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1、2010.05.012010.05.01了解抗菌肽相關(guān)知識掌握分離篩選產(chǎn)生抗菌肽細(xì)菌的方法學(xué)習(xí)抗菌肽的分離及抗菌譜分析抗菌肽抗菌肽是生物體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種具有生物活性的小分子具有生物活性的小分子多肽多肽,分子量在20007000Da左右,由2060個(gè)氨基酸殘基組成。這類活性多肽多數(shù)具有強(qiáng)堿性、熱穩(wěn)定性以及廣譜抗菌等特點(diǎn)。一般認(rèn)為抗菌肽的殺菌機(jī)理是作用于細(xì)菌的細(xì)胞膜,破壞其作用于細(xì)菌的細(xì)胞膜,破壞其完整性并產(chǎn)生穿孔現(xiàn)象完整性并產(chǎn)生穿孔現(xiàn)象,造成細(xì)胞內(nèi)容物溢出胞外而死亡抗菌肽具有廣譜抗菌活性,并有抗真菌、抗寄生蟲及抗腫瘤等生物活性,有良好的應(yīng)用前景。1 1 昆蟲抗菌肽哺乳動(dòng)物抗菌肽 植物抗菌肽
2、原核微生物抗菌肽:又稱細(xì)菌素(bacteriocin),包括陽離子肽和中性肽,革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均可分泌。細(xì)菌中已發(fā)現(xiàn)的抗菌肽有桿菌肽(Bacitracin)、短桿菌肽S(Gramicidin S)、多粘菌素E(Polymyxin E)和乳鏈菌肽(Nisin)4種類型。樣品:樣品:新鮮土壤樣品(同學(xué)自備)。新鮮土壤樣品(同學(xué)自備)。培養(yǎng)基:培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。無菌水:無菌水:帶有玻璃珠裝有帶有玻璃珠裝有20mL20mL無菌水無菌水三角瓶。三角瓶。其它:其它:無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、無菌無菌培養(yǎng)皿、無菌吸管、無菌離心管、電子天平、記號筆、玻璃涂離心管、電子天平、
3、記號筆、玻璃涂棒、酒精燈、火柴。棒、酒精燈、火柴。土壤樣品的采集土壤樣品的采集用取樣鏟,將表層5cm左右的浮土除去,取525cm處的土樣1025g,裝入事先準(zhǔn)備好滅菌容器內(nèi)扎好。制備土壤稀釋液:制備土壤稀釋液:稱取土壤2g,放入18mL帶有玻璃珠的無菌水三角瓶中,振蕩5min,即為稀釋101的土壤懸液。然后在離心管中依次稀釋至102 、103 、104稀釋度。制備綠膿桿菌混菌平板:制備綠膿桿菌混菌平板:每組制3塊牛膏蛋胨培養(yǎng)基平板。具體制法為:在空培養(yǎng)皿內(nèi)先加入0.1mL的綠膿桿菌菌液;再按正常方法倒入融化好的牛膏蛋胨培養(yǎng)基(溫度為不燙手為宜)并輕輕搖晃混勻,置于桌面冷卻為平板。在無菌培養(yǎng)皿底部注明分離菌名、稀釋度、組別、班級。 制備普通牛膏蛋胨平板制備普通牛膏蛋胨平板每組制2塊牛膏蛋胨培養(yǎng)基平板,置于冷藏柜備用。吸取稀釋液吸取稀釋液無菌操作法分別吸取102、103 、104土壤稀釋液0.1mL,分別加在已制好的3塊混菌平板培養(yǎng)基上。涂板涂板用玻璃刮鏟將稀釋液在培養(yǎng)基上充分混勻鋪平,倒置于恒溫箱培養(yǎng)。培養(yǎng)培養(yǎng)置于5
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