微生物實驗教材

1、微生物實驗教材題目：環(huán)境中微生物的觀察題目：環(huán)境中微生物的觀察目的目的讓學(xué)生瞭解環(huán)境中有許多的微生物，可能會造讓學(xué)生瞭解環(huán)境中有許多的微生物，可能會造成微生物實驗的污染，希望學(xué)生在往後的實驗成微生物實驗的污染，希望學(xué)生在往後的實驗裡能做好無菌的操作，避免污染。裡能做好無菌的操作，避免污染。 材料材料營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng) (NA, nutrient agar) 實驗步驟：實驗步驟：用油性簽字筆先將培養(yǎng)皿劃分成兩區(qū)，標示組別、座號、用油性簽字筆先將培養(yǎng)皿劃分成兩區(qū)，標示組別、座號、日期、培養(yǎng)基種類（此次的培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)日期、培養(yǎng)基種類（此次的培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基基nut

2、rient agar plates，簡稱，簡稱NA），將手指輕按於培養(yǎng)），將手指輕按於培養(yǎng)基的一區(qū)上基的一區(qū)上另外有一平板培養(yǎng)基，將蓋子打開，於空氣中暴露另外有一平板培養(yǎng)基，將蓋子打開，於空氣中暴露30分分鐘鐘將平板培養(yǎng)基倒置放於室溫中，培養(yǎng)將平板培養(yǎng)基倒置放於室溫中，培養(yǎng)24-48小時。小時。觀察平板培養(yǎng)基所長出的菌落，互相比較並計算其數(shù)觀察平板培養(yǎng)基所長出的菌落，互相比較並計算其數(shù)目。試著依大小、形狀、表面狀況、高度、顏色、邊目。試著依大小、形狀、表面狀況、高度、顏色、邊緣等，描述幾個不同之菌落，菌落之外表特徵，可供緣等，描述幾個不同之菌落，菌落之外表特徵，可供菌種鑑定時的參考。菌種鑑定時

3、的參考。 微生物實驗微生物實驗無菌操作無菌操作常用器材常用器材接種環(huán)接種環(huán)微生物實驗微生物實驗無菌操作無菌操作常用器材常用器材酒精燈酒精燈微生物實驗微生物實驗無菌操作無菌操作消毒殺菌器材消毒殺菌器材70酒精酒精塑膠培養(yǎng)皿塑膠培養(yǎng)皿培養(yǎng)基培養(yǎng)基-營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯瓊脂（洋菜膠）瓊脂（洋菜膠）使培養(yǎng)基固化使培養(yǎng)基固化Broth （肉湯）（肉湯）液態(tài)培養(yǎng)基液態(tài)培養(yǎng)基Slant 斜面培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)基題目：細菌的接種與純培養(yǎng)題目：細菌的接種與純培養(yǎng)目的目的本次實驗中讓學(xué)生練習平板劃線技術(shù)本次實驗中讓學(xué)生練習平板劃線技術(shù)(Streak-Plate Technique)，分離單一菌落，分離單一菌落藉由此實驗學(xué)

4、習基本的無菌操作觀念，與純培藉由此實驗學(xué)習基本的無菌操作觀念，與純培養(yǎng)養(yǎng)將沾有菌種的接種環(huán)在培養(yǎng)基表面劃線，在劃將沾有菌種的接種環(huán)在培養(yǎng)基表面劃線，在劃線過程中，細胞逐漸分散，培養(yǎng)後形成單個菌線過程中，細胞逐漸分散，培養(yǎng)後形成單個菌落。落。材料材料營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng) (NA, nutrient agar)接種環(huán)、酒精燈接種環(huán)、酒精燈菌種菌種大腸桿菌大腸桿菌Escherichia coli枯草桿菌枯草桿菌Bacillus subtilis金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus 實驗步驟實驗步驟用油性簽字筆先將培養(yǎng)皿標示組別、座號、用油性簽字筆先將培養(yǎng)

