人體寄生蟲學(xué)實驗：實驗五 醫(yī)學(xué)原蟲（一）

1、實驗五醫(yī)學(xué)原蟲（一）實驗五醫(yī)學(xué)原蟲（一）Medical Protozoan溶組織內(nèi)阿米巴溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoeba histolytica) 和其它阿米巴和其它阿米巴11.掌握溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體和包囊的形態(tài)掌握溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體和包囊的形態(tài)特點(diǎn)。特點(diǎn)。2.掌握溶組織內(nèi)阿米巴常用病原學(xué)診斷方法。掌握溶組織內(nèi)阿米巴常用病原學(xué)診斷方法。3.掌握溶組織內(nèi)阿米巴與結(jié)腸阿米巴形態(tài)鑒掌握溶組織內(nèi)阿米巴與結(jié)腸阿米巴形態(tài)鑒別要點(diǎn)。別要點(diǎn)。4.理解溶組織內(nèi)阿米巴的致病作用。理解溶組織內(nèi)阿米巴的致病作用。2實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容一、油鏡的使用一、油鏡的使用二、操作二、操作 1. 溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體溶組織內(nèi)阿

2、米巴滋養(yǎng)體 (trophozoite)（油鏡）（油鏡） 2.2.溶組織內(nèi)阿米巴包囊溶組織內(nèi)阿米巴包囊 (cyst)（油鏡）（油鏡） 3.3.阿米巴活滋養(yǎng)體觀察及包囊碘染色觀察阿米巴活滋養(yǎng)體觀察及包囊碘染色觀察（高倍鏡）（高倍鏡）三、小組操作三、小組操作 鼠瘧原蟲接種實驗鼠瘧原蟲接種實驗四、示教四、示教 溶組織內(nèi)阿米巴腸病理標(biāo)本（火山口樣，燒瓶狀）、溶組織內(nèi)阿米巴腸病理標(biāo)本（火山口樣，燒瓶狀）、結(jié)腸內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體和包囊，其他非致病阿米巴結(jié)腸內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體和包囊，其他非致病阿米巴 五、作業(yè)五、作業(yè) P22-23 P22-23 3油鏡的使用及清潔油鏡的使用及清潔 使用使用: :方法一方法一1.加一滴

3、香柏油在玻片標(biāo)本上加一滴香柏油在玻片標(biāo)本上2.把顯微鏡的物鏡調(diào)至與標(biāo)本最小距離后，再轉(zhuǎn)動微調(diào)（逆把顯微鏡的物鏡調(diào)至與標(biāo)本最小距離后，再轉(zhuǎn)動微調(diào)（逆時針轉(zhuǎn)動，拉開標(biāo)本與物鏡的距離），調(diào)至焦距清楚為止。時針轉(zhuǎn)動，拉開標(biāo)本與物鏡的距離），調(diào)至焦距清楚為止。方法二方法二1. 低倍鏡低倍鏡高倍鏡高倍鏡目標(biāo)置于視野正中目標(biāo)置于視野正中2.2.移開高倍鏡，標(biāo)本中央加移開高倍鏡，標(biāo)本中央加1 1滴香柏油滴香柏油3.3.油鏡：調(diào)節(jié)微調(diào)（細(xì)調(diào)焦旋鈕）油鏡：調(diào)節(jié)微調(diào)（細(xì)調(diào)焦旋鈕）4清潔油鏡頭清潔油鏡頭: :鏡頭的清潔鏡頭的清潔 1. 用用擦鏡紙擦鏡紙（白色白色）擦拭油鏡頭擦拭油鏡頭 2. 再用沾有再用沾有1-2滴滴

