生物技術(shù)制藥單克隆抗體

1、1生物技術(shù)制藥 -單克隆抗體2 一、單克隆抗體的概念一、單克隆抗體的概念 二、單克隆抗體制備二、單克隆抗體制備 三、生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈- -單克隆抗體靶向抗腫瘤藥物單克隆抗體靶向抗腫瘤藥物 研究現(xiàn)狀研究現(xiàn)狀 四、四、人源化單克隆抗體人源化單克隆抗體簡(jiǎn)介簡(jiǎn)介 五、展望展望目目 錄錄3一、單克隆抗體的概念一、單克隆抗體的概念單克隆抗體，簡(jiǎn)稱單抗。是將能分泌特單克隆抗體，簡(jiǎn)稱單抗。是將能分泌特異性抗體的細(xì)胞和具有無(wú)限增殖能力的異性抗體的細(xì)胞和具有無(wú)限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞相融合，通過有限稀釋法及骨髓瘤細(xì)胞相融合，通過有限稀釋法及克隆化，使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克克隆化，使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系

2、而產(chǎn)生的細(xì)胞。這種抗體是單隆細(xì)胞系而產(chǎn)生的細(xì)胞。這種抗體是單一的一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，具有對(duì)一個(gè)淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，具有對(duì)一個(gè)抗原決定簇的單一性、特異性、均質(zhì)性抗原決定簇的單一性、特異性、均質(zhì)性的抗體。的抗體。4二、單克隆抗體的制備二、單克隆抗體的制備淋巴細(xì)胞雜交瘤分為淋巴細(xì)胞雜交瘤分為B細(xì)胞雜交瘤和細(xì)胞雜交瘤和T細(xì)胞雜細(xì)胞雜交瘤。前者指用交瘤。前者指用B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合來(lái)制備單克隆抗體合來(lái)制備單克隆抗體, 后者是把后者是把T淋巴細(xì)胞和淋巴細(xì)胞和胸腺瘤細(xì)胞融合來(lái)制備抗原特異的淋巴因子胸腺瘤細(xì)胞融合來(lái)制備抗原特異的淋巴因子和研究細(xì)胞免疫的許多問題。用和研究細(xì)胞免

3、疫的許多問題。用B細(xì)胞雜交細(xì)胞雜交瘤技術(shù)來(lái)制備單克隆抗體的簡(jiǎn)要流程圖瘤技術(shù)來(lái)制備單克隆抗體的簡(jiǎn)要流程圖1567三、三、生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈-單克隆抗體靶向抗腫瘤藥物研究現(xiàn)狀單克隆抗體靶向抗腫瘤藥物研究現(xiàn)狀 8幾種單克隆抗體藥物幾種單克隆抗體藥物9幾種單克隆抗體藥物幾種單克隆抗體藥物101、單克隆抗體靶向藥物、單克隆抗體靶向藥物特點(diǎn)：特點(diǎn)：1 1、體積小、體積小, ,能更有效地透入腫瘤能更有效地透入腫瘤; ;2 2、其分子小、消除快、累積毒性小、其分子小、消除快、累積毒性小; ;3 3、所攜帶的彈頭脫離后、所攜帶的彈頭脫離后, ,可較快被清除可較快被清除; ;4 4、循環(huán)中免疫靶向結(jié)合物對(duì)靶細(xì)胞的競(jìng)

4、爭(zhēng)作、循環(huán)中免疫靶向結(jié)合物對(duì)靶細(xì)胞的競(jìng)爭(zhēng)作用??；用?。? 5、半衰期短、穿透性好、半衰期短、穿透性好; ;6 6、能穿過血腦屏障、能穿過血腦屏障, ,因而使單抗偶聯(lián)物能更好因而使單抗偶聯(lián)物能更好地達(dá)到治療目的。地達(dá)到治療目的。 112、抗腫瘤藥物研究現(xiàn)狀、抗腫瘤藥物研究現(xiàn)狀研究表明研究表明,單抗靶向藥物具有很好的療效單抗靶向藥物具有很好的療效, 對(duì)移植于裸鼠的相應(yīng)人體腫瘤生長(zhǎng)有抑對(duì)移植于裸鼠的相應(yīng)人體腫瘤生長(zhǎng)有抑制作用，具有更高更好的療效和較低的制作用，具有更高更好的療效和較低的細(xì)胞毒性。與單抗進(jìn)行偶聯(lián)并在裸鼠進(jìn)細(xì)胞毒性。與單抗進(jìn)行偶聯(lián)并在裸鼠進(jìn)行療效觀察的抗癌藥物有阿霉素、博胺行療效觀察的抗

