醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)二

1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.1.細(xì)菌接種法（示教），細(xì)菌接種法（示教），平板分區(qū)劃線接種（操作，每平板分區(qū)劃線接種（操作，每人一份）人一份）2.2.溶菌酶試驗(yàn)（操作，每組一份）溶菌酶試驗(yàn)（操作，每組一份）3.3.吞噬作用（結(jié)果示教）吞噬作用（結(jié)果示教）4.4.外毒素及抗毒素作用（結(jié)果示教外毒素及抗毒素作用（結(jié)果示教）一、細(xì)菌接種法一、細(xì)菌接種法培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。分類：分類：據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類：液體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基，半固體培養(yǎng)基;據(jù)對培養(yǎng)基成分了解程度分類：據(jù)對培養(yǎng)基成分了解程度分類：合成培養(yǎng)基，

2、天然培養(yǎng)基；據(jù)營養(yǎng)組成和用途分類據(jù)營養(yǎng)組成和用途分類：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，增菌培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)基，鑒別培養(yǎng)基，厭氧培養(yǎng)基。細(xì)菌接種法細(xì)菌接種法原理：原理： 用接種環(huán)（針）沾取細(xì)菌或標(biāo)本，通過劃線涂抹等方法，將細(xì)菌接種到合適的培養(yǎng)基上，并在一定的條件下使細(xì)菌得以生長繁殖。 接種環(huán)（針）滅菌俟冷沾取細(xì)菌或標(biāo)本進(jìn)行接種環(huán)滅菌步驟和方法1. 接種工具接種工具2.2.接種環(huán)境接種環(huán)境 接種罩 超凈工作臺 無菌室3.接種方法接種方法根據(jù)待檢標(biāo)本性質(zhì)、培養(yǎng)目的和所用培養(yǎng)基的性質(zhì)采用不同的接種方法。1） 平板劃線分離培養(yǎng)法：平板劃線分離培養(yǎng)法：使標(biāo)本混雜混雜的多種細(xì)菌分散成單個細(xì)菌單個細(xì)菌。 *連續(xù)劃線分離法 *分區(qū)

3、劃線分離法平板分區(qū)劃線分離法平板分區(qū)劃線分離法菌落菌落平板分區(qū)劃線分離混雜菌金黃色葡萄球菌菌落 （S型菌落）結(jié)核分枝桿菌菌落（R型菌落）肺炎鏈球菌（M型菌落）細(xì)菌的菌落細(xì)菌的菌落2）斜面接種法：）斜面接種法： 主要用于純種移植，以進(jìn)一步鑒鑒定或保存定或保存菌種菌苔菌苔3）液體接種法：）液體接種法：可觀察到細(xì)菌不同的生長現(xiàn)象4）半固體穿刺接種法：）半固體穿刺接種法：可用于保菌或觀察動力5）涂布接種法：）涂布接種法：用于標(biāo)本中菌數(shù)測定和藥敏試驗(yàn)的細(xì)菌接種細(xì)菌接種法細(xì)菌接種法n結(jié)果示教結(jié)果示教：半固體（?。捍竽c埃希菌、白色葡萄球菌； 肉湯管（?。捍竽c埃希菌、枯草芽孢桿菌、乙型鏈球菌； 斜面（大）

4、：白色葡萄球菌； 普平分區(qū)劃線結(jié)果：金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌混合菌液n操作示教操作示教：普通平板：平板分區(qū)劃線分離法； 半固體：半固體穿刺接種法； 肉湯管：液體接種法； 斜面：斜面接種法n操作操作： 平板分區(qū)劃線接種法（操作，每人一份）二、溶菌酶試驗(yàn)二、溶菌酶試驗(yàn)原理：n溶菌酶能裂解G+菌的胞壁肽聚糖中N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸之間的-1，4糖苷鍵，破壞聚糖骨架，引起細(xì)菌裂解。nG-菌因?yàn)榧?xì)胞壁外有外膜一般不受溶菌酶的影響。n溶菌酶是非特異性免疫中一種重要體液殺菌成分。n方法：1、菌液的準(zhǔn)備2、溶壁微球菌瓊脂平板的制備3、用清水漱口，片刻后將唾液吐于小燒杯中，用毛細(xì)吸管吸出滴入孔內(nèi)（不要

