動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體(講課)

1、 2002年年12月月30日，日， 兩場籌備了兩場籌備了10年的年的“太太空婚禮空婚禮”首次在神舟四號(hào)飛船上舉行，首次在神舟四號(hào)飛船上舉行，植物細(xì)胞植物細(xì)胞“新人新人”黃花煙草黃花煙草和和革新一號(hào)煙草革新一號(hào)煙草葉肉細(xì)胞葉肉細(xì)胞原原生質(zhì)體生質(zhì)體，動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞和和骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞，兩批新人同時(shí)在，兩批新人同時(shí)在 “產(chǎn)房產(chǎn)房”電融電融合儀內(nèi)孕育新生命。合儀內(nèi)孕育新生命?！疤栈槎Y太空婚禮”植物體細(xì)胞雜交技術(shù)植物體細(xì)胞雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)(1)(1)(2)(3)(4)植物體細(xì)胞雜交過程示意圖A細(xì)胞細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞融合融合一一 動(dòng)物動(dòng)

2、物細(xì)胞融合的概念細(xì)胞融合的概念雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞 動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）：是指交）：是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞胞結(jié)合形成結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞一個(gè)細(xì)胞的過程。的過程。動(dòng)物細(xì)胞融合過程示意圖動(dòng)物細(xì)胞融合過程示意圖細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性融合融合原理原理電激、電激、PEGPEG等等誘導(dǎo)融合的手段？誘導(dǎo)融合的手段？融合后形成的細(xì)胞類型？融合后形成的細(xì)胞類型？ABAB雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞遺傳物質(zhì)有什遺傳物質(zhì)有什么特點(diǎn)？么特點(diǎn)？三種三種 AAAA自融細(xì)胞、自融細(xì)胞、BBBB自融自融細(xì)胞、細(xì)胞、ABAB雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞同時(shí)具有兩種生物的遺傳物質(zhì)同時(shí)具有兩種生物的遺傳物質(zhì)

3、A細(xì)胞細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞滅活病毒誘導(dǎo)動(dòng)物滅活病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的過程細(xì)胞融合的過程使細(xì)胞相互凝聚使細(xì)胞相互凝聚細(xì)胞膜打開，細(xì)胞膜打開，促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生融合促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生融合 比較項(xiàng)比較項(xiàng)目目 融合融合 原理原理 融合融合 方法方法 誘導(dǎo)融合誘導(dǎo)融合 手段手段用途用途植物體植物體細(xì)胞雜細(xì)胞雜交交細(xì)胞膜的細(xì)胞膜的流動(dòng)性流動(dòng)性細(xì)胞的全細(xì)胞的全能性能性纖維素酶、纖維素酶、果膠酶果膠酶去除去除細(xì)胞壁后誘細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體導(dǎo)原生質(zhì)體融合融合離心、電刺離心、電刺激、振動(dòng)、激、振動(dòng)、聚乙二醇聚乙二醇克服遠(yuǎn)源克服遠(yuǎn)源雜交不親雜交不親和，獲得和，獲得雜種植株雜種植株動(dòng)物細(xì)動(dòng)物細(xì)胞融合胞融合細(xì)胞膜的細(xì)胞膜的流動(dòng)性流動(dòng)性用

4、用胰蛋白酶胰蛋白酶使細(xì)胞分散使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞后誘導(dǎo)細(xì)胞融合融合除應(yīng)用植物除應(yīng)用植物細(xì)胞雜交手細(xì)胞雜交手段外，段外，還有還有滅活病毒滅活病毒獲得雜交獲得雜交 細(xì)胞細(xì)胞二、比較二、比較 植物細(xì)胞雜交技術(shù)植物細(xì)胞雜交技術(shù) 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合三、動(dòng)物三、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的優(yōu)勢細(xì)胞融合技術(shù)的優(yōu)勢 已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，如人已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，如人小鼠、人小鼠、人兔、人兔、人雞、鼠雞、鼠兔、雞兔、雞鼠等上百種融合細(xì)胞。甚至已成鼠等上百種融合細(xì)胞。甚至已成功完成了酵母菌功完成了酵母菌雞雞 、人、人胡蘿卜胡蘿卜 等細(xì)胞的融合。等細(xì)胞的融合。1. 1. 抗體由何種細(xì)胞產(chǎn)生？抗體由

5、何種細(xì)胞產(chǎn)生？2. 2.抗體主要分布在哪里？抗體主要分布在哪里？4. 4. 用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體用傳統(tǒng)的方法如何獲得抗體？傳統(tǒng)方法生產(chǎn)抗體傳統(tǒng)方法生產(chǎn)抗體抗原抗原 反復(fù)注射動(dòng)物反復(fù)注射動(dòng)物從動(dòng)物的從動(dòng)物的血清血清中分離抗體中分離抗體缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低，特異產(chǎn)量低、純度低，特異性差性差n方案一方案一 利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)單個(gè)效應(yīng)單個(gè)效應(yīng)B細(xì)胞細(xì)胞，使它增殖，產(chǎn)生出大量的單一抗體，使它增殖，產(chǎn)生出大量的單一抗體設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：方案二方案二 利用利用效應(yīng)效應(yīng)B細(xì)胞細(xì)胞和和腫瘤細(xì)胞腫瘤細(xì)胞融合，融合，獲得獲得雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞，使它增殖，產(chǎn)生出大量單一抗體

6、，使它增殖，產(chǎn)生出大量單一抗體雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體的制備 看書上看書上53頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？頁圖，分組討論，單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？字母按正確順序連接起來。順序是？ 1 1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） A.

7、A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.B.沒經(jīng)過免疫的沒經(jīng)過免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.沒經(jīng)過免疫的淋巴細(xì)胞沒經(jīng)過免疫的淋巴細(xì)胞A2.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（ ）誘導(dǎo)融合的方法完全相同誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同所用的技術(shù)手段基本相同 C. 操作步驟基本相同操作步驟基本相同 D. 都能形成雜種細(xì)胞都能形成雜種細(xì)胞 D3. 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是（單克隆抗體制備過程中培育的雜交細(xì)胞是（ ）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的由小鼠能

8、產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合淋巴細(xì)胞與肝細(xì)胞融合 B.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 C.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞與肌瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 D.由小鼠一個(gè)由小鼠一個(gè)B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合而成 D4.4.只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是（只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法是（ ）A APEGPEG B B滅活的病毒滅活的病毒 C C電刺激電刺激 D D離心離心B5. 5. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)

9、融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 （ ）淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞A.A. B. B.C.C. D.D. C CA A 、 B B細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞為動(dòng)物細(xì)胞, ,請據(jù)圖回答問題請據(jù)圖回答問題: :A細(xì)胞細(xì)胞B細(xì)胞細(xì)胞C細(xì)細(xì)胞胞D細(xì)細(xì)胞胞(1)(1)若若A A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞B B細(xì)胞為淋巴細(xì)胞細(xì)胞為淋巴細(xì)胞, ,那么那么D D細(xì)胞細(xì)胞稱為稱為 細(xì)胞細(xì)胞,D,D細(xì)胞具有兩個(gè)親本細(xì)胞的細(xì)胞具有兩個(gè)親本細(xì)胞的特征特征, ,一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的一方面因具有骨髓瘤細(xì)胞的 性性質(zhì)