反義寡聚核苷酸課件

1、24.1反義技術(shù)簡(jiǎn)介反義技術(shù)簡(jiǎn)介24.2反義核酸類(lèi)藥物的特點(diǎn)反義核酸類(lèi)藥物的特點(diǎn)24.3反義核酸類(lèi)藥物的作用機(jī)理及應(yīng)用反義核酸類(lèi)藥物的作用機(jī)理及應(yīng)用24.4反義核酸類(lèi)藥物的通用生產(chǎn)方法與技術(shù)反義核酸類(lèi)藥物的通用生產(chǎn)方法與技術(shù)24.5典型反義核酸類(lèi)藥物生產(chǎn)技術(shù)及工藝典型反義核酸類(lèi)藥物生產(chǎn)技術(shù)及工藝24.6反義類(lèi)藥物的發(fā)展前景與展望反義類(lèi)藥物的發(fā)展前景與展望 何謂何謂“反義反義”靶是有靶是有“正義正義”的鏈的鏈反義核酸與靶結(jié)合，為了區(qū)分，把反義核酸與靶結(jié)合，為了區(qū)分，把補(bǔ)充進(jìn)的鏈定義為補(bǔ)充進(jìn)的鏈定義為“反義反義” 反義核酸是指與具有遺傳信息的反義核酸是指與具有遺傳信息的“正義正義”（POSITIV

2、E SENSE）核酸鏈互補(bǔ)的核酸序列，與靶基因具有互補(bǔ)序列的）核酸鏈互補(bǔ)的核酸序列，與靶基因具有互補(bǔ)序列的DNADNA或或RNARNA片段，可通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則原理與特定靶基因片段，可通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則原理與特定靶基因或或MRNAMRNA形成雜交鏈，從而阻斷基因轉(zhuǎn)錄和翻譯。它包括反義形成雜交鏈，從而阻斷基因轉(zhuǎn)錄和翻譯。它包括反義RNARNA、反義、反義DNADNA及核酶（及核酶（RIBOZYME），可通過(guò)人工合成和從），可通過(guò)人工合成和從生物中提取獲得它們。生物中提取獲得它們。24.1反義技術(shù)簡(jiǎn)介反義技術(shù)簡(jiǎn)介反義技術(shù)（反義技術(shù)（antisense technology）就是采用反義核就是采

3、用反義核酸分子抑制、封閉或破壞靶基因的技術(shù)酸分子抑制、封閉或破壞靶基因的技術(shù)。 發(fā)展史發(fā)展史History時(shí)間時(shí)間/ /年年事件事件人或機(jī)構(gòu)人或機(jī)構(gòu)1953首次提出首次提出“反義反義”定義定義Watson1957三螺旋核酸概念的提出三螺旋核酸概念的提出Davies1969第一代反義核酸藥物（福米韋生，第一代反義核酸藥物（福米韋生，F(xiàn)omivirsen）誕生）誕生Isis制藥公司制藥公司1978首次應(yīng)用合成的寡核苷酸成功的抑制基因的表達(dá)首次應(yīng)用合成的寡核苷酸成功的抑制基因的表達(dá)Zamenick和和Stephenson1980ColE1 DNA復(fù)制研究中發(fā)現(xiàn)反義調(diào)節(jié)機(jī)制復(fù)制研究中發(fā)現(xiàn)反義調(diào)節(jié)機(jī)制I

4、toh和和Tomizawa1981第二代反義核酸藥物第二代反義核酸藥物Hybridon公司公司1984首次提出反義核酸可用于下調(diào)原核生物與真核生物基因的表達(dá)首次提出反義核酸可用于下調(diào)原核生物與真核生物基因的表達(dá)Coleman等等1987首次報(bào)道反義鏈下調(diào)一種細(xì)菌基因的表達(dá)首次報(bào)道反義鏈下調(diào)一種細(xì)菌基因的表達(dá)Rothstein1988首次報(bào)道反義基因下調(diào)一種植物基因的表達(dá)首次報(bào)道反義基因下調(diào)一種植物基因的表達(dá)Van der Krol1988一段一段27bp的三鏈結(jié)構(gòu)寡核苷酸序列特異性抑制的三鏈結(jié)構(gòu)寡核苷酸序列特異性抑制c-myc的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄Cooey1990首次報(bào)道正義基因下調(diào)植物基因的表達(dá)首次

