農藥生物測定實驗指導

1、農藥生物測定實驗指導（自編試用1.0）主 編：姜興印副主編：趙春青 張衛(wèi)光制藥工程專業(yè)用山東農業(yè)大學植物保護學院2008年9月棉鈴蟲人工飼料制備一、實驗目的學習棉鈴蟲人工飼料制備技術和方法。本方法還適合玉米螟等人工飼料的制備。二、實驗用品和儀器設備儀器設備：天平、高壓滅菌器、罐頭瓶、電飯鍋、篩子（40目）、量筒、搪瓷盤、溫度計實驗物品：小麥粉、玉米粉、黃豆粉、啤酒酵母粉、瓊脂、棉葉、VC、棉油、苯甲酸鈉、山梨酸鉀、獸用鏈霉素、水等三、實驗方法1. 配方：用料用量（g）用料用量（g）小麥粉300瓊脂45玉米粉300山梨酸鉀10大豆粉200苯甲酸鈉5棉葉（風干）35鏈霉素200萬單位Vc10棉油5

2、ml酵母粉80水2000ml2. 小麥粉、玉米粉、黃豆粉、酵母粉和棉葉裝入罐頭瓶中，高壓滅菌40min.（120）3. 水+瓊脂煮開冷卻至70，加入Vc、防腐劑、棉油混勻，再加入混合好的其他成分，充分混勻。4. 倒入搪瓷盤，加蓋冷卻后放入冰箱中備用。四、質量檢查飼料冷卻后觀察顏色和固化成型情況。五、實驗報告農藥生物測定藥劑配制一、實驗目的學習生物測定藥劑配制的實驗操作技術和方法。二、實驗用品和儀器設備電子天平、計算器、燒杯、移液管、吸耳球、記號筆、容量瓶、量筒等。實驗原藥：93%順式氯氰菊酯，95%吡蟲啉實驗制劑： 50%多菌靈WP，2.5%功夫EC(w/w)，33%施田補EC(w/v)三、實

3、驗方法1. 原藥母液的配制與稀釋（1）用丙酮配制2順式氯氰菊酯母液50mL，然后稀釋成200mg/L 50mL丙酮液。（2）用丙酮配制1吡蟲啉母液50mL，然后稀釋成125mg/L 50mL丙酮液（3）將順式氯氰菊酯和吡蟲啉按照5：2的比例混合，配制1.5%混劑50mL丙酮液。2. 制劑的稀釋（1）50%多菌靈WP，稀釋成200mg/L 100mL的水溶液（燒杯）。（2）2.5%功夫EC，稀釋成1000mg/L 100mL的水溶液（燒杯）。（3）33%施田補EC，稀釋成150mg/L 100mL的水溶液（燒杯）。四、結果計算和處理將以上每一種母液配制和稀釋需要原藥和制劑的量計算，并詳細描述配制

4、和稀釋過程。五、實驗報告 撰寫實驗報告。殺蟲劑毒力測定微量點滴法一、實驗目的學習微量點滴法測定殺蟲劑觸殺毒力的實驗操作技術和方法，學習和使用微量點滴儀。二、實驗用品和儀器設備生化培養(yǎng)箱、電子天平、計算器、微量點滴儀、燒杯、移液管、養(yǎng)蟲盒、鑷子、濾紙、記號筆、容量瓶等。實驗藥劑：順式氯氰菊酯，2.5、5.0，10，20，40mg/L實驗材料：玉米螟5齡幼蟲三、實驗方法1. 藥劑配制與稀釋 用丙酮配制1順式氯氰菊酯母液，然后稀釋成系列濃度。2. 試蟲選取與稱重 選擇個體大小一致的5齡幼蟲，每個處理濃度3次重復，每個重復20頭幼蟲，電子天平稱重求平均蟲重。3. 微量點滴儀的使用方法和注意事項4. 藥

5、劑點滴 點滴部位：幼蟲前胸背面，點滴量1.0uL左右，以溶劑處理為對照。5. 點滴后的幼蟲放置在養(yǎng)蟲盒內，5頭/盒，飼喂人工飼料，置于28的生化培養(yǎng)箱中。四、結果檢查和處理處理48h后檢查死亡數，用毛筆尖端或尖頭鑷子輕輕觸動蟲體，以不能正常爬行者為死亡。計算死亡率和校正死亡率，并求毒力回歸方程和LD50 值。五、實驗報告 撰寫實驗報告，并對實驗結果進行討論分析。殺蟲劑毒力測定浸漬法一、實驗目的學習浸漬法（浸蟲和浸葉法）測定殺蟲劑觸殺毒力和胃毒毒力的實驗操作技術和方法。二、實驗用品和儀器設備生化培養(yǎng)箱、電子天平、計算器、浸蟲器、燒杯、移液管、養(yǎng)蟲盒、鑷子、濾紙、記號筆、容量瓶等。實驗藥劑：80氟

