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文檔簡介
1、動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染答疑-用RNA或DNA直接注射動物完成干擾和表達(dá)動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染,簡單地說,就是用RNA和DNA直接打動物完成干擾和表達(dá)。再通俗地說,用合成的(RNA)或者提取的核酸(DNA),就可以完成以前的動物轉(zhuǎn)基因或者基因敲除的實(shí)驗(yàn),無需再用病毒或者基因敲除動物。實(shí)驗(yàn)周期可以縮短為幾天,花費(fèi)幾千元即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)的出現(xiàn),讓廣大生物醫(yī)學(xué)研究者,輕松進(jìn)行動物的基因干擾、導(dǎo)入等操作。尤其是臨床醫(yī)學(xué)工作者,可以在很少工作量較少經(jīng)費(fèi)的情況下,直接針對研究的疾病進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn),發(fā)表高水平文章。比如在英格恩客戶已發(fā)表的文章中,有尾靜脈注射DNA研究治療病毒性心肌炎,有皮下月中瘤注射miRNA研究治
2、療結(jié)腸癌,有腦室注射siRNA研究腦缺血機(jī)理,有皮膚涂抹siRNA治療皮膚瘢痕等。這些研究都非常有臨床和現(xiàn)實(shí)意義。由于動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)應(yīng)用的時間不長,對這種嶄新的技術(shù)人們還不太了解。此次受丁香園邀請,特開此動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)答疑專帖。對站友們提出的問題給予解答,希望能夠和大家相互學(xué)習(xí),共同進(jìn)步。任何與動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染有關(guān)的問題(包括實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、產(chǎn)品、實(shí)驗(yàn)過程、結(jié)果分析、文獻(xiàn)等問題),大家盡管提出,我們會盡力解答,也歡迎站友們參加討論。技術(shù)資料目錄:1 .體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑的原理和方法1) .動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)可以做什么?2) .體內(nèi)轉(zhuǎn)染的原理3) .體內(nèi)轉(zhuǎn)染的過程4) .體內(nèi)轉(zhuǎn)染需要的實(shí)驗(yàn)條件5) .
3、體內(nèi)轉(zhuǎn)染適合進(jìn)行怎樣的實(shí)驗(yàn)6) .體內(nèi)轉(zhuǎn)染可以在哪些組織器官進(jìn)行7) .應(yīng)用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑發(fā)表的部分文獻(xiàn)8) .動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染和病毒感染的比較9) .動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染和基因敲除的比較2 .體內(nèi)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)1) .需要的材料2) .需要的時間3) .需要的費(fèi)用4) .常見的結(jié)果檢測方法3 .體內(nèi)轉(zhuǎn)染過程相關(guān)問題及解答1) .體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑對動物有什么影響?2) .注射后,試劑是如何在體內(nèi)分布的,有靶向性嗎?3) .轉(zhuǎn)染試劑和核酸需要使用多少?提問與解答:1、如何技術(shù)上解決(排除)RNAi的非特異性?是否需要復(fù)原實(shí)驗(yàn)(RescueExperiment:)。2、實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性/可靠性如何?需要使用多少只動物,
