高中生物《第五章_第三節(jié)_血紅蛋白的提取和分離》課件6_新人教版選修1

1、 體驗(yàn)從復(fù)雜體系中提取生物大分子的基本過程和方法，并體驗(yàn)從復(fù)雜體系中提取生物大分子的基本過程和方法，并了解色譜法、電泳法等分離生物大分子的基本原理。了解色譜法、電泳法等分離生物大分子的基本原理。凝膠色譜法凝膠色譜法 電泳法電泳法 緩沖溶液緩沖溶液 它們在它們在血紅蛋白的提取中分別起到什么作用。血紅蛋白的提取中分別起到什么作用。 凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理 電泳法分離樣品的原理電泳法分離樣品的原理 緩沖溶液的組成和作用機(jī)理緩沖溶液的組成和作用機(jī)理凝膠色譜法的原理和方法凝膠色譜法的原理和方法 樣品的處理樣品的處理 色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填。色譜柱填料的處理和色譜柱的

2、裝填。1. 1.分離生物大分子的基本思路：分離生物大分子的基本思路： 選用一定的選用一定的物理或化學(xué)物理或化學(xué)的方法分離具有不同物的方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子生物大分子。2. 2.蛋白質(zhì)分離和提取的原理：蛋白質(zhì)分離和提取的原理： 根據(jù)蛋白質(zhì)根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性各種特性的差異，如的差異，如分子的形狀和分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)和對其他分子的親和力和對其他分子的親和力等等，可以用來分離等等，可以用來分離不同種不同種類的蛋白質(zhì)。類的蛋白質(zhì)。 一、血紅蛋白的提取和分離一、血紅蛋白的提取和分離3 3、提

3、取分離方法、提取分離方法凝膠色譜法凝膠色譜法 凝膠電泳法凝膠電泳法 （一）（一） 凝膠色譜法（凝膠色譜法（分配色譜法分配色譜法）2. 2.凝膠：凝膠： 大多數(shù)凝膠是由大多數(shù)凝膠是由多糖類化合物多糖類化合物（如葡聚糖或瓊（如葡聚糖或瓊脂糖）構(gòu)成的多孔小球體脂糖）構(gòu)成的多孔小球體，內(nèi)部有許多貫穿的內(nèi)部有許多貫穿的通道。通道。 根據(jù)被分離物質(zhì)的根據(jù)被分離物質(zhì)的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的大小，的大小，利用具有利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，來進(jìn)行的凝膠，來進(jìn)行分離。分離。1. 1.概念：概念：3.3.凝膠色譜法的原理凝膠色譜法的原理當(dāng)相對分子量不同的蛋白質(zhì)通過凝膠時(shí)，當(dāng)相對分子量不同的蛋白

4、質(zhì)通過凝膠時(shí)，相對相對分子量較小的蛋白質(zhì)分子量較小的蛋白質(zhì)容易容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長，移動速度較慢路程較長，移動速度較慢; ;相對分子量相對分子量較大較大的蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快。度較快。依據(jù)的特性是：依據(jù)的特性是：蛋白質(zhì)分子量的大小。蛋白質(zhì)分子量的大小。分離蛋白質(zhì)分離蛋白質(zhì)（二）緩沖溶液（二）緩沖溶液 1.1.概念概念: : 在一定的范圍內(nèi)，凡是能夠抵制在一定的范圍內(nèi)，凡是能夠抵制外加少量強(qiáng)外加少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿酸或強(qiáng)堿的影響使原來溶液的影響使原來溶

5、液PHPH值基本保持值基本保持不變的混不變的混合溶液。合溶液。 能夠抵制外界的酸和堿對溶液能夠抵制外界的酸和堿對溶液PHPH值的影響，值的影響，維持維持PHPH基本不變?；静蛔?。2.2.作用作用: : 思考：說出人體血液中緩沖對。思考：說出人體血液中緩沖對。 NaHNaH2 2POPO4 4/Na/Na2 2HPOHPO4 4H H2 2COCO3 3/NaHCO/NaHCO3 3 通常由通常由1 12 2 種緩沖劑種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的緩沖劑的使用比例使用比例就可以制得在就可以制得在不同不同PHPH范圍內(nèi)使用的范圍內(nèi)使用的緩沖液。緩沖液。 4.4.

