最新消毒劑消毒效力及有效期驗(yàn)證方案課件.doc

1、o湖北普愛藥業(yè)有限公司驗(yàn)證管理標(biāo)準(zhǔn)文件第1頁 共5頁消毒劑滅菌效J權(quán)驗(yàn)證編號(hào)：PY-ZR-YZ-004-00 起草審核:批求.類別：技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)日期：日期：日期：頒發(fā)部門：QA生效日期：年 月 日分發(fā)部門：驗(yàn)證委員會(huì)、質(zhì)量管理部、生產(chǎn)管理部消毒劑的選用原則：目的：確認(rèn)各潔凈級(jí)別的操作間及設(shè)備外表面按照規(guī)定的消毒程序消毒能夠達(dá)到消毒、防止污染的目的，并在消毒劑有效期內(nèi)能確保其消毒效力能符合要求。范圍：本驗(yàn)證方案適用于本公司潔凈區(qū)的墻面、天花板、門窗、機(jī)器設(shè)備、儀器、操作臺(tái)、地漏、推車、桌椅等表面以及操作人員雙手（手套）的消毒等。1. 參考文件1.1. 醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范1.2. 中國藥典201

2、5版 第4部 微生物限度檢查法2. 概述2.1. 本公司的潔凈區(qū)為 D級(jí)，擬定用于潔凈區(qū)表面消毒的有五種消毒劑：75%J1、0.1%新潔爾滅溶液、0.2麻潔爾滅溶液、0.5%昔酸氯己定溶液、0.1狗酸氯己定溶液。本次驗(yàn)證方案將選用以上5種消毒劑分別進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)作用對(duì)象一樣的消毒劑每月輪換使用，避免表面微生物產(chǎn)生耐藥菌株。在利用消毒劑進(jìn)行表面擦拭消毒過程中消毒劑的作用時(shí)間應(yīng)不少于10分鐘，利用消毒劑進(jìn)行浸泡消毒的不少于5分鐘消毒劑的種類、消毒對(duì)象、消毒方法和有效期名稱消毒對(duì)象175%乙醇用于設(shè)備表面、器具和手消毒。0.1%新潔爾滅 溶液0.2%勺新潔爾 滅溶液05%醋酸氯己 定溶液01%醋酸氯己

3、 定溶液用于地面、墻面、器具、工作服、 清潔布、拖布和潔凈鞋的消毒用于水池和地漏的消毒用于水池和地漏的消毒用于工作服、清潔布、拖布和潔 凈鞋的消毒米用擦拭或噴密閉保存D級(jí)：30灑方式天米用擦拭或浸密閉保存D級(jí)：30泡方式天用于液封密閉保存天D級(jí)：30用于液封密閉保存天D級(jí)：30米用浸泡方式密閉保存天D級(jí)：30消毒方法有效期2.2. 為了確認(rèn)消毒劑的消毒效力，通過實(shí)驗(yàn)室考察部分和現(xiàn)場(chǎng)考察部分分別進(jìn)行驗(yàn)證。其中,消毒劑滅菌效果驗(yàn)證用定量懸浮試驗(yàn)法和表面實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室考察試驗(yàn)部分。潔凈區(qū)設(shè)施表面材質(zhì)基本都是不銹鋼和玻璃兩種，故表面試驗(yàn)法選用不銹鋼載片和玻璃裁片模擬潔凈區(qū)設(shè)施表面進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。兩種試

4、驗(yàn)方法作用的消毒劑見表。序號(hào)試驗(yàn)方法消毒劑1表面實(shí)驗(yàn)法75%乙醇20.1%f潔爾滅溶液3定量懸浮試驗(yàn)法0.3%的新潔爾火溶液40.1%新潔爾滅溶液50.5%昔酸氯己定溶液60.1%昔酸氯己定溶液現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)部分選擇車間（D級(jí)）的配液間、灌裝間設(shè)備表面消毒前和消毒后分別進(jìn)行取樣，測(cè)定其微生物數(shù)量。3. 確認(rèn)前準(zhǔn)備3.1. 驗(yàn)證用試劑與材料3.1.1. 菌種序號(hào)名稱1 金黃色葡萄球菌2 大腸埃希菌3 枯草桿菌芬抱白色念珠菌3.1.2. 培養(yǎng)基序號(hào)名稱1 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基胰酪大豆陳瓊脂培養(yǎng)基4胰酪大豆豚培養(yǎng)基大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟5（編號(hào)： BZW12085序列號(hào)CMCC(B)2

