加味香連丸的定性鑒別及黃連生物堿的含量測(cè)定

1、加味香連丸的定性鑒別及加味香連丸的定性鑒別及黃連生物堿的含量測(cè)定黃連生物堿的含量測(cè)定一、儀器與藥品一、儀器與藥品1 1）層析缸）層析缸 2 2）三用紫外分析儀）三用紫外分析儀3 3）噴霧瓶）噴霧瓶 4 4）吹風(fēng)機(jī)）吹風(fēng)機(jī)5 5）紫外分光光度計(jì)）紫外分光光度計(jì)6 6）小層析柱：高）小層析柱：高13cm,13cm,內(nèi)徑內(nèi)徑8mm8mm，2 2個(gè)個(gè) 7 7）中性）中性AlAl2 2O O3 3(150200(150200目目) ) 8 8）滴管）滴管9 9）加味香連丸樣品加味香連丸樣品 1010）鹽酸小檗堿對(duì)照品鹽酸小檗堿對(duì)照品、黃連、木香對(duì)照藥材黃連、木香對(duì)照藥材1111）95%95%乙醇乙醇1

2、1、定量用樣品的凈化、定量用樣品的凈化1 1）定容：將索氏提取樣品定容到）定容：將索氏提取樣品定容到25mL25mL。2 2）凈化）凈化A A、裝柱：取、裝柱：取2 2個(gè)個(gè)高高13cm13cm、內(nèi)徑內(nèi)徑8mm8mm的的Al2O3Al2O3柱柱，平行裝柱。分別墊上少許棉，平行裝柱。分別墊上少許棉花，裝入中性氧化鋁，高度花，裝入中性氧化鋁，高度1.5cm1.5cm左右。左右。1 1個(gè)作空白，另個(gè)作空白，另1 1個(gè)加入樣品。個(gè)加入樣品。B B、加樣與洗脫：將兩根小柱下分別接上、加樣與洗脫：將兩根小柱下分別接上10mL10mL容量瓶，樣品用小柱中容量瓶，樣品用小柱中精密精密加入加入樣品液樣品液0.5m

3、L0.5mL，待樣品完全被填料吸收后，加入，待樣品完全被填料吸收后，加入95%EtOH95%EtOH至洗脫完全至洗脫完全?？瞻子眯≈械奶盍现苯佑每瞻子眯≈械奶盍现苯佑?5%95%乙醇平行洗脫。接近乙醇平行洗脫。接近10mL10mL時(shí)停止洗脫，分時(shí)停止洗脫，分別定容到別定容到10mL10mL。C C、含量測(cè)定：采用外標(biāo)一點(diǎn)法于、含量測(cè)定：采用外標(biāo)一點(diǎn)法于350nm350nm 測(cè)定含量測(cè)定含量供試品紫外測(cè)定：空白采用自制空白供試品紫外測(cè)定：空白采用自制空白對(duì)照品紫外測(cè)定：空白采用對(duì)照品紫外測(cè)定：空白采用95%95%乙醇，對(duì)照品濃度：乙醇，對(duì)照品濃度：0.06mg/mL0.06mg/mLD D、

4、計(jì)算（、計(jì)算（100g100g干品中含有多少克總生物堿）干品中含有多少克總生物堿）二、實(shí)驗(yàn)步驟二、實(shí)驗(yàn)步驟A A供供/A/A標(biāo)標(biāo) = = C C供供/C/C標(biāo)標(biāo)約約0.1g0.1g25mL25mL0.5mL0.5mL10mL10mL含量含量(%) =(%) =C C供供D Dm m 100%100%1 1、加味香連丸中黃連和木香的薄層鑒別、加味香連丸中黃連和木香的薄層鑒別1 1）黃連的鑒別）黃連的鑒別取本品取本品60mg60mg，研細(xì)，加，研細(xì)，加乙醇乙醇5ml5ml，置水浴，置水浴中加熱回流中加熱回流1515分鐘，濾過(guò)，濾液補(bǔ)加乙分鐘，濾過(guò)，濾液補(bǔ)加乙醇使成醇使成5ml5ml，作為，作為供試