4、二甲苯二甲苯的擦鏡紙擦的擦鏡紙擦 3. 最后用擦鏡紙擦鏡頭最后用擦鏡紙擦鏡頭1-2次次標(biāo)本的清潔標(biāo)本的清潔 1. 封加蓋玻片的標(biāo)本，清潔方式同上封加蓋玻片的標(biāo)本，清潔方式同上 2. 未封加蓋玻片的標(biāo)本未封加蓋玻片的標(biāo)本 (1). 先先用用黃色黃色的紙小心平拉的紙小心平拉輕輕拖輕輕拖去油（去油（1-2次）次） ( (2). 用沾有用沾有1-21-2滴滴二甲苯二甲苯的紙的紙輕輕拖輕輕拖2-3次。次。 目的目的：以免抹掉涂片標(biāo)本。：以免抹掉涂片標(biāo)本。 5溶組織內(nèi)阿米巴生活史溶組織內(nèi)阿米巴生活史四核包囊四核包囊滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體腸外腸外腸壁腸壁肝肝、肺、腦、皮膚，膿腫、肺、腦、皮膚，

5、膿腫潰瘍、阿米巴腫、穿孔，痢疾潰瘍、阿米巴腫、穿孔，痢疾外界外界經(jīng)口吞入經(jīng)口吞入包囊包囊人體內(nèi)（盲腸、結(jié)腸）人體內(nèi)（盲腸、結(jié)腸）感染期感染期糞便糞便二分裂增殖二分裂增殖二分裂增殖二分裂增殖腸外阿米巴病腸外阿米巴病腸阿米巴病腸阿米巴病61.1.內(nèi)外質(zhì)分明內(nèi)外質(zhì)分明2. .通常有吞噬的通常有吞噬的RBC3. .核一個，常位中央。核一個，常位中央。核仁一個，常居中。核仁一個，常居中。核周染色質(zhì)較均勻。核周染色質(zhì)較均勻。 7滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體(含紅細(xì)胞含紅細(xì)胞)8滋養(yǎng)體（不含紅細(xì)胞）滋養(yǎng)體（不含紅細(xì)胞）91.核的特點(diǎn)同滋養(yǎng)體核的特點(diǎn)同滋養(yǎng)體;2.細(xì)胞核數(shù)細(xì)胞核數(shù)1-4個個, 感染期為感染期為4核核成熟包囊成

6、熟包囊；3.擬染色體深藍(lán)色，棒狀，擬染色體深藍(lán)色，棒狀， 兩端較鈍圓。成熟包囊兩端較鈍圓。成熟包囊 常缺擬染色體。常缺擬染色體。10111.1.內(nèi)外質(zhì)不分明內(nèi)外質(zhì)不分明2. .沒有吞噬的沒有吞噬的RBC3. .核一個，常偏位。核核一個，常偏位。核 仁一個，也常偏位。仁一個，也常偏位。 核周染色質(zhì)分布不均勻。核周染色質(zhì)分布不均勻。 121.核的特點(diǎn)同滋養(yǎng)體核的特點(diǎn)同滋養(yǎng)體2.細(xì)胞核數(shù)細(xì)胞核數(shù)1-8個個,感染期感染期 為為8個個3.3.擬染色體深藍(lán)色，兩端擬染色體深藍(lán)色，兩端 不整齊，似碎片狀或草不整齊，似碎片狀或草 束狀。成熟包囊常缺擬束狀。成熟包囊常缺擬 染色體染色體13溶組織內(nèi)阿米巴與結(jié)腸內(nèi)

7、阿米巴形態(tài)特點(diǎn)及區(qū)別溶組織內(nèi)阿米巴與結(jié)腸內(nèi)阿米巴形態(tài)特點(diǎn)及區(qū)別 溶組織內(nèi)阿米巴溶組織內(nèi)阿米巴 結(jié)腸內(nèi)阿米巴結(jié)腸內(nèi)阿米巴 滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體 1.1.較小，內(nèi)外質(zhì)分明較小，內(nèi)外質(zhì)分明2. .通常有吞噬的通常有吞噬的RBC3. .核核( (核仁核仁) )一個，常位中央。一個，常位中央。核仁一個，居中。核仁一個，居中。 核周染色核周染色質(zhì)較均質(zhì)較均 勻，勻，1.1.較大，內(nèi)外質(zhì)分界不甚顯較大，內(nèi)外質(zhì)分界不甚顯2.2.無無RBC，吞噬細(xì)菌、淀粉，吞噬細(xì)菌、淀粉3.3.核核( (核仁核仁) )一個，較大，常偏一個，較大，常偏位。核周染色顆粒粗大，大小位。核周染色顆粒粗大，大小及分布及分布 不均。不均。 包囊包

