培養(yǎng)基的制作

1、第 3 單元（Unit） 第 3 周（Week） 6 學時(Periods)單元標題(Title)：培養(yǎng)基的制作教學地點(Place)：育賢閣教學目標(Teaching Target)：1.熟悉培養(yǎng)基的成分及作用2.掌握母液和培養(yǎng)基的配制教學方法(Teaching Approaches)：講授法、項目教學法、提問教學材料及工具(Teaching Materials & Aids)：教案、教材、ppt、組培苗考核與評價方式(Testing & Evaluating Mode)：考勤、提問、作業(yè)任務一 培養(yǎng)基的配制 培養(yǎng)基（culture medium）是植物組織培養(yǎng)的重要基質(zhì)。在離體培養(yǎng)條件下，

2、不同種植物的組織對營養(yǎng)有不同的要求，甚至同一種植物不同部位的組織對營養(yǎng)的要求也不相同，只有滿足了它們各自的特殊要求，它們才能很好地生長。因此，沒有一種培養(yǎng)基能夠適合一切類型的植物組織或器官，在建立一項新的培養(yǎng)系統(tǒng)時，首先必須找到一合適的培養(yǎng)基，培養(yǎng)才有可能成功。在植物組織培養(yǎng)歷史進程中，事實上也緊密地伴隨著培養(yǎng)基的研制史。對植物的營養(yǎng)要求的不斷認識，對已有培養(yǎng)基的改進，或者將新發(fā)現(xiàn)的植物激素、新的有益成分應用于培養(yǎng)基之中，都大大促進了組織培養(yǎng)研究的迅速發(fā)展，取得越來越多的成功。一、培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基的成分主要可以分水、無機鹽、有機物、天然復合物、培養(yǎng)體的支持材料等五大類。1水水是植物原生質(zhì)體的

3、組成成分，也是一切代謝過程的介質(zhì)和溶媒。它是生命活動過程中不可缺少的物質(zhì)。配制培養(yǎng)基母液時要用蒸餾水，以保持母液及培養(yǎng)基成分的精確性，防止貯藏過程發(fā)霉變質(zhì)大規(guī)模生產(chǎn)時可用自來水。但在少量研究上盡量用蒸餾水，以防成分的變化引起不良效果。2無機元素(inorganicelement)大量元素，指濃度大于05mmolL的元素，有N，P，K，Ca，Mg，S等。其作用是： (1) N 是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分，是生命不可缺少的物質(zhì)。在制備培養(yǎng)基時以N03-N和NH4-N兩種形式供應。大多數(shù)培養(yǎng)基既含有NO，-N又含NH4-N。NH4-N對植物生長較為有利。供應的物質(zhì)有

4、KN03、NH4NO3等。有時，也添加氨基酸來補充氮素。(2) P 是磷脂的主要成分。而磷脂又是原生質(zhì)、細胞核的重要組成部分。磷也是ATP、ADP等的組成成分。在植物組織培養(yǎng)過程中，向培養(yǎng)基內(nèi)添加磷，不僅增加養(yǎng)分、提供能量，而且也促進對N的吸收，增加蛋白質(zhì)在植物體中的積累。常用的物質(zhì)有KH2P04或NaH2P04等。(3) K 對碳水化合物合成、轉(zhuǎn)移、以及氮素代謝等有密切關(guān)系。K增加時，蛋白質(zhì)合成增加，維管束、纖維組織發(fā)達，對胚的分化有促進作用。但濃度不易過大，一般為1-3mgL為好。制備培養(yǎng)基時，常以KCl、KNO，等鹽類提供。(4) Mg、S和Ca、Mg 是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化

5、劑；S是含S氨基酸和蛋白質(zhì)的組成成分。它們常以MgS047H20提供。用量為13mgL較為適宜；Ca是構(gòu)成細胞壁的一種成分，Ca對細胞分裂、保護質(zhì)膜不受破壞有顯著作用，常以CaCl22H20提供。(5) 微量元素 指小于0.5mmolL的元素，F(xiàn)e，B，Mn，Cu，Mo，Co等。鐵是一些氧化酶、細胞色素氧化酶、過氧化氫酶等的組成成分。同時，它又是葉綠素形成的必要條件。培養(yǎng)基中的鐵對胚的形成、芽的分化和幼苗轉(zhuǎn)綠有促進作用。在制做培養(yǎng)基時不用Fe2(S04)3和FeCl3(因其在pH值5.2以上，易形成Fe(OH)，的不溶性沉淀)，而用FeS047H20和Na2-EDTA結(jié)合成螯合物使用。B，Mn

