血栓與止血試驗(yàn)ppt課件

1、 血栓與止血檢驗(yàn)血栓與止血檢驗(yàn) 臨床血液學(xué)教研室 第一節(jié)第一節(jié) 血栓與止血的挑選檢驗(yàn)血栓與止血的挑選檢驗(yàn)一、一期止血缺陷的挑選檢驗(yàn)一、一期止血缺陷的挑選檢驗(yàn)二、二期止血缺陷的挑選檢驗(yàn)二、二期止血缺陷的挑選檢驗(yàn)三、纖溶活性加強(qiáng)的的挑選檢驗(yàn)三、纖溶活性加強(qiáng)的的挑選檢驗(yàn)四、四、 抗凝物質(zhì)檢驗(yàn)抗凝物質(zhì)檢驗(yàn) 出血時(shí)間測(cè)定出血時(shí)間測(cè)定 血小板計(jì)數(shù)血小板計(jì)數(shù) 束臂實(shí)驗(yàn)毛細(xì)血管脆性實(shí)驗(yàn)束臂實(shí)驗(yàn)毛細(xì)血管脆性實(shí)驗(yàn) 血塊收縮實(shí)驗(yàn)血塊收縮實(shí)驗(yàn) 毛細(xì)血管抵抗力實(shí)驗(yàn)毛細(xì)血管抵抗力實(shí)驗(yàn) 第一節(jié)第一節(jié) 一期止血篩查實(shí)驗(yàn)一期止血篩查實(shí)驗(yàn)出血時(shí)間測(cè)定出血時(shí)間測(cè)定(bleeding time(bleeding time，BT)BT

2、) 一、原理：一、原理： 測(cè)定在皮膚受特定條件外傷后，出血自測(cè)定在皮膚受特定條件外傷后，出血自然停頓所需的時(shí)間即為出血時(shí)間。此過程反然停頓所需的時(shí)間即為出血時(shí)間。此過程反映了毛細(xì)血管與血小板的相互作映了毛細(xì)血管與血小板的相互作 用，包括用，包括內(nèi)皮下組織與血小板粘附經(jīng)過內(nèi)皮下組織與血小板粘附經(jīng)過vWF 的作用的作用、血小板的聚集和釋放等反響，以、血小板的聚集和釋放等反響，以 及及PGI2與與TXA2的動(dòng)態(tài)平衡。的動(dòng)態(tài)平衡。二、方法二、方法 Duke法、法、 Ivy法、出血時(shí)間測(cè)定器法法、出血時(shí)間測(cè)定器法TBT法法 衛(wèi)生部引薦方法衛(wèi)生部引薦方法三、試劑與器材：三、試劑與器材： 1、血壓計(jì)，秒表，

3、干凈濾紙、血壓計(jì)，秒表，干凈濾紙 2、出血時(shí)間測(cè)定器、出血時(shí)間測(cè)定器 四、操作：四、操作： 1、血壓計(jì)袖帶縛于測(cè)定上肢的上臂，加壓并維、血壓計(jì)袖帶縛于測(cè)定上肢的上臂，加壓并維 持在持在40mmHg,兒童減半。兒童減半。 2、在肘前窩下、在肘前窩下5cm處的尺側(cè)做部分消毒后，將處的尺側(cè)做部分消毒后，將測(cè)定器垂測(cè)定器垂 直貼于皮膚外表，按下按鈕，同時(shí)啟動(dòng)秒表，直貼于皮膚外表，按下按鈕，同時(shí)啟動(dòng)秒表，移開測(cè)移開測(cè) 定器。定器。 3、每隔、每隔30s,用干凈濾紙吸去流出的血液，直至用干凈濾紙吸去流出的血液，直至流血自然停頓，并記錄秒表讀數(shù)。流血自然停頓，并記錄秒表讀數(shù)。 五、參考值五、參考值 ： 2.

