藥典三部(2015版)-通則-1101微生物檢查法

1、1101 無(wú)菌檢查法無(wú)菌檢查法系用于檢查藥典要求無(wú)菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無(wú)菌的一種方法。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢查的要求，檢驗(yàn)全過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基

2、主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌培養(yǎng)；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)條件培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基或成品培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在225、避光的環(huán)境，若保存于非封閉容器中，一般在3周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。1. 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基胰酪胨 15.0g氯化鈉 2.5g酵母浸出粉 5.0g新配制的0.1% 刃天青溶液 1.0ml 無(wú)水葡萄糖 5.0g瓊脂 0.75gL-胱氨酸 0.5g 水 1000ml硫乙醇酸鈉 0.5g（或硫乙醇酸） (0.3ml)除葡萄糖

3、和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié)pH，使滅菌后在25 的pH值為7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/2。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過(guò)培養(yǎng)基深度的1/5，否則，須經(jīng)100水浴加熱至粉紅色消失（不超過(guò)20分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止污染。除另有規(guī)定外，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置3035 培養(yǎng)。2. 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基胰酪胨 17.0g氯化鈉 5.0g大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g磷酸氫二鉀 2.5g葡萄糖/

4、無(wú)水葡萄糖 2.5g/2.3g水 1000ml除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，濾過(guò)，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25的pH值為7.3±0.2，加入葡萄糖，分裝，滅菌。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置2025培養(yǎng)。3. 中和或滅活用培養(yǎng)基按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的處方及制法，在培養(yǎng)基滅菌或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法適用性試驗(yàn)。4. 0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基（用于硫酸鏈霉素等抗生素的無(wú)菌檢查）胨 10.0g氯化鈉 5.0g牛肉浸出粉 3.0g水 1000ml葡萄糖 5.0g除葡萄糖外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，加入葡萄糖溶

5、解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25 的pH值為7.2±0.2，分裝，滅菌。5. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪胨 15.0g瓊脂 15.0g大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g水 1000ml氯化鈉 5.0g除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25 的pH值為7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，搖勻，分裝，滅菌。6. 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g水 1000ml葡萄糖 20.0g除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25 的pH值為5.6±0.2，加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。7. 沙

6、氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g瓊脂 15.0g葡萄糖 40.0g水 1000ml除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié)pH使滅菌后在25 pH值為5.6±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。培養(yǎng)基的適用性檢查無(wú)菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無(wú)菌性檢查及靈敏度檢查要求。本檢查可在供試品的無(wú)菌檢查前或與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。無(wú)菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。靈敏度檢查菌種 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過(guò)

7、5代（從菌種保存中心獲得的干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保存技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。金黃色葡萄球菌（Staphylococcus）CMCC（B）26 003銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）CMCC（B）10 104枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）CMCC（B）63 501生孢梭菌（Clostridium sporogenes）CMCC（F）64 941白色念珠菌（Candida albicans）CMCC（F）98 001黑曲霉（Aspergillus niger）CMCC（F）98 003菌液制備 接種金黃色葡萄球菌、銅綠

8、假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，3035 培養(yǎng)1824小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，2025 培養(yǎng)2448小時(shí)，上述培養(yǎng)物用pH7.0 無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9% 無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu（菌落形成單位）的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基上，2025 培養(yǎng)57天，加入35ml含0.05% （ml/ml） 聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫

9、。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無(wú)菌試管中，用含0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9% 無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml 含孢子數(shù)小于100cfu的孢子懸液。菌懸液若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28 可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28 ，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。培養(yǎng)基接種 取每管裝量為12ml 的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基7支，分別接種小于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑

10、曲霉各2支，另1支不接種作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。結(jié)果判定 空白對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，若加菌的培養(yǎng)基管均生長(zhǎng)良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。稀釋液、沖洗液及其制備方法稀釋液、沖洗液配置后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。1. 0.1%無(wú)菌蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調(diào)節(jié)pH至7.1±0.2，分裝，滅菌。2. pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀3.56g，無(wú)水磷酸氫二鈉5.77g，氯化鈉4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗(yàn)證過(guò)的適宜的溶液作為稀釋液、沖洗