5、皿標示組別、座號、日期，另外逆時針標示三區(qū)（日期，另外逆時針標示三區(qū)（I、II、III，每一，每一區(qū)大約差區(qū)大約差6090度）及中間第四區(qū)度）及中間第四區(qū)IVIIIIIIIV將接種環(huán)前端的環(huán)區(qū)置於酒精燈上燒紅，放將接種環(huán)前端的環(huán)區(qū)置於酒精燈上燒紅，放於酒精燈旁冷卻（要確實冷卻），以冷卻的於酒精燈旁冷卻（要確實冷卻），以冷卻的接種環(huán)沾取一些菌落。（所以動作儘量在酒接種環(huán)沾取一些菌落。（所以動作儘量在酒精燈周圍）精燈周圍）打開培養(yǎng)皿，於第打開培養(yǎng)皿，於第I區(qū)輕輕來回塗抹均勻（接區(qū)輕輕來回塗抹均勻（接種環(huán)盡量與培養(yǎng)皿成水平，比較不會劃破培種環(huán)盡量與培養(yǎng)皿成水平，比較不會劃破培養(yǎng)基），蓋上培養(yǎng)皿。再將

6、接種環(huán)用酒精燈養(yǎng)基），蓋上培養(yǎng)皿。再將接種環(huán)用酒精燈燒紅、冷卻。燒紅、冷卻。打開培養(yǎng)皿，將培養(yǎng)皿逆時針轉(zhuǎn)約打開培養(yǎng)皿，將培養(yǎng)皿逆時針轉(zhuǎn)約6090度，度，自第自第I區(qū)的尾部，單方向畫線拖往第區(qū)的尾部，單方向畫線拖往第II區(qū)，大區(qū)，大約劃約劃8-10條線。蓋上培養(yǎng)皿。再將接種環(huán)用條線。蓋上培養(yǎng)皿。再將接種環(huán)用酒精燈燒紅、冷卻。酒精燈燒紅、冷卻。打開培養(yǎng)皿，將培養(yǎng)皿逆時針轉(zhuǎn)約打開培養(yǎng)皿，將培養(yǎng)皿逆時針轉(zhuǎn)約6090度，度，自第自第II區(qū)的尾部，單方向畫線拖往第區(qū)的尾部，單方向畫線拖往第III區(qū)，大約區(qū)，大約劃劃5-10條線。條線。接種環(huán)不燒紅，培養(yǎng)皿再逆時針轉(zhuǎn)約接種環(huán)不燒紅，培養(yǎng)皿再逆時針轉(zhuǎn)約6090

7、度，度，直接從第直接從第III區(qū)的尾部以區(qū)的尾部以Z字形拉線到第四區(qū)。接字形拉線到第四區(qū)。接種環(huán)需再燒紅一次滅菌。種環(huán)需再燒紅一次滅菌。I區(qū)區(qū)III區(qū)區(qū)II區(qū)區(qū)IV區(qū)區(qū)平板劃線技術(shù)平板劃線技術(shù)(Streak-Plate Technique) 題目：影響細菌生長的因素：溫度、題目：影響細菌生長的因素：溫度、pH值值目的：目的：本次實驗中讓學(xué)生再次練習平板劃線技術(shù)本次實驗中讓學(xué)生再次練習平板劃線技術(shù)(Streak-Plate Technique)，分離單一菌落與，分離單一菌落與複習無菌操作觀念複習無菌操作觀念給學(xué)生練習液態(tài)培養(yǎng)基的接種技術(shù)與斜面培養(yǎng)給學(xué)生練習液態(tài)培養(yǎng)基的接種技術(shù)與斜面培養(yǎng)基的接種方

8、法基的接種方法平板培養(yǎng)基將培養(yǎng)於不同溫度，觀察溫度對細平板培養(yǎng)基將培養(yǎng)於不同溫度，觀察溫度對細菌生長的影響菌生長的影響液態(tài)培養(yǎng)基（或稱為肉湯）則是含有不同的液態(tài)培養(yǎng)基（或稱為肉湯）則是含有不同的pH值，可觀察值，可觀察pH值對細菌生長的影響值對細菌生長的影響材料：材料：營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng) (NA, nutrient agar)液態(tài)培養(yǎng)基液態(tài)培養(yǎng)基(broth)接種環(huán)、酒精燈接種環(huán)、酒精燈菌種（大腸桿菌菌種（大腸桿菌Escherichia coli）實驗步驟：實驗步驟：四區(qū)畫線法的步驟如前所述。四區(qū)畫線法的步驟如前所述。液態(tài)培養(yǎng)基的接種，將接種環(huán)燒紅之外，上面鐵棒部分液態(tài)培養(yǎng)基的接