6、提問：在本課題中使用的緩沖液是提問：在本課題中使用的緩沖液是:_ ,:_ , 利用緩沖液利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的模擬細(xì)胞內(nèi)的PHPH環(huán)境環(huán)境，保證，保證 血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察，便于觀察( (紅色紅色) )和科和科 學(xué)研究學(xué)研究( (活性活性) )磷酸緩沖液磷酸緩沖液3.3.緩沖溶液的配制緩沖溶液的配制: :其目的是其目的是:帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在有可解離的基團(tuán)，在一定的一定的PHPH下，這些基團(tuán)會帶下，這些基團(tuán)會

7、帶上正上正 電或負(fù)電。電或負(fù)電。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷帶電荷相反相反的電極移動。的電極移動。分離樣品中各種分子分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同本身的大小，形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。影響蛋白質(zhì)分子運(yùn)動速度的因素影響蛋白質(zhì)分子運(yùn)動速度的因素決定決定運(yùn)動方向運(yùn)動方向形成形成庫侖力庫侖力形成形成阻力阻力決定決定運(yùn)動速率運(yùn)動速率電荷性質(zhì)電荷性質(zhì)電荷量電荷量分子形狀分子形狀分子大小分子

8、大小瓊脂糖瓊脂糖凝膠電泳、凝膠電泳、聚丙稀酰胺聚丙稀酰胺凝膠電泳。凝膠電泳。 1 1、測定蛋白質(zhì)分子量、測定蛋白質(zhì)分子量: :常用常用十二烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉（SDSSDS）聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺凝膠電泳。凝膠電泳。 聚丙烯酰胺凝膠是由聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺單體丙烯酰胺和和交聯(lián)劑交聯(lián)劑N,N-N,N-亞甲基雙丙烯酰胺亞甲基雙丙烯酰胺在在引發(fā)劑引發(fā)劑和和催化劑催化劑的作用下聚合交聯(lián)的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。N,N-亞甲基雙丙烯酰胺（形成交聯(lián)）亞甲基雙丙烯酰胺（形成交聯(lián)）丙烯酰胺和交聯(lián)劑丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反應(yīng)亞

9、甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反應(yīng) 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率遷移率取決取決于它所帶于它所帶凈電荷的多少凈電荷的多少以及以及分子的大小分子的大小等因素。等因素。2. 2.原理：原理： SDSSDS能使能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。解聚成單條蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。解聚成單條肽鏈肽鏈，因此測定的結(jié)果只是，因此測定的結(jié)果只是單條肽鏈的分子量單條肽鏈的分子量。SDSSDS能與各種蛋白質(zhì)形成能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)SDSSDS復(fù)合物復(fù)合物，SDSSDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子原有原有的電荷量的電荷量。因而。因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷

10、差掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，別，使使電泳遷移率完全取決于分子的大小電泳遷移率完全取決于分子的大小。3. SDS3. SDS作用機(jī)理作用機(jī)理: :用用SDSSDS測定蛋白質(zhì)分子量的方法測定蛋白質(zhì)分子量的方法 使用使用SDSSDS聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳測定蛋測定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組已知分子量已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時(shí)進(jìn)行電泳，根據(jù)已知分子同時(shí)進(jìn)行電泳，根據(jù)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置電泳區(qū)帶位置，可以測定，可以測定未知蛋白質(zhì)未知蛋白質(zhì)的分子量。的分子量。市場上有高分子量、市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋

11、白試劑出次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。售。 二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作樣品處理樣品處理粗分離粗分離純化純化純度鑒定純度鑒定1.1.樣品處理：樣品處理：（一）蛋白質(zhì)提取和分離步驟（一）蛋白質(zhì)提取和分離步驟（二）操作過程（二）操作過程 可選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液來可選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液來分離血紅蛋白。分離血紅蛋白。血血液液血漿血漿水水 分分固體物質(zhì)：固體物質(zhì)：血漿蛋白、血漿蛋白、無機(jī)鹽、磷脂、葡萄糖等無機(jī)鹽、磷脂、葡萄糖等血細(xì)胞血細(xì)胞白細(xì)胞白細(xì)胞血小板血小板紅細(xì)胞紅細(xì)胞（最多）（最多）血紅蛋白血紅蛋白（9090）兩個(gè)兩個(gè)肽鏈肽鏈兩個(gè)兩個(gè)一肽鏈一肽鏈四個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)

12、四個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)2.提問：提問：血液有哪些成分？血液有哪些成分？ 1. 1.提問：提問：用雞的紅細(xì)胞提取用雞的紅細(xì)胞提取DNADNA，用豬、牛、羊的，用豬、牛、羊的紅細(xì)胞提取血紅蛋白的原因是什么？紅細(xì)胞提取血紅蛋白的原因是什么？ 雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有DNADNA，便于進(jìn)行，便于進(jìn)行DNADNA的提??；人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡單，血紅蛋的提??；人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡單，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。白含量豐富，便于提取血紅蛋白。血紅蛋白血紅蛋白兩個(gè)兩個(gè)肽鏈肽鏈兩個(gè)兩個(gè)一肽鏈一肽鏈四個(gè)亞鐵四個(gè)亞鐵血血紅素基團(tuán)紅素基團(tuán)每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè)每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵

13、血紅素基團(tuán)，亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶此基團(tuán)可攜帶一分子一分子O2或一分子或一分子CO2，血紅蛋白因含有血紅蛋白因含有血紅素血紅素而而呈呈紅色紅色。血紅蛋白的特點(diǎn)：血紅蛋白的特點(diǎn)：(1)(1)紅細(xì)胞的洗滌紅細(xì)胞的洗滌: :去除雜質(zhì)蛋白，利于后續(xù)血紅蛋白的分離純化去除雜質(zhì)蛋白，利于后續(xù)血紅蛋白的分離純化. .1 1、采集血樣、采集血樣2 2、低速短時(shí)間離心、低速短時(shí)間離心（速度越高和時(shí)間越長，會使白細(xì)（速度越高和時(shí)間越長，會使白細(xì) 胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果）胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果）3 3、吸取血漿：、吸取血漿：上層透明的黃色血漿。上層透明的黃色血漿。4 4、鹽水洗滌：、鹽水洗滌：

14、下層暗紅色的紅細(xì)胞下層暗紅色的紅細(xì)胞+ +五倍體積的五倍體積的0.90.9 的的NaClNaCl溶液洗滌，攪拌溶液洗滌，攪拌10min10min5 5、低速、低速短時(shí)間短時(shí)間離心：離心：6 6、重復(fù)、重復(fù)3 3、4 4、5 5步驟三次步驟三次 上清液中已沒有黃色：紅細(xì)胞洗滌干凈。上清液中已沒有黃色：紅細(xì)胞洗滌干凈。目的目的: :操作：操作：洗滌次數(shù)過少洗滌次數(shù)過少,無法除去血漿蛋白。無法除去血漿蛋白。加蒸餾水到加蒸餾水到原血液體積原血液體積，加加40體積的甲苯體積的甲苯（溶解細(xì)胞膜）（溶解細(xì)胞膜）置于置于磁力攪拌器磁力攪拌器攪拌攪拌10min（加速細(xì)胞破裂）（加速細(xì)胞破裂）紅細(xì)胞破裂，釋放出血

15、紅蛋白紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白(3)(3)分離血紅蛋白溶液：分離血紅蛋白溶液：過程過程：將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min2000r/min的速的速度度離心離心10 min10 min。試管中溶液層次：試管中溶液層次：第第1層（最上層）：層（最上層）：甲苯層甲苯層（無色透明）；（無色透明）；第第2層（中上層）：層（中上層）：脂溶性物質(zhì)沉淀層脂溶性物質(zhì)沉淀層（白色薄層固體）；（白色薄層固體）；第第3層（中下層）：層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層血紅蛋白的水溶液層（紅色透明液體）；（紅色透明液體）；第第4層（最下層）：層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層雜質(zhì)沉