5、6003CMCC(B)44102CMCC(B)63501CMCC(F) 98001備注培養(yǎng)基經(jīng) 121c , 20min滅菌備用32規(guī)格：55mm取樣面積為25m消毒劑滅菌效果驗(yàn)證6玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)接觸碟（編號(hào)： BZW151293.1.3. 消毒液擬定選用的中和劑序號(hào)消毒劑名稱中和劑備注175癡醇中和劑經(jīng)1%W磷脂 +0.1%聚山梨酯 80121c , 20min火菌備用。20.1%新潔爾滅溶液30.2%的新沽奔滅洛液3.1.4. 稀釋液0.9%£菌氯化鈉溶液（NS3.1.5. 器具及設(shè)備lrr序號(hào)1名稱11無菌移液營2錐形瓶3無菌試管恒溫水浴鍋3.1.6. 恒溫恒濕培養(yǎng)箱3.1.

6、7. 恒溫恒濕培養(yǎng)箱3.2. 驗(yàn)證用試劑與材料記錄見附錄1。4. 消毒劑消毒效力試驗(yàn)4.1. 中和劑鑒定試驗(yàn)4.1.1. 試驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^該試驗(yàn)，確認(rèn)所用的中和劑對(duì)對(duì)應(yīng)的消毒劑有良好的中和作用，對(duì)試驗(yàn)用菌劑及其恢復(fù)期培養(yǎng)示范有害或不良影響。4.1.2. 菌液的制備及計(jì)數(shù)4.1.3. 金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌工作菌液的制備接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3035c培養(yǎng)1A24小時(shí)。取上述培養(yǎng)物用0.%無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋85X 10CFU/ml的工作菌液（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為1 X1085X 108CFU/mJ成 1X10可

7、不再用0.%無菌氯化鈉溶液稀釋）消毒劑滅菌效果驗(yàn)證計(jì)數(shù)時(shí)，將1x10 85X 1C8CFU/m的工作菌液10倍系列稀釋成含 5g 100CFU/m菌液，并同時(shí)采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基3g 35c培養(yǎng)2天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。4.1.2. 的色念珠菌工作菌液的制備接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，2328c培養(yǎng)2448小時(shí)。取上85X 1C8CFU/m的工作菌液述培養(yǎng)物用0.詠無菌氯化鈉溶液做10倍系列稀釋成1X10（如肉湯培養(yǎng)物的濃度已為1X10 85X 10CFU/ml可不再用0.%無菌氯化鈉溶液稀85X 10CFU/ml的工作菌液10倍

8、系列稀釋成含 5d 100CFU/ml釋）。計(jì)數(shù)時(shí)，將1X10菌液，并同時(shí)采用改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基28 28c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)。計(jì)算該稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)，將計(jì)數(shù)結(jié)果換算成每毫升濃菌液的菌落數(shù)。4.1.3. 鑒定試驗(yàn)操作4.1.3.翦己制75%J1、0.1漸潔爾滅溶液、0.2%0吉爾滅溶液、40mg/L勺二氧化氯、60mg/L的二氧化氯，具體操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒劑置20C ±1 C恒溫水浴鍋中備用。4.1.3.盼組操作試驗(yàn)分組及稀釋操作方法簡(jiǎn)表取混合液 B或混合液B的稀釋級(jí)溶液 0.5ml平板計(jì)數(shù)（2皿/組）-1混合液B、10-1混勻作用混合液B、1010min-2、1

