臨床基因檢測實驗室建設(shè)要求

1、臨檢實驗室建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)與要求一、高通量測序（NGS實驗室簡介1.1 NG弦驗室又叫高通量測序檢測實驗室。NGS1下一代測序技術(shù)（NExt GeneratioSequenciNG高通量測序技術(shù)的簡稱。高通量測序技術(shù)是對傳 統(tǒng)SANGE惻序（稱為一代測序技術(shù)）革命性的改變，可同時對幾十萬到 幾百萬條核酸分子進行序列測定，同時高通量測序使得對一個物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進行細(xì)致全貌的分析成為可能, 也稱為深度測序（DEEPSEQuENciN）G。1.2 由于NGSK術(shù)對所檢測的核酸模板進行大量擴增，容易出現(xiàn)實驗室污染導(dǎo)致檢測結(jié)果準(zhǔn)確性下降；另外 NGSJ術(shù)要求高、影響因素多，實驗過 程處理不當(dāng)易導(dǎo)致檢測結(jié)果

2、準(zhǔn)確性下降或檢測失敗。因此臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)驗收和規(guī)范化管理是 NGSK術(shù)本身需要,也是在臨床上 順利應(yīng)用該技術(shù)前提。二、NG弦驗室臨床應(yīng)用的基本條件2.1 必須擁有符合臨檢中心相關(guān)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)NGSS驗室。2.2 檢測設(shè)備必須符合標(biāo)準(zhǔn)NG砥驗室設(shè)置要求：高通量測序儀及配套服務(wù) 器；高通量測序檢測試劑盒；通用電腦；自動分析軟件，實驗室樣本信 息管理系統(tǒng)等。2.3 檢測人員必須通過專門的技能培訓(xùn)，并獲得省級以上衛(wèi)生計生行政部門頒發(fā)的臨床基因擴增檢驗技術(shù)上崗證書。NGSS驗室必須建立嚴(yán)格的實驗室管理制度、建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP、建立系列質(zhì)量管理文件 等，確保實驗室日常運行符合國家衛(wèi)生部的

3、要求，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確、 確保實驗室衛(wèi)生安全，確保實驗室長期穩(wěn)定運行。2.4 NGS臨床應(yīng)用必須在無菌無塵環(huán)境下進行操作。三、NG弦驗室建設(shè)基本要求3.1 主體結(jié)構(gòu)主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50 內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。3.2 標(biāo)準(zhǔn)的各區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)將檢測過程分成試劑準(zhǔn)備、樣本制備、PCFT增和高通量測序四個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)，同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個檢測實驗過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染?？纱蜷_緩沖區(qū)和PCR

4、擴增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣，在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口，空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。3.3 消毒在每個實驗區(qū)和緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。在各區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。3.4 機械連鎖不銹鋼傳遞窗試劑和標(biāo)本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。3.5 地面地面建議使用PVC材地面或自流坪地面，整體性好。便于進行清掃，耐腐 蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800MMt段的末端修復(fù)與純化、接頭連接與純化、文庫混合、缺口 平移。4.5 文庫檢測區(qū)主要功能：文庫

5、濃度質(zhì)檢分析。4.6 測序區(qū)主要功能：測序模板制備（乳液 PC叫磁珠富集回收）、上機測序、數(shù)據(jù)分 析、報告審核及發(fā)放。5 . 儀器配置5.1 試劑準(zhǔn)備區(qū)主要儀器設(shè)備：冰箱、分析天平、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈和超凈工作臺等。5.2 電泳區(qū)主要儀器設(shè)備：電泳儀、微波爐、凝膠成像儀、冰箱、掌式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈等。5.3 WG制備區(qū)主要儀器設(shè)備：PC雙、超凈工作臺、冰箱、掌式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈等。5.4 擴增一區(qū)主要儀器設(shè)備：PC雙、可移動紫外燈、超凈工作臺、冰箱、微量臺式離心 機、渦旋振蕩器、UPS移液器、磁力架等。5.5 文庫檢

