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文檔簡介
1、實驗一檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)必修-P18一.實驗?zāi)康模河没瘜W(xué)試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)二.實驗原理:某些化學(xué)試劑能使生物組織中的有關(guān)有機化合物,產(chǎn)生特定的顏色反響.1 .可溶性復(fù)原糖如葡萄糖、果糖、麥芽糖與斐林試劑發(fā)生作用,可生成醇紅色的Cu2O沉淀.如:加熱葡萄糖+CuOH2-匚'葡萄糖酸+Cu2OJ醇紅色+H20,即CuOH2被復(fù)原成Cu2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸.2 .脂肪可以被蘇丹出染液染成橘黃色或被蘇丹IV染液染成紅色.淀粉遇碘變藍色.3 .蛋白質(zhì)與雙縮月尿試劑發(fā)生作用,產(chǎn)生紫色反響.蛋白質(zhì)分子中含有很多肽鍵,在堿性NaOH溶液中能與雙縮月尿試劑中的C
2、u2+作用,產(chǎn)生紫色反響.三.實驗材料1 .做可溶性復(fù)原性糖鑒定實驗,應(yīng)選含糖高,顏色為白色的植物組織,如蘋果、梨.由于組織的顏色較淺,易于觀察.2 .做脂肪的鑒定實驗.應(yīng)選富含脂肪的種子,以花生種子為最好,實驗前一般要浸泡34小時也可用蔗麻種子.3 .做蛋白質(zhì)的鑒定實驗,可用富含蛋白質(zhì)的黃豆或雞蛋清.四、實驗試劑斐林試劑包括甲液:質(zhì)量濃度為0.1g/mLNaOH溶液和乙液:質(zhì)量濃度為0.05g/mLCuSO4溶液、蘇丹山或蘇丹IV染液、雙縮月尿試劑包括A液:質(zhì)量濃度為0.1g/mLNaOH溶液和B液:質(zhì)量濃度為0.01g/mLCuSO4溶液、體積分數(shù)為50%的酒精溶液,碘液、蒸儲水.五、方法
3、步驟:一可溶性糖的鑒定操作方法注意問題解釋1.制備組織樣液.去皮、切塊、研磨、過濾蘋果或梨組織液必須臨時制備.因蘋果多酚氧化酶含量高,組織液很易被氧化成褐色,將產(chǎn)生的顏色掩蓋.2.取1支試管,向試管內(nèi)注入2mL組織樣液.3.向試管內(nèi)注入1mL新制的斐林試劑,振蕩.應(yīng)將組成斐林試劑的甲液、乙液分別配制、儲存,使用前才將甲、乙液等量混勻成斐林試劑;切勿將甲液、乙液分別參加蘋果組織樣液中進行檢測.斐林試劑很不穩(wěn)定,甲、乙液混合保存時,生成的CuOH2在70900C下分解成黑色CuO和水;甲、乙液分別參加時可能會與組織樣液發(fā)生反響,無CuOH2生成.4.試管放在盛有50-650C溫水的大燒杯中,加熱約