11、液（如0.9% 無(wú)菌氯化鈉溶液）。如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或中和劑等。方法適用性試驗(yàn)進(jìn)行產(chǎn)品無(wú)菌檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無(wú)菌檢查。若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。方法適用性試驗(yàn)按“供試品的無(wú)菌檢查”的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。對(duì)每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行方法確認(rèn)。菌種及菌液制備 除大腸埃希菌（Escherichia coli）CMCC（B）44 102外，金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌株及菌液制備同培養(yǎng)基靈敏度檢查。大腸埃希菌的菌液制備同金黃色葡萄球菌。薄膜過(guò)

12、濾法 取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入小于100cfu的試驗(yàn)菌，過(guò)濾。加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基至濾筒內(nèi)。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌，作為對(duì)照。置規(guī)定溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天，各試驗(yàn)菌同法操作。直接接種法 取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基6管，分別接入小于100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基6管，分別接入小于100cfu的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另1管作為

13、對(duì)照，置規(guī)定的溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過(guò)5天。結(jié)果判定 與對(duì)照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長(zhǎng)良好，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無(wú)抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無(wú)菌檢查。如含供試品的任一容器中的試驗(yàn)菌生長(zhǎng)微弱、緩慢或不生長(zhǎng)，則說(shuō)明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，應(yīng)采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基的用量、使用中和劑或滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。方法適用性試驗(yàn)也可與供試品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)行。供試品的無(wú)菌檢查無(wú)菌檢查法包括薄膜過(guò)濾法和直接接種法。只要供試品性質(zhì)允許，應(yīng)采用薄膜過(guò)濾法。供試品無(wú)菌檢

14、查所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法相同。無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應(yīng)證明其有效性，且對(duì)微生物無(wú)毒性。檢驗(yàn)數(shù)量 檢驗(yàn)數(shù)量是指一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量，成品每亞批均應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌檢查。除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品按表1規(guī)定；上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗(yàn)按表2規(guī)定。表1、表2中最少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的供試品用量。檢驗(yàn)量 是指供試品每個(gè)最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量（g或ml）。除另有規(guī)定外，供試品檢驗(yàn)量按表3規(guī)定。若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩種培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。采用薄膜過(guò)濾法時(shí)，只要供試品

15、特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部?jī)?nèi)容物過(guò)濾。陽(yáng)性對(duì)照 應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽(yáng)性對(duì)照菌：無(wú)抑菌作用及抗革蘭陽(yáng)性菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對(duì)照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對(duì)照菌；抗真菌的供試品，以白色念珠菌為對(duì)照菌。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的菌液制備同方法適用性試驗(yàn)，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無(wú)菌檢查時(shí)每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)72小時(shí)內(nèi)應(yīng)生長(zhǎng)良好。陰性對(duì)照 供試品無(wú)菌檢查時(shí)，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。供試品處理及接種培養(yǎng)基操作時(shí)，用適宜的消毒液對(duì)供試品容器表面進(jìn)行徹底消毒，如

16、果供試品容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無(wú)菌器材（如帶有除菌過(guò)濾器的針頭）向容器內(nèi)導(dǎo)入無(wú)菌空氣，再按無(wú)菌操作啟開(kāi)容器取出內(nèi)容物。除另有規(guī)定外，按下列方法進(jìn)行供試品處理及接種培養(yǎng)基。1. 薄膜過(guò)濾法薄膜過(guò)濾法一般應(yīng)采用封閉式薄膜過(guò)濾器。無(wú)菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45um，直徑約為50mm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。水溶性供試液過(guò)濾前應(yīng)先將少量的沖洗液過(guò)濾，以潤(rùn)濕濾膜。油類(lèi)供試品，其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖

17、洗量一般為100ml，且總沖洗量不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。水溶液供試品 取規(guī)定量，直接過(guò)濾，或混合至含不少于100ml 適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，混勻，立即過(guò)濾。如供試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗(yàn)。除生物制品外，一般樣品沖洗后，1份濾器中加入100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1份濾器中加入100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。生物制品樣品沖洗后，2份濾器中加入100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1份濾器中加入100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。水溶性固體供試品 取規(guī)定量，加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶，然后

