仿制藥質(zhì)量一致性評價人體生物等效性研究

1、附件3仿制藥質(zhì)量一致性評價人體生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則一、概述藥物制劑要產(chǎn)生最佳療效，其藥物活性成分應(yīng)當(dāng)在預(yù)期時間段內(nèi)釋放吸收并被轉(zhuǎn)運(yùn)到作用部位達(dá)到預(yù)期的有效濃度。大多數(shù)藥物是進(jìn)入血液循環(huán)后產(chǎn)生全身治療效果的，作用部位的藥物濃度和血液中藥物濃度存在一定的比例關(guān)系，因此可以通過測定血液循環(huán)中的藥物濃度來獲得反映藥物體內(nèi)吸收程度和速度的主要藥代動力學(xué)參數(shù)，間接預(yù)測藥物制劑的臨床治療效果，以評價制劑的質(zhì)量。允許這種預(yù)測的前提是制劑中活性成分進(jìn)入體內(nèi)的行為是一致并且可重現(xiàn)的。生物利用度（Bioavailability,BA）是反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)的程度和速度的指標(biāo)。過去出現(xiàn)的一些由于制劑生物

2、利用度不同而導(dǎo)致的不良事件，使人們認(rèn)識到確有必要對制劑中活性成分生物利用度的一致性或可重現(xiàn)性進(jìn)行驗(yàn)證，尤其是在含有相同活性成分的仿制產(chǎn)品要替代它的原研制劑進(jìn)入臨床使用的時候。鑒于藥物濃度和治療效果相關(guān)，假設(shè)在同一受試者，相同的血藥濃度-時間曲線意味著在作用部位能達(dá)到相同的藥物濃度，并產(chǎn)生相同的療效，那么就可以藥代動力學(xué)參數(shù)作為替代的終點(diǎn)指標(biāo)來建立等效性，即生物等效性（Bioequivalence, BE）。BA和BE研究已經(jīng)成為評價制劑質(zhì)量的重要手段。本指導(dǎo)原則將重點(diǎn)闡述BA和BE研究的相關(guān)概念、應(yīng)用范圍和BA和BE研究的設(shè)計、操作和評價等。本指導(dǎo)原則主要是針對化學(xué)藥品普通固體口服制劑質(zhì)量一致

3、性評價的人體生物等效性研究。因?yàn)樵诰唧w應(yīng)用過程中有可能面臨多種情況，對于一些特殊問題，仍應(yīng)遵循具體問題具體分析的原則。二、BA和BE基本概念及應(yīng)用1.生物利用度：是指藥物活性成分從制劑釋放吸收進(jìn)入全身循環(huán)的程度和速度。一般分為絕對生物利用度和相對生物利用度。絕對生物利用度是以靜脈制劑（通常認(rèn)為靜脈制劑生物利用度為100%）為參比制劑獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的相對量；相對生物利用度則是以其他非靜脈途徑給藥的制劑（如片劑和口服溶液）為參比制劑獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體循環(huán)的相對量。2.生物等效性：是指藥學(xué)等效制劑或可替換藥物在相同試驗(yàn)條件下，服用相同劑量，其活性成分吸收程度和速度的差異

4、無統(tǒng)計學(xué)意義。通常意義的BE研究是指用BA研究方法，以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)，根據(jù)預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較研究。在藥代動力學(xué)方法確實(shí)不可行時, 也可以考慮以臨床綜合療效、藥效學(xué)指標(biāo)或體外試驗(yàn)指標(biāo)等進(jìn)行比較性研究，但需充分證實(shí)所采用的方法具有科學(xué)性和可行性。了解以下幾個概念將有助于理解 BA和BE：原研藥（Innovator Product）：是指已經(jīng)過全面的藥學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)研究以及臨床研究數(shù)據(jù)證實(shí)其安全有效性并首次被批準(zhǔn)上市的藥品。藥學(xué)等效性(Pharmaceutical equivalence)：如果兩制劑含等量的相同活性成分，具有相同的劑型，符合同樣的或可比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，則

5、可以認(rèn)為它們是藥學(xué)等效的。藥學(xué)等效不一定意味著生物等效，因?yàn)檩o料的不同或生產(chǎn)工藝差異等可能會導(dǎo)致藥物溶出或吸收行為的改變。治療等效性(Therapeutic equivalence)：如果兩制劑含有相同活性成分，并且臨床上顯示具有相同的安全性和有效性，可以認(rèn)為兩制劑具有治療等效性。如果兩制劑中所用輔料本身并不會導(dǎo)致有效性和安全性問題，生物等效性研究是證實(shí)兩制劑治療等效性最合適的辦法。如果藥物吸收速度與臨床療效無關(guān),吸收程度相同但吸收速度不同的藥物也可能達(dá)到治療等效。而含有相同的活性成分只是活性成分化學(xué)形式不同（如某一化合物的鹽、酯等）或劑型不同（如片劑和膠囊劑）的藥物制劑也可能治療等效?；鞠?/p>