4、才能實(shí)現(xiàn)90-95%可信度?3、遺傳性狀改變后能維持多久?如果性狀的改變是暫時的,那么經(jīng)過一段時間后,動物能否恢復(fù)到原有的生理狀態(tài)(沒有后遺癥)?4、這種siRNA的體內(nèi)注射,在不同的組織中可能轉(zhuǎn)染效率差別很大,樓主能否告知哪些組織的轉(zhuǎn)染效率高,哪些低?5、不同的組織和注射方法,如何評估干擾效率?6、目前有沒有攜帶熒光的siRNA可以用于相關(guān)實(shí)驗(yàn)?7、我目前正在用病毒感染的方法,效果不是太好,病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染有什么不一樣?病毒感染做不好,體內(nèi)轉(zhuǎn)染能做好嗎?8、不是太懂,動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)用來干什么,主要的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)是什么?9、很感興趣,你們的動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑有文獻(xiàn)支持嗎?10、再問一下,你們試
5、劑的原理是什么,使用方法麻煩嗎?11、請問體內(nèi)轉(zhuǎn)染可以轉(zhuǎn)染肺組織么?12、是直接通過氣管內(nèi)注射?13、轉(zhuǎn)染的基因過表達(dá)能夠維持多長時間?14、可以直接用于關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨相關(guān)基因轉(zhuǎn)染么,如何轉(zhuǎn)染?直接關(guān)節(jié)腔注射還是尾靜脈注射?15、我想請問一下你們這個轉(zhuǎn)染試劑多少錢?我想直接瘤內(nèi)注射是否可以?16、太好了,找到專家了!請教幾個問題,體內(nèi)轉(zhuǎn)染用慢病毒效果好嗎?目的組織是心肌,是尾靜脈注射好呢還是心肌局部注射好?17、可以腹膜腔注射么?18、每個目的器官用量怎么安排?每次還用同位素檢測轉(zhuǎn)染效率,那也不便宜啊。19、如果我做大鼠睪丸的RNA干擾,您能否建議是尾靜脈注射,還是涂抹還是其他方法呢?20、這個實(shí)
6、驗(yàn)技術(shù)很新呢,眼前一亮,我的實(shí)驗(yàn)是移植一種細(xì)胞到視網(wǎng)膜下腔,想要干擾這種細(xì)胞中的某個基因的表達(dá),如果通過常規(guī)的體外RNAi技術(shù)比較麻煩,想直接在移植細(xì)胞的時候同時用你們的這個進(jìn)行局部體內(nèi)注射,這樣是否可以實(shí)現(xiàn)呢?21、第二個問題是,我的實(shí)驗(yàn)中是要干擾移植細(xì)胞中的神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá),但是神經(jīng)營養(yǎng)因子種類很多,包括bFGF、BDNF、NT-3、NT-4/5等,如果想抑制多種神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)有可能嗎?謝謝!22、你好,請問想要消除小鼠腦內(nèi)海馬神經(jīng)元細(xì)胞中某種microRNA的表達(dá),可以用你們的轉(zhuǎn)染試劑么?怎么注射,側(cè)腦室注射還是尾靜脈注射比較好?另外,你們試劑的價格是多少?問與答:1、如何技術(shù)上解
7、決(排除)RNAi的非特異性?是否需要復(fù)原實(shí)驗(yàn)(RescueExperiment)。RNAi的非特異性是每個RNAi實(shí)驗(yàn)所必須考慮的,一般通過設(shè)計(jì)多條針對同一個基因的siRNA等,如果都能得到同樣的結(jié)果,一般認(rèn)為是特異性的。如果您不能確定是否有非特異性,理論上是需要RescueExperiment的。但這些實(shí)驗(yàn)一般都在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)階段。在動物實(shí)驗(yàn)階段,可通過合適的對照來排除非特異性。2、實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性/可靠性如何?需要使用多少只動物,才能實(shí)現(xiàn)90-95%可信度?實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性或可靠性和整體的實(shí)驗(yàn)分不開,如果基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)(比如細(xì)胞實(shí)驗(yàn))充分,而且又有其他的方法進(jìn)行印證,那么實(shí)驗(yàn)的可靠性就很高,這時動物體內(nèi)轉(zhuǎn)
