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1、1實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 酶的底物專一性2實(shí)驗(yàn)?zāi)康膌了解酶的專一性了解酶的專一性l掌握檢查酶專一性的原理和方法掌握檢查酶專一性的原理和方法l學(xué)會(huì)排除干擾因素,設(shè)計(jì)酶學(xué)實(shí)驗(yàn)學(xué)會(huì)排除干擾因素,設(shè)計(jì)酶學(xué)實(shí)驗(yàn)3實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容4 酶的專一性是指一種酶只能對(duì)一種底物或一類底酶的專一性是指一種酶只能對(duì)一種底物或一類底物起催化作用,對(duì)其他底物無催化作用。酶的專一性物起催化作用,對(duì)其他底物無催化作用。酶的專一性程度分為:程度分為:l鍵專一性:鍵專一性:只要求作用于一定類型的鍵,對(duì)鍵兩端基只要求作用于一定類型的鍵,對(duì)鍵兩端基團(tuán)無嚴(yán)格要求。如酯酶、核酶團(tuán)無嚴(yán)格要求。如酯酶、核酶l基團(tuán)專一性:基團(tuán)專一性:對(duì)鍵兩端或一端的基團(tuán)
2、要求嚴(yán)格,如對(duì)鍵兩端或一端的基團(tuán)要求嚴(yán)格,如-、-葡萄糖苷酶,轉(zhuǎn)移酶葡萄糖苷酶,轉(zhuǎn)移酶l絕對(duì)專一性:絕對(duì)專一性:只作用于一種底物,如某些核酸工具酶只作用于一種底物,如某些核酸工具酶l立體異構(gòu)專一性:立體異構(gòu)專一性:旋光異構(gòu)專一性和幾何異構(gòu)專一性旋光異構(gòu)專一性和幾何異構(gòu)專一性實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理-5淀淀 粉粉直鏈淀粉直鏈淀粉: 由由200-300個(gè)個(gè)-葡萄糖以葡萄糖以-1,4糖苷糖苷鍵相連成一直鏈鍵相連成一直鏈支鏈淀粉支鏈淀粉:有有-1,4糖苷鍵和糖苷鍵和-1,6糖苷鍵,糖苷鍵,在直鏈淀粉的基礎(chǔ)上形成分支在直鏈淀粉的基礎(chǔ)上形成分支6 直鏈淀粉直鏈淀粉的相對(duì)分子質(zhì)量比支鏈淀粉小,直鏈淀粉的的相對(duì)分子質(zhì)
3、量比支鏈淀粉小,直鏈淀粉的分子是由許多分子是由許多-D-D-葡萄糖經(jīng)過葡萄糖經(jīng)過-1-1,4-4-苷鍵反復(fù)連接而成苷鍵反復(fù)連接而成的線狀聚合物。的線狀聚合物。OOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHO-1,4-苷 鍵7 直鏈淀粉的形狀并不是伸展?fàn)顟B(tài)的直鏈,而是有規(guī)律的直鏈淀粉的形狀并不是伸展?fàn)顟B(tài)的直鏈,而是有規(guī)律的卷曲成螺旋狀,每一螺旋圈約有卷曲成螺旋狀,每一螺旋圈約有 6 6個(gè)葡萄糖結(jié)構(gòu)單位。個(gè)葡萄糖結(jié)構(gòu)單位。 直鏈淀粉遇碘液顯藍(lán)色,加熱煮沸時(shí)顏色消失,冷直鏈淀粉遇碘液顯藍(lán)色,加熱煮沸時(shí)顏色消失,冷卻后又重新顯色。這個(gè)反應(yīng)很靈敏,常用來檢驗(yàn)淀粉
4、或卻后又重新顯色。這個(gè)反應(yīng)很靈敏,常用來檢驗(yàn)淀粉或碘的存在。碘的存在。8 支鏈淀粉支鏈淀粉比直鏈淀粉由更多的比直鏈淀粉由更多的D-D-葡萄糖組成,其連接方式也有葡萄糖組成,其連接方式也有所不同。支鏈淀粉中所不同。支鏈淀粉中D-D-葡萄糖之間以葡萄糖之間以-1-1,4 4苷鍵連接成主鏈,每苷鍵連接成主鏈,每隔隔20202525個(gè)葡萄糖單位便分枝出個(gè)葡萄糖單位便分枝出1 1個(gè)支鏈,支鏈上還有分枝,而支個(gè)支鏈,支鏈上還有分枝,而支鏈的連接點(diǎn)即分枝處為鏈的連接點(diǎn)即分枝處為-l-l,6 6糖苷鍵。糖苷鍵。OOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OHOOOHOHCH2OOOHOHCH2OHOOOOHOHC
5、H2OHOOOHOHCH2OHO -1,6-苷鍵 -1,4-苷鍵9支鏈淀粉,平均每支鏈淀粉,平均每2530個(gè)單位產(chǎn)生個(gè)單位產(chǎn)生1個(gè)分支。個(gè)分支。糖原,平均每糖原,平均每812個(gè)單位產(chǎn)生個(gè)單位產(chǎn)生1個(gè)分支。個(gè)分支。10 由-葡萄糖和-果糖以-1,2糖苷鍵相連而成的雙糖蔗蔗 糖糖11Benedict反應(yīng)反應(yīng) lBenedictBenedict試劑試劑是堿性硫酸銅溶液,具有一定的氧化能力,能與還原性糖的半縮醛羥基半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應(yīng),生成氧化亞銅(Cu2O)磚紅色沉淀。l淀粉淀粉和蔗糖蔗糖都不能反應(yīng),而它們的水解產(chǎn)物葡萄糖能夠發(fā)生Benedict反應(yīng),所以,用顏色反應(yīng)來觀察淀粉酶、蔗糖酶對(duì)淀粉
6、及蔗糖的水解作用。12半縮醛羥基在右邊,即與氧環(huán)同側(cè)-D-葡萄糖;半縮醛羥基在左邊,即與氧環(huán)異側(cè)-D-葡萄糖。 RCOHHO R+R CHOHOR半縮醛HCOHHHOOHHOHHCH2OHCOHHHHOOHHOHHCH2OHOHOHHCOHHHOOHHHCH2OHHOHOHCOHHHOOHHHCH2OHHOHO-D-葡萄糖-D-葡萄糖13試試 劑劑注:注:Cl-是唾液淀粉酶的激活劑。其它的陰離子,如是唾液淀粉酶的激活劑。其它的陰離子,如Br-、NO3-和和I-對(duì)該酶也有激活作用,但較微弱。而對(duì)該酶也有激活作用,但較微弱。而Cu2+對(duì)唾液對(duì)唾液淀粉酶具有抑制作用。淀粉酶具有抑制作用。14試試 劑劑15Benedict試劑l 在在600mL600mL蒸餾水中溶解蒸餾水中溶解173g173g檸檬酸鈉檸檬酸鈉和和100g100g無水無水碳酸鈉碳酸鈉,冷卻后稀釋到,冷卻后稀釋到850mL850mL。l在在100mL熱蒸餾水中溶解熱蒸餾水中溶解17.4g無水硫酸銅無水硫酸銅。冷卻。冷卻后稀釋到后稀釋到150mL。把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉。把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉碳酸鈉溶液中,邊加邊攪拌,如產(chǎn)生沉淀。要碳酸鈉溶液中,邊加邊攪拌,如產(chǎn)生沉淀。要過濾,班氏試劑配制后能長期使用。如存放較久過濾,班氏試劑配制后能長期使用。如存放較久而產(chǎn)生沉淀時(shí),可取上
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