病研究協(xié)會（APASL）,2012年歐洲肝病學會（EASL）發(fā)布的慢性乙肝治療指南，我室計劃在以下幾個節(jié)點對病人實施高靈敏度HBVDNA定量檢測：抗病毒治療第24周，用于判定治療的應答情況及后續(xù)處理方案。對常規(guī)HBVDNA檢測結果為“小于檢出限”的樣本進行復測，用于對病人樣本進行精確定量，幫助對后續(xù)的HBeAg轉換、病毒耐藥、ALT復常進行預后。對治療結束后的病人進行動

21、態(tài)監(jiān)測，提前預警病毒的反跳。2、從操作層面來看，以目前的標本量情況，每周開展1-2次檢測，每次檢測時，直接將病人的原始采血管離心后推送到全自動核酸提取工作站上，機器會自動進行核酸的提取及體系構建，隨后人工把反應管安放到熒光定量PCR儀中進行檢測。每次檢測都需要帶上陰性對照品、弱陽性室內(nèi)質控品、強陽性室內(nèi)質控品、四個定標的標準品，所有這些樣品都需要經(jīng)歷與臨床標本一致的提取和檢測過程。四、該項醫(yī)療技術的基本概況（衛(wèi)生行政部門公布的技術目錄內(nèi)的技術除外）（一）技術路線（包括技術方法、所采用的儀器設備及技術的科學性等）：1 .技術方法：本項目采用磁珠法核酸純化技術、PCR熒光探針法、內(nèi)標技術，用于對臨

22、床血清和血漿中乙型肝炎病毒核酸（DNA）的定量檢測。其中核酸提取采用磁珠法核酸純化技術實現(xiàn)病毒核酸的提取及純化。樣本中加入蛋白酶使病毒裂解并將病毒DNA釋放出來，磁珠表面包裹有一層二氧化硅，二氧化硅在高離液鹽條件下牛I異性吸附核酸DNA,接著通過洗滌步驟有效去除二價陽離子和蛋白質等PCR反應抑制物，最后用洗脫液（低鹽）將病毒DNA從磁珠上洗脫下來，完成純化。經(jīng)過純化的病毒DNA不含蛋白質、核酸酶和其他雜質。檢測分析采用臨床上應用最為成熟的熒光定量PCR法。通過PCR反應擴增HBV基因組目的片段，擴增反應同時將特異性熒光探針水解而釋放發(fā)光基團，通過檢測及分析自由發(fā)光基團受激發(fā)產(chǎn)生的熒光信號可實現(xiàn)

23、對HBV病毒DNA的定量檢測。操作過程中，將內(nèi)對照參入到每個樣本中，通過內(nèi)對照對整個工作流程進行監(jiān)控，包括病毒核酸純化步驟、PCR反應體系構建步驟、核酸擴增與檢測步驟等，可有效防止產(chǎn)生假陰性檢測結果。2 .設備：QIAsymphonySP/AS全自動樣本處理工作站：可實現(xiàn)全自動病毒核酸純化、PCR反應液配制及上樣Rotor-GeneQ熒光定量PCR儀：實現(xiàn)PCR擴增3 .先進性、科學性：I自動化實現(xiàn)核酸提取和PCR反應體系構建，減少人為誤差，提高核酸純度 標準化的工作流程，消除了檢測平臺差異導致的結果偏差 提供從樣本到結果完整解決方案，實驗結果實現(xiàn)可靠溯源 原始樣品管直接上機，節(jié)省時間I預裝試

24、劑盒，減少人為操作，防止交叉污染 最低檢出限：20IU/ml,符合新的行業(yè)標準 試劑盒配備內(nèi)標，全程監(jiān)控核酸純化、擴增及檢測，可有效防止假陰性4 .性能指標：適用樣本類型：血清、血漿上樣量：200ulI最低檢測限：20IU/ml 線性范圍：40-1.1E8IU/mlI可檢測基因型：A-H,8個基因型I精密度CV:<5% 適用平臺：QIAsymphonyRGQI通量：一次運行72份檢測，7小時完成144份檢測結果（二）該項技術的國內(nèi)外應用情況（包括該項技術在國內(nèi)外的應用時間、范圍、例數(shù)及獲得相關監(jiān)督管理部門的準入情況）I臨床基因擴增檢驗技術早在2009年已被衛(wèi)生部列為醫(yī)療二類技術目錄中，因