18、照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。非水溶性供試品 取規(guī)定量，直接過(guò)濾；或混合溶于適量含聚山梨酯80或其他適宜乳化劑的稀釋液中，充分混合，立即過(guò)濾。用含0.1%1% 聚山梨酯80的沖洗液沖洗濾膜至少3次。加入含或不含聚山梨酯80的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)基照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作?？扇苡谑耐樗岙惐サ母鄤┖宛ば杂蛣┕┰嚻?取規(guī)定量，混合至適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯中，劇烈振搖，使供試品充分溶解，如果需要可適當(dāng)加熱，但溫度不得超過(guò)44 ，趁熱迅速過(guò)濾。對(duì)仍然無(wú)法過(guò)濾的供試品，于含有適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯中的供試液中加入不少于100ml的稀釋液，充分振搖萃取，靜置，取下層水相作為供試液過(guò)濾。過(guò)濾后濾膜沖洗

19、及接種培養(yǎng)基照非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。無(wú)菌十四烷酸異丙酯的制備 采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾除菌，選用孔徑0.22um的適宜濾膜。無(wú)菌氣（噴）霧劑供試品 取規(guī)定量，將各容器置20或其他適宜溫度冷凍約1小時(shí)，取出，以無(wú)菌操作迅速在容器上端鉆一小孔，釋放拋射劑后再無(wú)菌開(kāi)啟容器，并將供試品轉(zhuǎn)移至無(wú)菌容器中混合，供試品亦可采用其他適宜的方法取出。然后照水溶液或非水溶性制劑供試品項(xiàng)下的方法操作。裝有藥物的注射器供試品 取規(guī)定量，將注射器中的內(nèi)容物（若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解）直接過(guò)濾，或混合至含適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，然后照水溶液或非水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法進(jìn)行包裝中所

20、配帶的無(wú)菌針頭的無(wú)菌檢查。具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具（輸血、輸液袋等）供試品 取規(guī)定量，每個(gè)最小包裝用50100ml 沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無(wú)菌容器中，然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的針頭的無(wú)菌檢查。 2. 直接接種法直接接種法適用于無(wú)法用薄膜過(guò)濾法進(jìn)行無(wú)菌檢查的供試品，即取規(guī)定量供試品分別等量接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。除生物制品外，一般樣品無(wú)菌檢查時(shí)兩種培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)相等；生物制品無(wú)菌檢查時(shí)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)為2:1。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于

21、培養(yǎng)基體積的10%，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。供試品檢查時(shí)，培養(yǎng)基的用量和高度同方法適用性試驗(yàn)。混懸液等非澄清水溶液供試品 取規(guī)定量，等量接種至各管培養(yǎng)基中。固體培養(yǎng)基 取規(guī)定量，直接等量接種至各管培養(yǎng)基中。加入適宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶后，取規(guī)定量等量接種至各管培養(yǎng)基中。非水溶性供試品 取規(guī)定量，混合，加入適量的聚山梨酯80或其他適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化，等量接種至各管培養(yǎng)基中?；蛑苯拥攘拷臃N至含聚山梨酯80或其他適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。敷料供試品 取規(guī)定數(shù)量，以無(wú)菌操作拆開(kāi)每個(gè)包裝，于不同部位剪取約100mg或

22、1cm×3cm的供試品，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適宜培養(yǎng)基中。腸線、縫合線等供試品 腸線、縫合線及其他一次性使用的醫(yī)用材料按規(guī)定量取最小包裝，無(wú)菌拆開(kāi)包裝，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。滅菌醫(yī)用器具供試品 取規(guī)定量，必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎段，等量接種于各管足以浸沒(méi)供試品的適量培養(yǎng)基中。放射性藥品 取供試品1瓶（支），等量接種于裝量為7.5ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。 每管接種量為0.2ml。培養(yǎng)及觀察將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)14天；接種生物制品供試品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份，一份置303

23、5培養(yǎng)，一份置2025 培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天，不能從外觀上判斷有無(wú)微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。結(jié)果判斷陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)生長(zhǎng)良好，陰性對(duì)照管不得有菌生長(zhǎng)。否則，試驗(yàn)無(wú)效。若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少一個(gè)條件時(shí)方可判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效：（1）無(wú)菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無(wú)菌檢查法的要求。（2）回顧無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。（3）供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查，若無(wú)菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定。表1 批出廠產(chǎn)品及生物制品的原液和半成品最少檢驗(yàn)數(shù)量供試品批產(chǎn)量N（個(gè)）接種每種培養(yǎng)基的最少檢驗(yàn)數(shù)量注射劑大體積注射劑（100ml）100100N50050010% 或4個(gè)（取較多者）10個(gè)2%或20個(gè)（取較少者）20個(gè)（