6、似藥物（Essentially similar product）：如果兩個制劑具有等量且符合同一質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的藥物活性成分，具有相同劑型，并且經(jīng)過證明具有生物等效性,則兩個制劑可以認(rèn)為是基本相似藥物。從廣義上講，這一概念也應(yīng)適用于含同一活性成分的不同的劑型，如片劑和膠囊劑。與原研藥基本相似藥物是可以替換原研藥使用的。BA和BE均是評價制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，BA強(qiáng)調(diào)反映藥物活性成分到達(dá)體內(nèi)循環(huán)的相對量和速度，是新藥研究過程中選擇合適給藥途徑和確定用藥方案(如給藥劑量和給藥間隔)的重要依據(jù)之一。BE則重點(diǎn)在于以預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同制劑體內(nèi)行為一致性的依據(jù)，是

7、判斷后研發(fā)產(chǎn)品是否可替換已上市藥品使用的依據(jù)。BA和BE研究在藥品研發(fā)的不同階段有不同作用：在新藥研究階段，為了確定新藥處方、工藝合理性，通常需要比較改變上述因素后制劑是否能達(dá)到預(yù)期的生物利用度；開發(fā)了新劑型，要對擬上市劑型進(jìn)行生物利用度研究以確定劑型的合理性，通過與原劑型比較的 BA研究來確定新劑型的給藥劑量，也可通過BE研究來證實(shí)新劑型與原劑型是否等效；在臨床試驗(yàn)過程中，可通過BE研究來驗(yàn)證同一藥物的不同時期產(chǎn)品的前后一致性，如：早期和晚期的臨床試驗(yàn)用藥品，臨床試驗(yàn)用藥品（尤其是用于確定劑量的試驗(yàn)藥）和擬上市藥品等。在仿制生產(chǎn)已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品時，可通過BE研究來證明仿制產(chǎn)品與原研藥是否具有

8、生物等效性，是否可與原研藥替換使用。藥品批準(zhǔn)上市后，如處方組成成分、比例以及工藝等出現(xiàn)一定程度的變更時，研究者需要根據(jù)產(chǎn)品變化的程度來確定是否進(jìn)行BE研究，以考察變更后和變更前產(chǎn)品是否具有生物等效性。以提高生物利用度為目的研發(fā)的新制劑，需要進(jìn)行BA研究，了解變更前后生物利用度的變化。三、研究方法BE研究是在試驗(yàn)制劑和參比制劑生物利用度比較基礎(chǔ)上建立等效性。目前推薦的生物等效性研究方法包括體內(nèi)和體外的方法。按方法的優(yōu)先考慮程度從高到低排列：藥代動力學(xué)研究方法、藥效動力學(xué)研究方法、臨床比較試驗(yàn)方法、體外研究方法。具體如下：藥代動力學(xué)研究即采用人體生物利用度比較研究的方法。通過測量不同時間點(diǎn)的生物樣

9、本（如全血、血漿、血清或尿液）中藥物濃度，獲得藥物濃度-時間曲線（Concentration-Time curve,C-T）來反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的動態(tài)過程。并經(jīng)過適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，得出與吸收程度和速度有關(guān)的藥代動力學(xué)參數(shù)如曲線下面積（AUC）、達(dá)峰濃度（Cmax）、達(dá)峰時間（Tmax）等，通過統(tǒng)計學(xué)比較以上參數(shù)，判斷兩制劑是否生物等效。藥效動力學(xué)研究在無可行的藥代動力學(xué)研究方法建立生物等效性研究時（如無靈敏的血藥濃度檢測方法、濃度和效應(yīng)之間不存在線性相關(guān)），可以考慮用明確的可分級定量的人體藥效學(xué)指標(biāo)通過效應(yīng)-時間曲線（Effect-Time curve）與參比制劑比較來確定生物等效性

10、。臨床比較試驗(yàn)當(dāng)無適宜的藥物濃度檢測方法，也缺乏明確的藥效學(xué)指標(biāo)時，也可以通過以參比制劑為對照的臨床比較試驗(yàn)，以綜合的療效終點(diǎn)指標(biāo)來驗(yàn)證兩制劑的等效性。然而，作為生物等效研究方法，對照的臨床試驗(yàn)可能因?yàn)闃颖玖坎蛔慊驒z測指標(biāo)不靈敏而缺乏足夠的把握度去檢驗(yàn)差異，故建議盡量采用藥代動力學(xué)研究方法。通過增加樣本量或嚴(yán)格的臨床研究實(shí)施在一定程度上可以克服以上局限。體外研究一般不提倡用體外的方法來確定生物等效性，因?yàn)轶w外并不能完全代替體內(nèi)行為，但在某些情況下，如能提供充分依據(jù)，也可以采用體外的方法來證實(shí)生物等效性。根據(jù)生物藥劑學(xué)分類證明屬于高溶解度，高滲透性，快速溶出的口服制劑可以采用體外溶出度比較研究的

11、方法驗(yàn)證生物等效，因?yàn)樵擃愃幬锏娜艹?、吸收已?jīng)不是藥物進(jìn)入體內(nèi)的限速步驟。對于難溶性但高滲透性的藥物，如已建立良好的體內(nèi)外相關(guān)關(guān)系，也可用體外溶出的研究來替代體內(nèi)研究。四、BE研究具體要求以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)的研究方法是目前普遍采用的生物等效性研究方法。一個完整的生物等效性研究包括生物樣本分析、實(shí)驗(yàn)設(shè)計、統(tǒng)計分析、結(jié)果評價四個方面內(nèi)容。（一）生物樣本分析方法的建立和確證生物樣品一般來自全血、血清、血漿、尿液或其他組織，具有取樣量少、藥物濃度低、干擾物質(zhì)多以及個體的差異大等特點(diǎn)，因此必須根據(jù)待測物的結(jié)構(gòu)、生物介質(zhì)和預(yù)期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品定量分析方法，并對方法進(jìn)行確證。1.常用分