9、種，將接種環(huán)燒紅之外，上面鐵棒部分也要燒過，放於酒精燈旁冷卻（要確實冷卻），沾取一也要燒過，放於酒精燈旁冷卻（要確實冷卻），沾取一些菌落。些菌落。將試管蓋口輕輕過火，以右手小拇指打開蓋子，將接種將試管蓋口輕輕過火，以右手小拇指打開蓋子，將接種環(huán)深入試管底部，輕輕攪拌一會。環(huán)深入試管底部，輕輕攪拌一會。拿出接種環(huán)，瓶口過火，蓋子過火，蓋子套回試管，再過火，拿出接種環(huán)，瓶口過火，蓋子過火，蓋子套回試管，再過火，接種環(huán)需再燒紅一次滅菌。接種環(huán)需再燒紅一次滅菌。斜面培養(yǎng)基的接種，類似液態(tài)培養(yǎng)基接種方法，只有畫菌方式斜面培養(yǎng)基的接種，類似液態(tài)培養(yǎng)基接種方法，只有畫菌方式不同。不同。接菌方式如上所述，沾到

10、菌之後將接種環(huán)深入試管底部，從接菌方式如上所述，沾到菌之後將接種環(huán)深入試管底部，從下往上慢慢下往上慢慢Z字型畫線。字型畫線。拿出接種環(huán)，瓶口過火，蓋子過火，蓋子套回試管，再拿出接種環(huán)，瓶口過火，蓋子過火，蓋子套回試管，再過火，接種環(huán)需再燒紅一次滅菌。過火，接種環(huán)需再燒紅一次滅菌。固態(tài)培養(yǎng)基將培養(yǎng)於固態(tài)培養(yǎng)基將培養(yǎng)於45、37、25、4，液態(tài)培養(yǎng)，液態(tài)培養(yǎng)基置於基置於37震盪培養(yǎng)。震盪培養(yǎng)。題目：細菌數(shù)量的計數(shù)方法題目：細菌數(shù)量的計數(shù)方法- 平板塗佈法平板塗佈法（Spread Plate） 目的目的常用來計算每常用來計算每ml液體培養(yǎng)基中的細菌數(shù)量有三種液體培養(yǎng)基中的細菌數(shù)量有三種血球計數(shù)器計直

11、接數(shù)法、平板計數(shù)法、濾膜培養(yǎng)法血球計數(shù)器計直接數(shù)法、平板計數(shù)法、濾膜培養(yǎng)法本次實驗中讓學(xué)生練習以平板塗佈法來計數(shù)細菌的數(shù)量。本次實驗中讓學(xué)生練習以平板塗佈法來計數(shù)細菌的數(shù)量。此種方法簡單、靈敏，廣泛應(yīng)用於食品、水體及土壤樣此種方法簡單、靈敏，廣泛應(yīng)用於食品、水體及土壤樣品中活的細菌的計數(shù)品中活的細菌的計數(shù)平板計數(shù)法得到的結(jié)果稱為菌落形成單位平板計數(shù)法得到的結(jié)果稱為菌落形成單位(colony forming unit， CFU)CFU並不完全等同於樣品中的活菌數(shù)，菌落數(shù)在並不完全等同於樣品中的活菌數(shù)，菌落數(shù)在30-300個內(nèi)，所計數(shù)的結(jié)果會較正確個內(nèi)，所計數(shù)的結(jié)果會較正確材料材料營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)

12、營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng) (NA, nutrient agar)液態(tài)培養(yǎng)基液態(tài)培養(yǎng)基(broth)L型玻棒、酒精燈型玻棒、酒精燈菌種（大腸桿菌菌種（大腸桿菌Escherichia coli）與所使用）與所使用的稀釋倍數(shù)菌液的稀釋倍數(shù)菌液 實驗步驟實驗步驟用油性簽字筆先將培養(yǎng)皿標示組別、座號、用油性簽字筆先將培養(yǎng)皿標示組別、座號、日期，與所使用的稀釋倍數(shù)菌液。日期，與所使用的稀釋倍數(shù)菌液。將隔夜培養(yǎng)的大腸桿菌菌液做連續(xù)性的稀釋將隔夜培養(yǎng)的大腸桿菌菌液做連續(xù)性的稀釋（包含（包含10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8，此部分由老師實驗前先準備）。，此部分由老師實驗前先