8、染就不需要太多動物,幾十只動物,能說明問題就可以。但如果其他的實(shí)驗(yàn)較少,單純用一種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn),就需要排除實(shí)驗(yàn)過程的客觀因素的影響,比如動物本身的差異,比如實(shí)驗(yàn)過程的差異,比如檢測方法的誤差等。這時就需要動物數(shù)量足夠,以達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上的誤差要求。3、遺傳性狀改變后能維持多久?如果性狀的改變是暫時的,那么經(jīng)過一段時間后,動物能否恢復(fù)到原有的生理狀態(tài)(沒有后遺癥)?屬于瞬時的轉(zhuǎn)染,對目標(biāo)基因的改變,一般注射1次,可以維持7-14天左右。隨后,隨著轉(zhuǎn)入的核酸的代謝,效應(yīng)減弱消失。動物是否回復(fù)到原有的生理狀態(tài),這與目標(biāo)基因有關(guān)系。如果希望長期維持動物的轉(zhuǎn)染狀態(tài),可以多次注射。4、這種siRNA的體內(nèi)注射
9、,在不同的組織中可能轉(zhuǎn)染效率差別很大,樓主能否告知哪些組織的轉(zhuǎn)染效率高,哪些低?如果通過尾靜脈注射,確實(shí)不同組織的分布有差異。一般來說,肝、肺、腎的分布最高。一般分布高的地方轉(zhuǎn)染效率也相對較高。但不是其他的組織器官效果就不好,相反,對絕大多數(shù)的器官組織來說,采用體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù),效果也很好。比如一般認(rèn)為神經(jīng)細(xì)胞難以轉(zhuǎn)染,而且尾靜脈動物給藥,通過血腦屏障到達(dá)大腦也不容易。但實(shí)驗(yàn)表明,用體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)進(jìn)行尾靜脈轉(zhuǎn)染,能明顯轉(zhuǎn)染大腦神經(jīng)細(xì)胞。還有通常認(rèn)為難以轉(zhuǎn)染的心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和原代細(xì)胞,用體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)也有這樣的效果。所以,采用體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)后,很多難以想象的組織器官等都可以應(yīng)用,比如,甚至可以皮膚
10、涂抹siRNA轉(zhuǎn)染到瘢痕組織,影響毛發(fā)生長。5、不同的組織和注射方法,如何評估干擾效率?針對具體的組織器官,不同的注射方法會明顯影響效果。比如,大腦神經(jīng)細(xì)胞的體內(nèi)轉(zhuǎn)染,可以采用尾靜脈注射和側(cè)腦室注射,用側(cè)腦室的方法就好得多。再比如,肺部的體內(nèi)轉(zhuǎn)染,用氣管灌注就比用尾靜脈注射的方法好得多。體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑和核酸的混合物與靶器官的接觸越直接越充分,效果越好。干擾效率可以理解為干擾的細(xì)胞數(shù)量和全部細(xì)胞的數(shù)量的比例。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,這2個數(shù)字可以精確計(jì)算。但在動物體內(nèi)無法精確統(tǒng)計(jì)。一般評估效果,我們建議在分子水平,用RT-PCR,在細(xì)胞水平,用Western-Blot,在組織水平,用病理生理等方法。6、
11、目前有沒有攜帶熒光的siRNA可以用于相關(guān)實(shí)驗(yàn)?目前攜帶熒光的siRNA,如FAM熒光基團(tuán)標(biāo)記的,熒光比GFP等弱很多,而且光點(diǎn)很小,穿透性很差。如果需要評估siRNA在動物體內(nèi)的分布,我們建議還是用靈敏度和穿透性更好的同位素標(biāo)記。7、我目前正在用病毒感染的方法,效果不是太好,病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染有什么不一樣?病毒感染做不好,體內(nèi)轉(zhuǎn)染能做好嗎?1)關(guān)于病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染的區(qū)別:病毒感染動物轉(zhuǎn)染試劑實(shí)驗(yàn)周最快3天就可以出結(jié)果期靈活性更換核酸簡單,利于篩選。方法簡單,實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)少,尤其在轉(zhuǎn)染小片斷RNA方面,如:siRNA,miRNA,效果mimic,inhibitor等,有非常明確的效果,而且普通的