6、蟲腈WG 實驗材料：小菜蛾3齡幼蟲，甘藍葉片三、實驗方法1. 藥劑配制與稀釋 將藥劑稀釋1.0×105×，2.0×105×，4.0×105×，8.0×105×，以清水為對照。2. 采用浸漬法先將甘藍葉片在不同濃度的藥液中處理35s，放在報紙上晾干，放在養(yǎng)蟲盒里，每盒1片。3. 用浸蟲器將小菜蛾幼蟲在藥液中浸漬處理35s，每一濃度處理30頭，分為3次重復，每一重復10頭幼蟲放在1個養(yǎng)蟲盒內。4. 28生化培養(yǎng)箱飼養(yǎng)。四、結果檢查和處理處理3d后檢查結果，用毛筆尖端或尖頭鑷子輕輕觸動蟲體，以不能正常爬行者為死亡。計算死

7、亡率和校正死亡率，并求毒力回歸方程和LC50 值。五、實驗報告 撰寫實驗報告，并對實驗結果進行討論分析。殺蟲劑觸殺毒力測定-濾紙片藥膜法一、實驗目的學習濾紙片藥膜的準備方法和利用藥膜測定殺蟲劑對鱗翅目初孵幼蟲的毒力。二、實驗用品和儀器設備電子天平、計算器、燒杯、移液管、吸耳球、記號筆、容量瓶、量筒、濾紙、大頭針、泡沫板、毛筆、培養(yǎng)皿、秒表、丙酮、石油醚、縫紉機油等。實驗原藥：90%辛硫磷原油實驗材料：玉米螟初孵幼蟲三、實驗方法1.混合溶劑的配制丙酮：石油醚：縫紉機油1：3：12.原藥母液的配制用混合溶劑配制1辛硫磷母液50mL。3.藥膜的制備取直徑9cm濾紙，放于用三根大頭針做成的支架上，吸取

8、1mL1%辛硫磷母液，從濾紙中心向外均勻環(huán)形滴加，使其充分濕潤，待溶劑揮發(fā)后，放于直徑9cm的培養(yǎng)皿內備用，以混合溶劑處理為空白對照。4.初孵幼蟲的處理 用軟毛筆迅速挑取玉米螟初孵幼蟲30頭于濾紙上，并立即計時，培養(yǎng)皿的一側加一微光源，玉米螟由于有趨光性，會迅速爬向光照得一方，不斷轉動培養(yǎng)皿，使玉米螟保持爬動，以不能爬動的為死蟲，觀察幼蟲擊倒時間及頭數，重復3次。四、結果計算和處理計算各個處理幼蟲的擊倒率和校正擊倒率，求得毒力回歸方程和擊倒中時(KT50)。五、實驗報告 撰寫實驗報告，并對實驗結果進行分析和討論。殺螨劑毒力測定浸玻片法一、實驗目的學習浸玻片法測定殺螨劑的實驗操作技術和方法。本方

9、法適合測定螨體背部剛毛較短的各種雌成螨。二、實驗用品和儀器設備生化培養(yǎng)箱、電子天平、計算器、雙目解剖鏡、燒杯、移液管、載玻片、雙面膠帶、零號毛筆、記號筆、搪瓷盤、吸水紙、薄海綿、剪刀等。實驗藥劑：2.5功夫乳油，2000×、4000×、8000×、16000×、32000×實驗材料：山楂葉螨三、實驗方法1. 將雙面膠帶剪成2cm長，貼在載玻片的一端。2. 用零號毛筆挑起34日齡的雌成螨，迅速將其背部粘在膠帶上，每行粘10頭，粘23行。3. 雙目解剖鏡仔細觀察粘在膠帶上的螨，用毛筆除去粘在膠帶上不規(guī)則的螨，如足、腹面、頭部等粘在膠帶上，只保留符合

10、規(guī)定的雌成螨。25，相對濕度80左右的條件下放置4h后，再用解剖鏡觀察，足能夠正?；顒拥膫€體符合實驗要求，去除不合格的其它個體，并記錄存活個體數。4. 用水將實驗藥劑配制成5個系列濃度，置于100mL燒杯中，用手持玻片無螨的一端，將粘有螨的一端在藥液中浸漬5s，取出后用吸水紙吸去多余的藥液。對照用清水處理。每個處理重復34次。5. 在搪瓷盤中鋪設厚度為1.0cm的海綿或吸水紙，其上鋪藍布，加水濕透海綿（或吸水紙）和藍布，不要積水。將玻片平放在上面，置于25的生化培養(yǎng)箱中。四、結果檢查和處理處理24h后檢查死亡數，用毛筆尖端輕輕觸動螨足，以不動者為死亡。計算死亡率和校正死亡率，并求毒力回歸方程和