9、03 310-2-310、 0-2、1035102皿?；旌弦篈組號(hào)取0.5ml工作菌液加入下列溶液中1 消毒劑 4.5ml2 消毒劑 4.5ml中和劑4.5ml中和產(chǎn)物 4.5ml （消4毒液與中和劑比例為 1:1）稀釋液4.5ml6稀釋液和中和劑各具體操作第1組混合液B取混合液 A 0.5ml加入下列溶液稀釋液4.5ml混勻作用中和劑4.5ml10min稀釋液4.5ml稀釋液4.5ml稀釋液4.5ml1.0ml注入無菌平皿中，各制備目的：觀察消毒液對(duì)試驗(yàn)菌有無殺滅或抑制能力 操作:0.5ml稀釋液 4.5ml取消毒劑4.5ml+：作菌液0.5ml混勻作用10minJf ,取混合液消毒劑滅菌效

10、果驗(yàn)證混勻作用10min取0.5m在皿，平行制備 2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草 桿菌芽泡菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置30- 35c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 23- 28c培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。第2組目的：觀察殘留消毒劑被中和后受到消毒劑作用后的試驗(yàn)菌是否恢復(fù)生長(zhǎng)。操作：取消毒劑4.5ml+：作菌液0.5ml混勻作用10min后，取¥M合液0.5ml用和劑4.5m,l -i混勻作用10min用稀釋液稀釋成10。分別取未稀釋溶液（混合液 0.5mll沖和劑4.5ml-1 0.5m注皿，各平行制備 2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草的混合液）及10桿菌芽泡菌

11、用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于 3g 35c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅 鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置于2A 28c培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)。第3組目的：觀察中和劑是否有抑菌性操作：取中和劑4.5ml+：作菌液0.5mJ混勻作用10min取混合液0.5ml 1+稀釋液4.5mJ混勻作用10min后，用稀釋液進(jìn)行 10倍系列稀釋成10-2、103o取相應(yīng)稀釋級(jí) 0.5ml注皿，各稀釋級(jí)平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽泡菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置30- 35c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置3035c培養(yǎng)3大計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。第4組目的：觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和殘留消毒劑對(duì)試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)繁殖

12、是否有影響。操作：取消毒劑和中和劑 1:1的混合液4.5m1+C作菌液0.5成1混勻作用 10min取混合液-2-30.5ml 1稀釋液4.5m|混勻作用10min后，用稀釋液進(jìn)行 10倍系列稀釋成10、10取相應(yīng)稀釋級(jí)0.5ml注皿，各稀釋級(jí)平行制備 2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯 草桿菌芽抱菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置30- 35c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3g 35c培養(yǎng)3天計(jì)。第5組目的：作菌落數(shù)對(duì)照用o操作:消毒劑滅菌效果驗(yàn)證取稀釋液4.5ml+EE作菌液0.5mJ混勻作用10min取混合液0.5ml 1+稀釋液4.5mJ混勻作用10min后，用稀釋液進(jìn)行

13、10倍系列稀釋成10-2、103o取相應(yīng)稀釋級(jí) 0.5ml注皿，各稀釋級(jí)平行制備2皿。金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置 30- 35c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置 3035c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)。第6組目的：作為陰性對(duì)照用操作：分別取稀釋液和中和劑各1.0ml注入無菌平皿中，各制備 2皿。4.1.3.3吉果判斷試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合下列全部條件，判斷所選中和劑合格。第1組無菌生長(zhǎng)，或僅有少數(shù)試驗(yàn)菌菌落生長(zhǎng)。笫2組菌落數(shù)比第1組菌落數(shù)多卜但比第一3、4、5組菌落數(shù)少，且符命下表要求第1組平板平均菌落數(shù)第2組平板平均菌落數(shù)（x+5）y（y+0.5y）第&