12、析方法目前常用的幾種分析方法有：（1）色譜法：氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（LCMS、LC-MS-MS、GC-MS、GC-MS-MS）等，可用于大多數(shù)藥物的檢測；（2）免疫學(xué)方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測；（3）微生物學(xué)方法：可用于抗生素藥物的測定。生物樣本分析方法的選擇宜盡量選擇可行的靈敏度高的方法。2.方法學(xué)確證（Method Validation）建立可靠的和可重現(xiàn)的定量分析方法是進(jìn)行生物等效性研究的關(guān)鍵之一。為了保證分析方法可靠，必須進(jìn)行充分的方法確證，一般應(yīng)進(jìn)行以下幾方面的考察：2.1 特異性(Spe

13、cificity)特異性是指樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一地測定分析物的能力。必須提供證明所測定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或特定活性代謝物，生物樣品所含內(nèi)源性物質(zhì)和相應(yīng)代謝物、降解產(chǎn)物不得干擾對樣品的測定，如果有幾個分析物，應(yīng)保證每一個分析物都不被干擾。應(yīng)確定保證分析方法特異性的最佳檢測條件。對于色譜法至少要考察6個來自不同個體的空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖反映分析方法的特異性。對于以軟電離質(zhì)譜為基礎(chǔ)的檢測法（LCMS、LC-MS-MS）應(yīng)注意考察分析過程中的介質(zhì)效應(yīng)，如離子抑制等。2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（Cali

14、bration Curve）標(biāo)準(zhǔn)曲線反映了所測定物質(zhì)濃度與儀器響應(yīng)值之間的關(guān)系，一般用回歸分析方法（如用加權(quán)最小二乘法）所得的回歸方程來評價。應(yīng)提供標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)，說明其線性相關(guān)程度。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范圍為定量范圍，在定量范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應(yīng)達(dá)到試驗(yàn)要求的精密度和準(zhǔn)確度。配制標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)使用與待測樣品相同生物介質(zhì)，不同生物樣品應(yīng)制備各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度個數(shù)取決于分析物可能的濃度范圍和分析物/響應(yīng)值關(guān)系的性質(zhì)。必須至少用6個濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對于非線性相關(guān)可能需要更多濃度點(diǎn)。定量范圍要能覆蓋全部待測的生物樣品濃度范圍，不得用定量范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。

15、建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點(diǎn)，僅用于評價干擾。標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點(diǎn)的實(shí)測值與標(biāo)示值之間的偏差*在可接受的范圍之內(nèi)時，可判定標(biāo)準(zhǔn)曲線合格?？山邮芊秶话阋?guī)定為最低濃度點(diǎn)的偏差在20%以內(nèi)，其余濃度點(diǎn)的偏差在15%以內(nèi)。只有合格的標(biāo)準(zhǔn)曲線才能對臨床待測樣品進(jìn)行定量計算。當(dāng)線性范圍較寬的時候，推薦采用加權(quán)的方法對標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計算，以使低濃度點(diǎn)計算得比較準(zhǔn)確。（注：*偏差=【（實(shí)測值標(biāo)示值）/標(biāo)示值】X100%）2.3 定量下限（Lower Limit of quantitation，LLOQ）定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，表示測定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度。L

16、LOQ應(yīng)能滿足測定35個消除半衰期時樣品中的藥物濃度或能檢測出Cmax的1101/20時的藥物濃度。其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的80%120%范圍內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)應(yīng)小于20%。應(yīng)至少由5個標(biāo)準(zhǔn)樣品測試結(jié)果證明。2.4精密度與準(zhǔn)確度(Precision and Accuracy)精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間RSD來考察方法的精確度。一般RSD應(yīng)小于15，在LLOQ附近 RSD應(yīng)小于20。準(zhǔn)確度是指在確定的分析條件下，測得的生物樣品濃度與真實(shí)濃度的接近程度(即質(zhì)控樣品的實(shí)測濃度與真實(shí)濃度的偏差)，重復(fù)測定已知濃度分析物樣

17、品可獲得準(zhǔn)確度。一般應(yīng)85115范圍內(nèi)，在LLOQ附近應(yīng)在80120范圍內(nèi)。一般要求選擇高、中、低3個濃度的質(zhì)控樣品同時進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在LLOQ的3倍以內(nèi)，高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，中間選一個濃度。在測定批內(nèi)精密度時，每一濃度至少制備并測定5個樣品。為獲得批間精密度應(yīng)至少在不同天連續(xù)制備并測定3個合格的分析批(Analytical run/Analytical batch)，至少45個樣品。2.5 樣品穩(wěn)定性(Stability) 根據(jù)具體情況，對含藥生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同存放時間進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時間。還應(yīng)注意考察儲備液的

18、穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。2.6 提取回收率從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應(yīng)值除以純標(biāo)準(zhǔn)品產(chǎn)生的響應(yīng)值即為分析物的提取回收率。也可以說是將供試生物樣品中分析物提取出來供分析的比例。應(yīng)考察高、中、低3個濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)當(dāng)精密和可重現(xiàn)。2.7 微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證上述分析方法確證主要針對色譜法，很多參數(shù)和原則也適用于微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到它們的一些特殊之處。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線本質(zhì)上是非線性的，所以應(yīng)盡可能采用比化學(xué)分析更多的濃度點(diǎn)來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果的準(zhǔn)確度是關(guān)鍵的因素，如果重復(fù)測定能夠改善準(zhǔn)確

