免疫學(xué)2223免疫診斷與防治

1、抗原抗體反應(yīng)的特異性抗原抗體反應(yīng)的特異性抗原抗體反應(yīng)的可逆性抗原抗體反應(yīng)的可逆性抗原抗體反應(yīng)的可見性抗原抗體反應(yīng)的可見性抗原抗體比例合適出現(xiàn)肉眼可見抗原抗體比例合適出現(xiàn)肉眼可見ICIC 凝集物，沉淀物凝集物，沉淀物受溫度、受溫度、PHPH、電解質(zhì)影響、電解質(zhì)影響 抗 原 抗 體 復(fù) 合 物 的 形 成抗原多于抗體 抗原與抗體數(shù)量相當(dāng)抗原少于抗體1.1.凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)l 概念：顆粒性抗原（細菌或細胞等）與相概念：顆粒性抗原（細菌或細胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的應(yīng)抗體結(jié)合在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物。凝集物。 l 類型：類型： 直接凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng) 間接凝集反應(yīng)間接

2、凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng)玻片法：玻片法：定性，已知抗體測未知抗原定性，已知抗體測未知抗原 細菌的鑒定和分型細菌的鑒定和分型 人類人類ABO血型測定血型測定試管法：試管法：定量，用已知抗原測未知抗體的量定量，用已知抗原測未知抗體的量 肥達氏試驗肥達氏試驗-診斷傷寒和付傷寒診斷傷寒和付傷寒抗原抗原抗原抗體抗體抗原抗原抗原顆粒抗原顆?？乖w粒凝集顆粒間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)可溶性抗原可溶性抗原 載體顆粒載體顆粒 免疫微球免疫微球 （致敏載體）（致敏載體） 抗體抗體凝集凝集 可溶性抗原先吸附在一與免疫反應(yīng)無關(guān)的顆粒載體上，可溶性抗原先吸附在一與免疫反應(yīng)無關(guān)的顆粒載體上，成為致敏顆粒，再與相

3、應(yīng)抗體結(jié)合，出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象成為致敏顆粒，再與相應(yīng)抗體結(jié)合，出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象. .2.2.沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 概念：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在概念：可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在 一定條件下形成沉淀物的現(xiàn)象一定條件下形成沉淀物的現(xiàn)象. . 可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、組織浸出可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、組織浸出 液、細菌濾液等液、細菌濾液等. . 類型：類型： 1 1）單向瓊脂擴散試驗）單向瓊脂擴散試驗 2 2）雙向瓊脂擴散試驗）雙向瓊脂擴散試驗 用于血清中IgM、 IgG、IgA、補體C3等含量的測定.雙向瓊脂擴散試驗雙向瓊脂擴散試驗3. 3. 免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)l將已知的抗體或抗原標(biāo)記

4、上將已知的抗體或抗原標(biāo)記上熒光素?zé)晒馑?、酶、放射性核酶、放射性核素素等示蹤物質(zhì)，通過檢測標(biāo)記物，測定抗體或抗原等示蹤物質(zhì)，通過檢測標(biāo)記物，測定抗體或抗原的方法。的方法。l常用標(biāo)記技術(shù)：常用標(biāo)記技術(shù)： 1 1）免疫酶測定）免疫酶測定(enzyme immunoassay, EIA)(enzyme immunoassay, EIA) 酶聯(lián)免疫吸附試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA(ELISA） 2 2）免疫熒光技術(shù)）免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence technique)(immunofluorescence technique) 3 3）放射免疫測定法）放射免疫測定法(radioi

5、mmunoassay, RIA)(radioimmunoassay, RIA) 4 4）化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等）化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等酶免疫測定酶免疫測定用酶標(biāo)記抗體進行的抗原抗體反應(yīng)，通過酶用酶標(biāo)記抗體進行的抗原抗體反應(yīng)，通過酶作用于底物后顯色來判斷結(jié)果。作用于底物后顯色來判斷結(jié)果。 抗原抗體反應(yīng)酶促反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)酶促反應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay, enzyme-linked immunosorbent assay, ELISAELISA）將已知抗原或抗體吸附在固相載體表面，再用酶將已知抗原或抗體吸附在固相載體表面，再用酶標(biāo)抗體進

