濾膜過濾法MF過濾法

1、濾膜過濾法 (MF 過濾法 )一、 目的：學(xué)習(xí)如何使用濾膜法檢驗(yàn)水樣中的大腸菌類的菌類數(shù)，用培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸菌類，利用大腸菌類所形成的綠色金屬光澤進(jìn)行計(jì)數(shù)。二、 原理：將水樣經(jīng)由抽氣幫浦真空抽氣，通過無菌濾膜，大腸菌類因此無法通過濾膜，置留在濾膜上，接著放入M-Endo agar培養(yǎng)基中，放入37恆溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24 小時(shí)。培養(yǎng)過程中，大腸菌類會(huì)分解乳糖，產(chǎn)生氣體和醛類，醛類會(huì)和培養(yǎng)基中的鹼性洋紅染料結(jié)合，產(chǎn)生在陽光反射下出現(xiàn)的綠色金屬光澤，依據(jù)這個(gè)來計(jì)算大腸菌類的數(shù)目。三、 過程方法：1. 取一錐形瓶放入 1.53g M-Endo加上 100ml 二段水加上 0.6ml 酒精，再放上電磁加熱

2、攪拌器，加熱至煮沸。過一下子，稍微冷卻後，用隔熱手套把培養(yǎng)液分裝成 6 個(gè)培養(yǎng)基，放置凝固冷卻。3. 利用隔壁實(shí)驗(yàn)室的抽氣幫浦真空抽氣過濾，總共做 6 個(gè) 1010-5 的無菌濾膜，過濾完之後，放上培養(yǎng)皿中，再放入 37恆溫培養(yǎng)箱中，等24 小時(shí)候，進(jìn)行觀察。四、 材料： 1.器材：三角錐瓶、塑膠培養(yǎng)皿、無菌濾膜、鑷子、塑膠滴管、定量玻璃吸管、吸球、量筒、隔熱手套、稱藥杓、稱藥紙。2.儀器： 37恆溫培養(yǎng)箱、電磁加熱攪拌器、電子分析天平、過濾抽氣裝置。五、 結(jié)果：所選取之大腸桿菌群菌數(shù)落1001100大腸桿菌密度 (CFU/100ml)所有選曲之過濾水樣之體積 (ml)100 1(CFU/10

3、0ml1010-110-210-310-410-5-問題 -1. 比較同一樣品以濾膜法、多管醱酵法二種實(shí)驗(yàn)方法所記錄整理出來的數(shù)據(jù)，並參四法規(guī) (參考附錄四 )所定之標(biāo)準(zhǔn)，是否樣品超過標(biāo)準(zhǔn)及受到大桿腸菌之污染？請(qǐng)進(jìn)行合理的解釋和討論。Ans：兩次實(shí)驗(yàn)用的樣品不同，所以無法評(píng)斷。2. 請(qǐng)?jiān)囀鰹V膜法與多管醱酵法之間之異同及優(yōu)缺點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)機(jī)使用使用時(shí)間配置經(jīng)費(fèi)水樣多管四天複雜多較少發(fā)酵濾膜短時(shí)簡單少較多法間3.試述多管醱酵法與濾膜法中所使用的LST、 BGLB、EMB 培養(yǎng)皿、 M-Endo培養(yǎng)基 (液 )之特性，並說明其主要用途為何？Ans：特性用途LST水樣中如果有大腸菌類會(huì)以 LST 培養(yǎng)基