19、度，則應(yīng)在方法確證和未知樣品測定中采用同樣的步驟。3.方法學(xué)質(zhì)控只有在生物樣本分析方法確證完成之后才能開始測定未知樣品。在測定生物樣品中的藥物濃度時應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證所建立的方法在實(shí)際應(yīng)用中的可靠性。推薦由獨(dú)立的人員配制不同濃度的質(zhì)控樣品對分析方法進(jìn)行考核。每個未知樣品一般測定一次，必要時可進(jìn)行復(fù)測。生物等效性試驗(yàn)中，來自同一個體的生物樣品最好在同一批中測定。每個分析批生物樣品測定時應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測定高、中、低三個濃度的質(zhì)控樣品。每個濃度至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測試順序中。當(dāng)一個分析批中未知樣品數(shù)目較多時，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的5%。質(zhì)

20、控樣品測定結(jié)果的偏差一般應(yīng)小于15%，低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于20%，最多允許1/3的質(zhì)控樣品結(jié)果超過上述限度，但不能出現(xiàn)在同一濃度質(zhì)控樣品中。如質(zhì)控樣品測定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測試結(jié)果作廢。濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的空白介質(zhì)稀釋后重新測定。對于濃度低于定量下限的樣品，在進(jìn)行藥代動力學(xué)分析時，在達(dá)到Cmax以前取樣的樣品應(yīng)以零值計算，在達(dá)到Cmax以后取樣的樣品應(yīng)以無法定量（Not detectable, ND）計算，以減小零值對AUC計算的影響。4.分析數(shù)據(jù)的記錄與保存分析方法的有效性應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)證明。在臨床報告中，應(yīng)提供完成這些實(shí)驗(yàn)工作的相關(guān)的詳細(xì)資料。建立一般性和特殊

21、性標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、保存完整的實(shí)驗(yàn)記錄是分析方法有效性的基本要素。生物分析方法建立中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)和質(zhì)控樣品測試結(jié)果應(yīng)全部記錄并妥善保存，并提供足夠的可供評價的方法學(xué)建立和樣品分析的數(shù)據(jù)。至少應(yīng)當(dāng)提供的數(shù)據(jù)包括：4.1 方法建立的數(shù)據(jù)分析方法的詳細(xì)描述；儀器設(shè)備、分析條件；該方法所用對照品（被測藥物、代謝物、內(nèi)標(biāo)物）的純度和來源；描述測定特異性、準(zhǔn)確度、精密度、回收率、定量限、標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)并給出獲得的主要數(shù)據(jù)列表；列出批內(nèi)批間精密度和準(zhǔn)確度的詳細(xì)結(jié)果；描述穩(wěn)定性考察及相關(guān)數(shù)據(jù)；根據(jù)具體情況提供代表性的色譜圖或質(zhì)譜圖并加以說明。4.2 樣品分析的數(shù)據(jù)樣品處理和保存的情況；分析樣品時標(biāo)準(zhǔn)曲線列表；用于計

22、算結(jié)果的回歸方程；各分析批質(zhì)控樣品測定結(jié)果綜合列表并計算批內(nèi)和批間精密度、準(zhǔn)確度；各分析批包括的未知樣品濃度計算結(jié)果。提供100%受試者樣品測試的色譜圖復(fù)印件，包括相應(yīng)分析批的標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣品的色譜圖復(fù)印件。注明缺失樣品的原因，重復(fù)測試的結(jié)果。對舍棄任何分析數(shù)據(jù)和選擇所報告的數(shù)據(jù)說明理由。4.3 其他相關(guān)信息項(xiàng)目編號、分析方法編號、分析方法類型、分析方法確證進(jìn)行簡化的理由、以及相應(yīng)的項(xiàng)目計劃編號、標(biāo)題等。（二）實(shí)驗(yàn)設(shè)計與操作1. 交叉設(shè)計交叉設(shè)計是目前應(yīng)用最多最廣的方法，因?yàn)槎鄶?shù)藥物吸收和清除在個體之間均存在很大變異，個體間的變異系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于個體內(nèi)變異系數(shù)，因此生物等效性研究一般要求按自身交

23、叉對照的方法設(shè)計。把受試對象隨機(jī)分為幾組，按一定順序處理，一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。兩順序間應(yīng)有足夠長的間隔時間，為清洗期（Wash-out Period）。這樣，對每位受試者都連續(xù)接受兩次或更多次的處理，相當(dāng)于自身對照，可以將制劑因素對藥物吸收的影響與其他因素區(qū)分開來，減少了不同試驗(yàn)周期和個體間差異對試驗(yàn)結(jié)果的影響。根據(jù)試驗(yàn)制劑數(shù)量不同一般采用22交叉、33交叉等設(shè)計。如果是兩種制劑比較，雙處理、雙周期，兩序列的交叉設(shè)計是較好的選擇。如試驗(yàn)包括3個制劑（受試制劑2個和參比制劑1個）時，宜采用3制劑3周期二重33拉丁方試驗(yàn)設(shè)計。各周期