6、行檢測的抗原抗體反應(yīng)。標(biāo)抗體進行檢測的抗原抗體反應(yīng)。特點：敏感性高（特點：敏感性高（ng-pgng-pg），操作簡便），操作簡便類型：直接法類型：直接法( (雙抗體夾心法雙抗體夾心法):Ab +Ag + Ab):Ab +Ag + Ab* * 間接法間接法:Ag +Ab + :Ag +Ab + 抗抗AbAb* * 雙抗體夾心法放射免疫測定法放射免疫測定法(radioimmunoassay,RIA)l原理：用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進行免疫原理：用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進行免疫學(xué)檢測的技術(shù)學(xué)檢測的技術(shù)l常用放射性核素：常用放射性核素：125125I I、131131I Il應(yīng)用：測定血清、尿液等

7、液體中的微量抗原或應(yīng)用：測定血清、尿液等液體中的微量抗原或半抗原物資，如激素、藥物等。半抗原物資，如激素、藥物等。 敏感性很高，應(yīng)用廣泛。敏感性很高，應(yīng)用廣泛。放射免疫檢測法（放射免疫檢測法（RIARIA）競爭法競爭法免疫印跡法免疫印跡法Western blotting病毒浸于固相載體大小不同的蛋白電 泳裂 解將各蛋白分開待檢血清轉(zhuǎn) 印加底 物洗 滌酶標(biāo)二抗觀察結(jié)果l免疫細胞的分離免疫細胞的分離l免疫細胞的功能測定免疫細胞的功能測定一、免疫細胞的分離一、免疫細胞的分離l外周血單個核細胞（外周血單個核細胞（PBMCPBMC）的分離）的分離淋巴細胞分離：葡聚糖淋巴細胞分離：葡聚糖- -泛影葡胺密度

8、梯度離心法泛影葡胺密度梯度離心法單核細胞單核細胞淋巴細胞淋巴細胞流式細胞術(shù)流式細胞術(shù)抗原肽抗原肽-MHC-MHC分子四聚體技分子四聚體技術(shù)術(shù)檢測特異性檢測特異性TCRTCR抗原特異性抗原特異性T T細胞檢測細胞檢測鏈霉親合素?zé)晒馑厣锼豈HC分子抗原肽 T T細胞功能檢測：細胞功能檢測：T T細胞增殖試驗：細胞增殖試驗：淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗有形態(tài)計數(shù)法、淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗有形態(tài)計數(shù)法、MTTMTT法法和同位素法三種和同位素法三種 細胞毒試驗：細胞毒試驗：5151CrCr釋放法、凋亡細胞檢查法等釋放法、凋亡細胞檢查法等細胞因子檢測：細胞因子檢測：生物活性測定法等生物活性測定法等 皮膚試驗（體內(nèi)法）：皮

9、膚試驗（體內(nèi)法）：OTOT試驗試驗免疫細胞功能的測定免疫細胞功能的測定結(jié)核菌素結(jié)核菌素注射受試者前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)注射受試者前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)紅腫硬結(jié)紅腫硬結(jié)0.5cm陽性陽性觀察局部超敏反應(yīng)觀察局部超敏反應(yīng)24244848小時后小時后無紅腫硬結(jié)無紅腫硬結(jié)或或0.5cm陰性陰性l原理：原理：型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)l步驟：步驟： 皮膚試驗（結(jié)核菌素試驗）皮膚試驗（結(jié)核菌素試驗）OT試驗試驗B B細胞功能測定細胞功能測定 (1) (1) 單向瓊脂擴散試驗等測定單向瓊脂擴散試驗等測定IgIg的含量的含量 (2) (2) 抗體形成細胞測定抗體形成細胞測定 溶血空斑形成試驗溶血空斑形成試驗 19791979年年101

10、0月月2626日日WHOWHO宣布全球宣布全球“天花天花”已絕跡已絕跡這是醫(yī)學(xué)史上的里程碑這是醫(yī)學(xué)史上的里程碑人工主動免疫人工主動免疫 輸入輸入抗原物質(zhì)抗原物質(zhì)（疫苗，類毒素（疫苗，類毒素) )，主動刺主動刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，獲得特異獲得特異性免疫力的方法。性免疫力的方法。作用作用: : 預(yù)防或治療預(yù)防或治療慢、持久慢、持久人工被動免疫人工被動免疫（Artificial passive immunization） 輸入免疫效應(yīng)物質(zhì)（輸入免疫效應(yīng)物質(zhì)（抗體等抗體等），），使機體使機體被動被動立即立即獲得短期獲得短期特異免疫力特異免疫力的方法。的方法?？?、短暫快