8、囊 1.較小較小2.核的特點(diǎn)同滋養(yǎng)體核的特點(diǎn)同滋養(yǎng)體3.細(xì)胞核數(shù)細(xì)胞核數(shù)1-4個個,感染期為感染期為4個個4.4.擬染色體深藍(lán)色，棒狀，兩擬染色體深藍(lán)色，棒狀，兩 端較鈍圓。成熟包囊常缺擬端較鈍圓。成熟包囊常缺擬 染色體。染色體。 1.較大較大2.核的特點(diǎn)同滋養(yǎng)體核的特點(diǎn)同滋養(yǎng)體3.細(xì)胞核數(shù)細(xì)胞核數(shù)1-8個個,感染期為感染期為8個個4.4.擬染色體的兩端不整齊似碎擬染色體的兩端不整齊似碎 片狀或草束狀。片狀或草束狀。14口小底大的燒瓶樣潰瘍口小底大的燒瓶樣潰瘍1516阿米巴活滋養(yǎng)體觀察及阿米巴活滋養(yǎng)體觀察及包囊碘染色觀察包囊碘染色觀察 包囊碘染色后呈棕黃色，囊壁不著色，包囊碘染色后呈棕黃色，囊

9、壁不著色，發(fā)亮，核呈小圓圈狀，未成熟包囊中可見發(fā)亮，核呈小圓圈狀，未成熟包囊中可見清晰的棕色糖原泡，擬染色體發(fā)亮。清晰的棕色糖原泡，擬染色體發(fā)亮。 碘染液碘染液含含包囊的包囊的培養(yǎng)液培養(yǎng)液活滋養(yǎng)體觀察活滋養(yǎng)體觀察包囊碘染色觀察包囊碘染色觀察含含滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體的培養(yǎng)液的培養(yǎng)液17包囊碘染色包囊碘染色18包囊碘染色包囊碘染色19溶組織內(nèi)阿米巴的診斷溶組織內(nèi)阿米巴的診斷1. 1. 病原診斷病原診斷 糞便糞便 滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體生理鹽水涂片法生理鹽水涂片法送送 及時、保溫及時、保溫 取取 膿血便，粘液膿血便，粘液 看看 醬紅色粘液，腥臭味醬紅色粘液，腥臭味 包囊包囊 碘染色，碘染色，多次多次檢查，濃集法檢查，

10、濃集法( (甲醛乙醚法甲醛乙醚法) ) 肝膿腫液肝膿腫液 滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體 “巧克力醬巧克力醬”狀膿液狀膿液( (果醬色果醬色) )；膿腫壁；膿腫壁2.2.體外培養(yǎng)法體外培養(yǎng)法RobinsonRobinson培養(yǎng)基培養(yǎng)基 （診斷及保存蟲種）（診斷及保存蟲種）3.3.免疫診斷免疫診斷 ELISA IHA AGDELISA IHA AGD4.4.分子生物學(xué)方法分子生物學(xué)方法 PCRPCR5.5.鑒別診斷鑒別診斷 迪斯帕內(nèi)阿米巴、結(jié)腸內(nèi)阿米巴、哈門氏內(nèi)阿迪斯帕內(nèi)阿米巴、結(jié)腸內(nèi)阿米巴、哈門氏內(nèi)阿米巴、細(xì)菌性痢疾、細(xì)菌性肝膿腫等米巴、細(xì)菌性痢疾、細(xì)菌性肝膿腫等20鼠瘧原蟲接種實驗鼠瘧原蟲接種實驗（伯氏瘧原蟲，（伯氏瘧原蟲，Plasmodium berghei) 小組操作小組操作:4:4人人/ /組組方法：方法：1.1.從陽性鼠尾巴取血從陽性鼠尾巴取血2 2滴，用生理鹽水稀釋滴，用生理鹽水稀釋至至3 ml3 m