24、間也應(yīng)有足夠的清洗期。設(shè)定清洗期是為了消除兩制劑的互相干擾，避免上個周期內(nèi)的處理影響到隨后一周期的處理中。清洗期一般不應(yīng)短于7個消除半衰期。但有些藥物或其活性代謝物半衰期很長時則難以按此方法設(shè)計實(shí)施，在此情況下可能需要考慮按平行組設(shè)計進(jìn)行，但樣本量可能要增加。而對于某些高變異性藥物（Highly Variable Drug），根據(jù)具體情況，除采用增加例數(shù)的辦法外，可采用重復(fù)交叉設(shè)計，對同一受試者兩次接受同一制劑時可能存在的個體內(nèi)差異進(jìn)行測定。2.受試者的選擇2.1 受試者入選條件：受試者的選擇應(yīng)當(dāng)盡量使個體間差異減到最小，以便能檢測出制劑間的差異。試驗(yàn)方案中應(yīng)明確入選和剔除條件。一般情況應(yīng)選擇

25、男性健康受試者。特殊作用的藥品，則應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)受試者。選擇健康女性受試者應(yīng)避免懷孕的可能性。如待測藥物存在已知的不良反應(yīng)，可能帶來安全性擔(dān)憂，也可考慮選擇患者作為受試者。年齡:一般1840周歲，同一批受試者年齡不宜相差10歲以上。體重：正常受試者的體重一般不應(yīng)低于50kg。按體質(zhì)指數(shù)(Body MassIndex , BMI)體重（kg）身高2（m2）計算，一般應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)體重范圍內(nèi)。同一批受試者體重（kg）不宜懸殊過大，因?yàn)槭茉囌叻玫乃幬飫┝渴窍嗤摹Ｊ茉囌邞?yīng)經(jīng)過全面體檢，身體健康，無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖、呼吸狀況、肝、

26、腎功能和血象無異常，避免藥物體內(nèi)過程受到疾病干擾。根據(jù)藥物類別和安全性情況，還應(yīng)在試驗(yàn)前、試驗(yàn)期間、試驗(yàn)后進(jìn)行特殊項(xiàng)目檢查，如降糖藥應(yīng)檢查血糖水平。為避免其他藥物干擾，試驗(yàn)前兩周內(nèi)及試驗(yàn)期間禁服任何其他藥物。實(shí)驗(yàn)期間禁煙、酒及含咖啡因的飲料，或某些可能影響代謝的果汁等，以免干擾藥物體內(nèi)代謝。受試者應(yīng)無煙、酒嗜好。如有吸煙史，在討論結(jié)果時應(yīng)考慮可能的影響。如已知藥物存在遺傳多態(tài)性導(dǎo)致代謝差異，應(yīng)考慮受試者由于慢代謝可能出現(xiàn)的安全性等問題。2.2受試者例數(shù)受試者例數(shù)應(yīng)當(dāng)符合統(tǒng)計學(xué)要求，對于目前的統(tǒng)計方法,1824例可滿足大多數(shù)藥物對樣本量的要求，但對某些變異性大的藥物可能需要適當(dāng)增加例數(shù)。一個臨床

27、試驗(yàn)的例數(shù)多少是由三個基本因素決定的：（1）顯著性水平：即值的大小，通常取 0.05 或 5%；（2）把握度：即1-值的大小，一般定為不小于 80%，其中是犯第類錯誤的概率，也就是把實(shí)際有效誤判為無效的概率；（3）變異性（CV%）和差別（）：兩藥等效性檢驗(yàn)中檢測指標(biāo)的變異性和差別越大所需例數(shù)越多。在試驗(yàn)前并不知道和CV%，只能根據(jù)已有的參比制劑的上述參數(shù)來估算或進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。另外，當(dāng)一個生物利用度試驗(yàn)完成后，可以根據(jù)、CV%和把握度等參數(shù)來求N值，并與試驗(yàn)所選擇例數(shù)進(jìn)行對比，檢驗(yàn)試驗(yàn)所采用例數(shù)是否合適。2.3 受試者分組必須采用隨機(jī)方法分組，各組間應(yīng)具有可比性。3.受試制劑和參比制劑(Test

28、Product and Reference Product ,T and R )參比制劑的質(zhì)量直接影響生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，參比制劑的選擇應(yīng)遵循總局仿制藥質(zhì)量一致性評價工作辦公室發(fā)布的相關(guān)指導(dǎo)原則的要求。參比制劑和受試制劑含量差別不能超過5%。對于受試制劑，應(yīng)為符合現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的中試/生產(chǎn)規(guī)模的產(chǎn)品。應(yīng)提供該制劑的體外溶出度、穩(wěn)定性、含量或效價測定、批間一致性報告等，供試驗(yàn)單位參考。個別藥物尚需提供多晶型及光學(xué)異構(gòu)體的資料。參比制劑和受試制劑均應(yīng)注明研制單位、批號、規(guī)格、保存條件、有效期。試驗(yàn)結(jié)束后受試制劑和參比制劑應(yīng)保留足夠長時間直到產(chǎn)品一致性評價以備查。4.給藥劑量進(jìn)行藥物制劑生物利