12、用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的RNA就可以,效果非??隙ā3掷m(xù)時屬于瞬時轉(zhuǎn)染,單次轉(zhuǎn)染效果持續(xù)7-14間天,但可以通過多次注射維持轉(zhuǎn)染效果只花費(fèi)幾千元即可立即進(jìn)行小規(guī)模預(yù)實(shí)費(fèi)用驗(yàn)來確定動物實(shí)驗(yàn)效果。2)關(guān)于病毒感染如果效果不好,體內(nèi)轉(zhuǎn)染是否可以病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染屬2種實(shí)驗(yàn)手段,單從方法看,病毒感染如果不好,體內(nèi)轉(zhuǎn)染并不受影響,反之,需要進(jìn)行克隆、病毒包裝等一系列實(shí)驗(yàn),周期短則1個月,長則達(dá)數(shù)月。更換核酸序列,需要重新構(gòu)建和包裝病毒,復(fù)雜而且費(fèi)工費(fèi)時。理論上效果不錯,但由于病毒實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)較多,任何一個環(huán)節(jié)出問題都容易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,而且失敗后,不易查找原因。實(shí)際上很多實(shí)驗(yàn)室失敗后,往往暫停或終止了動物實(shí)驗(yàn),導(dǎo)致課題
13、研究質(zhì)量的降低??梢酝ㄟ^整合到基因組內(nèi)長期發(fā)揮作用進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)也需要花費(fèi)數(shù)萬元和數(shù)月包裝病毒,環(huán)節(jié)多,易出錯,不易成功。病毒感染和體內(nèi)轉(zhuǎn)染不相關(guān),所以也一樣。當(dāng)然如果實(shí)驗(yàn)本質(zhì)上就不會有效果,比如錯誤的干擾序列,那么采用任何方法都不會成功。一般來說,如果細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是成功的,基本可以排除實(shí)驗(yàn)的不可行性,那么就主要是方法有問題,這時,如果病毒感染不好,可以采用體內(nèi)轉(zhuǎn)染。另外,現(xiàn)在英格恩有病毒感染體內(nèi)增強(qiáng)試劑,可以大大提高病毒的感染效果。您也可以試一下這個。8、不是太懂,動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)用來干什么,主要的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)是什么?1)簡單地說,如果你希望影響動物某部位基因的功能,增強(qiáng)、減弱,以及引入外源基因。就可
14、以用動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染技術(shù)。2)主要特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn):比較以前的病毒感染、基因敲除、轉(zhuǎn)基因動物等方法,要簡單得多,用合成的小RNA與體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑混合注射動物,就可以進(jìn)行類似基因敲除的實(shí)驗(yàn)。同樣,用質(zhì)粒DNA與體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑混合注射動物就可以進(jìn)行類似轉(zhuǎn)基因動物的實(shí)驗(yàn)。非常方便,注射幾天后就可以觀察結(jié)果,而且可以隨時更換核酸,完成更多基因,更深入的實(shí)驗(yàn)。而且,省時間和經(jīng)費(fèi)。病毒感染需要動輒上萬的經(jīng)費(fèi)和數(shù)月包裝病毒的時間?;蚯贸鲜蠛娃D(zhuǎn)基因動物也很麻煩。9、很感興趣,你們的動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑有文獻(xiàn)支持嗎?這是部分的文獻(xiàn),附件有部分全文。1 .CNSNeurosciTher.2013May3.TheInvolveme