11、、短暫應(yīng)用：緊急預(yù)防或治療，應(yīng)用：緊急預(yù)防或治療，抗毒素、抗毒素、 人免疫球蛋人免疫球蛋 白制劑、單克隆抗體白制劑、單克隆抗體主動免疫主動免疫被動免疫被動免疫 滅活疫苗滅活疫苗 減毒活疫苗減毒活疫苗 類毒素類毒素病原體滅活病原體滅活減毒活病原體減毒活病原體細菌外毒素脫毒而得細菌外毒素脫毒而得疫苗的基本要求：疫苗的基本要求：安全性；有效性；實用性安全性；有效性；實用性v亞單位疫苗：提取病原體有效的免疫原成分制亞單位疫苗：提取病原體有效的免疫原成分制成的疫苗。霍亂亞單位疫苗成的疫苗。霍亂亞單位疫苗v合成肽疫苗：用人工合成多肽抗原連接適當(dāng)載合成肽疫苗：用人工合成多肽抗原連接適當(dāng)載體與佐劑制成的疫苗。

12、體與佐劑制成的疫苗。 豬口蹄疫合成肽疫苗豬口蹄疫合成肽疫苗v基因工程疫苗：利用基因工程疫苗：利用DNADNA重組技術(shù)制備的只含保重組技術(shù)制備的只含保護性抗原的純化疫苗。護性抗原的純化疫苗。HBsAgHBsAg疫苗疫苗 vDNADNA重組疫苗：將編碼病原體免疫原的基因與細重組疫苗：將編碼病原體免疫原的基因與細菌質(zhì)粒構(gòu)建重組體稱為菌質(zhì)粒構(gòu)建重組體稱為DNADNA疫苗，可直接免疫機疫苗，可直接免疫機體。體。v轉(zhuǎn)基因植物疫苗：將編碼有效免疫原的基因?qū)мD(zhuǎn)基因植物疫苗：將編碼有效免疫原的基因?qū)肟墒秤弥参锛毎幕蚪M中，免疫原可在植入可食用植物細胞的基因組中，免疫原可在植物中穩(wěn)定的表達和積累，人類和動物通

13、過食入物中穩(wěn)定的表達和積累，人類和動物通過食入該植物達到免疫接種的目的。該植物達到免疫接種的目的。預(yù)防性疫苗：按照規(guī)定的免疫程序有計預(yù)防性疫苗：按照規(guī)定的免疫程序有計劃地對人群進行預(yù)防接種，提高人群免疫劃地對人群進行預(yù)防接種，提高人群免疫水平，預(yù)防傳染病。水平，預(yù)防傳染病。治療性疫苗：治療性疫苗：出出生生1月月齡齡2月月齡齡3月月齡齡4月月齡齡5月月齡齡6月月齡齡8月齡月齡18月月齡齡18-24月齡月齡2周周歲歲3周歲周歲4周歲周歲6周周歲歲乙肝疫苗乙肝疫苗 卡介苗卡介苗脊灰疫苗脊灰疫苗百白破百白破白破疫苗白破疫苗麻風(fēng)疫苗麻風(fēng)疫苗麻腮風(fēng)麻腮風(fēng)乙腦減毒乙腦減毒A群流腦群流腦A-C群流群流腦腦甲肝

14、疫苗甲肝疫苗特異性免疫特異性免疫自然免疫自然免疫人工免疫人工免疫自然被動免疫自然被動免疫自然主動免疫自然主動免疫來自母親的抗體來自母親的抗體自然感染自然感染（隱性、顯性）（隱性、顯性）人工被動免疫人工被動免疫抗毒素抗毒素免疫球蛋白免疫球蛋白人工主動免疫人工主動免疫疫苗疫苗類毒素類毒素 SIgAIgG第二節(jié)第二節(jié) 免疫治療免疫治療l 利用免疫學(xué)原理，針對疾病的發(fā)生機利用免疫學(xué)原理，針對疾病的發(fā)生機 制，人為地調(diào)整機體的免疫功能，以達制，人為地調(diào)整機體的免疫功能，以達 到治療目的。到治療目的。 l分子疫苗合成肽疫苗、重組載體疫苗、分子疫苗合成肽疫苗、重組載體疫苗、DNADNA疫苗疫苗. .包括腫瘤抗原和微生物抗原疫苗包括腫瘤抗原和微生物抗原疫苗l抗體免疫血清；單克隆抗體；基因工程抗體抗體免疫血清；單克隆抗體；基因工程抗體. .l細胞因子重組細胞因子；細胞因子拮抗療法細胞因子重組細胞因子；細胞因子拮抗療法. .l細胞疫苗腫瘤細胞疫苗、基因修飾的瘤細胞疫苗腫瘤細胞疫苗、基因修飾的瘤苗、苗、DCDC疫苗等。疫苗等。l過繼免疫過繼免疫LAKLAKl干細胞移植分離骨髓、外周血、臍血