5、報(bào)道正義基因下調(diào)植物基因的表達(dá)Napoli和和Van der Krol1997反義反義P120抑制抑制MIA Pa Ca-2細(xì)胞細(xì)胞Freeman 反義技術(shù)的兩種技術(shù)路線(xiàn)反義技術(shù)的兩種技術(shù)路線(xiàn)將表達(dá)與體內(nèi)基因或?qū)⒈磉_(dá)與體內(nèi)基因或mRNA互補(bǔ)序列的互補(bǔ)序列的基因轉(zhuǎn)入體內(nèi)，使細(xì)胞表達(dá)與目標(biāo)基因基因轉(zhuǎn)入體內(nèi)，使細(xì)胞表達(dá)與目標(biāo)基因互補(bǔ)的互補(bǔ)的mRNA，從而阻斷目標(biāo)基因的表從而阻斷目標(biāo)基因的表達(dá)達(dá)體外合成體外合成mRNA互補(bǔ)的核苷酸類(lèi)似物，互補(bǔ)的核苷酸類(lèi)似物，通過(guò)靜脈注射等途徑進(jìn)入細(xì)胞，特異性通過(guò)靜脈注射等途徑進(jìn)入細(xì)胞，特異性的與目標(biāo)的與目標(biāo)mRNA作用作用以第二種為主來(lái)介紹以第二種為主來(lái)介紹 反義基因

6、藥物輸送系統(tǒng)反義基因藥物輸送系統(tǒng)脂質(zhì)體、脂質(zhì)復(fù)合物脂質(zhì)體、脂質(zhì)復(fù)合物受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移技術(shù)受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移技術(shù)以聚合物微球?yàn)檩d體的輸送系統(tǒng)以聚合物微球?yàn)檩d體的輸送系統(tǒng) 樹(shù)枝狀高聚物樹(shù)枝狀高聚物 脂質(zhì)體、脂質(zhì)復(fù)合物脂質(zhì)體、脂質(zhì)復(fù)合物脂質(zhì)體是由磷脂雙脂質(zhì)層包裹液體脂質(zhì)體是由磷脂雙脂質(zhì)層包裹液體成分構(gòu)成成分構(gòu)成 陽(yáng)離子脂質(zhì)體和陽(yáng)離子脂質(zhì)體和ASODN形成陽(yáng)離子形成陽(yáng)離子脂質(zhì)復(fù)合物與帶有負(fù)電荷的細(xì)胞膜脂質(zhì)復(fù)合物與帶有負(fù)電荷的細(xì)胞膜親和，通過(guò)胞飲進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)親和，通過(guò)胞飲進(jìn)入細(xì)胞內(nèi) 受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移技術(shù)受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移技術(shù):受受體介導(dǎo)受受體介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)運(yùn)技術(shù)的轉(zhuǎn)運(yùn)技術(shù)的啟發(fā)實(shí)現(xiàn)啟發(fā)實(shí)現(xiàn)DNA和和RNA的轉(zhuǎn)運(yùn)的轉(zhuǎn)運(yùn)

7、例例:脫唾液酸血清類(lèi)粘蛋白脫唾液酸血清類(lèi)粘蛋白(ASGP)受體受體脫去血清類(lèi)粘蛋白上的唾液酸，得到脫去血清類(lèi)粘蛋白上的唾液酸，得到ASGP以中間連接物將以中間連接物將ASGP與多聚賴(lài)氨酸與多聚賴(lài)氨酸 （PL）共價(jià)結(jié)合，得到共價(jià)結(jié)合，得到ASGPPL復(fù)合物復(fù)合物結(jié)合反義結(jié)合反義RNA，成為成為ASGPPL反義反義RNA復(fù)合物復(fù)合物 該復(fù)合物能被肝細(xì)胞表面該復(fù)合物能被肝細(xì)胞表面ASGP受體識(shí)別，吞噬，然后受體識(shí)別，吞噬，然后釋放，發(fā)揮作用釋放，發(fā)揮作用 受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移技術(shù)：受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移技術(shù)：有以下兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)：有以下兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)： 1. 專(zhuān)一性強(qiáng)專(zhuān)一性強(qiáng) 2. 抗降解能力強(qiáng)抗降解能力強(qiáng) 以聚合物微球?yàn)檩d