15、ntofProgrammedCellDeath5(PDCD5)intheRegulationofApoptosisinCerebralIschemia/ReperfusionInjury.(腦室注射siRNA研究腦缺血的凋亡機(jī)理)2 .MatrixBiol.2013Mar5.TransdermalsiRNA-TGF31-337patchforhypertrophicscartreatment.(皮膚涂抹siRNA研究治療皮膚瘢痕)3 .JCerebBloodFlowMetab.2013Jan9.SirT1mediateshyperbaricoxygenpreconditioning-induc
16、edischemictoleranceinratbrain.腦室注射siRNA研究腦缺血機(jī)理)4 .CancerLett.2012Jan28;314(2):223-31.Epub2011Oct5.NIRFisfrequentlyupregulatedincolorectalcanceranditsoncogenicitycanbesuppressedbylet-7amicroRNA.(皮下腫瘤注射miRNA研究治療結(jié)腸癌),.5 .BMCInfectDis.2012Aug6;12(1):177.ShorthairpinRNAtargeting2Bgeneofcoxsackievirus83 e
17、xhibitspotentialantiviraleffectsbothinvitroandinvivo.(尾靜脈注射DNA研究治療病毒性心肌炎)84 CurrPharmDes.2012Sep25.MicroRNAs(miRNAs)incolorectalcancer:Fromaberrantexpressiontowardstherapy.85 ProgressinModernBiomedicine2010Sep.Anti-VirusResearchonShortDouble-StrandedRNAinMouseModelswithViralMyocarditis.10、再問一下,你們試劑的
18、原理是什么,使用方法麻煩嗎?1)體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑Entranster-invivo是采用納米技術(shù)合成的高分子化合物,通過物理作用與核酸結(jié)合,濃縮包裹核酸,從而保護(hù)核酸免受免疫系統(tǒng)破壞,同時將核酸富集在細(xì)胞表面,保護(hù)促進(jìn)核酸進(jìn)入細(xì)胞組織發(fā)揮作用。不含任何動物來源成分,由于處于納米尺度,粒徑小,不易引起免疫反應(yīng),不影響動物和器官組織的功能,可以多次在同一動物注射。2)使用方法非常簡單,幾天就可以出結(jié)果。第1天:將RNA或DNA與轉(zhuǎn)染試劑混合,注射動物。第2天或稍長:動物常規(guī)生長。第3天或稍長:效果檢測(PCR,WesternBlot,病理,生理等)。如此說來,從學(xué)術(shù)研究看,動物RNAi的工作量還是蠻大
19、的,并不比KO少。還是傳統(tǒng)的KO結(jié)果清楚,也容易解釋。例如,一些基因?qū)儆贖aploidInsufficiency,動物RNAi可能就無法弄明白。不過在應(yīng)用研究上,尤其是在小鼠以外的動物身上,動物RNAi還是可以試一試。關(guān)于動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染和KO(基因敲除)比較,基因敲除確實(shí)有其優(yōu)勢,可以在動物中長期存在某基因的缺失。但基因敲除,也有這樣的問題,就是敲除的基因會在動物的全身存在,不利于局部的研究。即使針對同一個基因,各個實(shí)驗(yàn)室基因敲除產(chǎn)生的動物也可能有差異,不利于實(shí)驗(yàn)的重復(fù)。動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染對動物的依賴很少,很容易重復(fù)?;蚯贸臅r間周期也很長,而且由于其不可替代性,飼養(yǎng)要求高?;蚯贸齽游锏臄?shù)量有限,
20、費(fèi)用高,不利于大規(guī)模的篩選和評估。動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染可以做大量動物,避免了個體差異,飼養(yǎng)操作等誤差,實(shí)驗(yàn)容易重復(fù),而且可以隨時更換基因,進(jìn)行上下游研究,非常靈活。由于KO動物的相對來之不易,所以實(shí)驗(yàn)數(shù)量少一些,可能從這個角度看,工作量少。實(shí)際KO的工作量一點(diǎn)都不少,包括前期的準(zhǔn)備,KO動物的構(gòu)建,KO動物的鑒定等等。關(guān)于HaploidInsufficiency(單倍體功能不全),一般指等位基因的2個拷貝中,其中一個拷貝由于突變等導(dǎo)致產(chǎn)生的蛋白數(shù)量減少或功能不全,實(shí)際就是該基因功能的部分失活(不全)。KO動物往往可能存在這樣的問題。HaploidInsufficiency(單倍體功能不全)和RNAi在