4、2分鐘,觀察到溶液顏色:淺藍色一棕色一科紅色沉淀最好用試管夾夾住試管上部,使試管底部不觸及燒杯底部,試管口不朝向?qū)嶒炚?也可用酒精燈對試管直接加熱.預(yù)防試管內(nèi)的溶液沖出試管,造成燙傷;縮短實驗時間.二脂肪的鑒定操作方法注意問題解釋花生種子浸泡、去皮、切下一些子干種子要浸泡3-4小由于浸泡時間短,不易切片,葉薄片,將薄片放在載玻片的水滴中,用吸水紙吸去裝片中的水.時,新花生的浸泡時間可縮短.浸泡時間過長,組織較軟,切下的薄片不易成形.切片要盡可能薄些,便于觀察.在十葉溥片上滴2-3滴蘇丹出或蘇丹IV染液,染色1分鐘.染色時間/、宜過長.用吸水紙吸去薄片周圍染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精.酒
5、精用于洗去浮色,不洗去浮色,會影響對橘黃色脂肪滴的觀察.同時,酒精是脂溶性溶齊IJ,可將花生細胞中的脂肪顆粒溶解成油滴.用吸水紙吸去薄片周圍酒精,滴上12滴蒸播水,蓋上蓋玻片.滴上清水可預(yù)防蓋蓋玻片時產(chǎn)生氣泡.低倍鏡下找到花生子葉薄片的最薄處,可看到細胞中有染成橘黃色或紅色圓形小顆粒.裝片/、宜久放.時間一長,油滴會溶解在乙醇中.三、蛋白質(zhì)的鑒定操作方法注意問題解釋制備組織樣液.浸泡、去皮研磨、過濾.黃豆浸泡1至2天,容易研磨成漿,也可購新鮮豆?jié){以節(jié)約實驗時間.鑒定.加樣液約2ml于試管中,參加雙縮月尿試劑A,搖勻;再參加雙縮月尿試劑B液34滴,搖勻,溶液變紫色.A液和B液也要分開配制,儲存.
6、鑒定時先加A液后加B液.CuSO4溶液不能多加.先加NaOH溶液,為Cu2+與蛋白質(zhì)反響提供一個堿性的環(huán)境.A、B液混裝或同時參加,會導(dǎo)致Cu2+變成CuOH2沉淀,而失效.否那么CuSO4的藍色會遮蓋反響的真實顏色.可用蛋清代替豆?jié){.蛋清要先稀釋.如果稀釋小夠,在實驗中蛋清粘在試管壁,與雙縮月尿試劑反響后會粘固在試管內(nèi)壁上,使反響不容易徹底,并且試管也不易洗干凈.附:淀粉的檢測和觀察用試管取2ml待測組織樣液,向試管內(nèi)滴加2滴碘液,觀察顏色變化.碘液不要滴太多以免影響顏色觀察實驗二用高倍鏡觀察線粒體和葉綠體必修-P471 .實驗?zāi)康模菏褂酶弑剁R觀察葉綠體和線粒體的形態(tài)分布.2 .實驗原理:葉
7、綠體的識別依據(jù):葉綠體是綠色的,呈扁平的橢圓球形或球形.線粒體識別依據(jù):線粒體的形態(tài)多樣,有短棒狀、圓球狀、線形、啞鈴形等.健那綠染液是專一性染線粒體的活細胞染料,可以使活細胞中線粒體呈現(xiàn)藍綠色.3 .實驗材料:觀察葉綠體時選用:群類的葉、黑藻的葉.取這些材料的原因是:葉子薄而小,葉綠體清楚,可取整個小葉直接制片,所以作為實驗的首選材料.假設(shè)用菠菜葉作實驗材料,要取菠菜葉的下表皮并稍帶些葉肉.由于表皮細胞不含葉綠體.四.方法步驟:步驟注意問題分析1.制片.用鐐子取一片黑藻的小葉,放入載玻片的水滴中,蓋上蓋玻片.制片和鏡檢時,臨時裝片中的葉片不能放干了,要隨時保持有水狀態(tài)否那么細胞或葉綠體失水收