5、品溶液供試品溶液。另取黃連。另取黃連對(duì)照藥材對(duì)照藥材50mg50mg，同法制成，同法制成對(duì)照藥材溶液對(duì)照藥材溶液。再取再取鹽酸小檗堿對(duì)照品鹽酸小檗堿對(duì)照品，加乙醇制成每，加乙醇制成每1ml1ml含含0.04mg0.04mg的溶液。的溶液。用點(diǎn)樣用毛細(xì)管分用點(diǎn)樣用毛細(xì)管分別取別取1.5cm1.5cm左右，左右，分別點(diǎn)于同一硅膠分別點(diǎn)于同一硅膠G G薄薄層板上，以層板上，以乙酸乙酯：氯仿：甲醇：氨乙酸乙酯：氯仿：甲醇：氨水：二乙胺（水：二乙胺（8 8：2 2：2 2：1 1：0.50.5）為展開(kāi)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈紫外光燈（365nm365nm）下檢視）下

6、檢視。供試品色譜中，在與。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的黃色熒光斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的一個(gè)黃色熒光斑點(diǎn)。位置上，顯相同的一個(gè)黃色熒光斑點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)步驟二、實(shí)驗(yàn)步驟 O O O O O O O O 小小檗檗堿堿樣樣品品黃連黃連對(duì)照對(duì)照藥材藥材例例1.5cm1.5cm圓形圓形點(diǎn)樣點(diǎn)樣飽和飽和10min10min1 1、加味香連丸中黃連和木香的薄層鑒別、加味香連丸中黃連和木香的薄層鑒別2 2）木香的鑒別）木香的鑒別取本品取本品0.5g0.5g，研細(xì)，加，研細(xì)，加乙醚乙醚5ml5ml，放置，放

7、置2 2小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，濾過(guò)，濾液揮去乙醚，殘?jiān)哟姿嵋阴堅(jiān)哟姿嵋阴?.5ml0.5ml使溶解，作為使溶解，作為供試供試品溶液品溶液。另取木香對(duì)照藥材。另取木香對(duì)照藥材0.2g0.2g，加乙，加乙醚醚5ml5ml，同法制成，同法制成對(duì)照藥材溶液對(duì)照藥材溶液，用點(diǎn)樣用點(diǎn)樣用毛細(xì)管分別取用毛細(xì)管分別取1.5cm1.5cm左右左右，分別點(diǎn)于同，分別點(diǎn)于同一硅膠一硅膠G G薄層板上，以薄層板上，以環(huán)己烷：丙酮（環(huán)己烷：丙酮（1010：3 3）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%5%香草醛硫酸溶液香草醛硫酸溶液，在，在105105烘

8、約烘約5 5分鐘分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的紫紅色至藍(lán)紫色斑的位置上，顯相同的紫紅色至藍(lán)紫色斑點(diǎn)。點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)步驟二、實(shí)驗(yàn)步驟 O O OO O O 加味香連加味香連丸針對(duì)木丸針對(duì)木香提取液香提取液木香木香對(duì)照對(duì)照藥材藥材例例光度計(jì)模式操作教程光度計(jì)模式操作教程開(kāi)機(jī)自檢通過(guò)后，經(jīng)過(guò)開(kāi)機(jī)自檢通過(guò)后，經(jīng)過(guò)1515分鐘的預(yù)分鐘的預(yù)熱，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)入主菜單。熱，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)入主菜單。波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：546.0nm 09：21：19取消取消下翻下翻選取選取D2W系統(tǒng)主菜單系統(tǒng)主菜單光度計(jì)模式光度計(jì)模式 定量測(cè)量定量測(cè)量光譜掃描光譜掃描動(dòng)力學(xué)測(cè)量動(dòng)力