5、癌藥物有阿霉素、博胺霉素、絲裂霉素、平陽(yáng)霉素、柔紅霉素、霉素、絲裂霉素、平陽(yáng)霉素、柔紅霉素、苯丁酸氮芥、苯丙酸氮芥、順鉑以及長(zhǎng)苯丁酸氮芥、苯丙酸氮芥、順鉑以及長(zhǎng)春新堿等春新堿等,在治療腫瘤方面取得了積極的在治療腫瘤方面取得了積極的作用。作用。12利用小鼠生產(chǎn)單抗利用小鼠生產(chǎn)單抗13問問 題題 單抗在疾病診斷方面表現(xiàn)出色，但在治療癌癥等單抗在疾病診斷方面表現(xiàn)出色，但在治療癌癥等惡性疾病方面的發(fā)展卻一波三折，步履維艱惡性疾病方面的發(fā)展卻一波三折，步履維艱！ 原因：原因： 1、使人體產(chǎn)生、使人體產(chǎn)生 “ “人抗鼠抗體人抗鼠抗體” ” (Human anti mouse antibody，簡(jiǎn)寫，簡(jiǎn)寫H

6、AMA，人體主要針對(duì)鼠源性人體主要針對(duì)鼠源性單克隆抗體同種型產(chǎn)生的抗抗體，可誘發(fā)人抗鼠抗體反單克隆抗體同種型產(chǎn)生的抗抗體，可誘發(fā)人抗鼠抗體反應(yīng)。應(yīng)。） 2、在人體內(nèi)的半衰期很短，難以維持有效的藥物、在人體內(nèi)的半衰期很短，難以維持有效的藥物作用靶組織的時(shí)間。作用靶組織的時(shí)間。14四、四、人源化單克隆抗體人源化單克隆抗體 將特異性和親和力較強(qiáng)的非人源單將特異性和親和力較強(qiáng)的非人源單（主要指鼠源性單抗）進(jìn)行人源化改造（主要指鼠源性單抗）進(jìn)行人源化改造后后, 在保持對(duì)特異性抗原表位高親和力的在保持對(duì)特異性抗原表位高親和力的基礎(chǔ)上進(jìn)行人源化改造基礎(chǔ)上進(jìn)行人源化改造, 減少異源抗體的減少異源抗體的免疫原性

7、免疫原性,有效的避免了人抗鼠抗體反應(yīng)，有效的避免了人抗鼠抗體反應(yīng)，此種抗體，即人源化單克隆抗體。此種抗體，即人源化單克隆抗體。15 人源性單抗特點(diǎn)人源性單抗特點(diǎn) 與與表皮生長(zhǎng)因子受體（表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）具有高具有高親和性親和性。 (表皮生長(zhǎng)因子表皮生長(zhǎng)因子：參與正常細(xì)胞的生：參與正常細(xì)胞的生長(zhǎng)、腫瘤形成。長(zhǎng)、腫瘤形成。表皮生長(zhǎng)因子受體表皮生長(zhǎng)因子受體：創(chuàng)傷愈合等：創(chuàng)傷愈合等過程與表皮生長(zhǎng)因子結(jié)合的細(xì)胞膜受體，具有酪過程與表皮生長(zhǎng)因子結(jié)合的細(xì)胞膜受體，具有酪氨酸激酶活性氨酸激酶活性） 具有靶向性強(qiáng)、毒副作用低具有靶向性強(qiáng)、毒副作用低，并能增并能增強(qiáng)放、化療的治療效果強(qiáng)放、化療的治療效果