21、效果上是類似的。研究HaploidInsufficiency(單倍體功能不全),多不需要再采用動物的RNAi,而是需要采用動物的基因表達(dá),也就是轉(zhuǎn)DNA到動物,以增強(qiáng)該基因的功能,這個也是動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染的一部分。動物體內(nèi)轉(zhuǎn)染目前在小鼠上應(yīng)用較多,主要是小鼠成本低,而且容易獲得和操作。KO動物主要是鼠,也是這個原因。11、請問體內(nèi)轉(zhuǎn)染可以轉(zhuǎn)染肺組織么?轉(zhuǎn)染肺組織是沒有問題的。12、是直接通過氣管內(nèi)注射?轉(zhuǎn)染肺有2種方式,1.是通過氣管灌注,需要做氣管切開。2.通過靜脈注射。這2種方法都可以,區(qū)別是:氣管直接灌注效果更好,而且用量較少,可以做較大動物,比如兔。但需要麻醉動物進(jìn)行氣管切開,放置氣管導(dǎo)管
22、,方便給藥。通過靜脈給藥,相對用量較大,一般做小動物,比如鼠。13、轉(zhuǎn)染的基因過表達(dá)能夠維持多長時間?如果進(jìn)行基因的過表達(dá),一般可以維持2周。如果需要長時間維持,可以進(jìn)行多次給藥。14、可以直接用于關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨相關(guān)基因轉(zhuǎn)染么,如何轉(zhuǎn)染?直接關(guān)節(jié)腔注射還是尾靜脈注射?關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨相關(guān)基因的轉(zhuǎn)染相對難一些,尤其是轉(zhuǎn)DNA,但可以使用。一般采用關(guān)節(jié)腔注射的方法。15、我想請問一下你們這個轉(zhuǎn)染試劑多少錢?我想直接瘤內(nèi)注射是否可以?瘤內(nèi)注射不管是DNA還是RNA效果都不錯,而且用量花費(fèi)很少。這里只技術(shù)答疑,關(guān)于價格,已發(fā)站內(nèi)信息。16、太好了,找到專家了!請教幾個問題,體內(nèi)轉(zhuǎn)染用慢病毒效果好嗎?目的組織是心
23、肌,是尾靜脈注射好呢還是心肌局部注射好?科研實(shí)驗(yàn),有很多方法可以選擇,各種方法都有其成功的應(yīng)用者,各種方法殊途同歸,從這個角度看,各種方法都可以采用,各種方法都可能失敗,效果的好壞和很多因素有關(guān)。單純從方法看,之所以不同的研究者采用不同的方法,多從以下因素考慮:1 .實(shí)驗(yàn)方法是否成熟(是否有文獻(xiàn)支持);2 .方法是否易于操作,如同解數(shù)學(xué)題,有的方法需要10步,有的需要2步,多種方法都可以成功,如果10步的方法,每步都很熟,都能保證不錯,結(jié)果也會成功,當(dāng)然,2步的方法,由于過程少,更易操作和成功。3 .方法是否節(jié)省時間和經(jīng)費(fèi)。相信很多研究者都是在考慮平衡到上述因素后,評估當(dāng)時能采用和利用的最佳方
24、法后進(jìn)行的研究。還需要說明一點(diǎn)的是,單一一種方法,有時會有其系統(tǒng)誤差,所以很多高質(zhì)量的文獻(xiàn)重要的實(shí)驗(yàn)采用的方法都不只一種,就是為了避免孤證”的產(chǎn)生。關(guān)于心肌的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的注射途徑的問題,尾靜脈注射和心肌直接注射的文獻(xiàn)都有報(bào)道,說明這2種方法對應(yīng)用者來說都不錯,這和前面的問題類似,2種方法涉及不同的技術(shù)。心肌局部注射,一般注射到心包,直接作用到心肌,試劑用量少,缺點(diǎn)是需要掌握心臟注射的技術(shù),老鼠易死亡。尾靜脈注射,技術(shù)簡單,但試劑用量大,花費(fèi)可能高??傊枰鶕?jù)實(shí)驗(yàn)室和課題的具體情況,平衡各種因素,一般在有成熟的應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)(文獻(xiàn)支持)基礎(chǔ)上,首先采用方法簡單的,過程少的,實(shí)驗(yàn)成功概率大的,在成功的基礎(chǔ)上,可以再才用其它方法進(jìn)行驗(yàn)證,這樣得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)論才更可靠,更有說服力,文章也更容易被接受。17、可以腹膜腔
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