8、體的輸送系統(tǒng)以聚合物微球?yàn)檩d體的輸送系統(tǒng) 目前研究最多的聚合物微球是聚丙交酯目前研究最多的聚合物微球是聚丙交酯及乳酸一羥乙酸（及乳酸一羥乙酸（LA-GA）以丙交酯和乙交酯為單體形成的共聚物，以丙交酯和乙交酯為單體形成的共聚物，降解屬于水解反應(yīng)，產(chǎn)物均為人體正常降解屬于水解反應(yīng)，產(chǎn)物均為人體正常代謝物，降解時(shí)間取決于兩種單體的配代謝物，降解時(shí)間取決于兩種單體的配比和聚合物的分子量，構(gòu)成的結(jié)合復(fù)合比和聚合物的分子量，構(gòu)成的結(jié)合復(fù)合體具有潛在的轉(zhuǎn)運(yùn)反義核苷酸和核酶的體具有潛在的轉(zhuǎn)運(yùn)反義核苷酸和核酶的作用作用 樹(shù)枝狀高聚物樹(shù)枝狀高聚物 轉(zhuǎn)運(yùn)帶負(fù)電荷的轉(zhuǎn)運(yùn)帶負(fù)電荷的ASODN，并形并形成穩(wěn)定的復(fù)合物成穩(wěn)

9、定的復(fù)合物 第一種第一種ASODN藥物藥物-Vitravene98年，第一種年，第一種ASODN藥物由藥物由FDA批準(zhǔn)批準(zhǔn)使用使用用于治療一種由用于治療一種由CMV（巨細(xì)胞病毒）引巨細(xì)胞病毒）引起的眼部傳染病起的眼部傳染病-巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎膜炎流行于艾滋病人中流行于艾滋病人中 巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎把藥物把藥物注射到玻璃體中，然后被注射到玻璃體中，然后被視網(wǎng)膜中的受染細(xì)胞吸收，進(jìn)入視網(wǎng)膜中的受染細(xì)胞吸收，進(jìn)入細(xì)胞的細(xì)胞的ASODN與病毒的與病毒的mRNA結(jié)合結(jié)合24.2反義核酸類(lèi)藥物的特點(diǎn)反義核酸類(lèi)藥物的特點(diǎn)根據(jù)核酸雜交原理根據(jù)核酸雜交原理來(lái)來(lái)設(shè)計(jì)，針對(duì)特

10、設(shè)計(jì)，針對(duì)特定靶序列定靶序列人工合成人工合成DNA或或RNA小分子小分子由由7到到30個(gè)核苷酸組成個(gè)核苷酸組成 功能：功能： 有選擇地結(jié)合目標(biāo)，影響轉(zhuǎn)錄或有選擇地結(jié)合目標(biāo)，影響轉(zhuǎn)錄或翻譯，促進(jìn)結(jié)合產(chǎn)物的降解翻譯，促進(jìn)結(jié)合產(chǎn)物的降解分類(lèi)：分類(lèi)： 反義反義DNA，反義反義RNA（核酶）核酶）反義核酸類(lèi)藥物的特點(diǎn)：反義核酸類(lèi)藥物的特點(diǎn)： 高度特異性高度特異性 高效低毒高效低毒 最優(yōu)化藥物設(shè)計(jì)最優(yōu)化藥物設(shè)計(jì) 經(jīng)濟(jì)方便經(jīng)濟(jì)方便 24.3反義核酸類(lèi)藥物的作用反義核酸類(lèi)藥物的作用機(jī)理及應(yīng)用機(jī)理及應(yīng)用 反義寡聚核苷酸反義寡聚核苷酸 & 反義寡聚脫氧核苷酸反義寡聚脫氧核苷酸反義寡聚核苷酸反義寡聚核苷酸A

11、ntisense oligonucleotides mRNA 翻譯 蛋白質(zhì)反義反義RNA作用機(jī)理作用機(jī)理前體-mRNADNA轉(zhuǎn)錄mRNA翻譯蛋白質(zhì)反義寡脫氧核苷酸抑制mRNA翻譯：a：RNA與核糖體作用的空間位阻；b：阻礙mRNA從核內(nèi)到細(xì)胞質(zhì)的通道；c：與目標(biāo)序列結(jié)合；d：RNase H酶裂解目標(biāo)mRNA 根據(jù)反義根據(jù)反義RNA的作用機(jī)制分為的作用機(jī)制分為 類(lèi)反義類(lèi)反義RNA直接作用于靶直接作用于靶mRNA的的S D序列和序列和(或或)部分編碼區(qū)，直接抑制翻譯，或部分編碼區(qū)，直接抑制翻譯，或與靶與靶mRNA結(jié)合形成雙鏈結(jié)合形成雙鏈RNA，從而易被從而易被RNA酶酶 降解；降解； 類(lèi)反義類(lèi)反義

