復(fù)旦大學(xué) 開(kāi)題報(bào)告演示版

1、 大學(xué)大學(xué)2003級(jí)碩士研究生級(jí)碩士研究生研究生 導(dǎo) 師 Therapeutic Effects of Capsule TONGBI on Human Knee Osteoarthritis and Its Influence on the mRNA Expression Of Chondrocytes Type II Collagen in A Rat Model 研究目的與意義研究目的與意義文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)綜述選題依據(jù)選題依據(jù)科研假說(shuō)與技術(shù)構(gòu)科研假說(shuō)與技術(shù)構(gòu)思思研究方法和技術(shù)路線研究方法和技術(shù)路線指導(dǎo)人員指導(dǎo)人員計(jì)劃進(jìn)度計(jì)劃進(jìn)度研究基礎(chǔ)研究基礎(chǔ)預(yù)期成果預(yù)期成果文獻(xiàn)資料文獻(xiàn)資料2022-3-30

2、4研究目的研究目的證明痛痹膠囊通過(guò)整體調(diào)節(jié)作用能夠上調(diào)軟骨細(xì)胞型膠原mRNA的表達(dá)、調(diào)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)膠原的生成與降解的平衡、促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖 證明痛痹膠囊的軟骨保護(hù)劑樣作用 通過(guò)隨機(jī)、平行、對(duì)照臨床觀察進(jìn)一步證明其臨床療效 2022-3-305骨關(guān)節(jié)炎定義骨關(guān)節(jié)炎定義骨關(guān)節(jié)炎是以進(jìn)行性關(guān)節(jié)透明軟骨變性、破壞及喪失，關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨邊緣骨贅形成為特征的骨關(guān)節(jié)病變。骨關(guān)節(jié)炎的最新定義：在力學(xué)和生物學(xué)因素共同作用下導(dǎo)致軟骨細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)以及軟骨下骨三者降解和合成正常耦聯(lián)失衡的結(jié)果，并伴有不同程度的滑膜炎癥。 Kelley WN，Ruddy S，Harris ED，et al.Textbook o

3、f Rheumatology.15th ed. Philadelphia：Saunders，1997，1 3691 3822022-3-306國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀、水平和發(fā)展趨勢(shì)國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀、水平和發(fā)展趨勢(shì) 最新流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)最新流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展治療進(jìn)展治療進(jìn)展中醫(yī)藥研究進(jìn)展中醫(yī)藥研究進(jìn)展討論討論2022-3-307最新流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)最新流行病學(xué)統(tǒng)計(jì) 全世界大約有1.9億骨性關(guān)節(jié)炎患者 據(jù)世界衛(wèi)生組織一份調(diào)查表明，50歲以上的人群中，各種骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病率占6070 我國(guó)患有OA的人數(shù)占總?cè)丝诘?% 美國(guó)，總?cè)丝谥械?5%患關(guān)節(jié)炎，其中43%為，達(dá)1600萬(wàn)高發(fā)病高發(fā)病率率骨關(guān)

4、節(jié)炎發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展透明軟骨軟骨細(xì)胞軟骨基質(zhì)膠原蛋白聚糖金屬蛋白酶（MMP）IL-1TNF-aNO.破壞軟骨細(xì)胞基質(zhì)膠原蛋白聚糖增齡磨損創(chuàng)傷生化代謝異常免疫紊亂遺傳變異等 軟骨降解酶（MMPs）細(xì)胞因子(IL-1,TNF-,)等分解合成2022-3-3011膠原蛋白膠原蛋白 目前能從正常成目前能從正常成年關(guān)節(jié)軟骨和軟年關(guān)節(jié)軟骨和軟骨細(xì)胞培養(yǎng)基中骨細(xì)胞培養(yǎng)基中提取的膠原有提取的膠原有5種：種：型膠原、型膠原、膠膠原、原、型膠原、型膠原、型膠原、型膠原、型型膠原膠原 結(jié)構(gòu)圖2022-3-3012膠原生理膠原生理 各型膠原在軟骨內(nèi)的排列高度有序，表現(xiàn)在型膠原、型膠原、型膠原組