6、，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物組織培養(yǎng)中不可缺少的元素，缺少這些物質(zhì)會導致生長，發(fā)育異?，F(xiàn)象?？傊?，植物必需營養(yǎng)元素可組成結(jié)構(gòu)物質(zhì)，也可是具有生理活性的物質(zhì)，如酶、輔酶以及作為酶的活化劑，參與活躍的新陳代謝。此外，在維持離子濃度平衡、膠體穩(wěn)定、電荷平衡等電化學方面起著重要作用。當某些營養(yǎng)元素供應不足時，愈傷組織表現(xiàn)出一定的缺素癥狀。如缺氮，會表現(xiàn)出一種花色素苷的顏色，不能形成導管；缺鐵，細胞停止分裂；缺硫，表現(xiàn)出非常明顯的褪綠；缺錳或鉬，則影響細胞的伸長。3有機化合物(organic compound)培養(yǎng)基中若只含有大量元素與微量元素，常稱為基本培養(yǎng)基。為不同的培養(yǎng)目的往往要加入一些有

7、機物以利于快速生長。常加入的有機成分主要有以下幾類：(1) 碳水化合物：最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是較好的碳源，可支持許多組織很好的生長。麥芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在組織培養(yǎng)中也有應用。蔗糖使用濃度在23，常用3，即配制1L培養(yǎng)基稱取30g蔗糖，有時可用2.5，但在胚培養(yǎng)時采用415的高濃度，因蔗糖對胚狀體的發(fā)育起重要作用。不同糖類對生長的影響不同。從各種糖對水稻根培養(yǎng)的影響來看，以葡萄糖效果最好，果糖和蔗糖相當，麥芽糖差一些。不同植物不同組織的糖類需要量也不同，實驗時要根據(jù)配方規(guī)定按量稱取，不能任意取量。高壓滅菌時一部分糖發(fā)生分解、制定配方時要給予考慮。在大規(guī)模生產(chǎn)時，可用食用的綿

8、白糖代替。(2) 維生素(vitamin) 這類化合物在植物細胞里主要是以各種輔酶的形式參與多種代謝活動，對生長、分化等有很好的促進作用。雖然大多數(shù)的植物細胞在培養(yǎng)中都能合成所必需的維生素，但在數(shù)量上還明顯不足，通常需加入一至數(shù)種維生素，以便獲得最良好的生長。主要有Vsl(鹽酸硫胺素)、VD6(鹽酸吡哆醇)、Vpp(煙酸)、VC(抗壞血酸)、有時還使用生物素、葉酸、VB2等。一般用量為0.11.0mgL。有時用量較高。Vm對愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有重要作用，VB6能促進根的生長，Vpp與植物代謝和胚的發(fā)育有一定關(guān)系。Vc有防止組織變褐的作用。(3) 肌醇 (myo-inosit0l)又叫環(huán)己六

9、醇，在糖類的相互轉(zhuǎn)化中起重要作用。通常可由磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)化而成，還可進一步生成果膠物質(zhì)，用于構(gòu)建細胞壁。肌醇與6分子磷酸殘基相結(jié)合形成植酸，植酸與鈣、鎂等陽離子結(jié)合成植酸鈣鎂，植酸可進一步形成磷脂，參與細胞膜的構(gòu)建。使用濃度一般為l00mgL，適當使用肌醇，能促進愈傷組織的生長以及胚狀體和芽的形成。對組織和細胞的繁殖、分化有促進作用，對細胞壁的形成也有作用。(4) 氨基酸(aminoacide) 是很好的有機氮源，可直接被細胞吸收利用。培養(yǎng)基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常用。有時應用水解乳蛋白或水解酪蛋白，它們是牛乳用酶法等加工的水解產(chǎn)

10、物，是含有約20種氨基酸的混合物，用量在101000mgL之間。由于它們營養(yǎng)豐富，極易引起污染。如在培養(yǎng)中無特別需要，以不用為宜。(5) 天然復合物 其成分比較復雜，大多含氨基酸、激素、酶等一些復雜化合物。它對細胞和組織的增殖與分化有明顯的促進作用，但對器官的分化作用不明顯。它的成分大多不清楚，所以一般應盡量避免使用。1) 椰乳 是椰子的液體胚乳。它是使用最多、效果最大的一種天然復合物。一般使用濃度在1020，與其果實成熟度及產(chǎn)地關(guān)系也很大。它在愈傷組織和細胞培養(yǎng)中有促進作用。在馬鈴薯莖尖分生組織和草莓微莖尖培養(yǎng)中起明顯的促進作用，但莖尖組織的大小若超過1mm時，椰乳就不發(fā)生作用。2) 香蕉