12、RNA與與mRNA的非編碼區(qū)結(jié)合，的非編碼區(qū)結(jié)合，引起引起mRNA構(gòu)象變化，抑制翻譯；構(gòu)象變化，抑制翻譯； 類(lèi)反義類(lèi)反義RNA則直接抑制靶則直接抑制靶mRNA的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄 。 反義寡聚核反義寡聚核苷酸（苷酸（類(lèi)）類(lèi)） 與mRNA特異性結(jié)合，阻斷翻譯過(guò)程 反義反義RNA的應(yīng)用（一）的應(yīng)用（一）利用反義利用反義RNA的原癌基因失活療法：的原癌基因失活療法：阻止或抑制原癌基因的過(guò)度表達(dá)及阻止或抑制原癌基因的過(guò)度表達(dá)及抑制癌基因突變體抑制癌基因突變體mRNA成熟成熟 原癌基因原癌基因調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)，增殖與分化調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)，增殖與分化正常情況下，表達(dá)受?chē)?yán)格控制正常情況下，表達(dá)受?chē)?yán)格控制一旦調(diào)節(jié)失控，基因產(chǎn)

13、物（生長(zhǎng)因一旦調(diào)節(jié)失控，基因產(chǎn)物（生長(zhǎng)因子，生長(zhǎng)因子受體，胞內(nèi)外傳遞信子，生長(zhǎng)因子受體，胞內(nèi)外傳遞信號(hào)等癌蛋白）分泌過(guò)剩，細(xì)胞惡性號(hào)等癌蛋白）分泌過(guò)剩，細(xì)胞惡性增生，致癌增生，致癌 治療方法治療方法根據(jù)已知癌基因的核苷酸序列合成反義根據(jù)已知癌基因的核苷酸序列合成反義RNA相應(yīng)的反義寡聚核苷酸與腫瘤癌基因活相應(yīng)的反義寡聚核苷酸與腫瘤癌基因活化表達(dá)的化表達(dá)的mRNA的起始翻譯位點(diǎn)結(jié)合成的起始翻譯位點(diǎn)結(jié)合成RNA/RNA雙鏈體雙鏈體雙鏈體阻止啟動(dòng)子與核糖體結(jié)合，或核雙鏈體阻止啟動(dòng)子與核糖體結(jié)合，或核糖體沿糖體沿mRNA上移，抑制翻譯上移，抑制翻譯 反義反義RNA的應(yīng)用（二）的應(yīng)用（二）抗抗HIV-l

14、的作用的作用 ：從翻譯水平封閉從翻譯水平封閉基因表達(dá)，并干擾基因表達(dá)，并干擾mRNA的剪切、的剪切、加工而實(shí)現(xiàn)抗病毒作用加工而實(shí)現(xiàn)抗病毒作用 tat為為HIV-l重要的調(diào)節(jié)基因，編碼重要的調(diào)節(jié)基因，編碼反式激活反式激活因子因子 Tat蛋白蛋白在逆轉(zhuǎn)錄病毒啟動(dòng)子在逆轉(zhuǎn)錄病毒啟動(dòng)子LTR之后連接之后連接反義反義tat與多聚與多聚TAR的構(gòu)建物的構(gòu)建物(LTR-25TAR-AS-TAT) ，具有反義具有反義tat及及TAR誘餌的雙重作用誘餌的雙重作用 由于由于LTR啟動(dòng)子受啟動(dòng)子受Tat蛋白的反式激蛋白的反式激活，使活，使tat在在HIV-l感染的細(xì)胞中感染的細(xì)胞中得以得以高表達(dá)高表達(dá) 將這種外源基

15、因?qū)雽⑦@種外源基因?qū)隡olt-3 T細(xì)胞細(xì)胞系、系、CEM-SS T細(xì)胞系及健康人外周細(xì)胞系及健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)，對(duì)實(shí)驗(yàn)及臨對(duì)實(shí)驗(yàn)及臨床分離病毒株均有抑制作用床分離病毒株均有抑制作用 gag是是HIV-1的結(jié)構(gòu)基因，編碼的結(jié)構(gòu)基因，編碼p24等病毒結(jié)構(gòu)蛋白等病毒結(jié)構(gòu)蛋白 Veres等構(gòu)建了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，在等構(gòu)建了逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)互補(bǔ)于細(xì)胞內(nèi)表達(dá)互補(bǔ)于gag區(qū)不同長(zhǎng)度的反區(qū)不同長(zhǎng)度的反義義RNA(225-1225nt) 在在CEM-SS T細(xì)胞及外周血細(xì)胞及外周血CD4細(xì)胞細(xì)胞均有抑制均有抑制HIV-l復(fù)制的作用復(fù)制的作用 長(zhǎng)片段反義長(zhǎng)片段反義RN