4、3-9.5 min六、臨床意義：六、臨床意義： 延伸：延伸： 1、 血小板數(shù)量異常，如血小板數(shù)量異常，如ITP、TTP 2、血小板功能異常，如、血小板功能異常，如plt無力癥、宏大無力癥、宏大plt綜合征、綜合征、 儲(chǔ)存池病儲(chǔ)存池病 3、 血管壁異常血管性血友病、遺傳性血管壁異常血管性血友病、遺傳性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥毛細(xì)血管擴(kuò)張癥 4、某些嚴(yán)重的凝血因子缺乏、某些嚴(yán)重的凝血因子缺乏 縮短：高凝形狀和血栓性疾病縮短：高凝形狀和血栓性疾病七、質(zhì)量控制七、質(zhì)量控制 1、留意影響、留意影響B(tài)T測(cè)定的要素測(cè)定的要素 2、濾紙吸去血液時(shí)，防止與傷口接觸、濾紙吸去血液時(shí)，防止與傷口接觸 3、留意藥物的影響抗凝劑

5、、留意藥物的影響抗凝劑、A 血小板檢驗(yàn)血小板檢驗(yàn)一、血小板計(jì)數(shù)一、血小板計(jì)數(shù)二、血小板生存時(shí)間檢測(cè)二、血小板生存時(shí)間檢測(cè)三、血小板相關(guān)抗體檢測(cè)三、血小板相關(guān)抗體檢測(cè)四、血小板粘附實(shí)驗(yàn)四、血小板粘附實(shí)驗(yàn)五、血小板聚集實(shí)驗(yàn)五、血小板聚集實(shí)驗(yàn)六、血小板第六、血小板第3因子有效性檢測(cè)因子有效性檢測(cè)七、血小板膜糖蛋白檢測(cè)七、血小板膜糖蛋白檢測(cè)八、血小板活化目的檢測(cè)血漿八、血小板活化目的檢測(cè)血漿-TG、PF4、血、血 小板小板P選擇素檢測(cè)選擇素檢測(cè) 血小板計(jì)數(shù)血小板計(jì)數(shù)platelet count , PCplatelet count , PC或或pltplt 正常值：正常值：100300109/L危險(xiǎn)危

6、險(xiǎn)PCPC2020109/L109/L可引起自發(fā)性出血可引起自發(fā)性出血 血 小 板 粘 附 試 驗(yàn) ( platelet adhension test,PAdT)原理：原理： 受檢者血液一定速度經(jīng)過一定量玻璃珠的塑料受檢者血液一定速度經(jīng)過一定量玻璃珠的塑料管，測(cè)定經(jīng)過玻璃珠前后血液中血小板數(shù)的差值，管，測(cè)定經(jīng)過玻璃珠前后血液中血小板數(shù)的差值，即為粘附于玻珠和塑料管的血小板數(shù)，由此可計(jì)算即為粘附于玻珠和塑料管的血小板數(shù)，由此可計(jì)算出其占血小板總數(shù)的百分比，即為血小板粘附率。出其占血小板總數(shù)的百分比，即為血小板粘附率。方法：玻球法、玻璃濾器法、玻珠法方法：玻球法、玻璃濾器法、玻珠法臨床意義：臨床意

7、義： 血管性血友病、宏大血小板綜合癥、血小板無血管性血友病、宏大血小板綜合癥、血小板無力癥、肝硬化、力癥、肝硬化、MDS、急性白血病、服用抗血小、急性白血病、服用抗血小板藥物等板藥物等 血栓前形狀和血栓性疾病、妊高癥、口服避孕藥血栓前形狀和血栓性疾病、妊高癥、口服避孕藥等等粘附率減低粘附率減低粘附率增高粘附率增高誘聚劑誘聚劑PPPPPPPRPPRP血血 小小 板板 聚聚 集集 試試 驗(yàn)驗(yàn)platelet aggregation tset，PAgT比濁法：以比濁法：以PPP設(shè)最低濁度，設(shè)最低濁度，PRP設(shè)最高濁度，在血漿中參與誘聚設(shè)最高濁度，在血漿中參與誘聚劑，測(cè)定血漿濁度的變化，繪制血小板聚集