8、縮,將影響對葉綠體形態(tài)和分布的觀察.2.低倍鐐下找到葉片細胞3.高倍鐐下觀察葉綠體的形態(tài)和分布4.制作人的口腔上皮細胞臨時裝片在潔凈載玻片中央淅-滴健那綠染液一用牙簽取碎屑一蓋蓋玻片5.觀察線粒體藍綠色的是線粒體,細胞質(zhì)接近無色.討論:1、細胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體,是不是靜止不動的?為什么?答:不是.呈橢球體形的葉綠體在不同光照條件下可以運動,這種運動能隨時改變橢球體的方向,使葉綠體既能接受較多光照,又不至于被強光灼傷.2、葉綠體的形態(tài)和分布,與葉綠體的功能有什么關(guān)系?答:葉綠體的形態(tài)和分布都有利于接受光照,完成光合作用.如葉綠體在不同光照條件下改變方向.又如葉子上面的葉肉細胞中的葉綠體比下面的多
9、,這可以接受更多的光照.實驗三觀察植物細胞的質(zhì)壁別離和復(fù)原必修-P61“探究一、實驗?zāi)康模? .學(xué)會觀察植物細胞質(zhì)壁別離與復(fù)原的方法.2 .了解植物細胞發(fā)生滲透作用的原理.二.實驗原理:1 .質(zhì)壁別離的原理:當細胞液的濃度小于外界溶液的濃度時,細胞就會通過滲透作用而失水,細胞液中的水分就透過原生質(zhì)層進入到溶液中,使細胞壁和原生質(zhì)層都出現(xiàn)一定程度的收縮.由于原生質(zhì)層比細胞壁的收縮性大,當細胞不斷失水時,原生質(zhì)層就會與細胞壁別離.2 .質(zhì)壁別離復(fù)原的原理:當細胞液的濃度大于外界溶液的濃度時,細胞就會通過滲透作用而吸水,外界溶液中的水分就通過原生質(zhì)層進入到細胞液中,整個原生質(zhì)層就會慢慢地恢復(fù)成原來的
10、狀態(tài),緊貼細胞壁,使植物細胞逐漸發(fā)生質(zhì)壁別離復(fù)原.二、實驗材料:紫色洋蔥鱗片葉的外表皮.由于液泡呈紫色,易于觀察.也可用水綿代替.0.3g/ml的蔗糖溶液.用蔗糖溶液做質(zhì)壁別離劑對細胞無毒害作用.三、實驗步驟:步驟注意問題分析1.制作洋蔥表皮的臨時裝片.在載玻片上?斷一滴水,撕取洋蔥鱗片葉外表皮放在水滴中展平也可挑取幾條水綿放入水滴中.蓋上蓋玻片.蓋蓋玻片應(yīng)讓蓋玻片的一側(cè)先觸及載玻片,然后輕輕放平.預(yù)防裝片產(chǎn)生氣泡.2.觀察洋蔥或水綿細胞可看到:液泡大,呈紫色,液泡含花青素,所以液泡呈紫色.先觀察正常細胞與后面的“質(zhì)壁別離起對照作原生質(zhì)層緊貼著細胞壁.或水綿細胞中水帶狀葉綠體,原生質(zhì)層呈綠色,
11、緊貼著細胞壁.用.3.觀察質(zhì)壁別離現(xiàn)象.從蓋玻片的一側(cè)滴入0.3g/ml的蔗糖溶液,在另一側(cè)用吸水紙吸引,重復(fù)幾次.鏡檢.觀察到:液泡由大變小,顏色由淺變深,原生質(zhì)層與細胞壁別離.原生質(zhì)層與細胞壁之間充滿蔗糖溶液.重復(fù)幾次糖液濃度不能過高蔗糖溶液濃度大于細胞液濃度,細胞通過滲透作用失水,細胞壁伸縮性小原生質(zhì)層的伸縮性大,液泡和原生質(zhì)層不斷收縮,所以發(fā)生質(zhì)壁別離.為了使細胞完全浸入蔗糖溶液中.否那么,細胞嚴重失水死亡,看/、到質(zhì)壁別離的復(fù)原.4.觀察細胞質(zhì)壁別離的復(fù)原現(xiàn)象.從蓋玻片的一側(cè)滴入清水,在另,側(cè)用吸水紙吸弓1,重復(fù)幾次.鏡檢.觀察至k液泡由小變大,顏色由深變淺,原生質(zhì)層恢復(fù)原狀.發(fā)生質(zhì)