16、A的抗的抗HIV-l作用更好，作用更好，可能由于它能與不同種的可能由于它能與不同種的HIV-l RNA結(jié)結(jié)合而限制了病毒的逃逸合而限制了病毒的逃逸 新技術(shù)新技術(shù) 新思路新思路設(shè)計(jì)出具核酶活性的反義設(shè)計(jì)出具核酶活性的反義RNA，既既能與能與mRNA互補(bǔ)結(jié)合阻止互補(bǔ)結(jié)合阻止mRNA的的反義，又帶有錘頭狀結(jié)構(gòu)基因，能反義，又帶有錘頭狀結(jié)構(gòu)基因，能對(duì)靶序列（對(duì)靶序列（mRNA）特異性切割，特異性切割，可反復(fù)使用可反復(fù)使用反義寡聚脫氧核苷酸反義寡聚脫氧核苷酸Antisense oligodeoxyribonucleotidesASODN 一段與一段與mRNA或或DNA特異性結(jié)合并特異性結(jié)合并阻斷其基因表

17、達(dá)的人工合成的阻斷其基因表達(dá)的人工合成的DNA分子分子能通過(guò)封閉或抑制腫瘤細(xì)胞和病毒能通過(guò)封閉或抑制腫瘤細(xì)胞和病毒的關(guān)鍵編碼基因來(lái)特異性抑制腫瘤的關(guān)鍵編碼基因來(lái)特異性抑制腫瘤細(xì)胞增殖和病毒的復(fù)制細(xì)胞增殖和病毒的復(fù)制 作用機(jī)理作用機(jī)理1 . 在在DNA結(jié)合蛋白（如甲基化酶、結(jié)合蛋白（如甲基化酶、激活子、限制性?xún)?nèi)切酶等）的識(shí)別激活子、限制性?xún)?nèi)切酶等）的識(shí)別位點(diǎn)處，通過(guò)與靶基因結(jié)合形成三位點(diǎn)處，通過(guò)與靶基因結(jié)合形成三螺旋螺旋DNA，并且位點(diǎn)專(zhuān)一性地干擾并且位點(diǎn)專(zhuān)一性地干擾DNA和蛋白的結(jié)合、激活子的轉(zhuǎn)錄和蛋白的結(jié)合、激活子的轉(zhuǎn)錄起始或轉(zhuǎn)錄延伸等，進(jìn)而阻止基因起始或轉(zhuǎn)錄延伸等，進(jìn)而阻止基因轉(zhuǎn)錄和復(fù)制轉(zhuǎn)

18、錄和復(fù)制 作用機(jī)理作用機(jī)理2 . 對(duì)對(duì)ASODN進(jìn)行化學(xué)改性（需要進(jìn)行化學(xué)改性（需要銅離子和還原劑的存在），如在銅離子和還原劑的存在），如在ASODN的的3-末端連接上化學(xué)切割末端連接上化學(xué)切割試劑，可實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的誘導(dǎo)切割試劑，可實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的誘導(dǎo)切割等不可逆的反應(yīng)，從而導(dǎo)致靶基因等不可逆的反應(yīng)，從而導(dǎo)致靶基因的失活的失活 三螺旋三螺旋DNA 從轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行抑制，盡可能完全從轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行抑制，盡可能完全抑制特定基因的表達(dá)抑制特定基因的表達(dá) 以以DNA雙螺旋分子的專(zhuān)一性序列為雙螺旋分子的專(zhuān)一性序列為靶物，通過(guò)與該序列形成三螺旋靶物，通過(guò)與該序列形成三螺旋DNA來(lái)阻止基因轉(zhuǎn)錄來(lái)阻止基因轉(zhuǎn)錄 TF