16、淀層（暗紅色）。（暗紅色）。分離分離：濾紙過濾：除去脂溶性沉淀層，濾紙過濾：除去脂溶性沉淀層，分液漏斗中靜置：分出下層的分液漏斗中靜置：分出下層的紅色透明液紅色透明液體體。甲苯層甲苯層（無色透明）無色透明） 白色薄層固體白色薄層固體 紅色透明液體紅色透明液體雜質(zhì)沉淀層雜質(zhì)沉淀層（暗紅色暗紅色） 試管中溶液層次試管中溶液層次(4)(4)透透 析：析：過程：過程：取取1ml1ml的血紅蛋白溶液的血紅蛋白溶液裝入透裝入透析袋中，將透析袋放入盛有析袋中，將透析袋放入盛有300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的磷酸緩沖的磷酸緩沖液液中（中（pHpH為為7.07.0），透析），透析12h

17、12h目的：目的：除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)和離子。除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)和離子?；蛴糜诟鼡Q樣品的緩沖液?；蛴糜诟鼡Q樣品的緩沖液。20mmol/L磷酸緩沖液磷酸緩沖液1mL2.2.凝膠色譜操作凝膠色譜操作: :（1 1）凝膠色譜柱的制作：）凝膠色譜柱的制作：取長取長4040厘米，內(nèi)徑厘米，內(nèi)徑1.61.6厘米的玻璃管，厘米的玻璃管，兩端磨平。兩端磨平。底塞的制作：底塞的制作： 打孔打孔挖出凹穴挖出凹穴安裝移液管頭部安裝移液管頭部覆蓋尼龍網(wǎng)，再用覆蓋尼龍網(wǎng)，再用100100目尼龍紗包好，插到玻璃管的一端目尼龍紗包好，插到玻璃管的一端。注意事項(xiàng)：玻璃管的注意事項(xiàng)：玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹

18、穴底面，否則難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。會導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。頂塞的制作：頂塞的制作：打孔打孔安裝玻璃管安裝玻璃管。組裝：組裝：將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個(gè)整體將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個(gè)整體。安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。（2 2）凝膠色譜柱的裝填）凝膠色譜柱的裝填凝膠的選擇：凝膠的選擇：A A、材料：、材料：交聯(lián)葡聚糖凝膠（交聯(lián)葡聚糖凝膠（G-75G-75）。）。B B、代表意義、代表意義：“G”G”表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度 及分離范圍及分離范圍。 75 75表

19、示凝膠的得水值，即每克凝膠膨表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨 脹時(shí)吸水脹時(shí)吸水7.57.5克?？?。凝膠的前處理：凝膠的前處理： 配置凝膠懸浮液：配置凝膠懸浮液： 計(jì)算并稱取一定量的凝膠浸泡于計(jì)算并稱取一定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液蒸餾水或洗脫液中中 充分溶脹后，配成充分溶脹后，配成凝膠懸浮液。凝膠懸浮液。 凝膠色譜柱的裝填方法：凝膠色譜柱的裝填方法：A、固定：、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。將色譜柱裝置固定在支架上。B、裝填：、裝填：將將凝膠懸浮液一次性凝膠懸浮液一次性緩慢倒入色譜柱緩慢倒入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻注意：注意：1、

20、裝填時(shí)盡量緊密：、裝填時(shí)盡量緊密：降低凝膠顆粒之間的空隙。降低凝膠顆粒之間的空隙。2、裝填凝膠柱時(shí)不得有氣泡存在：、裝填凝膠柱時(shí)不得有氣泡存在：因?yàn)闅馀輹囈驗(yàn)闅馀輹噥y洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。洗滌平衡：洗滌平衡：連接緩沖液洗脫瓶，在連接緩沖液洗脫瓶，在50cm50cm高的高的操作壓下，用操作壓下，用300ml300ml的的20mmol/L20mmol/L的的磷酸緩沖液（磷酸緩沖液（pHpH為為7.07.0）充分洗滌充分洗滌平衡平衡12h12h。注意：注意：1 1、液面不要低于凝膠表面，否則、液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響