11、LC50 值。五、實驗報告 撰寫實驗報告，并對實驗結果進行討論分析。殺菌劑室內毒力測定生長速率法一、實驗目的學習生長速率法測定殺菌劑室內毒力的實驗操作技術和方法。二、實驗用品和儀器設備生化培養(yǎng)箱、電子天平、計算器、直尺、培養(yǎng)皿、燒杯、移液管、打孔器（直徑0.5cm）、移菌環(huán)、酒精燈、記號筆、容量瓶、三角瓶（50mL、250 mL）、超凈工作臺、PDA培養(yǎng)基、微波爐、高壓滅菌器、電飯煲、馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂等。實驗藥劑：95%乙霉威原藥 實驗材料：灰葡萄孢菌三、實驗方法1. PDA培養(yǎng)基的制備和滅菌，培養(yǎng)皿、移液管、三角瓶（50mL）滅菌。2. 灰葡萄孢菌的培養(yǎng)PDA平板培養(yǎng)灰葡萄孢菌，菌落生長

12、達2/3皿。3. 藥劑配制與稀釋 先將原藥用丙酮配制1%母液，再用丙酮稀釋成25、50、100、200、400mg/L，以丙酮為對照。4. 帶藥PDA平板的制備和接菌在無菌的超凈工作臺上，50mL三角瓶中準確加入4.0mL藥液，再加入冷卻至50左右融化的PDA培養(yǎng)基至50mL刻度線，迅速搖勻后平均倒入到3個直徑9cm的培養(yǎng)皿中，制備成帶藥平板，每個濃度3次重復。以丙酮為對照。用滅菌的打孔器在灰葡萄孢菌菌落的邊緣打取菌餅，接入到帶藥平板中央。25生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)。四、結果檢查和處理處理3d后檢查結果，用直尺測量菌落直徑，計算各處理的抑制率，并求毒力回歸方程和EC50 值。五、實驗報告 撰寫實驗報告

13、，并對實驗結果進行討論分析。殺菌劑毒力測定圓葉片法一、實驗目的學習利用圓葉片法測定殺菌劑對黃瓜霜霉病菌生物活性的基本要求和方法。二、實驗用品和儀器設備光照生化培養(yǎng)箱、電子天平、計算器、燒杯、移液管、容量瓶、培養(yǎng)皿、玻棒、鑷子等。實驗藥劑：霜霉威，烯酰嗎啉等試驗菌種：黃瓜霜霉病菌（pseudoperonospora cubensis）。實驗材料：黃瓜葉片三、實驗方法1. 黃瓜霜霉病菌孢子懸浮液的制備室內用無菌水洗滌黃瓜霜霉病病葉的孢子，經過離心除去孢子梗等雜質，并稀釋成1×105個孢子/mL孢子懸浮液，保存于4冰箱中備用。2. 藥劑配制 在預試試驗的基礎上，將試驗藥劑用0.1%吐溫80

14、水溶液稀釋成5-7個系列濃度。3. 圓葉片處理用2.0cm打孔器在無病黃瓜葉上打取圓葉片，在藥液中浸漬5min后取出晾干，放在培養(yǎng)皿內，皿內用濾紙保濕，每片圓葉片葉背面向上，中心滴加10ul孢子懸浮液，置于19生化培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，光照黑暗12h交替。每個濃度重復4次，以0.1%吐溫80水溶液浸漬圓葉片并滴加孢子懸浮液的處理為對照。四、結果檢查和處理7d后檢查病斑長、短軸，計算防效，并用DPS數據處理軟件對結果進行處理，求毒力回歸方程和EC50 和EC90。五、實驗報告 撰寫實驗報告，并對實驗結果進行討論分析。殺菌劑毒力測定盆栽法一、實驗目的學習利用盆栽法測定井岡霉素對小麥紋枯病的毒力。二、實驗用

15、品和儀器設備光照生化培養(yǎng)箱、電子天平、計算器、燒杯、移液管、容量瓶、花盆（大號塑料杯）、玻棒、土壤等。實驗藥劑：井岡霉素，100，50，25，12.5mg/L；CK試驗菌種：小麥紋枯病菌，PDA平板培養(yǎng)的菌絲。實驗材料：小麥種子三、實驗方法1. 配制井岡霉素各濃度的水溶液，并將提前選擇好的小麥種子在藥液中浸泡1h，取出晾干。2. 將過篩的風干土壤裝入花盆內4/5，并澆水濕透，加入PDA平板培養(yǎng)的小麥紋枯病菌，每皿菌種平均加入到12個花盆內土壤的表面。3. 播種，5粒/盆，覆蓋1.5cm厚度的風干土壤。4. 光照生化培養(yǎng)箱內20培養(yǎng)21d，光照：黑暗=10h：14h，定期澆水，保持濕度。四、結果