19、OTFO-能與靶能與靶DNA高度序列特異性高度序列特異性結(jié)合形成三鏈結(jié)構(gòu)的脫氧寡聚核苷酸結(jié)合形成三鏈結(jié)構(gòu)的脫氧寡聚核苷酸靶序列靶序列-真核生物基因的啟動(dòng)子內(nèi)含真核生物基因的啟動(dòng)子內(nèi)含的同聚嘌呤的同聚嘌呤&同聚嘧啶序列同聚嘧啶序列 三螺旋三螺旋DNA三螺旋三螺旋DNA的組成結(jié)構(gòu)單元是三堿基體，的組成結(jié)構(gòu)單元是三堿基體，兩種三堿基體的基本類(lèi)型：兩種三堿基體的基本類(lèi)型：嘧啶嘧啶-嘌呤嘌呤-嘧啶型三堿基體，如嘧啶型三堿基體，如AT和和G+GC；嘌呤嘌呤-嘌呤嘌呤-嘧啶三堿基體，如嘧啶三堿基體，如GGC和和AAT 作用機(jī)制作用機(jī)制 合成的同聚嘌呤或同聚嘧啶脫氧寡合成的同聚嘌呤或同聚嘧啶脫氧寡核苷

20、酸在一定條件下可以與雙螺旋核苷酸在一定條件下可以與雙螺旋DNA分子的同聚嘌呤分子的同聚嘌呤&同聚嘧啶區(qū)同聚嘧啶區(qū)段結(jié)合形成局部的分子間三鏈段結(jié)合形成局部的分子間三鏈DNA ODN通常結(jié)合到雙螺旋中同聚嘌呤通常結(jié)合到雙螺旋中同聚嘌呤(A和和G)鏈上鏈上,其中每個(gè)堿基與雙螺旋其中每個(gè)堿基與雙螺旋靶區(qū)中的嘌呤堿基形成兩個(gè)氫鍵靶區(qū)中的嘌呤堿基形成兩個(gè)氫鍵 需考慮的問(wèn)題：需考慮的問(wèn)題：TFO可能與非專(zhuān)一性位點(diǎn)結(jié)合導(dǎo)致可能與非專(zhuān)一性位點(diǎn)結(jié)合導(dǎo)致正常的轉(zhuǎn)錄和翻譯受干擾正常的轉(zhuǎn)錄和翻譯受干擾富含富含G的的TFO 的三鏈結(jié)構(gòu)會(huì)被某些的三鏈結(jié)構(gòu)會(huì)被某些生理濃度的單價(jià)陽(yáng)離子，尤其是生理濃度的單價(jià)陽(yáng)離子，尤其

21、是K+所抑制所抑制 總結(jié)DNA mRNA 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄 加工加工 翻譯翻譯反義反義DNA 反義反義RNA24.4反反義義核酸類(lèi)藥物的通用核酸類(lèi)藥物的通用生產(chǎn)方生產(chǎn)方法及技術(shù)法及技術(shù)化學(xué)合成法或酶法合成化學(xué)合成法或酶法合成只要人工設(shè)計(jì)合成只要人工設(shè)計(jì)合成12個(gè)堿基以上基因序個(gè)堿基以上基因序列的反義列的反義DNA或反義或反義RNA化學(xué)修飾以提高其穩(wěn)定性化學(xué)修飾以提高其穩(wěn)定性24.5 典例典例該反義核酸由三種反義寡核苷酸等質(zhì)量構(gòu)成，序列如下：該反義核酸由三種反義寡核苷酸等質(zhì)量構(gòu)成，序列如下：c-myc反義核苷反義核苷5-CAC CGA GGG GTC GAT GCA CT3.c-myb反義核苷反義核苷5-AGG TAG CAG CTT CAG GGG AC3.bcr-abl反義核苷反義核苷5-CTG AAG GGC TTC TTC CTT AT3.應(yīng)用美國(guó)應(yīng)用美國(guó)Applied Biosystems公司出品的公司出品的ABI392全自全自動(dòng)動(dòng)DNA合成儀自動(dòng)合成，合成條件嚴(yán)格按照該機(jī)的操作合成儀自動(dòng)合成，合成條件嚴(yán)格按照該機(jī)的操作手冊(cè)進(jìn)行，所得粗產(chǎn)品，收集于手冊(cè)進(jìn)行，所得粗產(chǎn)品，收集于4ml的玻璃瓶中的玻璃瓶中。合成粗產(chǎn)品用真空離心方法（合成粗產(chǎn)品用真空離心方法（42）使氫氧化銨揮發(fā)）使氫氧化銨揮發(fā)，并用酒精萃取兩次，干燥后溶于，并用酒精