11、用量為150200ml/l。用黃熟的小香蕉，加入培養(yǎng)基后變?yōu)樽仙H值的緩沖作用大。主要在蘭花的組織培養(yǎng)中應用，對發(fā)育有促進作用。3) 馬鈴薯(potato) 去掉皮和芽后，加水煮30min，再經(jīng)過過濾，取其濾液使用。用量為150200gL。對pH值緩沖作用也大。添加后可得到健壯的植株。4) 水解酪蛋白 為蛋白質(zhì)的水解物，主要成分為氨基酸，使用濃度為100200mgL。受酸和酶的作用易分解，使用時要注意。5) 其他 酵母提取液(YE)(0.010.05)，主要成分為氨基酸和維生素類；麥芽提取液(0.01-0.5)、蘋果和番茄的果汁、黃瓜的果實、未熟玉米的胚乳等。遇熱較穩(wěn)定，大多在培養(yǎng)困難時

12、使用，有時有效。4植物激素(hormone)是植物新陳代謝中產(chǎn)生的天然化合物，它能以極微小的量影響到植物的細胞分化、分裂、發(fā)育，影響到植物的形態(tài)建成、開花、結(jié)實、成熟、脫落、衰老和休眠以及萌發(fā)等許許多多的生理生化活動，在培養(yǎng)基的各成分中，植物激素是培養(yǎng)基的關(guān)鍵物質(zhì)，對植物組織培養(yǎng)起著決定性作用。(1)生長素類 (auxin) 在組織培養(yǎng)中，生長素主要被用于誘導愈傷組織形成，誘導根的分化和促進細胞分裂、伸長生長。在促進生長方面，根對生長素最敏感。在極低的濃度下，(10-510-8mgL)就可促進生長，其次是莖和芽。天然的生長素熱穩(wěn)定性差，高溫高壓或受光條件易被破壞。在植物體內(nèi)也易受到體內(nèi)酶的分解

13、。組織培養(yǎng)中常用人工合成的生長素類物質(zhì)。IAA (indoaceticacid，吲哚乙酸) 是天然存在的生長素，亦可人工合成，其活力較低，是生長素中活力最弱的激素，對器官形成的副作用小，高溫高壓易被破壞，也易被細胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。IBA (indolebutyric acid，吲哚丁酸)是促進發(fā)根能力較強的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。NAA (naphthaleneaceticacid，萘乙酸)在組織培養(yǎng)中的起動能力要比IAA高出34倍，且由于可大批量人工合成，耐高溫高壓，不易被分解破壞，所以應用較普遍。NAA和IBA廣泛用于生根，并與細胞分裂素互作促進芽的增殖和生長。2，4-D (2，

14、4-二氯苯氧乙酸) 起動能力比IAA高10倍，特別在促進愈傷組織的形成上活力最高，但它強烈抑制芽的形成，影響器官的發(fā)育。適宜的用量范圍較狹窄，過量常有毒效應。生長素配制時可先用少量95酒精助溶。2，4-D可用0.1molL的NaOH或KOH助溶。生長素常配成1mgdml的溶液貯于冰箱中備用。(2) GA (gibberellicacid，赤霉素) 有20多種，生理活性及作用的種類、部位、效應等各有不同、培養(yǎng)基中添加的是GA3，主要用于促進幼苗莖的伸長生長，促進不定胚發(fā)育成小植株；赤霉素和生長素協(xié)同作用，對形成層的分化有影響，當生長素赤霉素比值高時有利于木質(zhì)部分化，比值低時有利于韌皮部分化；此外

15、，赤霉素還用于打破休眠，促進種子、塊莖、鱗莖等提前萌發(fā)。一般在器官形成后，添加赤霉素可促進器官或胚狀體的生長。赤霉素溶于酒精，配制時可用少量95酒精助溶。赤霉素不耐熱，高壓滅菌后將有70100失效，應當采用過濾滅菌法加入。(3)細胞分裂素類 (cytokinin) 這類激素是腺嘌呤的衍生物，包括6-BA(6-芐基氨基嘌呤)、Kt(kinetin激動素)、Zt (zeatin玉米素)等。其中Zt活性最強，但非常昂貴，常用的是6-BA。在培養(yǎng)基中添加細胞分裂素有三個作用：誘導芽的分化促進側(cè)芽萌發(fā)生長，細胞分裂素與生長素相互作用，當組織內(nèi)細胞分裂素生長素的比值高時，誘導愈傷組織或器官分化出不定芽。促