8、。 高度專一性，能夠特異性針對(duì)腫瘤細(xì)高度專一性，能夠特異性針對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行靶向治療胞進(jìn)行靶向治療。16 1、人源化抗體的構(gòu)建、人源化抗體的構(gòu)建 2、人源化抗體的表達(dá)、人源化抗體的表達(dá)人源化抗體步驟人源化抗體步驟17構(gòu)構(gòu) 建建 a、人、人+鼠嵌合抗體鼠嵌合抗體 的構(gòu)建：的構(gòu)建： 應(yīng)用應(yīng)用DNA 重組技術(shù)將小鼠抗體基因上的重組技術(shù)將小鼠抗體基因上的可變區(qū)與人抗體基因的恒定區(qū)重組可變區(qū)與人抗體基因的恒定區(qū)重組, 再將重再將重組后的基因?qū)牍撬枇黾?xì)胞中表達(dá)。根據(jù)組后的基因?qū)牍撬枇黾?xì)胞中表達(dá)。根據(jù)所用的載體質(zhì)粒標(biāo)記基因產(chǎn)物所用的載體質(zhì)粒標(biāo)記基因產(chǎn)物, 選用適當(dāng)?shù)倪x用適當(dāng)?shù)目股鼗蛑苿┻M(jìn)行篩選抗生素或制

9、劑進(jìn)行篩選, 再用與傳統(tǒng)技術(shù)相再用與傳統(tǒng)技術(shù)相似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗體的細(xì)胞似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗體的細(xì)胞株。株。18 b b、抗體改性技術(shù)的應(yīng)用：、抗體改性技術(shù)的應(yīng)用： CDR（免疫球蛋白分子的互補(bǔ)決定區(qū)）移植的人（免疫球蛋白分子的互補(bǔ)決定區(qū)）移植的人源化抗體，由于鼠源性抗體中的源化抗體，由于鼠源性抗體中的FR （FR即氨基酸即氨基酸骨架區(qū)或氨基酸序列）仍殘留一定的免疫原性骨架區(qū)或氨基酸序列）仍殘留一定的免疫原性, 這這種抗體還遠(yuǎn)非真正的人源化抗體種抗體還遠(yuǎn)非真正的人源化抗體, 有些還能產(chǎn)生很有些還能產(chǎn)生很強(qiáng)的抗獨(dú)特型反應(yīng)。為減少鼠源成分強(qiáng)的抗獨(dú)特型反應(yīng)。為減少鼠源成分, 人們進(jìn)

10、一步人們進(jìn)一步用人的用人的FR 替代鼠替代鼠FR, 形成更為完全的人源化抗體形成更為完全的人源化抗體, 即除了即除了3 個(gè)個(gè)CDR 是鼠源的外是鼠源的外, 其余全部是人源結(jié)構(gòu)其余全部是人源結(jié)構(gòu), 又稱又稱CDR 移植抗體。移植抗體。192、表、表 達(dá)達(dá) 多用大腸桿菌體系多用大腸桿菌體系 、酵母體系、酵母體系、昆蟲體系、哺乳動(dòng)物細(xì)胞體系。昆蟲體系、哺乳動(dòng)物細(xì)胞體系。20人源化單克隆抗體藥物人源化單克隆抗體藥物21展展 望望 近年來(lái)，單克隆抗體在世界醫(yī)藥市場(chǎng)異軍近年來(lái)，單克隆抗體在世界醫(yī)藥市場(chǎng)異軍突起突起! ! 其市場(chǎng)總銷售額大約在其市場(chǎng)總銷售額大約在35-4035-40億美億美元之間。已成為世界生物工程制藥業(yè)的支元之間。已成為世界生物工程制藥業(yè)的支柱產(chǎn)品之一。單抗的第二輪開發(fā)也正在成柱產(chǎn)品