4、裡面的 工業(yè)廢水、市鎮(zhèn)廢乳糖作為碳源產(chǎn)生氣體，為陽性反應(yīng)。其他無水、污水處理場(chǎng)放法利用者，則是受到抑制，無法生長。 LST 培 流水、以污染嚴(yán)重養(yǎng)基中含有膽鹽作為表面張力的抑制劑，可以之水樣、處理厰各抑制大腸菌類以外的菌種生長。操作單元之水樣。BGLB是一種選擇性的培養(yǎng)基，成分除了含有乳糖之過去紀(jì)錄顯示推定外，添加煌綠和膽汁可抑制革蘭氏陽性 (G+)及 試驗(yàn)不合要求之水生成胞子的微生物生長，以 BGLB 培養(yǎng)基培養(yǎng) 樣、例行檢驗(yàn)飲用將可以使大腸菌類大量增殖。水、水廠配水、各處理階段之水樣、污水廠中加氯消毒處理之待放流水、浴用水。EMB可抑制革蘭氏陽性菌生長，並於酸性環(huán)境中沉原水或配水之水質(zhì)培養(yǎng)

5、皿澱於大腸菌菌落上，形成墨綠色金屬光澤，用控制、決定給水是此一特殊的生理特性來鑑別大腸菌類，再利用否合乎安全。革蘭氏染色進(jìn)行染色、 LST 培養(yǎng)基確認(rèn)是否產(chǎn)氣。M-Endo 大腸菌類會(huì)分解乳糖，產(chǎn)生氣體和醛類，醛類 實(shí)驗(yàn)中來判定是否培養(yǎng)基 會(huì)和培養(yǎng)基中的鹼性洋紅染料結(jié)合，產(chǎn)生在陽 有大腸菌類。光反射下出現(xiàn)的綠色金屬光澤，依據(jù)這個(gè)來計(jì)算大腸菌類的數(shù)目。4. 試問濾膜之操作流程？其實(shí)驗(yàn)結(jié)果如何決定待測(cè)水樣中是否有大腸菌類？Ans：一 .1. 取一錐形瓶放入 1.53g M-Endo加上 100ml 二段水加上 0.6ml 酒精，再放上電磁加熱攪拌器，加熱至煮沸。過一下子，稍微冷卻後，用隔熱手套把培

6、養(yǎng)液分裝成 6 個(gè)培養(yǎng)基，放置凝固冷卻。3. 利用隔壁實(shí)驗(yàn)室的抽氣幫浦真空抽氣過濾，總共做6 個(gè) 10-110-3 的無菌濾膜，過濾完之後，放上培養(yǎng)皿中，再放入37恆溫培養(yǎng)箱中，等24 小時(shí)候，進(jìn)行觀察。二 . 大腸菌類會(huì)分解乳糖，產(chǎn)生氣體和醛類，醛類會(huì)和培養(yǎng)基中的鹼性洋紅染料結(jié)合，產(chǎn)生在陽光反射下出現(xiàn)的綠色金屬光澤，依據(jù)這個(gè)來計(jì)算大腸菌類的數(shù)目。5. 心得；4970N082 劉耿誌這次的實(shí)驗(yàn)濾膜法 (MF 試驗(yàn)法 )，做起來感覺比較簡單，可是在攪拌器上煮沸，是比較危險(xiǎn)拉，一不小心就會(huì)被燙傷，所以要戴防熱手套，菌落真的好微小，算到眼睛都要脫窗了。4970N091 黃冠勳 這次實(shí)驗(yàn)比上次順利多了有同學(xué)可以請(qǐng)教可能也是一大因素實(shí)驗(yàn)中有一個(gè)步驟需要用濾紙，真是讓我緊張萬分，因?yàn)槲冶緛砭陀惺侄兜睦厦?，操作的時(shí)候真的深怕把濾紙弄破。實(shí)驗(yàn)報(bào)告需要我們算菌落數(shù)，一大堆小點(diǎn)算到眼睛都脫臼而且?guī)缀趺看嗡愠鰜淼慕Y(jié)果都有些微不同，只好取個(gè)大約了。4970N033 王致程這次的實(shí)驗(yàn)感覺比較容易上手，實(shí)驗(yàn)步驟也比較簡單，要注意那沸騰的時(shí)間真的很刺激，一瞬間就要拿起來，不然會(huì)很危險(xiǎn)，專