5、溢出），同時加PBS于一孔中作陰性對照，加雞蛋清于一孔中作陽性對照。4、放置室溫，18h后觀察結(jié)果。n結(jié)果：測量并記錄溶菌環(huán)直徑。+-？二、溶菌酶試驗(yàn)二、溶菌酶試驗(yàn)注意注意 1.往孔內(nèi)加樣時，不能溢出孔外。 2.孔內(nèi)不能有氣泡。 3.做好標(biāo)記，不要混淆。二、溶菌酶試驗(yàn)二、溶菌酶試驗(yàn)+-？三、吞噬作用三、吞噬作用吞噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞 小吞噬細(xì)胞：小吞噬細(xì)胞：血液中的中性粒細(xì)胞血液中的中性粒細(xì)胞 大吞噬細(xì)胞：大吞噬細(xì)胞：固定于組織中的巨噬細(xì)胞和血固定于組織中的巨噬細(xì)胞和血 液中的單核細(xì)胞液中的單核細(xì)胞作用：非特異性吞噬、殺傷和消化侵入的病原體，作用：非特異性吞噬、殺傷和消化侵入的病原體， 是機(jī)體天然防

6、御的重要機(jī)制之一是機(jī)體天然防御的重要機(jī)制之一1、中性粒細(xì)胞的吞噬作用n方法：（1）取金葡球菌1-2ml，注射于小白鼠腹腔。（2）5h后將動物解剖，用無菌棉拭子取腹腔液作涂片，干燥后，用瑞氏法染色，觀察小吞噬現(xiàn)象。n結(jié)果：記錄并繪圖小吞噬現(xiàn)象。小吞噬小吞噬 （中性粒細(xì)胞吞噬葡萄球菌）2、巨噬細(xì)胞的吞噬作用n方法：（1）取滅菌的1%可溶性淀粉溶液5ml注射于豚鼠腹腔內(nèi)。（2）12h后注射5ml肉湯于豚鼠腹腔內(nèi)。（3）1h后注射5ml雞紅細(xì)胞懸液于豚鼠腹腔內(nèi)。（4）分別于1、6、24h抽取腹腔液少許涂片，干燥后，用瑞氏法染色，觀察大吞噬現(xiàn)象。n結(jié)果：記錄并繪圖大吞噬現(xiàn)象。大吞噬大吞噬 （巨噬細(xì)胞吞噬

7、雞紅細(xì)胞）四、外毒素及抗毒素作用四、外毒素及抗毒素作用 外毒素是某些致病菌在生長繁殖過程中產(chǎn)生外毒素是某些致病菌在生長繁殖過程中產(chǎn)生并釋放至體外的一種毒性蛋白質(zhì)。主要由并釋放至體外的一種毒性蛋白質(zhì)。主要由某些革某些革蘭陽性菌及少數(shù)革蘭陰性菌產(chǎn)生蘭陽性菌及少數(shù)革蘭陰性菌產(chǎn)生。 外毒素不穩(wěn)定，對熱和某些化學(xué)物質(zhì)敏感；外毒素不穩(wěn)定，對熱和某些化學(xué)物質(zhì)敏感；其抗原性強(qiáng)，毒性作用也強(qiáng)，具有親組織性，能其抗原性強(qiáng)，毒性作用也強(qiáng)，具有親組織性，能選擇性作用于某些器官，引起特殊病變；選擇性作用于某些器官，引起特殊病變； 細(xì)菌外毒素對機(jī)體的毒性作用，可被細(xì)菌外毒素對機(jī)體的毒性作用，可被相應(yīng)抗相應(yīng)抗毒素毒素中和。中和。n方法：1、將破傷風(fēng)梭菌接種于0.1%葡萄糖皰肉培養(yǎng)基中，37下培養(yǎng)48h，取上清離心，3000rpm ，30min，此上清中即含破傷風(fēng)外毒素。2、于一只小白鼠后腿肌肉注射破傷風(fēng)外毒素0.2ml。3、取另一只小白鼠，先在其腹腔中注射破傷風(fēng)抗毒素0.2ml ，再于其后腿肌肉注射破傷風(fēng)外毒素0.2ml。4、對兩只小鼠作好標(biāo)記，逐日觀察有無發(fā)