12、壁別離的裝片,不能久置,要馬上滴加清水,使其復(fù)原,重復(fù)幾次.細胞液的濃度高于外界溶液,細胞通過滲透作用吸水,所以發(fā)生質(zhì)壁別離復(fù)原現(xiàn)象.由于細胞失水過久,也會死亡.為了使細胞完全浸入清水中.實驗討論答案:1.如果將上述表皮細胞浸潤在與細胞液濃度相同的蔗糖溶液中,這些表皮細胞會出現(xiàn)什么現(xiàn)象?答:表皮細胞維持原狀,由于細胞液的濃度與外界溶液濃度相等.2.當紅細胞細胞膜兩側(cè)的溶液具有濃度差時,紅細胞會不會發(fā)生質(zhì)壁別離?為什么?答:不會.由于紅細胞不具細胞壁.實驗四探究影響酶活性的因素必修一P78、P83一.實驗?zāi)康模? .探究不同溫度和PH對過氧化氫酶活性的影響.2 .培養(yǎng)實驗設(shè)計水平.二.方法步驟:
13、提出問題一作出假設(shè)一設(shè)計實驗一包括選擇實驗材料、選擇實驗器具、確定實驗步驟、設(shè)計實驗記錄表格一實施實驗一分析與結(jié)論一表達與交流.實例1:比擬過氧化氫酶和Fe3+的催化效率一.實驗原理:鮮肝提取液中含有過氧化氫酶,過氧化氫酶和Fe3+都能催化H2O2分解放出.2.經(jīng)計算,質(zhì)量分數(shù)為3.5%的FeCl3溶液和質(zhì)量分數(shù)為20%的肝臟研磨液相比,每滴FeCl3溶液中的Fe3+數(shù),大約是每滴肝臟研磨液中過氧化氫酶分子數(shù)的25萬倍.方法步驟:步驟注意問題解釋取4支潔凈試管,編號,分別參加2mLH2O2溶液不讓H2O2接觸皮膚H2O2有f的腐蝕性將2號試管放在90°C左右的水浴中加熱,觀察氣泡冒出
14、情況,與1號對照向3號、4號試管內(nèi)分別滴入2滴FeCl3溶液和2滴肝臟研不可用同一支滴管由于酶具有高效性,假設(shè)滴入的FeCl3溶液中混有少量的過氧化氫酶,會影響實驗準確性磨液,觀察氣泡產(chǎn)生情況肝臟研磨液必須是新鮮的肝臟在制成研磨液由于過氧化氫酶是蛋白質(zhì),放置過久,可受細菌作用而分解,使肝臟組織中酶分子數(shù)減少,活性降低研磨可破壞肝細胞結(jié)構(gòu),使細胞內(nèi)的酶釋放出來,增加酶與底物的接觸面積2-3min后,將點燃的衛(wèi)生香分別放入3號和4號試管內(nèi)液面的上方,觀察復(fù)燃情況放衛(wèi)生香時,動作要快,/、要插到氣泡中現(xiàn)象:3號試管產(chǎn)生氣泡多,冒泡時間短,衛(wèi)生香猛烈復(fù)燃,4號試管產(chǎn)生氣泡少,冒泡時間長,衛(wèi)生香幾乎無變
15、化預(yù)防衛(wèi)生香因潮濕而熄滅實例2:溫度對酶活性的影響一實驗?zāi)康模? .初步學(xué)會探索溫度對酶活性的影響的方法.2 .探索淀粉酶在不同溫度下催化淀粉水解的情況.二實驗原理:1 .淀粉遇碘后,形成紫藍色的復(fù)合物.2 .淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麥芽糖和葡萄糖淀粉水解過程中,不同階段的中間產(chǎn)物遇碘后,會呈現(xiàn)紅褐色或紅棕色.麥芽糖和葡萄糖遇碘后不顯色.注:市售a-淀粉酶的最適溫度約60°C三方法步驟:操作注意問題解釋取3支試管,編上號,然后分別注入2mL可溶性淀粉溶液另取3支試管,編上號,然后分別注入1mL新鮮淀粉酶溶液將裝有淀粉溶液和酶溶液的試管分成3組,分別放入熱水約600C、沸水和冰塊中,