21、分離效果可能有氣泡混入，影響分離效果2 2、不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝、不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象膠顆粒的現(xiàn)象。（3 3）樣品加入與洗脫）樣品加入與洗脫調(diào)節(jié)緩沖液面：調(diào)節(jié)緩沖液面： 打開下端出口，使打開下端出口，使緩沖液下降到與凝膠面緩沖液下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口平齊，關(guān)閉出口滴加透析樣品滴加透析樣品：吸管吸吸管吸1ml1ml樣品加到色譜柱的樣品加到色譜柱的頂端頂端， 注意：注意： 1 1、不要觸及并破壞凝膠面。、不要觸及并破壞凝膠面。 2 2、貼壁加樣、貼壁加樣 3 3、吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動加樣、吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動加樣樣品滲入凝膠床：樣品滲入凝膠床：打開下端出口，使

22、樣品滲入凝膠床內(nèi)，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)， 樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口洗脫：洗脫：加入加入pH=7.0 pH=7.0 的的20mmol/l20mmol/l的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度，的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度， 連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口進(jìn)行洗脫。連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口進(jìn)行洗脫。收集：收集：待待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出時(shí)，用試管收集流出 液，每液，每5ml5ml收集一試管，連續(xù)收集收集一試管，連續(xù)收集。（如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明色譜柱制作成功）（如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明色譜柱制

23、作成功）注意：注意：正確的加樣操作是：正確的加樣操作是：1 1、不要觸及并破壞凝膠面。、不要觸及并破壞凝膠面。2 2、貼壁加樣。、貼壁加樣。3 3、使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。、使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。思考下面的問題：思考下面的問題：讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pHpH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能正常。功能正常。 1 1、在血紅蛋白純化的整個(gè)過程中不斷用磷酸緩、在血紅蛋白純化的整個(gè)過程中不斷用磷酸緩沖液處理的目的是什么？沖液處理的目的是什么？ 2 2、與其他蛋白質(zhì)相比，血紅蛋白有什么特點(diǎn)？、與其他蛋白質(zhì)相比，血紅蛋白有什么特點(diǎn)？這一特點(diǎn)對你進(jìn)行血紅蛋白的分離有什么啟示？

24、這一特點(diǎn)對你進(jìn)行血紅蛋白的分離有什么啟示？血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過觀察觀察顏色顏色來判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋來判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程白的分離過程非常直觀，大大簡化了實(shí)驗(yàn)操作。非常直觀，大大簡化了實(shí)驗(yàn)操作。 血紅蛋白提取和分離的程序包括：血紅蛋白提取和分離的程序包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。樣品的處理：樣品的處理：通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、 離心等操作收集到離心等操作收集到血紅蛋白溶液血紅蛋白溶液，樣品的

25、粗分離樣品的粗分離: :透析透析去除分子量較小的雜質(zhì)去除分子量較小的雜質(zhì)樣品的純化：樣品的純化：凝膠色譜法凝膠色譜法除去除去相對分子質(zhì)量較大相對分子質(zhì)量較大 的的雜質(zhì)蛋白雜質(zhì)蛋白純度鑒定純度鑒定: :聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。進(jìn)行純度鑒定。3 3、你能描述血紅蛋白分離的完整過程嗎？、你能描述血紅蛋白分離的完整過程嗎？鑒定血紅蛋白純度。鑒定血紅蛋白純度。3.方法步驟：（略）方法步驟：（略） 觀察處理的血液樣品離心后觀察處理的血液樣品離心后是否分層，如果分層不明顯，是否分層，如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因?？赡苁窍礈齑螖?shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。 此外，離心速度過高和時(shí)間過長，會使此外，離心速度過高和時(shí)間過長，會使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞白細(xì)胞和