HPLC法測(cè)定人血漿中舒必利濃度及其人體藥動(dòng)學(xué)和相對(duì)生物利用

1、4!壁墊堂盤查墊豎±苧!蘭查苧!塑.&堅(jiān)翌生垡墜墮墊鯉!墜些磐!z蘭堂!:!蘭!型!:!HPLC法測(cè)定人血漿中舒必利濃度及其人體藥動(dòng)學(xué)和相對(duì)生物利用度研究袁洞君,陽利龍,祝文兵,何周康(湖南省兒童醫(yī)院,湖南長(zhǎng)沙41000r7摘要目的:建立HPLc法測(cè)定人血漿中舒必利濃度,并研究其藥動(dòng)學(xué)及相對(duì)生物利用度。方法:采用固相萃取HPLc法,以甲氧氯普胺為內(nèi)標(biāo),乙腈:5mm洲L磷酸二氫鉀溶液(45:55,V,V為流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng):xex244nm,em280nm。18名受試者隨機(jī)分成兩組,采用雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì),以HPLc法測(cè)定血藥濃度,計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)并進(jìn)行方差分析,以雙單側(cè)t檢驗(yàn)進(jìn)行

2、生物等效性判定。結(jié)果:舒必利血漿濃度在6.761689.6I耐mL范圍內(nèi)樣品濃度與峰面積比之間線性關(guān)系良好,回歸方程為Y=O.00289079x+ 0.00247349(r=0.9998,n=9,方法回收率90%一“O%,日內(nèi)日間RSD<5%。18名男性健康志愿者單劑量口服100mg受試制劑或參比刺荊后AuCo_.M分別為(3996.O±579.5ng.hIllL一和(3939.6±469.7nghmL,AuCo.。分別為(4715.5±753.2 nghmL“和(4629.7±773.2ng.hmL一,T舭分別為(3.3±0.8h和(2

3、.7±1.Oh,C一分別為(362.9±118.7ngmL“和(358.9±98.9ngmL-。,t。,2分別為(10.3±3.8h和(9.7±4.1h。受試制劑對(duì)參比制劑的相對(duì)生物利用度為101.9%±13.7%。結(jié)論:HPLc 法能快速、準(zhǔn)確的測(cè)定人血漿中的舒必利濃度;受試制劑與參比制劑具有生物等效性。關(guān)鍵詞舒必利;高效液相色譜法;藥動(dòng)學(xué);生物利用度中圖分類號(hào)R969.1;R971.41文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A【文章編號(hào)1672108×(200603一0004一03HPLC deternli眥廿on of吼npide in h硼伯n

4、 pl淞瑚and its phammcol【i恥廿c,and rela廿ve biVailabiH鑼YUAN Dong-jun,YANG Li-10ng,ZHU Wen.bing,et al(劬i脅帆s月卻扛耐礦mn PrDtdMe,肌啪凡c地,垮k410007,劬訛 Abstractobjec蜢ve:ro detemine sIllpiri如in human pla8ma with tIIe me山od of HPLC,and study its ph咖acokinetics,relative bioavailability. Metllod:A solidphaextmction aIld

5、 reversed-phe hjgh pedb瑚ance liquid chrom砒ogmphy me出od was ud,and metoclop隨mide was applied as inteHIal standard,mobile ph鶴e w鵲set8setonitril肌d5咖01,L K心P04(45:55,V,V,and wavelengtIl,xex244姍,km280nm.Eighteen volunteers were瑚doIIlized into twogIoups.Group one6瑪t received山e trial preparation sIllpiride

6、 tablets,alld tllen w鵲followedwith t11e ref-erence prep眥tion.Group two received the reference prep啪tion6rst,and w踮fbuowed wi山the trial prep啪tion.Pla鋤a concentration of slllpiride w髂measu陀d by HPLc metIIod.ANOVA was used to check山e di玨brerIceof tlle ph鋤acokinetic par鋤eters between the two preP眥tions.

7、Bioeqllivalence was detenined by two one.sidedt.tests.Re砌ts:ne standard curves were linear within the r肌ge6.761689.6ngmL叫for sIllpiride in pl鵲ma,the regression eqIlation was A,AIs=O.002890r79x Conc.+O.00247349(r=O.9998,n=9.弧e recovery aVeraged between90%一110%.ne mearI interand in噸ssaycoemcien協(xié)vari8t

8、ion懈1e髓tIlan5%.ne ph刪cokinetic p鋤meters,AUCo斗36, AUC0_.。,Ik,C曲。and t1,2of the volumeers after taking a sinde dose of100mg of山e trial preparation or the comparison preparation were (3996.0±579.5nghmL一1&(3939.6±469.7nghmL一1,(4715.5±753.2nghmL。1&(4629.7±773.2nghmL一1,(3.3