14、; 4 5組有相似菌落數(shù)生長(zhǎng)，其每組間菌落數(shù)誤差率不超過15%計(jì)算公式如下：（3組間菌落平均數(shù)-各組菌落平均數(shù)）的絕對(duì)值之和誤差率= X10嬴3切組間菌落平均數(shù)第6組無菌生長(zhǎng)。否則，說明試劑有污染，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。4.1.4.中和劑鑒定試驗(yàn)記錄見附錄2。4.2.定量懸浮試驗(yàn)4.2.1.試驗(yàn)?zāi)康挠捎?.2%勺新潔爾滅溶液、0.1面潔爾滅溶液、60mg/二氧化氯溶液、0.5%昔酸氯 己定溶液、0.1加酸氯己定溶液是通過浸泡或液封消毒，通過定量懸浮試驗(yàn)，確定其消 毒效力是否符合要求。4.2.2.試驗(yàn)操作消毒劑滅菌效果驗(yàn)證4.2.2.翦己制0.2%勺新潔爾滅溶液、0.1麻潔爾滅溶液、60mg/LX氧化

15、氯溶液、0.5%昔酸氯 己定溶液、0.1%昔酸氯己定溶液，操作執(zhí)行清潔劑和消毒劑管理。將配置好的消毒 劑置20 ±1C恒溫水浴鍋中備用。4.2.2.*于0.2%勺新潔爾滅溶液、0.1面潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽胞，故定 量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。0.5%昔酸氯己定溶液、0.1吸酸氯己定溶液為高效消毒劑，能殺滅芽仙 故定量懸浮 試驗(yàn)用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽泡桿菌。4.2.2.弱菌液制備成1 x10 85X10CFU/ml的工作菌液，菌液的制備及計(jì)數(shù)同8.1.24.2.2.4試管按需要分組排列在試管架上，試驗(yàn)組分3組（4

16、min 5min 6mi諂一組），并由左向右逐管標(biāo)明消毒劑、中和劑、 10-1、102。對(duì)照組分1組，并由左向右逐管標(biāo)明稀釋液、中和劑、10 -1、102-3、1010 4。OO4.2.2.5&J個(gè)試管加入4.5m相應(yīng)的試劑，標(biāo)明10-1、102、10: 104。加入4.5m的稀釋液。加入4.5ml的稀釋液。迅速4.2.2.吸取工作菌液0.5m加入標(biāo)明消毒劑的試管中，對(duì)照組加入標(biāo)明稀釋液的試管中,混勻，并開始計(jì)時(shí)。4.2.2.7f菌液與消毒劑相互作用至8min 10min 12min吸取菌液和消毒劑混合液0.5ml加入標(biāo)明中和劑的試管中，迅速混勻。-14.2.2.呼和作用10min后，

17、吸取0.5m加入標(biāo)明10的試管中，混勻后吸取0.5m加入標(biāo)明-2-410試管中（對(duì)照組以此類推，對(duì)照組直至10）。-1、102管溶液1ml按平皿法測(cè)定存活菌數(shù)；對(duì)照組取103、4.2.2. 馱驗(yàn)組分別取中和劑管、1010-41m按平皿法測(cè)定存活菌數(shù)。每管平行制備2皿。4.2.2.0黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽孑6菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，倒置于30- 35c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，倒置于2A 28c培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)。4.2.3. 結(jié)果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的活菌濃度（CFU/mJ ,并換算為對(duì)數(shù)值（N）,并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值：殺滅對(duì)數(shù)值（KL）=對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值

18、（NQ -試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值（NR4.2.4. 可接受標(biāo)準(zhǔn)殺滅對(duì)數(shù)值（KL應(yīng)不低于35個(gè)對(duì)數(shù)單位。4.2.5. 定量懸浮試驗(yàn)記錄見附錄3o湖北普愛藥業(yè)有限公司驗(yàn)證管理標(biāo)準(zhǔn)文件第1頁 共5頁消毒劑滅菌效果驗(yàn)證4.3.1. 試驗(yàn)?zāi)康挠捎?5%J1、40mg/L二氧化氯溶液、0.1漸潔爾滅溶液是通過擦拭消毒，故選用不銹鋼載片和玻璃裁片進(jìn)行表面試驗(yàn)法，確定其消毒效力是否符合要求。4.3.2. 菌種選擇由于75雙酉1、0.1麻潔爾滅溶液中低效消毒劑，且不能殺滅芽胞，故定量懸浮試驗(yàn)用菌為金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌。0.5%昔酸氯己定溶液、0.1%酸氯己定溶液為高效消毒劑，能殺滅芽胞，故定量懸