9、學(xué)測(cè)量DNA/蛋白質(zhì)測(cè)量蛋白質(zhì)測(cè)量測(cè)試波長(zhǎng)測(cè)試波長(zhǎng)當(dāng)前時(shí)間當(dāng)前時(shí)間氘燈點(diǎn)亮顯示氘燈點(diǎn)亮顯示鎢燈點(diǎn)亮顯示鎢燈點(diǎn)亮顯示波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：546.0nm 09:21:19取消取消下翻下翻選取選取D2W系統(tǒng)主菜單系統(tǒng)主菜單光度計(jì)模式光度計(jì)模式定量測(cè)量定量測(cè)量光譜掃描光譜掃描動(dòng)力學(xué)測(cè)量動(dòng)力學(xué)測(cè)量DNA/DNA/蛋白質(zhì)測(cè)量蛋白質(zhì)測(cè)量點(diǎn)擊點(diǎn)擊“選取選取”功能鍵，或點(diǎn)功能鍵，或點(diǎn) ，進(jìn)入光度計(jì)模式。，進(jìn)入光度計(jì)模式。ENTER波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：546.0nm I: 19669 09:21:19設(shè)置單位設(shè)置單位模式模式因子因子標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量D2W0. 0 0 0 A b s首先選擇測(cè)量所需要的波長(zhǎng)。首先選擇測(cè)量所需要的波

10、長(zhǎng)。點(diǎn)點(diǎn) 進(jìn)入進(jìn)入。GOTO波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：546.0nm I: 19669 09:21:19D2W0. 0 0 0 A b s 請(qǐng)輸入波長(zhǎng)：請(qǐng)輸入波長(zhǎng)：546.0_使用數(shù)字鍵和小數(shù)點(diǎn)輸入所需要的波長(zhǎng)。使用數(shù)字鍵和小數(shù)點(diǎn)輸入所需要的波長(zhǎng)。波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：546.0nm I: 19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 A b s請(qǐng)輸入波長(zhǎng)：請(qǐng)輸入波長(zhǎng)：350.0_350.0_輸入完畢后，點(diǎn)擊輸入完畢后，點(diǎn)擊 進(jìn)行確認(rèn)。進(jìn)行確認(rèn)。ENTER輸入的測(cè)量波長(zhǎng)輸入的測(cè)量波長(zhǎng)波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：350.0nm I ：19669 09:21:19設(shè)置單位設(shè)置單位模式模式因子因子標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量D2W0. 0 0

11、0 A b s波長(zhǎng)將自動(dòng)調(diào)節(jié)到所設(shè)置的波長(zhǎng)，系統(tǒng)將自動(dòng)校零。波長(zhǎng)將自動(dòng)調(diào)節(jié)到所設(shè)置的波長(zhǎng)，系統(tǒng)將自動(dòng)校零。波長(zhǎng)已調(diào)整波長(zhǎng)已調(diào)整波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：350.0nm I: 19669 09:21:19設(shè)置單位設(shè)置單位模式模式因子因子標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量D2W樣品濃度單位設(shè)定鍵樣品濃度單位設(shè)定鍵0. 0 0 0 A b s使用四個(gè)方向鍵來(lái)選擇設(shè)置單位模式，選擇完畢后，使用四個(gè)方向鍵來(lái)選擇設(shè)置單位模式，選擇完畢后，點(diǎn)點(diǎn) 確認(rèn)。確認(rèn)。ENTER波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：350.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 請(qǐng)輸入含量單位：請(qǐng)輸入含量單位：mg/L使用四個(gè)方向鍵來(lái)選擇濃度單位，選

12、擇完畢后，點(diǎn)使用四個(gè)方向鍵來(lái)選擇濃度單位，選擇完畢后，點(diǎn) 確認(rèn)。確認(rèn)。ENTER波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I: 19669 09:21:19設(shè)置單位設(shè)置單位模式模式因子因子標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量D2W0. 0 0 0 A b s設(shè)定測(cè)量模式：吸光度模式、透過(guò)率模式、濃度模式。設(shè)定測(cè)量模式：吸光度模式、透過(guò)率模式、濃度模式。點(diǎn)擊點(diǎn)擊“模式模式”功能鍵進(jìn)入。功能鍵進(jìn)入?！澳Ｊ侥Ｊ健惫δ苕I功能鍵吸光度模式：顯示樣品的吸光度；吸光度模式：顯示樣品的吸光度；透過(guò)率模式：顯示樣品的透過(guò)率；透過(guò)率模式：顯示樣品的透過(guò)率；含量模式：含量模式： 根據(jù)系數(shù)法根據(jù)系數(shù)法C=KAC=KA，直接顯示，直接顯示試樣濃度。試樣