8、曲線。劑，測(cè)定血漿濁度的變化，繪制血小板聚集曲線。 臨床意義：臨床意義： 血小板無力癥、血管性血友病、宏大血小板血小板無力癥、血管性血友病、宏大血小板綜合癥、血小板儲(chǔ)存池病、低無纖維蛋白綜合癥、血小板儲(chǔ)存池病、低無纖維蛋白原血癥、肝硬化、運(yùn)用血小板抑制劑等。原血癥、肝硬化、運(yùn)用血小板抑制劑等。 高凝形狀、血栓構(gòu)成性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化高凝形狀、血栓構(gòu)成性疾病、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病、口服避孕藥、人工瓣膜移植術(shù)后、糖尿病、口服避孕藥、人工瓣膜移植術(shù)后、吸煙等。吸煙等。聚集率減低聚集率減低聚集率增高聚集率增高質(zhì)量控制：質(zhì)量控制： 1. 1.采血要順利，防止組織液混入，抗凝劑運(yùn)用合理不用采血要順利，防止

9、組織液混入，抗凝劑運(yùn)用合理不用EDTAEDTA抗凝抗凝 2. 2.采集后采集后3h3h內(nèi)室溫下完成內(nèi)室溫下完成 3. 3.實(shí)驗(yàn)前十天停用一切抑制血小板聚集的藥物；實(shí)驗(yàn)前禁實(shí)驗(yàn)前十天停用一切抑制血小板聚集的藥物；實(shí)驗(yàn)前禁食高脂類食物食高脂類食物 4. 4.留意留意 PRP PRP：1000r/min1000r/min離心離心10min10min PLT(100 PLT(100300)300)109/L109/L PPP PPP ：3000r/min3000r/min離心離心20min20min PLT PLT2020109/L109/L 全血凝固時(shí)間測(cè)定全血凝固時(shí)間測(cè)定CT 活化部分凝血活酶時(shí)間

10、測(cè)定活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定APTT 血漿凝血酶原時(shí)間測(cè)定血漿凝血酶原時(shí)間測(cè)定PT 第二節(jié)第二節(jié) 二期止血缺陷篩查檢驗(yàn)二期止血缺陷篩查檢驗(yàn)全血凝全血凝 固時(shí)間測(cè)定固時(shí)間測(cè)定(coagulation time, CT) 原理原理 察看血液自離體后，到玻璃試管中凝固所需時(shí)間察看血液自離體后，到玻璃試管中凝固所需時(shí)間血液血液從血管中從血管中抽出抽出與帶負(fù)電荷與帶負(fù)電荷外表接觸外表接觸內(nèi)源性凝血途徑啟動(dòng)內(nèi)源性凝血途徑啟動(dòng)纖維蛋白構(gòu)成血液凝固纖維蛋白構(gòu)成血液凝固臨床意義臨床意義 1. 因子因子VIII、IX、XI活性減低；嚴(yán)重的因活性減低；嚴(yán)重的因子子、和纖維蛋白原缺乏和纖維蛋白原缺乏 2. 原發(fā)性纖溶

11、亢進(jìn)；血循環(huán)中存在抗凝原發(fā)性纖溶亢進(jìn)；血循環(huán)中存在抗凝物質(zhì)物質(zhì) 高凝形狀和血栓性疾病高凝形狀和血栓性疾病CT延伸延伸CT縮短縮短肝素治療用量檢測(cè)目的肝素治療用量檢測(cè)目的活活 化化 部部 分分 凝凝 血血 活活 酶酶 時(shí)時(shí) 間間 測(cè)測(cè) 定定 (activated partial thromboplastin time，APTT)一、原理一、原理APTT Ca2+腦磷脂腦磷脂白陶土白陶土 Ca2+腦磷脂腦磷脂部分凝部分凝血活酶血活酶 二、操作二、操作 一一APTT手工法手工法(試管法試管法 血漿血漿0.1mlAPTT試劑各試劑各0.1ml +CaCl20.1ml 混勻計(jì)時(shí)混勻計(jì)時(shí) 結(jié)果察看：緩慢傾