5、成的軟骨內(nèi)纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu) 該網(wǎng)架結(jié)構(gòu)構(gòu)成軟骨的骨架，如遭到破壞，軟骨就不能維持正常的結(jié)構(gòu)和功能 型膠原構(gòu)成纖維網(wǎng)架結(jié)構(gòu)中的主體 生理狀況下，軟骨基質(zhì)膠原的合成和降解維持動(dòng)態(tài)平衡。 膠原的合成分細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外兩個(gè)階段，受軟骨細(xì)胞調(diào)控。 2022-3-3013OA關(guān)節(jié)軟骨膠原的變化關(guān)節(jié)軟骨膠原的變化輕度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，軟骨細(xì)胞代謝活躍，合成代謝增強(qiáng)，型膠原合成增加，同時(shí)伴有型膠原增加；中度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，型膠原在中間層、深層的合成和變性增強(qiáng)，以合成為主；重度損傷所致骨關(guān)節(jié)炎軟骨中，型膠原變性、溶解的速度明顯大于合成，使得型膠原纖維的數(shù)量明顯減少，主要位于單個(gè)和簇聚軟骨細(xì)胞周?chē)?202

6、2-3-3014OA關(guān)節(jié)軟骨膠原的變化關(guān)節(jié)軟骨膠原的變化型膠原總量丟失 型膠原表達(dá)的改變 2022-3-3015參與參與OA發(fā)病的其他病理機(jī)制發(fā)病的其他病理機(jī)制 軟骨降解酶 細(xì)胞因子 自由基 免疫紊亂 骨內(nèi)高壓 2022-3-3016治療進(jìn)展治療進(jìn)展非藥物治療非藥物治療 (1) 病人教育；(2) 自我調(diào)理；(3) 通過(guò)電話聯(lián)系以得到社會(huì)支持；(4) 減輕體重(如果超重的話)；(5) 戶(hù)外鍛煉；(6) 物理治療；(7) 增加關(guān)節(jié)活動(dòng)范圍的鍛煉；(8)增強(qiáng)肌力的鍛煉； (9) 行走的輔助裝置；(10) 穿刺抽液；(11) 選擇合適的鞋襪；(12)鞋底外側(cè)加墊(對(duì)膝內(nèi)翻者)；(13) 使用支架；(1

7、4) 職業(yè)療法；(15) 保護(hù)關(guān)節(jié)和保存能量；(16) 使用日常生活活動(dòng)的輔助裝置。 American college of Rheumatology Subcommittee on Osteoarthritis. Recommendations for the medicial management of osteoarthritis of the hehipand knee. Arthritis Rheum，2000，43(9)：19051915. 2022-3-3017治療進(jìn)展治療進(jìn)展藥物治療藥物治療控制癥狀的藥物改善病情藥物及軟骨保護(hù)劑 晚近，治療骨關(guān)節(jié)炎的策略主要集中在：金屬蛋白酶組

8、織抑制劑（TIMP）、啟動(dòng)軟骨細(xì)胞修復(fù)和軟骨生長(zhǎng)的刺激劑、細(xì)胞因子抑制劑、NO合成酶抑制劑等。 2022-3-3018控制癥狀的藥物控制癥狀的藥物對(duì)乙酰氨基酚 國(guó)外推薦首選 非甾體抗炎藥（NSAIDs） 值得關(guān)注的是，一些研究發(fā)現(xiàn)某些NSAIDs藥如阿司匹林、水楊酸、保泰松、吲哚美辛和萘普生等對(duì)關(guān)節(jié)軟骨基質(zhì)蛋白聚糖合成有抑制作用，加速軟骨退化，不利于OA，故不宜選用，至少不應(yīng)長(zhǎng)期使用 2022-3-3019改善病情藥物及軟骨保護(hù)劑改善病情藥物及軟骨保護(hù)劑 硫酸氨基葡萄糖 （維骨力）許多短程和長(zhǎng)程隨機(jī)雙盲對(duì)照觀察GS治療膝OA的結(jié)果都提示，該產(chǎn)品既能抗炎止痛，又有延緩膝OA發(fā)展的作用。被認(rèn)為是第