29、用度和生物等效性研究時，給藥劑量一般應(yīng)與臨床單次用藥劑量一致，不得超過臨床推薦的單次最大劑量或已經(jīng)證明的安全劑量。受試制劑和參比制劑一般應(yīng)服用相等劑量，需要使用不相等劑量時，應(yīng)說明理由并提供所用劑量范圍內(nèi)的線性藥代動力學(xué)特征依據(jù)，結(jié)果可以劑量校正方式計算生物利用度。一般情況下普通制劑僅進(jìn)行單劑量給藥研究即可,但在某些情況下可能需要考慮進(jìn)行多次給藥研究，如：（1）受試藥單次服用后原形藥或活性代謝物濃度很低，難以用相應(yīng)分析方法精密測定血藥濃度時；（2）受試藥的生物利用度有較大個體差異；（3）藥物吸收程度相差不大，但吸收速度有較大差異；（4）緩控釋制劑。進(jìn)行多次給藥研究應(yīng)按臨床推薦的給藥方案給藥，至

30、少連續(xù)3次測定谷濃度確定血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后選擇一個給藥間隔取樣進(jìn)行測定，并據(jù)此計算生物利用度。5.取樣取樣點(diǎn)的設(shè)計對保證試驗(yàn)結(jié)果可靠性及藥代動力學(xué)參數(shù)計算的合理性，均有十分重要的意義。通常應(yīng)有預(yù)試驗(yàn)或參考國內(nèi)外的藥代文獻(xiàn)，為合理設(shè)計采樣點(diǎn)提供依據(jù)。應(yīng)用血藥濃度測定法時，一般應(yīng)兼顧到吸收相、平衡相（峰濃度）和消除相。在藥物濃度時間曲線各時相及預(yù)計達(dá)峰時間前后應(yīng)有足夠采樣點(diǎn)，使?jié)舛葧r間曲線能全面反應(yīng)藥物在體內(nèi)處置的全過程。服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在吸收相部分取23個點(diǎn)，峰濃度附近至少需要3個點(diǎn)，消除相取35個點(diǎn)。盡量避免第一個點(diǎn)即為Cmax，預(yù)試驗(yàn)將有助于避免這個問題。采樣持續(xù)到受試藥原形或其活性

31、代謝物35個半衰期時，或至血藥濃度為Cmax的1/101/20, AUC0-t/AUC0-通常應(yīng)當(dāng)大于80%。對于長半衰期藥物，應(yīng)盡可能取樣持續(xù)到足夠比較完整的吸收過程，因?yàn)槟┒讼?xiàng)對該類制劑吸收過程的評價影響不大。多次給藥研究中，對于一些已知生物利用度受晝夜節(jié)律影響的藥物，則應(yīng)該連續(xù)24小時取樣。當(dāng)受試藥不能用血藥濃度測定方法進(jìn)行生物利用度檢測時，若該藥原形或活性代謝物主要由尿排泄（大于給藥劑量的70%），可以考慮尿藥法測定，以尿樣中藥物的累積排泄量來反映藥物攝入量。試驗(yàn)藥品和試驗(yàn)方案應(yīng)當(dāng)符合生物利用度測定要求。尿樣的收集采用分段收集法,其采集頻度、間隔時間應(yīng)滿足估算受試藥原形藥或活性代謝

32、物經(jīng)尿的排泄程度。但該方法不能反映藥物吸收速度，誤差因素較多，一般不提倡采用。某些藥物在體內(nèi)迅速代謝無法測定生物樣品中原形藥物，也可采用測定生物樣品中主要代謝物濃度的方法，進(jìn)行生物利用度和生物等效性試驗(yàn)。6.藥代動力學(xué)參數(shù)計算一般用非房室數(shù)學(xué)模型分析方法來估算藥代動力學(xué)參數(shù)。用房室模型方法估算藥代參數(shù)時，采用不同的方法或軟件其值可能有較大差異。研究者可根據(jù)具體情況選擇使用，但所用軟件必須經(jīng)確證并應(yīng)在研究報告中注明所用軟件。在生物等效性研究中，其主要測量參數(shù)Cmax和Tmax均以實(shí)測值表示。AUC0t以梯形法計算，故受數(shù)據(jù)處理程序影響不大。7.研究過程標(biāo)準(zhǔn)化整個研究過程應(yīng)當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化，以使得除制劑因

33、素外，其他各種因素導(dǎo)致的體內(nèi)藥物釋放吸收差異減少到最小，包括受試者的飲食、活動都應(yīng)控制。試驗(yàn)工作應(yīng)在I期臨床試驗(yàn)觀察室進(jìn)行。受試者應(yīng)得到醫(yī)護(hù)人員的監(jiān)護(hù)。受試期間發(fā)生的任何不良反應(yīng)，均應(yīng)及時處理和記錄，必要時停止試驗(yàn)。（三）數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析1.數(shù)據(jù)表達(dá)BA和BE研究必須提供所有受試者各個時間點(diǎn)受試制劑和參比制劑的藥物濃度測定數(shù)據(jù)、每一時間點(diǎn)的平均濃度（Mean）及其標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD），提供每個受試者的濃度時間曲線（C-T曲線）和平均C-T曲線以及C-T曲線各個時間點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)差。不能隨意剔除任何數(shù)據(jù)。脫落者的數(shù)據(jù)一般不可用其他數(shù)據(jù)替代。2.藥代動力學(xué)參數(shù)2.1 單次給藥的BA和B