6、測區(qū)主要儀器設(shè)備：QPCR、核酸定量儀、可移動紫外燈、超凈工作臺、冰箱、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、冰箱、移液器等。5.6 測序區(qū)主要儀器設(shè)備：高通量測序儀、PC電腦、打印機、UPS恒溫金屬浴、純水 儀、冰箱、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、移液器、超凈工作臺、可移動紫外燈、磁力架、PCRZ等。遺傳病診斷十月中瘤診斷與治療（雜交捕獲測序技術(shù)+SangeRM序驗證）1 .實驗室平面圖圖5:月中瘤診斷實驗室平面圖2 .技術(shù)流程圖圖6:月中瘤診斷技術(shù)流程圖圖7: 一代測序?qū)嶒灹鞒虉D3.技術(shù)參數(shù)分區(qū)壓力溫度相對濕度照明潔凈走廊0Pa20-25 C40%60%主實驗室1 300LX,其余 房間200300L

7、X緩沖區(qū)+5Pa試劑準(zhǔn)備室+15Pa標(biāo)本與文庫制備區(qū)+10PaDNA丁斷區(qū)+10Pa雜父捕獲區(qū)（擴”區(qū)）-5Pa文庫擴增區(qū)（擴增二區(qū)）-10Pa文庫檢測區(qū)-10Pa測序區(qū)-15Pa電泳區(qū)0 Pa4. 分區(qū)功能4.1 試劑準(zhǔn)備區(qū)主要功能：在NGS程中使用到的試劑的配制、分裝和保存。4.2 標(biāo)本與文庫制備區(qū)主要功能：樣本接收、樣本前處理、全基因組 DNAI取以及各種樣本DNA戈 者RNA勺提取、DNAt段化、DNA屯化、DNA&度測定、DNAt段的末端修復(fù) 與純化、接頭連接與純化。4.3 DNA丁斷區(qū)主要功能：DNA打斷（片段化）。4.4 電泳區(qū)主要功能：片段化DNAt泳檢測及結(jié)果反饋。4.5 雜

8、交捕獲區(qū)（擴增一區(qū)）主要功能：目的DNAt段的雜交捕獲與純化，Sanger測序目的片段擴增與純 化、Sanger測序PCRttf準(zhǔn)備。4.6 文庫擴增區(qū)（擴增二區(qū)）主要功能：雜交捕獲后擴增與純化、文庫濃度質(zhì)檢分析、及Sanger 測序的PCRT增反應(yīng)與純化。4.7 測序區(qū)主要功能：測序模板制備（乳液PCRf磁珠富集回收）、上機測序、及Sanger 測序。5. 儀器配置5.1 試劑準(zhǔn)備區(qū)主要儀器設(shè)備：加樣器、冰箱、分析天平、微量臺式離心機、渦旋振蕩器、 移液器、可移動紫外燈和超凈工作臺等。5.2 標(biāo)本與文庫制備區(qū)主要儀器設(shè)備：微量臺式離心機、掌上三管離心機、恒溫金屬浴、移液器、可移動紫外燈、生物安全柜、冰箱、托盤天平、Qubit核酸定量儀、PCROZ、電腦（可連接互聯(lián)網(wǎng)）、條形碼打印機、普通打印機、掃描槍等。5.3 DNA丁斷區(qū)主要儀器設(shè)備：Covaris S220超聲波打斷儀、冰箱、掌式離心機、渦旋振蕩 器、移液器、可移動紫外燈等。5.4 電泳區(qū)主要儀器設(shè)備：電泳儀、微波爐、凝膠成像儀、冰箱、掌式離心機、渦旋振蕩器、移液器、可移動紫外燈等。5.5 雜交捕獲區(qū)（擴增一區(qū)）主要儀器設(shè)備：PCRK、可移動紫外燈、超凈工作臺、冰箱、微量臺式離心 機、渦旋振蕩器等。5.6 文庫擴增區(qū)（擴增二區(qū)）主要儀器設(shè)備：PCRK、Qubit核酸定量儀、微量臺式離心機