13、準備）。以微量吸管取以微量吸管取100 ml稀釋菌液加於培養(yǎng)基的稀釋菌液加於培養(yǎng)基的中央。中央。將玻棒浸入將玻棒浸入95%酒精中，將沾附酒精的玻棒酒精中，將沾附酒精的玻棒稍用火燒並放置酒精燈下方使其冷卻稍用火燒並放置酒精燈下方使其冷卻（酒精燈與（酒精燈與95%酒精要離遠一點，不要讓火酒精要離遠一點，不要讓火滴到酒精中）。滴到酒精中）。用冷卻的玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上，用冷卻的玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上，塗佈的時候只需將培養(yǎng)基稍微打開，邊推邊轉(zhuǎn)塗佈的時候只需將培養(yǎng)基稍微打開，邊推邊轉(zhuǎn)動培養(yǎng)基，盡量塗均勻及避免污染。動培養(yǎng)基，盡量塗均勻及避免污染。 塗佈到菌液乾掉為止（這樣才可倒置培養(yǎng)）

14、。塗佈到菌液乾掉為止（這樣才可倒置培養(yǎng)）。有時會不容易推乾，可置於無菌操作臺吹乾，有時會不容易推乾，可置於無菌操作臺吹乾，培養(yǎng)於培養(yǎng)於37隔夜。隔夜?？偩鷶?shù)的計數(shù)總菌數(shù)的計數(shù)培養(yǎng)基菌落數(shù)培養(yǎng)基菌落數(shù)/0.1 ml/稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)例如：所使用的稀釋度為例如：所使用的稀釋度為10-5，平板長出的，平板長出的菌落數(shù)平均為菌落數(shù)平均為200個，則原培養(yǎng)液中可能的個，則原培養(yǎng)液中可能的菌數(shù)含量為？菌數(shù)含量為？ 200/0.1 ml/10-5 = 200 x 106 = 2 x 108 平板塗布技術(shù)平板塗布技術(shù)(Spread-Plate Technique)1. 將少量的菌液用微量吸管滴在平板中央將少量

15、的菌液用微量吸管滴在平板中央2. 將玻棒侵入酒精中將玻棒侵入酒精中3.將沾附酒精的玻棒稍用火燒並放置使其冷卻將沾附酒精的玻棒稍用火燒並放置使其冷卻4.用玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上培養(yǎng)用玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上培養(yǎng) 題目：細菌的鑑別染色法題目：細菌的鑑別染色法- 革蘭氏染色法（革蘭氏染色法（Gram stain）目的目的藉由此實驗讓學(xué)生練習細菌的鑑別染色方法，藉由此實驗讓學(xué)生練習細菌的鑑別染色方法，革蘭氏染色可將細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌及陰革蘭氏染色可將細菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌及陰性菌。性菌。原理原理鑑別染色需要先將細菌熱固定於玻片上，利用鑑別染色需要先將細菌熱固定於玻片上，利用四種化學(xué)藥

16、劑四種化學(xué)藥劑結(jié)晶紫為初染劑，使細菌著色，細菌呈現(xiàn)藍結(jié)晶紫為初染劑，使細菌著色，細菌呈現(xiàn)藍紫色紫色革蘭碘為媒染劑，加強結(jié)晶紫的染色效果革蘭碘為媒染劑，加強結(jié)晶紫的染色效果95%的酒精為脫色劑，脫去初染劑的顏色，的酒精為脫色劑，脫去初染劑的顏色，也是關(guān)鍵步驟也是關(guān)鍵步驟番紅為複染劑，與初染呈對比顏色番紅為複染劑，與初染呈對比顏色因為細胞壁結(jié)構(gòu)不一樣，革蘭氏陽性菌會被染因為細胞壁結(jié)構(gòu)不一樣，革蘭氏陽性菌會被染成藍紫色，而革蘭氏陰性菌則被染成紅色。成藍紫色，而革蘭氏陰性菌則被染成紅色。 革蘭氏染色法四種化學(xué)藥劑的作用原理革蘭氏染色法四種化學(xué)藥劑的作用原理初染劑：結(jié)晶紫初染劑：結(jié)晶紫(Crystal