9、7;O.8h&(2.7±1.0h,(362.9±118.7ngmLand(358.9±98.9ngmL,(10.3±3.8h&(9.7±4.1h,respectiVely.ne rel撕ve bioavailability was101.9%±13.7%.C伽cllls置。璐:-nle methods c8n dete硼ine sulpiride in the hu姍plas眥qIlicl【ly and corTecy and the two prep啪tions arequivalent.Key wor凼sIllpi

10、ride;High pe面mance liqIlid chmmatq曠aphy;Ph明nacokinetic;Bioavailability舒必利為苯甲酰胺類抗精神病藥物,是特異性多巴胺D,受體拮抗劑,具有與氯丙嗪相似的抗精神病效應(yīng),同時(shí)能止吐并抑制胃液分泌,臨床主要用于精神分裂癥的系統(tǒng)治療,頑固性惡心、嘔吐的對(duì)癥治療,也可用于胃及十二指腸潰瘍、眩暈、偏頭痛等o¨。舒必利現(xiàn)有規(guī)格一般為100嘴或200mg片劑,為了臨床用藥方便,特別是小兒用藥的方便,雅柏藥業(yè)(中國(guó)有限公司開發(fā)了舒必利50嘴膠囊劑。本研究比較了該公司的舒必利膠囊與國(guó)外已上市膠囊在健康人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)和相對(duì)生物利用度,對(duì)兩

11、種制劑進(jìn)行了生物等效性評(píng)價(jià),為新劑型申請(qǐng)注冊(cè)和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。1材料1.1藥品與試劑受試制劑舒必利膠囊(50IIlg,片,雅柏藥業(yè)中國(guó)有限公司,批號(hào):T一407503,T,參比制劑舒必利膠囊(商品名DOGMATIr,50mg/粒,Labomtoires Symhelabo, Syntllelabo Gmupe,批號(hào):xMu068,R,舒必利標(biāo)準(zhǔn)品(雅柏藥業(yè)中國(guó)有限公司,含量98.4%,批號(hào):Rw萬方數(shù)據(jù)0506060,內(nèi)標(biāo)甲氧氯普胺由甲氧氯普胺片劑(長(zhǎng)春達(dá)興藥業(yè)有限公司提取,經(jīng)HPLC歸一化法測(cè)定含量達(dá)99.5%。乙腈、甲醇為色譜純,磷酸二氫鉀為分析純,水為二重蒸餾水,其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純

12、(AR級(jí)。1.2研究對(duì)象受試者均為健康男性,年齡(22.5±1.3歲,體重(62.7±4.7kg,身高(172.7±4.1cm,無煙酒嗜好,試驗(yàn)前經(jīng)詢問病史、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查未發(fā)現(xiàn)異常。受試者無藥物過敏史和藥物依賴史,元慢性病史,2周內(nèi)未服用任何藥物。受試期間統(tǒng)一清淡飲食,不使用除試驗(yàn)藥物以外的任何藥物,不接受煙、酒及含咖啡因的飲料,受試者試驗(yàn)前簽署知情同意書,并經(jīng)倫理委員會(huì)審批同意。1.3主要儀器Agilent1100HPLc,配備FLD檢測(cè)器,che麟tation 工作站(美國(guó)安捷倫公司;TGL16一w微量高速冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司;WH一

13、2微量旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠;BEsEP12管固相萃取裝置(Supelco company,美國(guó)。固相萃取柱: Cleanert ODSsPE1mL(北京艾杰爾科技有限公司。2人血漿中舒必利濃度測(cè)定方法2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取舒必利標(biāo)準(zhǔn)品19.8IIlg置于25mL容量瓶中,用50%甲醇溶解并定容至刻度,得舒必利濃度為792肛g/mL的對(duì)照品貯備液。分別取該溶液適量,加甲醇稀釋,得濃度為63.36扯g/mL、12.67肛g/n1L、2.53肛mL的舒必利標(biāo)準(zhǔn)液,置4冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｓ眉状寂渲?0弘g/mL甲氧氯普胺標(biāo)準(zhǔn)液作為內(nèi)標(biāo)。2.2色譜條件色譜柱:依利特Hypersil cN柱

14、(4.6mm×200mm, 5“m;柱溫:40;流動(dòng)相:乙腈:5船nol/L磷酸二氫鉀溶液(45:55,V,V;流速:1.0mL,IIlin;檢測(cè)波長(zhǎng):入ex 244nm。入em280nm。2.3樣品處理精密吸取0.75mL血漿,置2mL離心管中,加入10血甲氧氯普胺內(nèi)標(biāo)溶液,旋渦混勻,血漿上柱(萃取小柱經(jīng)2mL甲醇和2mL水處理,待血漿全部通過小柱后先用l mL水洗脫,棄去洗脫液,然后用2mL甲醇洗脫,甲醇洗脫液于55水浴氮?dú)獯蹈?殘?jiān)眉状?00肛L溶解,3000r/IIlin離心5IIlin,取上清液20燦進(jìn)樣。記錄色譜圖,以內(nèi)標(biāo)法(峰面積比定量。2.4色譜行為空白血漿、舒必利