13、濃度。波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：350.0nm I: 19669 09:21:19D2W0. 0 0 0 A b s請(qǐng)輸入模式：請(qǐng)輸入模式： 吸光度吸光度使用四個(gè)方向鍵來(lái)選擇測(cè)量模式，選擇完畢后，使用四個(gè)方向鍵來(lái)選擇測(cè)量模式，選擇完畢后，點(diǎn)點(diǎn) 確認(rèn)。確認(rèn)。ENTER波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I ：19669 09：21：19設(shè)置單位設(shè)置單位模式模式因子因子標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量D2W0. 0 0 0 m g / L模式已變?yōu)闈舛饶Ｊ侥Ｊ揭炎優(yōu)闈舛饶Ｊ綕舛葴y(cè)定的原理是公式濃度測(cè)定的原理是公式C=KA。C濃度濃度 A吸光度吸光度 K吸收系數(shù)吸收系數(shù) K值設(shè)定有兩種方法：值設(shè)定有兩種方法：一是選擇一是選擇“因子因子”

14、功能鍵直接輸入功能鍵直接輸入K值；值；二是選擇二是選擇“標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量”，測(cè)定吸光度，輸入濃度，求出，測(cè)定吸光度，輸入濃度，求出K值值波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I ：19669 09：21：19設(shè)置單位設(shè)置單位模式模式因子因子標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量D2W0. 0 0 0 m g / L選擇選擇“因子因子”模式，直接輸入模式，直接輸入K值。值。吸收系數(shù)設(shè)定鍵吸收系數(shù)設(shè)定鍵波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 請(qǐng)輸入請(qǐng)輸入F因子：因子：1.000_使用數(shù)字鍵和小數(shù)點(diǎn)輸入所需要的使用數(shù)字鍵和小數(shù)點(diǎn)輸入所需要的K值。值。K值來(lái)源：以前實(shí)驗(yàn)所

15、做、查詢相關(guān)文獻(xiàn)。值來(lái)源：以前實(shí)驗(yàn)所做、查詢相關(guān)文獻(xiàn)。波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 請(qǐng)輸入請(qǐng)輸入F因子：因子：3.000_輸入完畢后，點(diǎn)擊輸入完畢后，點(diǎn)擊 進(jìn)行確認(rèn)。進(jìn)行確認(rèn)。ENTER輸入的吸收系數(shù)輸入的吸收系數(shù)K波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I ：19669 09：21：19設(shè)置單位設(shè)置單位模式模式因子因子標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量D2W0. 0 0 0 m g / LF 因子因子 3.000設(shè)定的吸收系數(shù)設(shè)定的吸收系數(shù)K波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I ：19669 09：21：19設(shè)置單位設(shè)置單位模式模式因子因子標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量

16、D2W0. 0 0 0 m g / LF 因子因子 3.000測(cè)量濃度已知樣品的濃度，輸入濃度，由機(jī)器自動(dòng)求出測(cè)量濃度已知樣品的濃度，輸入濃度，由機(jī)器自動(dòng)求出K值。值。選擇選擇“標(biāo)樣測(cè)量標(biāo)樣測(cè)量”功能鍵。功能鍵。進(jìn)入濃度法求進(jìn)入濃度法求K值值波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 請(qǐng)輸入標(biāo)樣含量：請(qǐng)輸入標(biāo)樣含量：1.000_將標(biāo)樣放入光路中，使用數(shù)字鍵和小數(shù)點(diǎn)輸入標(biāo)樣的濃度。將標(biāo)樣放入光路中，使用數(shù)字鍵和小數(shù)點(diǎn)輸入標(biāo)樣的濃度。波長(zhǎng)：波長(zhǎng)：450.0nm I ：19669 09：21：19D2W0. 0 0 0 m g / L 請(qǐng)輸入標(biāo)樣含量：請(qǐng)輸入標(biāo)樣含量：4.000_輸入完畢后，點(diǎn)擊輸入完畢后，點(diǎn)擊 進(jìn)行確認(rèn)。進(jìn)行