34、E研究，提供所有受試者服用受試制劑和參比制劑的AUC0t，AUC0、Cmax、Tmax、t1/2、CL、Vd、F等參數(shù)及其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。Cmax和Tmax均以實(shí)測值表示。AUC0t以梯形法計算；AUC0按公式計算：AUC0AUC0tCt/z（t為最后一次可實(shí)測血藥濃度的采樣時間；Ct為末次可測定樣本藥物濃度；z系對數(shù)濃度-時間曲線末端直線部份求得的末端消除速率常數(shù)，可用對數(shù)濃度-時間曲線末端直線部分的斜率求得；t1/2用公式 t1/20.693z計算。以各個受試者受試制劑（T）和參比制劑（R）的AUC0t按下式分別計算其相對生物利用度（F）值：當(dāng)受試制劑和參比制劑劑量相同時：FAUCTAUC

35、R100受試制劑和參比制劑劑量不同時，若受試藥物具備線性藥代動力學(xué)特征，可按下式以劑量予以校正：F【AUCTDRAUCRDT】100（AUCT、AUCR 分別為T和R的AUC；DR、DT分別為T和R的劑量）。3.2.2 對于多次給藥的BA和BE研究，提供受試制劑和參比制劑的三次谷濃度數(shù)據(jù)（Cmin），達(dá)穩(wěn)態(tài)后的AUCss Css-max、Css-min 、T ss-max、t1/2、F、DF等參數(shù)。當(dāng)受試制劑與參比制劑劑量相等時，F(xiàn)值按下式計算：FAUCss TAUCss R100（式中AUCss T和AUCss R 分別為T和R穩(wěn)態(tài)條件下的AUC）3.統(tǒng)計分析3.1 對數(shù)轉(zhuǎn)換評價BE的藥代動

36、力學(xué)參數(shù)AUC0t和Cmax在進(jìn)行等效性檢驗(yàn)前必須作對數(shù)轉(zhuǎn)換。當(dāng)數(shù)據(jù)有偏倚時經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換可校正其對稱性。此外,統(tǒng)計中數(shù)據(jù)對比宜用比值法而不用差值法,通過對數(shù)轉(zhuǎn)換,可實(shí)現(xiàn)將均值之比置信區(qū)間轉(zhuǎn)換為對數(shù)形式的均值之差的計算。3.2 等效判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前普遍采用主要藥代參數(shù)經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后以多因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，然后用雙單側(cè)t檢驗(yàn)和計算90置信區(qū)間的統(tǒng)計分析方法來評價和判斷藥物間的生物等效性。方差檢驗(yàn)是顯著性檢驗(yàn)，設(shè)定的無效假設(shè)是兩藥無差異，檢驗(yàn)方式為是與否，在P0.05時認(rèn)為兩藥差異無統(tǒng)計意義，但P0.05并不能認(rèn)為兩者相等或相近。在生物利用度試驗(yàn)中，采用多因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行

37、統(tǒng)計分析，以判斷藥物制劑間、個體間、周期間和服藥順序間的差異。在生物等效性實(shí)驗(yàn)中，方差分析可提示誤差來源，為雙單側(cè)t檢驗(yàn)計算提供了誤差值（MSE）。雙單側(cè)t檢驗(yàn)及（12）%置信區(qū)間法是目前生物等效檢驗(yàn)的唯一標(biāo)準(zhǔn)。雙向單側(cè)t檢驗(yàn)是等效性檢驗(yàn)，設(shè)定的無效假設(shè)是兩藥不等效，受試制劑在參比制劑一定范圍之外，在P0.05時說明受試制劑沒有超過規(guī)定的參比制劑的高限和低限，拒絕無效假設(shè)，可認(rèn)為兩藥等效。（12）%置信區(qū)間是雙單側(cè)t檢驗(yàn)另一種表達(dá)方式。其基本原理是在高、低2個方向?qū)κ茉囍苿┑膮?shù)均值與高低界值之間的差異分別作單側(cè)t檢驗(yàn)，若受試制劑均數(shù)在高方向沒有大于等于參比制劑均數(shù)的125（P0.05），且在

38、低方向也沒有小于等于參比制劑均數(shù)的80（P0.05），即在兩個方向的單側(cè)t檢驗(yàn)，都能以95的置信區(qū)間確認(rèn)沒有超出規(guī)定范圍，則可認(rèn)為受試制劑與參比制劑生物等效。等效判斷標(biāo)準(zhǔn)，一般規(guī)定，經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后的受試制劑的 AUC0t在參比制劑的80125范圍，受試制劑的Cmax在參比制劑的80125范圍。根據(jù)雙單側(cè)檢驗(yàn)的統(tǒng)計量，同時求得（12）%置信區(qū)間，如在規(guī)定范圍內(nèi)，即可有12的概率判斷兩藥生物等效。如有必要時，應(yīng)對Tmax經(jīng)非參數(shù)法檢驗(yàn)，如無差異，可以認(rèn)定受試制劑與參比制劑生物等效。（四）結(jié)果評價生物等效性是指一種藥物的不同制劑在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，給予相同劑量，其吸收程度和吸收速度沒有明顯差異。故對受