19、浮試驗(yàn)用菌枯金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、枯草芽泡桿菌。4.3.3. 工作菌液制備工作菌液的制備方法、濃度及驗(yàn)證同步計(jì)數(shù)操作同8.1.24.3.4. 試驗(yàn)操作4.34.1. 1)染菌不銹鋼載片制備將經(jīng)滅菌的載片平鋪于無菌平皿內(nèi)，滴加金黃色葡萄球菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌85X 10CFU的菌液0.1或l并均勻涂布于整個(gè)載體表面。滴染菌液后，含菌量為1X10 載片置超凈工作臺(tái)晾干后備用。每種菌平行制備兩個(gè)染菌不銹鋼載片。（2）染菌玻璃載片制備因培養(yǎng)皿的材質(zhì)為玻璃，故用培養(yǎng)皿代替玻璃載片進(jìn)行染菌試驗(yàn)。進(jìn)行菌液滴染前， 用記號(hào)筆在培養(yǎng)皿菌液滴染面的背面畫出染菌面積（50m睇50mm ,標(biāo)

20、注清晰。菌液滴染操作同染菌不銹鋼載片制備。4.3.42試驗(yàn)組：將消毒劑擦拭在制備好的染菌載片上，消毒劑作用時(shí)間分別為8min 10min 12min不銹鋼載片和玻璃載片每個(gè)作用時(shí)間分別制備2個(gè)。作用結(jié)束后，用接觸碟取樣（接觸碟規(guī)格：55mm取樣面積為25m 2）0取金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽胞菌用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號(hào)：BZW12085 ;取樣白色念珠菌用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基接觸碟（編號(hào)：BZW15129。接觸碟取樣方法： 打開接觸碟蓋，使無菌培養(yǎng)基表面與取樣面直接接觸，均勻按壓接觸碟底板，確保全部瓊脂表面與取樣面表面均勻接觸10秒左右，在蓋上跌蓋。對(duì)照組對(duì)照組的活菌濃度計(jì)

21、數(shù)見8.3.3 .消毒劑滅菌效果驗(yàn)證陰性對(duì)照：用接觸碟在已滅菌的載片上（未染菌片的載）按壓取樣，操作同上。每種載片及每種接觸碟平行制備兩份。4.3.4/#將取樣金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌芽抱菌的接觸碟倒置于30- 35c培養(yǎng)3天計(jì)數(shù)；取樣白色念珠菌的接觸碟倒置于2328c培養(yǎng)5天計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)。4.3.4.4果計(jì)算計(jì)算試驗(yàn)組和對(duì)照組的活菌濃度（CFU/mJ ,并換算為對(duì)數(shù)值（N）,并按下式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值：殺滅對(duì)數(shù)值（KL）=對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值（NQ -試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值（NR4.3.4.57接受標(biāo)準(zhǔn)殺滅對(duì)數(shù)值（KL應(yīng)不低于35個(gè)對(duì)數(shù)單位。4.3.5.表面試驗(yàn)法記錄見附錄54.4.現(xiàn)場(chǎng)考察試驗(yàn)4.4.1. 消毒前對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行表面微生物取樣。取樣地點(diǎn)：D級(jí)車間的配料間墻壁和設(shè)備表面、灌裝間墻壁和設(shè)備表面、中間站墻壁表面。取樣操作及檢驗(yàn)執(zhí)行表面微生物檢驗(yàn)4.4.2. 生產(chǎn)操作結(jié)束后操作人員按照生產(chǎn)區(qū)清潔對(duì)潔凈區(qū)進(jìn)行清潔消毒。4.4.3. 清潔消毒完畢15分鐘后，現(xiàn)場(chǎng)Q