技能考核內(nèi)容--細(xì)胞

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上雞胚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)材料、用品雞胚：9-11日齡器材：平皿、倒置顯微鏡、二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、天平、離心管、100目不銹鋼網(wǎng)、鑷子、眼科小剪、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、槍頭、移液器等。試劑：Hanks液、完全培養(yǎng)液、血清、碘酒、酒精方法1取胚：取9-11日齡雞胚，碘酒、酒精消毒氣室部，去除氣室部蛋殼，用無菌小鑷取出雞胚于無菌平皿中。2去頭、爪、內(nèi)臟，雞胚組織Hanks液洗2次，除去紅細(xì)胞，剪成1mm3組織塊，用Hanks液洗2次,800rpm3min,去上清。3加2倍體積胰酶攪拌消化15-30min，分散好的細(xì)胞懸液加完全培養(yǎng)基，通過不銹鋼篩網(wǎng)，濾液離心，沉淀加完全培養(yǎng)液,

2、分散。4細(xì)胞計(jì)數(shù)，接種培養(yǎng)與分裝：取單細(xì)胞懸液少量，進(jìn)行1：5或1：10稀釋后計(jì)數(shù)，然后調(diào)至細(xì)胞濃度為1x106ml。細(xì)胞計(jì)數(shù)方法：取細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)4角4個(gè)大方格細(xì)胞總數(shù)，用下式計(jì)數(shù)：培養(yǎng)細(xì)胞的活性檢查材料 1細(xì)胞 2 0.4 % w/v trypan blue、75%乙醇。 3培養(yǎng)瓶，無菌吸液管（5ml 及1m1)、廢液瓶、蓋玻片。 4. 倒置顯微鏡、計(jì)數(shù)器、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī)、C02培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、槍頭、移液器。方法1細(xì)胞懸液制備1)選生長(zhǎng)良好的細(xì)胞一瓶，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，懸浮細(xì)胞碎片，吸出生長(zhǎng)液，用Hanks液洗一次； 2)加入適量0.25胰蛋白酶液，使消化液浸沒細(xì)胞，置37培養(yǎng)箱，1mi

3、n左右，鏡檢。 3)待細(xì)胞圓縮后，吸出消化液。 4)置37培養(yǎng)箱，隨時(shí)鏡檢，。 5)待細(xì)胞變圓，加入完全培養(yǎng)基，洗下細(xì)胞，吹打混勻。2取細(xì)胞懸浮液50ul與等體積trypan blue混勻。 3 取10ul混合液滴入血球計(jì)數(shù)板，于100 倍倒置顯微鏡下觀察，活細(xì)胞不染色，死細(xì)胞則為藍(lán)色。 4 計(jì)數(shù)： 培養(yǎng)細(xì)胞傳代 材料 1細(xì)胞培養(yǎng)物 2Hanks液，0.25胰酶，培養(yǎng)基 3培養(yǎng)瓶、廢液瓶、倒置顯微鏡、計(jì)數(shù)器、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī)、C02培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、離心管、槍頭、移液器。操作方法1選生長(zhǎng)良好的細(xì)胞一瓶，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，懸浮細(xì)胞碎片，吸出生長(zhǎng)液，用Hanks液洗一次； 2加入適量0.25胰蛋白酶

4、液，使消化液浸沒細(xì)胞，置37培養(yǎng)箱，1min左右，鏡檢。 3待細(xì)胞圓縮后，吸出消化液。 4置37培養(yǎng)箱，隨時(shí)鏡檢，。 5待細(xì)胞變圓，加入完全培養(yǎng)基，洗下細(xì)胞，吹打混勻。按1：2或1：3分配到培養(yǎng)皿中，補(bǔ)足培養(yǎng)液進(jìn)行傳代培養(yǎng)。細(xì)胞凍存材料1細(xì)胞培養(yǎng)物2. 培養(yǎng)液、0.25%胰酶、凍存液、槍頭、移液器、凍存管、記號(hào)筆、線繩、酒精燈、酒精棉球、液氮罐、冰箱、離心機(jī)、超凈臺(tái)操作方法 1選生長(zhǎng)良好的細(xì)胞一瓶，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，懸浮細(xì)胞碎片，吸出生長(zhǎng)液，用Hanks液洗一次； 2加入適量0.25胰蛋白酶液，使消化液浸沒細(xì)胞，置37培養(yǎng)箱，1min左右，鏡檢。 3待細(xì)胞圓縮后，吸出消化液。 4置37培養(yǎng)箱，隨

5、時(shí)鏡檢，。 5待細(xì)胞變圓，加入完全培養(yǎng)基，洗下細(xì)胞，吹打混勻。離心，細(xì)胞沉淀按(1-5)xl06m1濃度，懸浮于凍存液中。 6分裝于凍存管中(l ml)，嚴(yán)密封口，注明細(xì)胞名稱和凍存日期。 7凍存：每分鐘下降1度。凍存保滬液(10ml) 生長(zhǎng)液 6.9ml 二甲基亞砜 1.0ml 小牛血清 2ml 雙抗 0.1ml細(xì)胞復(fù)蘇材料1凍存細(xì)胞3. 培養(yǎng)液、抗生素液4. 細(xì)胞計(jì)數(shù)器、吸管、凍存管、記號(hào)筆、線繩、培養(yǎng)瓶、酒精燈、酒精棉球等5. 液氮罐、冰箱、恒溫水浴鍋、CO2培養(yǎng)箱、離心機(jī)、超凈臺(tái)、槍頭、移液器操作方法 1取出凍存管 (取出時(shí)應(yīng)戴好手套和防護(hù)眼鏡)，迅速放入37-40水浴中使其在l min 內(nèi)融化（搖動(dòng)）。 2