39、試制劑與參比制劑的生物等效性評價，應(yīng)從藥物吸收程度和吸收速度兩方面進(jìn)行，評價反映這兩方面的3個藥代動力學(xué)參數(shù)即AUC0t、Cmax和Tmax是否符合前述等效標(biāo)準(zhǔn)。目前比較肯定AUC對藥物吸收程度的衡量作用，而Cmax、Tmax依賴取樣時間的安排，用它們衡量吸收速率有時是不夠準(zhǔn)確的，不適合用于具有多峰現(xiàn)象的制劑及個體變異大的實(shí)驗(yàn)。故在評價時，若出現(xiàn)某些不等效特殊情況，需具體問題加以具體分析。對于 AUC，一般要求90可信區(qū)間在80125范圍內(nèi)。對于治療窗窄的藥物，這個范圍可能應(yīng)適當(dāng)縮小，而在極少數(shù)情況下，如果經(jīng)臨床證實(shí)合理的情況下，也可以適當(dāng)放寬范圍。對 Cmax也是如此。而對于Tmax，一般在

40、釋放快慢與臨床療效和安全性密切相關(guān)時需要統(tǒng)計評價，其等效范圍可根據(jù)臨床要求來確定。對于出現(xiàn)受試制劑生物利用度高于參比制劑的情況，即所謂超生物利用，可以考慮兩種情況：1）參比制劑是否本身生物利用度低的產(chǎn)品，因而受試制劑表現(xiàn)出生物利用度相對較高；2）參比制劑質(zhì)量符合要求，受試制劑確實(shí)超生物利用度。結(jié)果的評價應(yīng)結(jié)合研究目的出發(fā)，進(jìn)行生物等效性評價的目的提供兩制劑可替換使用的依據(jù)；進(jìn)行生物利用度研究，則主要分析獲得的相對生物利用度數(shù)值進(jìn)一步指導(dǎo)確定新劑型的臨床使用劑量。（五）BE研究報告內(nèi)容為了滿足評價的需求，一份生物等效性研究臨床報告內(nèi)容至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?；?）生物樣本分析方法的建

41、立和考察的數(shù)據(jù)，提供必要的圖譜；（3）詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計和操作方法，包括全部受試者的資料、樣本例數(shù)、參比制劑、給藥劑量、服藥方法和采樣時間安排；（4）原始測定未知樣品濃度全部數(shù)據(jù)，每個受試者藥代參數(shù)和藥時曲線；（5）采用的數(shù)據(jù)處理程序和統(tǒng)計分析方法以及詳細(xì)統(tǒng)計過程和結(jié)果；（6）服藥后的臨床不良反應(yīng)觀察結(jié)果，受試者中途退出和脫落記錄及原因；（7）生物利用度或生物等效性結(jié)果分析以及討論；（8）參考文獻(xiàn)。正文前應(yīng)有簡短摘要；正文末，應(yīng)注明實(shí)驗(yàn)單位、研究負(fù)責(zé)人、參加實(shí)驗(yàn)人員，并簽名蓋章，以示對研究結(jié)果負(fù)責(zé)。五、復(fù)方制劑對復(fù)方化學(xué)藥品制劑生物等效性研究，一般情況下某一成分的體內(nèi)行為不能說明其他成分的體內(nèi)行為

42、，故原則上應(yīng)證實(shí)每一個有效成分的生物等效性。試驗(yàn)設(shè)計時應(yīng)盡量兼顧各個成分的特點(diǎn)。六、結(jié)語生物利用度和生物等效性研究只是作為一個驗(yàn)證制劑質(zhì)量的方法學(xué)手段。受試制劑能否達(dá)到預(yù)期的生物利用度，受試制劑是否能達(dá)到與原研制劑或其他已經(jīng)過臨床試驗(yàn)證明了安全與有效藥物的生物等效，都應(yīng)該從最開始的處方篩選、生產(chǎn)工藝條件以及質(zhì)量研究等方面著手，盡可能分析原研制劑或參比制劑的有關(guān)文獻(xiàn)，以實(shí)現(xiàn)研究目的。七、名詞解釋介質(zhì)效應(yīng):由于樣品中存在干擾物質(zhì),對響應(yīng)造成的直接或間接的影響。標(biāo)準(zhǔn)樣品(StandardSample)：在生物介質(zhì)中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算質(zhì)控樣品和未知樣品中分析物濃度。質(zhì)控

43、樣品（Quality Control Sample）：質(zhì)控樣品系將已知量的待測藥物加入到生物介質(zhì)中配制的樣品，用于監(jiān)測生物分析方法的效能和評價每一分析批中未知樣品分析結(jié)果的完整性和正確性。一般配制高、中、低三個濃度的質(zhì)控樣品。分析批（Analytical run/batch）：包括待測樣品、適當(dāng)數(shù)目的標(biāo)準(zhǔn)樣品和質(zhì)控樣品的完整系列。由于儀器性能的改善和自動進(jìn)樣器的使用，一天內(nèi)可以完成幾個分析批，一個分析批也可以持續(xù)幾天完成，但連續(xù)測量不宜超過3天。高溶解度（Highly soluble）：若藥物的最大劑量能溶解在 250ml 或更少的pH1-7.5的水溶液中，此藥物可被認(rèn)為是高溶解度的藥物。250 ml的量來源于標(biāo)準(zhǔn)的生物等效性研究中受試者用于服藥的一杯水的量。高滲透性（Highly permeable）：滲透性的分類標(biāo)準(zhǔn)以藥物在人體內(nèi)的吸收程度（吸收劑量的分?jǐn)?shù)，而不是系統(tǒng)生物利用度）為間接依據(jù)，以測定通透人體腸壁膜的量為直接依據(jù)。也可以選用能充分描述人體內(nèi)的吸收程度（如體外上皮組織細(xì)胞培養(yǎng)法）的非人體