16、進細胞分裂與擴大。抑制根的分化。因此，細胞分裂素多用于誘導不定芽的分化、莖、苗的增殖，而避免在生根培養(yǎng)時使用。生長素與細胞分裂素的比例決定著發(fā)育的方向，是愈傷組織、是長根還是長芽。如為了促進芽器官的分化，應除去或降低生長素的濃度，或者調(diào)整培養(yǎng)基中生長素與細胞分裂素的比例。 生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的使用甚微，一般用mgL表示濃度。在組織培養(yǎng)中生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的使用濃度，因植物的種類、部位、時期、內(nèi)源激素等的不同而異，一般生長素濃度的使用為0.055mgL，細胞分裂素0.0510mgL。5培養(yǎng)材料的支持物(1) 瓊脂 (agar) 在固體培養(yǎng)時瓊脂是最好的固化劑。瓊脂是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并

17、不提供任何營養(yǎng)。瓊脂能溶解在熱水中，成為溶膠，冷卻至40即凝固為固體狀凝膠。通常所說的煮化培養(yǎng)基，就是使瓊脂溶解于90以上的熱水。瓊脂的用量在610gL之間，若濃度太高，培養(yǎng)基就會變得很硬，營養(yǎng)物質(zhì)難以擴散到培養(yǎng)的組織中去。若濃度過低，凝固性不好。新買來的瓊脂最好先試一下它的凝固力。一般瓊脂以顏色淺、透明度好、潔凈的為上品。瓊脂的凝固能力除與原料、廠家的加工方式有關(guān)外，還與高壓滅菌時的溫度、時間、pH值等因素有關(guān)，長時間的高溫會使凝固能力下降，過酸過堿加之高溫會使瓊脂發(fā)生水解，喪失凝固能力。時間過久，瓊脂變褐，也會逐漸喪失凝固能力。加入瓊脂的固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基相比優(yōu)點在于操作簡便，通氣問題

18、易于解決，便于經(jīng)常觀察研究等，但它也有不少缺點，如培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸(即吸收)面積小，各種養(yǎng)分在瓊脂中擴散較慢，影響?zhàn)B分的充分利用，同時培養(yǎng)物排出的一些代謝廢物，聚集在吸收表面，對組織產(chǎn)生毒害作用。市售的各種瓊脂幾乎都含有雜質(zhì)，特別是Ca、Mg及其他微量元素。因此在研究植物組織或細胞的營養(yǎng)問題時，則應避免使用瓊脂。可在液體培養(yǎng)基表面安放一個無菌濾紙制成的濾紙橋，然后在濾紙橋上進行愈傷組織培養(yǎng)。 (2) 其他 有玻璃纖維、濾紙橋、海綿等，總的要求是排出的有害物質(zhì)對培養(yǎng)材料沒有影響或影響較小。6抗生物質(zhì) (antibiotic) 抗生物質(zhì)有青霉素、鏈霉素、慶大霉素等，用量在520mgL之間。添加

19、抗生物質(zhì)可防止菌類污染，減少培養(yǎng)中材料的損失，尤其是快速繁殖中，常因污染而丟棄成百上千瓶的培養(yǎng)物，采用適當?shù)目股乇憧晒?jié)約人力、物力和時間。尤其對大量通氣長期培養(yǎng)，效果更好。對于剛感染的組織材料，可向培養(yǎng)基中注入510的抗菌素?？股馗饔衅湟志V，要加以選擇試用，也可兩種抗生素混用。但是應當注意抗生素對植物組織的生長也有抑制作用，可能某些植物適宜用青霉素，而另一些植物卻不大適應。值得提醒的是，在工作中不能以為有了抗菌素，而放松滅菌措施。此外，在停止抗生素使用后，往往污染率顯著上升，這可能是原來受抑制的菌類又滋生起來造成的。7抗氧化物 (antioxide)植物組織在切割時會溢泌一些酚類物質(zhì)，接