17、violet)是一種鹼性溶劑，是一種鹼性溶劑，可與細胞壁中的勝肽聚醣緊密結(jié)合，使細菌染成藍可與細胞壁中的勝肽聚醣緊密結(jié)合，使細菌染成藍紫色。紫色。媒染劑：革蘭碘液媒染劑：革蘭碘液(Grams iodine solution)，可與，可與結(jié)晶紫結(jié)合形成不溶性複合物，加強結(jié)晶紫的顏色。結(jié)晶紫結(jié)合形成不溶性複合物，加強結(jié)晶紫的顏色。脫色劑：脫色劑：95%酒精，酒精可溶解掉革蘭氏陰性菌細胞酒精，酒精可溶解掉革蘭氏陰性菌細胞壁中外層的脂多醣（壁中外層的脂多醣（LPS），而使的結(jié)晶紫釋出，使），而使的結(jié)晶紫釋出，使菌體成無色。革蘭氏陽性菌細胞壁之脂質(zhì)含量低，酒菌體成無色。革蘭氏陽性菌細胞壁之脂質(zhì)含量低，酒

18、精很難讓結(jié)晶紫完全釋出，因而保留了藍紫色，但若精很難讓結(jié)晶紫完全釋出，因而保留了藍紫色，但若脫色時間太久也會導(dǎo)致菌體成無色。脫色時間太久也會導(dǎo)致菌體成無色。複染劑：番紅複染劑：番紅(safranin)可將脫成無色的革蘭氏陰性菌可將脫成無色的革蘭氏陰性菌染成紅色，而革蘭氏陽性菌因保有初始的藍紫色，番染成紅色，而革蘭氏陽性菌因保有初始的藍紫色，番紅無法將其再染色。紅無法將其再染色。材料材料液態(tài)培養(yǎng)菌液液態(tài)培養(yǎng)菌液大腸桿菌大腸桿菌Escherichia coli枯草桿菌枯草桿菌Bacillus subtilis宜使用培養(yǎng)宜使用培養(yǎng)1624小時之細菌。因菌齡老化，小時之細菌。因菌齡老化，革蘭氏陽性菌之

19、勝肽聚醣易失去保留初染劑革蘭氏陽性菌之勝肽聚醣易失去保留初染劑結(jié)晶紫的能力，而使的份菌體染呈藍紫色，結(jié)晶紫的能力，而使的份菌體染呈藍紫色，部份呈紅色。部份呈紅色。玻片、顯微鏡、試鏡紙、酒精燈玻片、顯微鏡、試鏡紙、酒精燈染劑染劑結(jié)晶紫、革蘭碘、結(jié)晶紫、革蘭碘、95%酒精、番紅酒精、番紅實驗步驟實驗步驟以試鏡紙將玻片擦乾淨，以簽字筆在玻片背面以試鏡紙將玻片擦乾淨，以簽字筆在玻片背面畫一個小圓圈。畫一個小圓圈。使用接種環(huán)取一點菌液（環(huán)部分形成一薄膜），使用接種環(huán)取一點菌液（環(huán)部分形成一薄膜），塗抹於玻片中央，將接種環(huán)再燒紅滅菌。大腸塗抹於玻片中央，將接種環(huán)再燒紅滅菌。大腸桿菌（桿菌（EC）與枯草桿菌

20、（）與枯草桿菌（BS）分別取，於空）分別取，於空氣中乾燥，熱固定（玻片背面用火烤一下）。氣中乾燥，熱固定（玻片背面用火烤一下）。滴結(jié)晶紫覆蓋塗抹區(qū)，靜置一分鐘，以滴結(jié)晶紫覆蓋塗抹區(qū)，靜置一分鐘，以RO水水輕洗。（在水槽邊操作）輕洗。（在水槽邊操作）滴革蘭碘試劑染一分鐘，以滴革蘭碘試劑染一分鐘，以RO水輕洗。水輕洗。以以95%酒精脫色，將玻片放傾斜，酒精逐滴滴酒精脫色，將玻片放傾斜，酒精逐滴滴下，勿脫色過頭，以蒸餾水輕洗。下，勿脫色過頭，以蒸餾水輕洗。滴番紅試劑染染滴番紅試劑染染45秒，以蒸餾水輕洗。秒，以蒸餾水輕洗。以吸水紙吸乾水分或陰乾，以以吸水紙吸乾水分或陰乾，以100倍油鏡觀察。倍油鏡觀