15、和內(nèi)標(biāo)對(duì)照品溶液、空白血漿+舒必利和內(nèi)標(biāo)對(duì)照品溶液以及志愿者服藥后血漿樣品色譜圖見圖1。由圖可見,在上述色譜條件下,舒必利5的保留時(shí)間約為7.9戚n,內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間約為11.3 rnin,血漿中內(nèi)源性物質(zhì)及其它雜質(zhì)不干擾樣品的分離測(cè)定。2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線用空白血漿將舒必利標(biāo)準(zhǔn)液稀釋成6.76、13.51、27.03、54.06、101.36、202.72、422.4、844.8、l689.6ng/lllL 系列濃度的血漿樣品,按樣品處理方法處理并測(cè)定,以舒必利和內(nèi)標(biāo)峰面積比定量,得濃度與峰面積比的回歸方程為:Y=0.00289079X+0.00247349(r=0.9998,線性范圍6.76168

16、9.6ng,IIlL。2.6回收率與精密度試驗(yàn)用空白血漿配制相當(dāng)于舒必利濃度為27.O、220.7、844.8nmL的血樣,每個(gè)濃度取5份按上法平行操作,得回收率及日內(nèi)RSD;每天取上述血樣各5份連續(xù)測(cè)定3日,得日間RSD。結(jié)果見表1。表1方法回收率及精密度3藥動(dòng)學(xué)及生物利用度試驗(yàn)3.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法采用雙周期雙交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì),18名志愿者隨機(jī)分成兩組,第1組先服用受試制劑,后服用參比制劑,第2組先服用參比制劑,后服用受試制劑。周期間清洗期14d。志愿者禁食12h后,于清晨頓服舒必利100 mg(受試制劑或參比制劑2粒,于服藥前和服藥后O.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3、4、6、8、1

17、2、24、36h抽取靜脈血各3mL。2周后交叉服藥,同時(shí)間點(diǎn)取血,血樣置含有肝素的離心管中,立即離心,分離出血漿,置一20冰箱中保存至測(cè)定。3.2數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析T眥、c均用實(shí)測(cè)值;AuCp,。以梯形面積法求得;T TrTF=等祟竽×100%;末端消除速率常數(shù)p用對(duì)數(shù)血藥ULO一36濃度一時(shí)間曲線末端直線部分的斜率求得;t。,:= 0.693/B;AuC一。=AUCp36+C36/p。AUc歸36和C。經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行藥物間、周期間、個(gè)體間的三因素方差分析,再以雙單側(cè)f檢驗(yàn)進(jìn)行等效性判斷。T。經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析。3.3藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果18名志愿者單劑量口服用兩種舒必利膠囊1

18、00 mg后的平均血藥濃度一時(shí)間曲線見圖2,主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。萬方數(shù)據(jù)6ALuB 10岫5C D A.空白血樣B.對(duì)照品c.空白血樣+對(duì)照品D.志愿者血樣圖1HPLc色譜圖(1一舒必利2一內(nèi)標(biāo)D5lO15202530圖2平均血藥濃度一時(shí)間曲線表2兩種舒必利膠囊的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)(露±s3.4相對(duì)生物利用度結(jié)果受試制劑相對(duì)參比制劑的相對(duì)生物利用度為1叭.9%±13.7%,方差分析結(jié)果表明受試制劑和參比制劑的各主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(尸>0.05。雙單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果表明,受試制劑AUC。鉑對(duì)數(shù)值的90%可信限落在參比制劑94.5%。108.4%之間,受試制劑c一對(duì)數(shù)值的90%可信限落在參比制劑89.7%一118.9%之間,可認(rèn)為受試制劑與參比制劑為生物等效制劑。4討論本研究建立的血漿中舒必利HPLc測(cè)定方法,較文獻(xiàn)方法阻31有較大改進(jìn),將血漿樣品用固相萃取方法處理,得到的樣品非常干凈,色譜圖無干擾,且回收率較高,可用于舒必利的藥動(dòng)學(xué)和生物利用度研究。本品口服吸收約3h達(dá)到血藥濃度峰值,平均tm(8約為10h,與文獻(xiàn)報(bào)道相似。舒必利藥動(dòng)學(xué)及生物利用度研究文獻(xiàn)報(bào)道很少,本組比較研究了舒必利受試制劑和參比制劑在健康受試者體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征,各主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)之間沒有顯著差異,說明受試制劑與參比制劑