12、斜試管，察看液體流動(dòng)形狀，流動(dòng)結(jié)果察看：緩慢傾斜試管，察看液體流動(dòng)形狀，流動(dòng) 停頓停頓計(jì)時(shí)停頓停頓計(jì)時(shí) 參考值參考值 25 45s (二儀器法二儀器法 3737水浴水浴5min3737溫浴溫浴 APTT APTT延伸延伸縮短縮短因子因子VIII、IX、XI活性減低活性減低高凝形狀高凝形狀三、臨床意義三、臨床意義 肝素抗凝監(jiān)測(cè)肝素抗凝監(jiān)測(cè)APTT糾正實(shí)驗(yàn)糾正實(shí)驗(yàn) 于患者血漿中分別參與于患者血漿中分別參與1/4 的正常新穎血漿、硫酸鋇的正常新穎血漿、硫酸鋇吸附血漿、正常血清，再作吸附血漿、正常血清，再作APTT實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)。 硫酸鋇吸附血漿硫酸鋇吸附血漿 VIII、XI、XII 不含不含IX 正常血

13、清正常血清 IX、XI、XII不含不含VIII 新穎血漿新穎血漿 VIII、IX、XI、XII 血友病甲血友病甲血友病乙血友病乙F缺乏缺乏正常血漿正常血漿硫酸鋇吸附血漿硫酸鋇吸附血漿 缺缺正常血清正常血清(缺缺)糾正糾正不糾正不糾正糾正糾正糾正糾正糾正糾正糾正糾正不糾正不糾正患者血漿患者血漿糾正糾正糾正糾正凝血酶原時(shí)間測(cè)定凝血酶原時(shí)間測(cè)定Prothrombin time ，PT一、原理一、原理 Ca2+腦磷脂腦磷脂PT組織因子組織因子Ca2+ 腦磷脂腦磷脂二、報(bào)告方式二、報(bào)告方式 1. 直接報(bào)告患者及正常對(duì)照的直接報(bào)告患者及正常對(duì)照的PT秒數(shù)秒數(shù) 2. 報(bào)告凝血酶原時(shí)間比值報(bào)告凝血酶原時(shí)間比值

14、PTR PTR=受檢者受檢者PT秒秒/正常對(duì)照正常對(duì)照PT秒秒 3. 報(bào)告國(guó)際規(guī)范化比值報(bào)告國(guó)際規(guī)范化比值INR INR=PTRISI 組織凝血活酶的國(guó)際敏感指數(shù)組織凝血活酶的國(guó)際敏感指數(shù)internation sensetivity index,ISI是用組織凝血活酶試劑與是用組織凝血活酶試劑與ISI知的國(guó)際參比品知的國(guó)際參比品或經(jīng)其標(biāo)定過的參比品之間敏感度相比較的一個(gè)參數(shù)或經(jīng)其標(biāo)定過的參比品之間敏感度相比較的一個(gè)參數(shù)。 測(cè)定方法：測(cè)定方法： 用多份凝血因子程度不同的血漿包括正常人和口服用多份凝血因子程度不同的血漿包括正常人和口服抗凝劑患者的血漿，用參比品測(cè)得它們的抗凝劑患者的血漿，用參比品