21、察。B. natto Gram stain 題目：控制微生物生長之化學(xué)治療劑題目：控制微生物生長之化學(xué)治療劑-細菌對抗細菌對抗生素敏感性生素敏感性(感受性感受性)測試測試目的目的利用利用 (disc-agar diffusion)了解了解Kirby-Bauer試驗法，以了解化學(xué)治療劑之抗微生物作用。試驗法，以了解化學(xué)治療劑之抗微生物作用。原理原理臨床上最常用來治療細菌性感染疾病的化學(xué)治臨床上最常用來治療細菌性感染疾病的化學(xué)治療藥為劑為抗生素（療藥為劑為抗生素（antibiotics）本實驗利用自製的紙錠，其含有不同的抗生素：本實驗利用自製的紙錠，其含有不同的抗生素：ampicillin、kan

22、amycin、chloramphenicol、tetracyclineKirby-Bauer法為一種標準的紙錠瓊脂擴散法，法為一種標準的紙錠瓊脂擴散法，用於測試細菌對藥物感受性，藉由量測抑制環(huán)用於測試細菌對藥物感受性，藉由量測抑制環(huán)之大小來判讀細菌對抗生素的感受性。之大小來判讀細菌對抗生素的感受性。 材料材料液態(tài)培養(yǎng)菌液液態(tài)培養(yǎng)菌液三種不同的大腸桿菌三種不同的大腸桿菌Escherichia coli抗生素敏感性抗生素敏感性抗抗ampicillin抗抗kanamycin酒精燈、無菌棉花棒、培養(yǎng)皿、鑷子、紙錠酒精燈、無菌棉花棒、培養(yǎng)皿、鑷子、紙錠實驗步驟實驗步驟將培養(yǎng)皿畫成四區(qū)，在三區(qū)周圍標上將培

23、養(yǎng)皿畫成四區(qū)，在三區(qū)周圍標上amp, kan, tetra，寫上組別與座號。，寫上組別與座號。含菌液試管過火，打開蓋子，使用無菌棉棒沾含菌液試管過火，打開蓋子，使用無菌棉棒沾取某一種大腸桿菌菌液，於試管內(nèi)將多餘的菌取某一種大腸桿菌菌液，於試管內(nèi)將多餘的菌液擠掉。液擠掉。棉花棒來回均勻塗佈於整片培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)棉花棒來回均勻塗佈於整片培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)基轉(zhuǎn)基轉(zhuǎn)90度再均勻塗佈一次。度再均勻塗佈一次。將尖嘴鑷子沾一些酒精，過火、冷卻、輕夾取將尖嘴鑷子沾一些酒精，過火、冷卻、輕夾取一紙錠，將其輕壓緊貼於瓊脂表面。每一一紙錠，將其輕壓緊貼於瓊脂表面。每一區(qū)放一種紙錠。區(qū)放一種紙錠。將培養(yǎng)基倒置，於將培養(yǎng)

24、基倒置，於37培養(yǎng)隔夜。培養(yǎng)隔夜。觀察細菌的生長是否受抑制。紙錠周圍會形成觀察細菌的生長是否受抑制。紙錠周圍會形成一透明環(huán)，測量抑制環(huán)之大小一透明環(huán)，測量抑制環(huán)之大小(mm)與標準表格與標準表格比較，即可得知此細菌的感受性為抗性比較，即可得知此細菌的感受性為抗性（resistant）、中間（）、中間（intermediate）或敏感）或敏感性（性（sensitive）。）。感受性的實驗受到許多因素的影響，如：培養(yǎng)感受性的實驗受到許多因素的影響，如：培養(yǎng)基的種類（不同品牌間會有差異）、紙錠的材基的種類（不同品牌間會有差異）、紙錠的材質(zhì)（影響擴散的速率），受測菌株之接種量、質(zhì)（影響擴散的速率），受

25、測菌株之接種量、生長速度與品系等。因本實驗紙錠為自製，培生長速度與品系等。因本實驗紙錠為自製，培養(yǎng)基也非標準的養(yǎng)基也非標準的Mueller-Hinton agar，所以不，所以不能由結(jié)果判斷菌株對抗生素是感受性或抗性。能由結(jié)果判斷菌株對抗生素是感受性或抗性。ampicillin (安比西林安比西林)的作用為抑制細胞壁的的作用為抑制細胞壁的合成，屬於青黴素類的抗生素；合成，屬於青黴素類的抗生素；kanamycin (卡那黴素卡那黴素)屬於胺基糖甘類屬於胺基糖甘類（aminoglycoside），干擾細菌），干擾細菌tRNA結(jié)合至結(jié)合至30S核糖體次單位，沒有勝肽鍵形成；核糖體次單位，沒有勝肽鍵形