20、觸空氣中的氧氣后，自動氧化或由酶類催化氧化為相應的醌類，產(chǎn)生可見的茶色、褐色以致黑色，這就是酚污染。這些物質(zhì)滲出細胞外就造成自身中毒，使培養(yǎng)的材料生長停頓，失去分化能力，最終變褐死亡。在木本，尤其是熱帶木本及少數(shù)草本植物中較為嚴重。目前還沒有徹底完善的辦法，只能按不同的實際情況，加用一些藥物，并適當降低培養(yǎng)溫度、及時轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上等辦法，使之有不同程度的緩解，當然像嚴格選擇外植體部位、加大接種數(shù)量等也應一并考慮。 抗酚類氧化常用的藥劑有半胱氨酸及Vc，可用50200mgL的濃度洗滌剛切割的外植體傷口表面，或過濾滅菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。其他抗氧化劑有二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、及二乙基

21、二硫氨基甲酸酯等。8. 活性炭 (active carbon)活性炭為木炭粉碎經(jīng)加工形成的粉沫結(jié)構(gòu)，它結(jié)構(gòu)疏松，孔隙大，吸水力強，有很強的吸附作用，它的顆粒大小決定著吸附能力、粒度越小，吸附能力越大。溫度低吸附力強，溫度高吸附力減弱，甚至解吸附。通常使用濃度為0.50.8L。它可以吸附非極性物質(zhì)和色素等大分子物質(zhì)，包括瓊脂中所含的雜質(zhì)，培養(yǎng)物分泌的酚、醌類物質(zhì)以及蔗糖在高壓消毒時產(chǎn)生的5-羥甲基糖醛及激素等。莖尖初代培養(yǎng)，加入適量活性炭，可以吸附外植體產(chǎn)生的致死性褐化物；其效力優(yōu)于Vc和半胱氨酸；在新梢增殖階段，活性炭可明顯促進新梢的形成和伸長，但其作用有一個閥值，一般為0.10.2，不能超過

22、0.2?；钚蕴吭谏鶗r有明顯的促進作用，其機理一般認為與活性碳減弱光照有關(guān)，可能是由于根頂端產(chǎn)生促進根生長的IAA，但IAA易受可見光的光氧化而破壞，因此活性炭的主要作用就在于通過減弱光照保護了IAA，從而間接促進了根的生長，由于根的生長加快，吸收能力增強，反過來又促進了莖、葉的生長。此外，在培養(yǎng)基中加入0.3活性炭，還可降低玻璃苗的產(chǎn)生頻率，對防止產(chǎn)生玻璃苗有良好作用?；钚蕴吭谂咛ヅ囵B(yǎng)中也有一定作用，如在葡萄胚珠培養(yǎng)時向培養(yǎng)基加入0.1的活性炭，可減少組織變褐和培養(yǎng)基變色，產(chǎn)生較少的愈傷組織。但是，活性炭具有副作用，研究表示，每毫克的活性炭能吸附100ng左右的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，這說明只需要極少

23、量的活性炭就可以完全吸附培養(yǎng)基中的調(diào)節(jié)物質(zhì)。大量的活性炭加入會削弱瓊脂的凝固能力，因此要多加一些瓊脂。很細的活性炭也易沉淀，通常在瓊脂凝固之前，要輕輕搖動培養(yǎng)瓶?？傊?，那種隨意抓一撮活性碳放入培養(yǎng)基，會帶來不良的后果。因此，在使用時要有其量的意識,使活性炭發(fā)揮其積極作用。二、 常用培養(yǎng)基的種類、配方及其特點（一）培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基有許多種類，根據(jù)不同的植物和培養(yǎng)部位及不同的培養(yǎng)目的需選用不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的產(chǎn)生最早是Sacks(1680)和Knop(1681)，他們對綠色植物的成分進行了分析研究，根據(jù)植物從土中主要是吸收無機鹽營養(yǎng)，設計出了由無機鹽組成的Sacks和Knop溶液，至今仍在作為

24、基本的無機鹽培養(yǎng)基得到廣泛應用。以后根據(jù)不同目的進行改良產(chǎn)生了多種培養(yǎng)基，White培養(yǎng)基在40年代用得較多，現(xiàn)在還常用。而到60和70年代則大多采用MS等高濃度培養(yǎng)基，可以保證培養(yǎng)材料對營養(yǎng)的需要，并能生長快、分化快，且由于濃度高，在配制、消毒過程中某些成分有些出入，也不致影響培養(yǎng)基的離子平衡。培養(yǎng)基的名稱，一直根據(jù)沿用的習慣。多數(shù)以發(fā)明人的名字來命名，如White培養(yǎng)基，Murashige和Skoog培養(yǎng)基(簡稱MS培養(yǎng)基)，也有對某些成分進行改良稱作改良培養(yǎng)基。（二）幾種常用培養(yǎng)基的配方（三）幾種常用培養(yǎng)基的特點目前國際上流行的培養(yǎng)基有幾十種，常用的培養(yǎng)基及特點如下：1MS培養(yǎng)基 它是1