25、此在中國應用已非常成熟。I超敏乙肝檢測的項目，早在2007年由美國斯坦福大學和全球多個醫(yī)學院和肝病研究中心共同制訂了“核昔類藥物治療慢性乙型肝炎路線圖”后各大指南就已經(jīng)要求乙肝檢測限需實現(xiàn)高精度，如2009年美國肝病學會就指出：清除HBV的診斷標準其中之一，是采用敏感的PCR試劑，HBVDNA未檢出； 中國在2013年國家衛(wèi)生計生委關于印發(fā)醫(yī)療機構臨床檢驗項目目錄中，就將高敏度乙型肝炎病毒DNA定量檢測列入了該目錄中。Mn i ttc-nIWliBElftt««Mfflztuxa£131電，ttfffundAA>ItWElMAD'J ” “ '

26、;ClfflNIMM4*工&tl中華人民A和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會一 Nation卸 Heaflh arnd Family Plwiiwig 6mm49ion 卅 w Poafrie1 Republic Off 1cllmafiiWt：f + DHfl i| rimi htbtfliHriDI-P生計生基JEF琲費用M網(wǎng)發(fā)出檢機%111錄刈M版J -*lili|l.|b|SBn：I 1 Eal'mitat JHULi111£版原20L3 9If芾看,Fi附，克鞘/工生h'Lj 衛(wèi)士計生專：-備川生/下世異川衛(wèi)生日為詁點鬟語瓶成物肋次F,構* t厭，評L種曲

27、出*勢*管理胭打衛(wèi)去戲 ；MMI年號5，良里雄杷專家甘麗年蟲布的醫(yī)H機構性或世帽SFIFIW送卜/博訐.心中/ 幽/乩的性出檢tut月目錄t劭碑荒】，tea st r生計生£Htt«nEirE目f極3 mit處你力.自*h執(zhí)療，息衛(wèi)生篙印龍的長擰利村第為帶管好nn京t :已內(nèi)發(fā)二%： IB0 弘 HltRt-SLFiUff巾劃的同屬國園E近看愧就出ft珀和衛(wèi)豐蓄翰床H總中心.身躥和.!王王 1:'Ll.Hliaik1高昭物炎睛痛鯽幽鮮檢測za肝炎病翡因分型勃Z型肝炎艇前山變熊泅一乙型肝炎痛鄙HMYMg變異檢斑乙型肝氏病毒iHM核小區(qū)啟動子（?。┳凈ㄍ隯型布腦基因黑瞅

28、一丙型肝霹毒網(wǎng)撼護增定性威一丙跚炎耦耐核窗護增定鱷澧:!£生訃生費初福日觸H（三）適應癥：1 .慢性乙型肝炎抗病毒治療第24周病毒學完全應答狀態(tài)（HBV-DNA<60IU/ml）的確定：以評估抗病毒藥物的療效和選擇正確的后續(xù)治療方案。2 .慢性乙型肝炎抗病毒治療白終點判定：依據(jù)HBV-DNA定量結果不可測（高敏PCR方法）來判定患者停止治療。3 .慢性乙型肝炎抗病毒治療的預后：對常規(guī)HBVDNA檢測結果為“小于檢出限”的樣本進行復測，用于對病人樣本進行精確定量，幫助對后續(xù)的HBeAg轉換、病毒耐藥、ALT復常進行預后。4 .慢性乙型治療結束后期的動態(tài)監(jiān)測：及時發(fā)現(xiàn)低水平HBVD

29、NA病毒的突破和反彈?，F(xiàn)有國內(nèi)傳統(tǒng)乙肝DNA檢測的試劑盒最低只能檢測至500-1000IU/ml,無法真正確定治療治療第6個月病毒學完全應答狀態(tài)（HBV-DNA<60IU/ml）和準確判定治療終點和停藥時機，從而使患者耐藥及復發(fā)的風險增加。用該方法監(jiān)測乙肝DNA濃度在1000IU/ml以下的病人用藥后的療效評估，確定慢性乙肝治療達到真正終點。（四）禁忌癥:無（五）不良反應:無（六）該項技術的療效判定標準及評估方法：1 .判定標準：1）內(nèi)標：從提取開始向每個樣本中加入大自然中不存在的、與HBVDNA目標序列相近似的一段基因序列，競爭性的參與核酸提取、純化、加樣和擴增的整個過程，監(jiān)測并防止擴