16、維持各自的溫度5min不能只用不同溫度處理淀粉溶液或酶溶液預(yù)防混合時,由于陰種溶液的溫度小同而使混合后溫度發(fā)生變化,反響溫度不是操作者所要限制的溫度,影響實驗結(jié)果.分別將淀粉酶溶液注入相同溫度卜的淀粉溶液中,搖勻后,維持各自的溫度5min保持各自溫度時間不能太短淀粉酶催化淀粉水解需要一定時間在3支試管中各滴入1-2滴碘液,搖勻后觀察這3支試管中溶液顏色變化并記錄碘液/、能滴加太多預(yù)防影響實驗現(xiàn)象的觀察用表格的形式顯示實驗步驟序號參加試劑或處理方法試管ABCabc1可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL/新鮮淀粉酶溶液一/1mL1mL1mL2保溫5min600C1000C00C600C1000C00C
17、3將a液參加到A試管,b液參加到B試管,c液參加到C試管中,搖勻4保溫5min600C1000C00C5滴入碘液,搖勻2滴2滴2滴6觀察現(xiàn)象并記錄實例3:PH值對酶活性的影響操作步驟:用表格開式顯示實驗步驟:注意操作順序不能錯序號參加試劑或處理方法試管1231注入新鮮的淀粉酶溶液1mL1mL1mL2注入蒸儲水1mL/3注入氫氧化鈉溶液/1mL/4注入鹽酸/1mL5注入可溶性淀粉溶液2mL2mL2mL6600C水浴保溫5min7參加斐林試劑,邊加邊振蕩2mL2mL2mL8水浴加熱煮沸1min9觀察3支試管中溶液顏色變化變記錄實驗五葉綠體色素的提取和別離必修-P97一.實驗?zāi)康模? .嘗試用過濾方
18、法提取葉綠體中的色素和用紙層析法別離提取到的色素.2 .分析實驗結(jié)果,探究葉綠體中有幾種色素,以及各自所呈現(xiàn)的顏色.二.實驗原理:1 .葉綠體中的色素是有機物,不溶于水,易溶于丙酮等有機溶劑中,所以用丙酮、乙醇等能提取色素.2 .層析液是一種脂溶性很強的有機溶劑.葉綠體色素在層析液中的溶解度不同,分子量小的溶解度高,隨層析液在濾紙上擴散得快,溶解度低的隨層析液在濾紙上擴散得慢.所以用層析法來別離四種色素.三、實驗材料:幼嫩、鮮綠的菠菜葉四、實驗步驟:步驟注意問題分析1.提取色素5克綠葉男碎,放入研缽,力口SiO2、CaCO3和5mL內(nèi)酮或10mL無水乙醇迅速、充分研磨.假設(shè)沒用無水乙醇,也可用
19、體積分數(shù)為95%的乙醇,但要加入適量的無水碳酸鈉,除去水分加SiO2力口CaCO3加內(nèi)酮迅速加SiO2為了研磨得更充分.加CaCO3預(yù)防研磨時葉綠素受到破壞.由于葉綠素含鎂,可被細胞液中的有機酸產(chǎn)生的氫代替,形成去鎂葉綠素,CaCO3可中和液泡破壞釋放的有機酸,預(yù)防葉綠體被破壞.葉綠體色素易溶于內(nèi)酮等后機溶劑.減少研磨過程葉綠素的分解,減少有毒性的丙酮揮發(fā).2.收集濾液漏斗基部放一單層尼龍布,研磨倒入漏斗內(nèi)擠壓,將濾液收集到小試管中,用棉花塞塞住試官口.尼龍布起過濾作用.試管口用棉花塞塞緊是為了預(yù)防丙酮揮發(fā).3.制備濾紙條將枯燥的濾紙,順著紙紋剪成長10cm,寬1cm的紙條,一端剪去二個角,并
