酵母菌形態(tài)觀察及死活細(xì)胞的觀察

1、 目的要求 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)程序 思考題 觀察酵母形態(tài)，加深理解酵母的形態(tài)特征觀察酵母形態(tài)，加深理解酵母的形態(tài)特征 美藍(lán)染色鑒定酵母的死活美藍(lán)染色鑒定酵母的死活 學(xué)習(xí)使用目鏡測微尺和鏡臺(tái)測微尺在顯微學(xué)習(xí)使用目鏡測微尺和鏡臺(tái)測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。鏡下測定微生物大小的方法。 學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。法。 顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺(tái)測微尺、血球顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺(tái)測微尺、血球記數(shù)板、酵母菌懸液、蓋玻片、美藍(lán)、無記數(shù)板、酵母菌懸液、蓋玻片、美藍(lán)、無菌滴管、吸水紙、擦鏡紙、香柏油、擦鏡菌滴管、吸水紙、擦鏡紙、香柏油、擦鏡油。油。 5-

2、1 :測定微生物的大小測定微生物的大小 5- 2 :測定微生物數(shù)量測定微生物數(shù)量 5- 3 :酵母的形態(tài)特和美藍(lán)酵母的形態(tài)特和美藍(lán) 染色鑒定酵母的死活染色鑒定酵母的死活 Division: budding Do not form filaments Some form filaments Some can mate.蜉蝣體表面的酵母菌面包酵母出芽生殖中的啤酒酵母 測定的工具：目鏡測微尺測定的工具：目鏡測微尺 鏡臺(tái)測微尺鏡臺(tái)測微尺 目鏡測微尺的校正：在高倍鏡下，看清鏡臺(tái)測微尺的刻度后，目鏡測微尺的校正：在高倍鏡下，看清鏡臺(tái)測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺(tái)測微尺的刻度平行，移動(dòng)推動(dòng)轉(zhuǎn)動(dòng)

3、目鏡，使目鏡測微尺與鏡臺(tái)測微尺的刻度平行，移動(dòng)推動(dòng)器，使目鏡測微尺的器，使目鏡測微尺的0點(diǎn)與鏡臺(tái)測微尺的某一刻度重合，然后，點(diǎn)與鏡臺(tái)測微尺的某一刻度重合，然后，仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)完全重合的刻度。計(jì)算兩刻度間目鏡測微仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)完全重合的刻度。計(jì)算兩刻度間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測微尺的格數(shù)。由于鏡臺(tái)測微尺的刻度每格長尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測微尺的格數(shù)。由于鏡臺(tái)測微尺的刻度每格長10m，所以可得：，所以可得： 目鏡測微尺每格長度（目鏡測微尺每格長度（ m）=（鏡臺(tái)測微尺格數(shù)（鏡臺(tái)測微尺格數(shù)10）/目鏡目鏡測微尺格數(shù)測微尺格數(shù) 注意：校正目鏡測微尺必須針對(duì)特定的顯微鏡和附件（特定的注意：校正目鏡測微尺

4、必須針對(duì)特定的顯微鏡和附件（特定的接物鏡、接目鏡、鏡筒長度等）進(jìn)行，而且只能在這接物鏡、接目鏡、鏡筒長度等）進(jìn)行，而且只能在這特定的情特定的情況況下才可重復(fù)使用。下才可重復(fù)使用。 菌體大小的測定：取下鏡臺(tái)測微尺，將細(xì)菌染色標(biāo)本置于載物菌體大小的測定：取下鏡臺(tái)測微尺，將細(xì)菌染色標(biāo)本置于載物臺(tái)上，然后在油鏡下用目鏡測微尺測量菌體的長和寬。臺(tái)上，然后在油鏡下用目鏡測微尺測量菌體的長和寬。 方法：活菌計(jì)數(shù)法方法：活菌計(jì)數(shù)法平板菌落計(jì)數(shù)法；總菌計(jì)數(shù)法平板菌落計(jì)數(shù)法；總菌計(jì)數(shù)法血血球計(jì)數(shù)板或霍瑟（球計(jì)數(shù)板或霍瑟（Peroff Hausser）細(xì)菌計(jì)數(shù)板（二者原）細(xì)菌計(jì)數(shù)板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同

5、而已）。理和部件相同，只是厚薄不同而已）。 1. 取清潔無油的血球計(jì)數(shù)板，在計(jì)數(shù)室上面加蓋玻片。 2. 取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計(jì)數(shù)室內(nèi)不得有氣泡。 3. 靜止5min后，用低倍鏡觀察并將計(jì)數(shù)室移至視野中央。 4. 在高倍鏡下計(jì)數(shù)：隨機(jī)計(jì)數(shù)五個(gè)中格的平均值，然后求得每個(gè)中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。 5. 計(jì)算方法： 6. 注意事項(xiàng)：壓在方格線上的菌體，以壓在底線和右側(cè)線上的菌體計(jì)入本格內(nèi)；遇到有芽體的酵母時(shí)，若芽體和母體同等大，就按單個(gè)酵母計(jì)數(shù)。 7. 計(jì)數(shù)完畢后，血球計(jì)數(shù)板要立即清洗干凈，并用吸水紙吸干，最后用擦鏡紙擦干凈，并放回盒內(nèi)。 （X1+X2+X3+X4+X5）5*25（或或16）*10 *1000 * 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 酵母菌細(xì)胞數(shù)酵母菌細(xì)胞數(shù)/mL= 美藍(lán)為無毒染料，其氧化型呈藍(lán)色，還原型無色。 通過美藍(lán)染色，檢驗(yàn)細(xì)胞的還原能力?；罴?xì)胞還原能力強(qiáng)，在特定時(shí)間內(nèi)將美藍(lán)還原為無色。 老化、死亡細(xì)胞呈藍(lán)色、淡