25、962年由Murashige和Skoog為培養(yǎng)煙草細胞而設計的。特點是無機鹽和離子濃度較高，為較穩(wěn)定的平衡溶液。其養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合適，可滿足植物的營養(yǎng)和生理需要。它的硝酸鹽含量較其他培養(yǎng)基為高，廣泛地用于植物的器官、花藥、細胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)，效果良好。有些培養(yǎng)基是由它演變而來的。2White培養(yǎng)基 是1943年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設計的。1963年又作了改良，稱作White改良培養(yǎng)基，提高了MgSO4：的濃度和增加了硼素。其特點是無機鹽數(shù)量較低，適于生根培養(yǎng)。3N6培養(yǎng)基 是1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)而設計的。其特點是成分較簡單，KN03和(NH4)：S042-含

26、量高。在國內(nèi)已廣泛應用于小麥、水稻及其他植物的花藥培養(yǎng)和其他組織培養(yǎng)。4B5培養(yǎng)基 是1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細胞而設計的。其主要特點是含有較低的銨，這可能對不少培養(yǎng)物的生長有抑制作用。從實踐得知有些植物在B5培養(yǎng)基上生長更適宜，如雙子葉植物特別是木本植物。5KM-8P培養(yǎng)基 它是1974年為原生質(zhì)體培養(yǎng)而設計的。其特點是有機成分較復雜，它包括了所有的單糖和維生素，廣泛用于原生質(zhì)融合的培養(yǎng)。三、培養(yǎng)基的配制（一）母液的配制和保存在植物組織培養(yǎng)工作中，配制培養(yǎng)基是日常必備的工作。為簡便起見，通常先配制一系列母液，即貯備液。所謂母液是欲配制液的濃縮液，這樣不但可以保證各物質(zhì)成分的準

27、確性及配制時的快速移取，而且還便于低溫保藏。一般母液配成比所需濃度高10100倍。母液配制時可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物和激素類等。配制時注意一些離子之間易發(fā)生沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+，Mg2+和PO43-一起溶解后，會產(chǎn)生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。配制母液時要用蒸餾水或重蒸餾水。藥品應選取等級較高的化學純或分析純。藥品的稱量及定容都要準確。各種藥品先以少量水讓其充分溶解，然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素等母液，其中維生素 氨基酸類可以分別配制，也可以混在一起。母液配好后放入冰箱內(nèi)低溫保存，用時再按比例稀釋。下面以MS培養(yǎng)基制備為例，概

28、述其制備方法（1）大量元素母液可配成濃度10倍母液。用分析天平按表2-3稱取藥品，分別加100ml左右蒸餾水溶解后，再用磁力攪拌器攪拌，促進溶解。注意Ca2+和陽Po43-易發(fā)生沉淀。然后倒人1000ml定容瓶中，再加水定容至刻度，成為10倍母液。（2）微量元素母液 可配成濃度配成比100倍的母液。用分析天平按表準確稱取藥品后，分別溶解，混合后加水定容至1000ml。（3）鐵鹽母液 可配成100倍的母液，按表稱取藥品，可加熱溶解，混合后加水定容至1000ml。（4）有機物母液 可配成500倍的母液。按表分別稱取藥品，溶解，混合后加水定容至500ml。（5）激素母液的配制每種激素必須單獨配成母液，濃度一般配成1mgml。用時根據(jù)需要取用。因為激素用量較少，一次可配成50ml或100ml。另外，多數(shù)激素難溶于水，要先溶于可溶物質(zhì)，然后才能加水定容。它們的的配法如下：將IAA、IBA、GA等先溶于少量的95的酒精中。再加水定容-定濃度。NAA可先溶于熱水或少量95的酒精中，再加水定容到一定濃度。2，4-D可用少量1mol NaOH溶解后，再加水定容到一定濃度。將Kt和BA先溶于少量1mol的HCI中再加水定容。將玉米素先溶于少量95的