20、枯燥順著紙紋剪成長可吸收更多的濾液.層析時,色素別離效果好.在距這一端1cm處劃一鉛筆線.條一端剪去二個角可使層析液同時到達濾液細線.4.劃濾液細線用毛細吸管吸取少量濾液,沿鉛筆線劃出細、齊、直的一條濾液細線,干后重復(fù)三次.濾液細線越細、越齊越好.重復(fù)三次.預(yù)防色素帶之間局部重疊.增加色素在濾紙上的附著量,實驗結(jié)果更明顯.5.紙層析法別離色素將3mL層析液倒入燒杯中,將濾紙條劃線一端朝下插入層析液中,用培養(yǎng)皿蓋蓋上燒杯.層析液不能沒及濾紙條.燒杯要蓋培養(yǎng)皿蓋.預(yù)防色素溶解在層析液中,層析液中的苯、內(nèi)酮、石油醒易揮發(fā).6.1觀:b餐實驗結(jié)果胡蘿卜素橙黃色葉黃素黃色葉綠素a藍綠色葉綠素b黃綠色擴散
21、最快是胡蘿卜素,擴散最慢TE葉綠系b,含里最多的是葉綠素a.四種色素之所以能被別離,是由于四種色素隨層析液在濾紙上的擴散速度/、同.五:實驗討論:1 .濾紙條上的濾液細線,為什么不能觸及層析液?答:濾紙條上的濾液細線如觸及層析液,濾紙上的葉綠體色素就會溶解在層析液中,實驗就會失敗.2 .提取和別離葉綠體色素的關(guān)鍵是什么?答:提取葉綠體色素的關(guān)鍵是:葉片要新鮮、濃綠;研磨要迅速、充分;濾液收集后,要及時用棉塞將試管口塞緊,以免濾液揮發(fā).別離葉綠體色素的關(guān)鍵是:一是濾液細線要細且直,而且要重復(fù)劃幾次;二是層析液不能沒及濾液線.實驗六觀察細胞的有絲分裂必修一P115一.實驗?zāi)康模? .制作洋蔥根尖細
22、胞有絲分裂裝片2 .觀察植物細胞有絲分裂的過程,識別有絲分裂的不同時期,比擬細胞周期不同時期的時間長短.3 .繪制植物細胞有絲分裂簡圖.二.實驗原理:1 .在高等植物體內(nèi),有絲分裂常見于根尖、芽尖等分生區(qū)細胞.由于各個細胞的分裂是獨立進行的,因此在同一分生組織中可以看到處于不同分裂時期的細胞.2 .染色體容易被堿性染料如龍膽紫溶液著色,通過在高倍顯微鏡下觀察各個時期細胞內(nèi)染色體或染色質(zhì)的存在狀態(tài),就可判斷這些細胞處于有絲分裂的哪個時期,進而熟悉有絲分裂的完整過程.三.實驗材料:洋蔥可用蔥、蒜代替.由于根尖生長點屬于分生組織,細胞分裂水平強,易觀察到有絲分裂各個時期的細胞.四.實驗步驟:步驟注意問題分析一、根尖的培養(yǎng)實驗前34天,讓洋忽放在廣口瓶上,底部接觸清水.根長約5cm時可用.置于溫暖處,常換水.由于細胞分裂和生長需要水分、適宜的溫度和氧氣.二、裝片的制作解離-漂洗-染色一制片1.解離:上午10時至卜午2時,剪取洋蔥根尖23mm,立即放入盛后質(zhì)量分數(shù)為15%的鹽酸和體積分數(shù)為95%的酒精溶液的混合液1:1的玻璃皿中,室溫下解離35min.解離時間要保
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