9、一個(gè)改變OA病情的藥物。 其他SOD（自由基）、四環(huán)素族抗生素（軟骨基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物）、葡糖胺聚糖（外源性軟骨基質(zhì)成分）、S腺苷基蛋氨酸（促進(jìn)蛋白聚糖合成及軟骨細(xì)胞分化）、阿侖磷酸鹽（固邦，雙膦酸鹽類(lèi)，抑制軟骨及骨質(zhì)吸收）、合成基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物(U24522)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子B、胰島素樣生長(zhǎng)因子2（促進(jìn)軟骨修復(fù)的細(xì)胞固子）、 VitC、 VitK（保護(hù)軟骨） 2022-3-3020選題依據(jù)選題依據(jù)中醫(yī)經(jīng)典醫(yī)著記載的治療骨痹的效方甚多，備急千金要方中的“獨(dú)活寄生湯”具有益肝腎、補(bǔ)氣血、祛風(fēng)濕、止痹痛之功，頗切合骨關(guān)節(jié)炎的病機(jī)。 痛痹膠囊是對(duì)千古名方獨(dú)活寄生湯進(jìn)行化裁，在補(bǔ)益肝腎的基礎(chǔ)上重用

10、活血化瘀，兼以祛風(fēng)除濕、加用化痰、滋陰之品。 2022-3-3021選題依據(jù)選題依據(jù)前期臨床研究表明:20例治療組與10例維骨力對(duì)照組進(jìn)行比較，痛痹膠囊能明顯減少骨關(guān)節(jié)炎者疼痛、腫脹、壓痛程度，療效較好，治療組有效率達(dá)95%，且無(wú)其他不良反應(yīng)。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明:痛痹膠囊對(duì)致炎大鼠關(guān)節(jié)炎模型具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用，并可改善急性血瘀大鼠的血液流變學(xué)，具有一定的活血化瘀作用；對(duì)老年鼠血液SOD和MDA含量的影響實(shí)驗(yàn)表明痛痹膠囊具有較好的抗氧化作用 2022-3-3022課題研究?jī)?nèi)容課題研究?jī)?nèi)容實(shí)驗(yàn)研究實(shí)驗(yàn)研究臨床研究臨床研究理論研究理論研究2022-3-3023痛痹膠囊血清對(duì)體外培養(yǎng)大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨痛

11、痹膠囊血清對(duì)體外培養(yǎng)大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞細(xì)胞型膠原基因轉(zhuǎn)錄的影響實(shí)驗(yàn)研究型膠原基因轉(zhuǎn)錄的影響實(shí)驗(yàn)研究 痛痹膠囊血清藥理學(xué)研究痛痹膠囊血清藥理學(xué)研究 軟骨細(xì)胞培養(yǎng)軟骨細(xì)胞培養(yǎng) 軟骨細(xì)胞損傷模型的制備軟骨細(xì)胞損傷模型的制備 痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞增痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的影響殖的影響 痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞型膠原型膠原mRNA表達(dá)的影響表達(dá)的影響 2022-3-3024痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞痛痹膠囊血清對(duì)軟骨細(xì)胞型型膠原膠原mRNA表達(dá)的影響表達(dá)的影響 引物設(shè)計(jì)與合成 總RNA的提取 RNA的濃度測(cè)定 總RNA逆轉(zhuǎn)錄成第一鏈cDNA PCR擴(kuò)增 1瓊脂糖凝膠電泳 2022-

12、3-3025臨床研究臨床研究診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷標(biāo)準(zhǔn)中醫(yī)癥候標(biāo)準(zhǔn)中醫(yī)癥候標(biāo)準(zhǔn)病情進(jìn)展分期病情進(jìn)展分期病情輕重分級(jí)病情輕重分級(jí)納入標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)隨機(jī)分組隨機(jī)分組治療方法治療方法觀察指標(biāo)觀察指標(biāo)療效判定標(biāo)準(zhǔn)療效判定標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理統(tǒng)計(jì)學(xué)處理2022-3-3026病例數(shù)計(jì)算病例數(shù)計(jì)算 采用樣本含量計(jì)算軟件NCSS2002進(jìn)行 根據(jù)文獻(xiàn)的資料及前期的臨床工作，4周治療后WOMAC指數(shù)下降16，標(biāo)準(zhǔn)差在20.5為標(biāo)準(zhǔn)療效評(píng)估，每組30例患者的樣本，power為80%，為0.05是已足夠能比較出痛痹膠囊組和對(duì)照藥組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 理論上計(jì)算最少每組30例的樣本量已可以達(dá)到80%的統(tǒng)計(jì)權(quán)力 2022-3-3027盲法設(shè)