30、增結果假陰性的發(fā)生。2）室內(nèi)質控：每次實驗中加入相同批次的陰性對照、弱陽性質控、強陽性質控，三個質控品結果均需要符合質控體系結果要求。當其中某一個結果不符合時，需要暫停發(fā)放報告，并對實驗體系進行檢查與確認，解決問題后重新檢測。3）室間質評：每年參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心或者上海市臨床檢驗中心組織的兩次室間質評，結果達標2 .評估方法：參考上海市臨床檢驗中心的新項目申請要求，驗證包括：正確度、靈敏度、批內(nèi)精密度、批間精密度、檢測下限、線性范圍等。1）精密度：a）實驗方案：批內(nèi)和批間精密度：取兩個臨床樣本（5次方與3次方），實驗前確認儀器運轉正常，質控在控。批內(nèi)精密度為一天內(nèi)在儀器上重復檢測20次；批

31、間精密度為每次在儀器上檢測5次，4個工作日完成，上述實驗均保留原始數(shù)據(jù)，并計算SD和CV值。b）結果判斷：批內(nèi)精密度v10%,批間精密度CV值v15%,則認為該項目達到檢測要求。2）正確度（三選一）a）方法學比對實驗方案：取20份其他醫(yī)院檢測過的樣本，重新提取檢測，將檢測結果與其他醫(yī)院的數(shù)據(jù)進行比較。結果判斷：如果兩樣本檢測結果對數(shù)值的差異在一個LOG值范圍內(nèi)，80%的樣本符合則認為該項目正確度符合要求。b） 對已知靶值物質的檢測（室間質評樣本）實驗方案：以最近兩次參加衛(wèi)生部臨檢中心或上海市臨檢中心EQA室間質量回報的數(shù)據(jù)為基礎，對回饋的報告進行相關的數(shù)據(jù)分析。結果判斷：計算上報的數(shù)據(jù)與靶值的

32、偏倚，在規(guī)定的范圍內(nèi)；如果衛(wèi)生部或上海臨檢中心回饋的報告顯示相應項目狀態(tài)為通過，則認為該項目正確度符合要求。c） 對標準物質進行檢測（國際標準品或國家標準品）實驗方案：對標準物質進行提取檢測，將檢測結果與標準物質的靶值范圍進行比較。結果判斷：檢測結果在靶值的規(guī)定范圍內(nèi)，則認為該項目正確度符合要求。3）線性范圍（可報告范圍）驗證：實驗方案：樣本的選擇：病人樣本。系列濃度樣本：將高濃度（7次方）的樣本按照1:10倍比稀釋連續(xù)7個濃度（采用陰性血清稀釋至6次方、5次方、4次方、3次方、100IU、40IU、20IU）每個水平重復測定3、次。樣本保存條件：-20C。實驗前確認儀器運轉正常，質控在控，保

33、留原始數(shù)據(jù)。結果判斷：取三次檢測結果的平均值進行相關性分析，相關性R2>0.98則認為線性通過驗證。4）最低檢出限（靈敏度）驗證：實驗方案：取一濃度為1-5X103iu/ml的樣本，將樣本稀釋到20,40IU/ml（采用陰性血清稀釋），分別檢測10次，10次都能檢出的最小濃度為該項目的最低檢出限。(七)與同種疾病的其他診療技術的風險、療效、費用及療程比較：當前高靈敏度HBVDNA檢測項目與常規(guī)的乙肝DNA定量檢測相比較如下：1、風險：高靈敏度HBVDNA檢測項目相比于常規(guī)HBVDNA檢測項目而言，增加了核酸提取與純化的步驟、增加了內(nèi)標質控品、提高了自動化程度，在控制假陰性、人為誤差和實驗室污染等方面具有更好的風險防范措施；2、療效與療程：常規(guī)HBVDNA檢測的主要用途在于對抗病毒治療前期病人體內(nèi)血液中HBVDNA濃度進行測定，并在后續(xù)的第12周進行動態(tài)跟蹤。在第24周的病毒監(jiān)測中由于其靈敏度只能達到5001000IU/ml,無法正確給出是否達到治療終點(<60IU/ml)的評價。對于后續(xù)的預后，包才HBVDNA濃度的反跳、HBeAg轉陰、ALT復常、病毒耐藥預測、肝硬化及肝癌的風險預測都無法給出正確的評價。高靈敏度HBVDNA檢測突破了常規(guī)HBVDNA檢測的極限，可以有效判斷抗病毒治療終點并對病人的療效和預后給