16、檢查和處理處理21d后檢查小麥幼苗發(fā)病情況，并按照要求將發(fā)病情況分級，計算病情指數和防效，并求毒力回歸方程和EC50 和EC90。小麥幼苗病級分級標準：0級，不顯癥狀；1級病斑占葉鞘寬1/2以下；2級病斑占葉鞘寬1/2-3/4；3級病斑占葉鞘寬3/4以上至全葉鞘。五、實驗報告 撰寫實驗報告，并對實驗結果進行討論分析。除草劑室內毒力測定小杯法一、實驗目的學習小杯法測定除草劑室內毒力的實驗操作技術和方法。二、實驗用品和儀器設備光照培養(yǎng)箱、小燒杯（50mL）、量筒、移液管、計算器、直尺、燒杯、記號筆、容量瓶（100mL）、保鮮膜、大頭針、鑷子、玻璃棒、砂子等。實驗藥劑：50%乙草胺乳油，實驗材料：露

17、白的稗草種子三、實驗方法1. 稗草種子催芽 28，24h催芽。2. 藥劑配制與稀釋 用水稀釋系列濃度500、250、125、62.5、31.25mg/L，以水為對照。3. 播種取不同濃度的藥液10mL分別加入到50mL小燒杯中，加入適量砂子至剛好吸附藥液，以清水為對照。選取大小均勻、出芽一致的稗草種子播入砂子中。播種前先用玻璃棒在砂子里打孔，然后再播種，防止損傷稗草種子的幼根。5棵/杯。4. 培養(yǎng) 保鮮膜封閉小燒杯口，用大頭針扎5個孔，28光照培養(yǎng)箱（光:暗=14:10）培養(yǎng)14d。四、結果檢查和處理處理14d后檢查結果，用直尺測量根長和芽長，計算各處理的抑制率，分別求毒力回歸方程和EC50

18、值。五、實驗報告 撰寫實驗報告，并對實驗結果進行討論分析。除草劑室內毒力測定小麥根長法一、實驗目的學習小麥根長法測定除草劑室內毒力的實驗操作技術和方法。二、實驗用品和儀器設備生化培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、量筒（50mL）、移液管、計算器、直尺、燒杯、記號筆、容量瓶（100mL）、培養(yǎng)皿、玻璃棒、鑷子、砂子、60目、80目標準篩等。實驗藥劑：50%乙草胺乳油，實驗材料：露白的小麥種子三、實驗方法1. 小麥種子催芽 25，24h催芽。2. 藥劑配制與稀釋 用水稀釋系列濃度200、100、50、25、12.5mg/L，以水為對照。3. 發(fā)芽床的制備直徑9cm的培養(yǎng)皿裝滿過篩的砂子并用玻棒刮平，每一皿加入30m

19、L藥液均勻濕透砂子。4. 播種用玻棒在培養(yǎng)皿直徑處輕輕壓出一道凹槽，選取根長為1-2mm均勻一致的小麥種子播種，10粒/皿，用橡皮筋固定皿蓋。5. 培養(yǎng) 25 ，培養(yǎng)4d。四、結果檢查和處理處理4d后檢查結果，用直尺測量根長，計算各處理的抑制率，求毒力回歸方程和EC50 值。五、實驗報告 撰寫實驗報告，并對實驗結果進行討論分析。除草劑田間藥效試驗-玉米田除草劑一、試驗目的學習防除夏玉米田雜草田間藥效試驗，以明確除草劑對夏玉米田一年生禾本科和闊葉雜草的除草效果及對夏玉米的安全性，二、試驗用品和儀器設備噴霧器、電子天平、計算器、燒杯、移液管、吸耳球、軟尺等。試驗藥劑：乙草胺等試驗地雜草：馬唐(Digitaria sanguinal)、牛筋草（Eleusine indica）、 反枝莧（Amaranthus retroflexus）、 馬齒莧（Portulaca oleracea L）試驗作物：夏玉米，品種為鄭單958或農大108.三、試驗方法1. 試驗地選擇明確試驗地的土質和栽培情況。2.試驗設計和安排2.1供試藥劑試驗設計 表1 供試藥劑試驗設計處理號藥劑施藥制劑量（克/畝）有效成分量（克/公頃 ）1999克/升乙草胺乳油50749.252999克/升乙草胺乳油701048.953999克/升乙草胺