13、計(jì)盲法設(shè)計(jì) 試驗(yàn)設(shè)計(jì)為隨機(jī)、西藥軟骨保護(hù)劑（維骨力，意大利羅達(dá)藥廠）對(duì)照，因?yàn)槲魉帉?duì)照藥維骨力如做成與中藥對(duì)照同劑型及外觀、用量，則存在生物利用度差異，難以雙盲。但在負(fù)責(zé) WOMAC 評(píng)估的醫(yī)生中仍進(jìn)行盲法設(shè)計(jì)。 2022-3-3028隨機(jī)化與隨機(jī)數(shù)字隱藏隨機(jī)化與隨機(jī)數(shù)字隱藏 將全部入選患者按就診順序編號(hào)隨機(jī)數(shù)字來(lái)自NCSS2004專(zhuān)業(yè)軟件，采用區(qū)組隨機(jī)化分組方法采用“信封法”將隨機(jī)化分配序列進(jìn)行隱藏 2022-3-3029相關(guān)要點(diǎn)說(shuō)明相關(guān)要點(diǎn)說(shuō)明 根據(jù)OA治療周期和相關(guān)國(guó)際臨床試驗(yàn)（CLASS和VIGOR試驗(yàn)），擬定本次臨床研究療程為4周。Silverstein FE, Faich G, G

14、oldstein JL, et al. Gastrointestinal toxicity with celecoxib vs nonsteroidal anti-inflammatory drugs for osteoarthritis and rheumatoid arthritis: the CLASS study: a randomized controlled trial. JAMA. 2000;284:1247-1255. Bombardier C, Laine L, Reicin A, et al. Comparison of upper gastrointestinal tox

15、icity of rofecoxib and naproxen in patients with rheumatoid arthritis. VIGOR study group. N Engl J Med. 2000;343:1520-1528.目前治療OA替代醫(yī)學(xué)類(lèi)藥物停藥后追蹤的報(bào)道較少，且缺乏與西藥對(duì)比的數(shù)據(jù)，因此本研究有理由在停藥后設(shè)置2周的追蹤時(shí)間 2022-3-3030觀察指標(biāo)和方法觀察指標(biāo)和方法 安全性觀察安全性觀察一般體檢項(xiàng)目血、尿、便常規(guī)化驗(yàn)，試驗(yàn)前后各查一次。肝、腎功能檢查，試驗(yàn)前后各查一次。不良反應(yīng)。療效性觀測(cè)療效性觀測(cè)相關(guān)癥狀、體征，VAS疼痛指數(shù)，WOMAT關(guān)節(jié)炎指數(shù)

16、，起效時(shí)間。 2022-3-3031可行性分析可行性分析 本課題是在大量查閱國(guó)際國(guó)內(nèi)最新相關(guān)文獻(xiàn)資料，并結(jié)合相關(guān)的前期工作的基礎(chǔ)上，采用了多種學(xué)科、多種技術(shù)相結(jié)合的綜合性研究方法，從而保證了立題的新穎性、科學(xué)性和可靠性。 理論上依據(jù)充分 本課題實(shí)驗(yàn)中所需應(yīng)用的細(xì)胞培養(yǎng)、引物設(shè)計(jì)、RTPCR、血清藥理學(xué)等先進(jìn)技術(shù)，通過(guò)前期實(shí)驗(yàn)，均能熟練掌握。完全具備完成本研究的技術(shù)力量。 2022-3-3032計(jì)劃進(jìn)度計(jì)劃進(jìn)度第一階段：（2005.52005.6）準(zhǔn)備階段，調(diào)研及資料檢索。按課題設(shè)計(jì)首先申購(gòu)實(shí)驗(yàn)用各種試劑（盒）。準(zhǔn)備臨床病例觀察表。第二階段：（2005.62006.3）按照課題設(shè)計(jì)，完成全部實(shí)驗(yàn)及病例臨床觀察工作。第三階段：（2006.3-2006.5）資料匯總、總結(jié)、處理數(shù)據(jù)、分析與研究成果撰寫(xiě)論文。 2022-3-3033預(yù)期研究成果預(yù)期研究成果 理論上系統(tǒng)總結(jié)骨關(guān)節(jié)炎中醫(yī)文獻(xiàn)、病因病機(jī)、治法方藥，提出骨痹發(fā)病“腎虛血瘀”新見(jiàn)解，發(fā)展中醫(yī)理