26、成；chloramphenicol (氯黴素氯黴素)抑制抑制50S核醣體的核醣體的肽基轉(zhuǎn)移酵素；肽基轉(zhuǎn)移酵素；tetracycline (四環(huán)黴素四環(huán)黴素)防止防止勝肽在勝肽在30S核醣體延長。核醣體延長。E. coli Top10F strainE. coli Top10F/pUC18 strain題目：土壤中放線菌的篩選與放線菌抗菌活性題目：土壤中放線菌的篩選與放線菌抗菌活性分析分析目的：從土壤樣品中篩選放線菌，掏選幾株放線目的：從土壤樣品中篩選放線菌，掏選幾株放線菌測試其抑制其他細菌生長的能力菌測試其抑制其他細菌生長的能力原理：現(xiàn)今臨床上所使用的抗生素有三分之二來原理：現(xiàn)今臨床上所使用的

27、抗生素有三分之二來自放線菌所生產(chǎn)，而放線菌普遍存於土壤當中，自放線菌所生產(chǎn)，而放線菌普遍存於土壤當中，土壤中的養(yǎng)分通常很貧瘠，所以本實驗所使用的土壤中的養(yǎng)分通常很貧瘠，所以本實驗所使用的篩選培養(yǎng)基一不含養(yǎng)分的水瓊脂培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)基一不含養(yǎng)分的水瓊脂培養(yǎng)基(water agar)，另一培養(yǎng)基為十分之一的營養(yǎng)培養(yǎng)基，可，另一培養(yǎng)基為十分之一的營養(yǎng)培養(yǎng)基，可以用來篩選土壤中的一般細菌。土壤中也存在許以用來篩選土壤中的一般細菌。土壤中也存在許多真菌，為了避免真菌的生長，培養(yǎng)基中添加了多真菌，為了避免真菌的生長，培養(yǎng)基中添加了抗生素抗生素-環(huán)己胺（環(huán)己胺（cycloheximide, 抑制真核細胞抑制真

28、核細胞蛋白質(zhì)合成），避免真菌的生長。蛋白質(zhì)合成），避免真菌的生長。材料：土壤樣本、無生理食鹽菌水、酒精燈、材料：土壤樣本、無生理食鹽菌水、酒精燈、L型玻棒、水瓊脂培養(yǎng)基型玻棒、水瓊脂培養(yǎng)基(water agar)、1/10營養(yǎng)營養(yǎng)培養(yǎng)基，菌株若干株。培養(yǎng)基，菌株若干株。實驗步驟：實驗步驟：秤土壤秤土壤 1 g放入放入9 ml生理食鹽水中，震盪混合，生理食鹽水中，震盪混合，做做10倍連續(xù)稀釋成倍連續(xù)稀釋成10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5（此部分由老師實驗前先準備）。（此部分由老師實驗前先準備）。將培養(yǎng)基標示好座號、組別、種類。將培養(yǎng)基標示好座號、組別、種類。以微量吸管取以

29、微量吸管取100 ml稀釋菌液加於培養(yǎng)基的中稀釋菌液加於培養(yǎng)基的中央。央。將玻棒浸入將玻棒浸入95%酒精中，將沾附酒精的玻棒稍酒精中，將沾附酒精的玻棒稍用火燒並放置酒精燈下方使其冷卻（酒精用火燒並放置酒精燈下方使其冷卻（酒精燈與燈與95%酒精要離遠一點，不要讓火滴到酒精酒精要離遠一點，不要讓火滴到酒精中）。中）。用冷卻的玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上，用冷卻的玻棒把菌液均勻塗佈於平板表面上，塗佈的時候只需將培養(yǎng)基稍微打開，邊推邊轉(zhuǎn)塗佈的時候只需將培養(yǎng)基稍微打開，邊推邊轉(zhuǎn)動培養(yǎng)基，盡量塗均勻及避免污染。動培養(yǎng)基，盡量塗均勻及避免污染。塗佈到菌液乾掉為止（這樣才可倒置培養(yǎng)）。塗佈到菌液乾掉為止（這樣才可倒置培養(yǎng)）。有時會不容易推乾，可置於無菌操作臺吹乾，有時會不容易推乾，可置於無菌操作臺吹乾，