15、測(cè)得它們的PT的對(duì)數(shù)的對(duì)數(shù)lgPT，再用待標(biāo)定的組織凝血活酶測(cè)得它們的，再用待標(biāo)定的組織凝血活酶測(cè)得它們的lgPT，以前者為縱坐標(biāo)，后者為橫坐標(biāo)作圖，經(jīng)回歸求得，以前者為縱坐標(biāo)，后者為橫坐標(biāo)作圖，經(jīng)回歸求得直線斜率。直線斜率。 待標(biāo)定的組織凝血活酶的待標(biāo)定的組織凝血活酶的ISI=知的知的ISI斜率斜率 PT PT延伸延伸縮短縮短因子因子VII、 II、V、X、Fg活性減低活性減低高凝形狀高凝形狀三、臨床意義三、臨床意義 口服雙香豆素類抗凝藥物監(jiān)測(cè)口服雙香豆素類抗凝藥物監(jiān)測(cè)要保證止凝血檢驗(yàn)的質(zhì)量要保證止凝血檢驗(yàn)的質(zhì)量 必需做好以下十點(diǎn)：必需做好以下十點(diǎn)：1. 采血須順利，盡量用大號(hào)針頭，動(dòng)作要輕

16、柔；采血須順利，盡量用大號(hào)針頭，動(dòng)作要輕柔； 2. 標(biāo)本用加蓋有刻度標(biāo)志的塑料試管或硅化管收標(biāo)本用加蓋有刻度標(biāo)志的塑料試管或硅化管收 集集 ；3. 抗凝劑用抗凝劑用109mmol/L的枸櫞酸鈉，抗凝劑與的枸櫞酸鈉，抗凝劑與 血液的比例為血液的比例為1:9。當(dāng)當(dāng)Hct Hct 增高增高55% 55% 或或25% 40mg/L，見于原發(fā)性纖，見于原發(fā)性纖溶癥、溶癥、DIC、M3、運(yùn)用鏈激酶等溶栓治療時(shí)。、運(yùn)用鏈激酶等溶栓治療時(shí)。血漿血漿D-二聚體測(cè)定二聚體測(cè)定一、原理：一、原理： 1. 膠乳凝集法膠乳凝集法 2. ELISA法法二、參考值：二、參考值：0.5mg/L有臨床意義有臨床意義三、臨床意義

17、：三、臨床意義： 1. DIC時(shí)呈陽性或明顯增高，另見深靜脈血栓時(shí)呈陽性或明顯增高，另見深靜脈血栓、心梗、肺栓塞、重癥肝炎等、心梗、肺栓塞、重癥肝炎等 2. 可作為原發(fā)纖溶和繼發(fā)纖溶鑒別的重要根可作為原發(fā)纖溶和繼發(fā)纖溶鑒別的重要根據(jù)。據(jù)。 血漿硫酸魚精蛋白副凝實(shí)驗(yàn)血漿硫酸魚精蛋白副凝實(shí)驗(yàn)plasma protamine paracoagulation test, 3P 結(jié)果判別結(jié)果判別 陰性陰性也是鑒別繼發(fā)性也是鑒別繼發(fā)性纖溶纖溶與原發(fā)性纖溶的與原發(fā)性纖溶的實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)血漿硫酸魚精蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)血漿硫酸魚精蛋白副凝固實(shí)驗(yàn)plasma protamin parcoagulation test，3P四

18、、臨床意義四、臨床意義 1. 陰性陰性 正?；蛘；駾IC晚期，原發(fā)纖溶晚期，原發(fā)纖溶 2. 陽性陽性 含細(xì)顆粒沉淀，粗顆粒沉淀含細(xì)顆粒沉淀，粗顆粒沉淀、纖維蛋白絲網(wǎng)或膠凍樣物質(zhì)，見于、纖維蛋白絲網(wǎng)或膠凍樣物質(zhì)，見于DIC早期，中期，靜脈血栓、嚴(yán)重創(chuàng)傷早期，中期，靜脈血栓、嚴(yán)重創(chuàng)傷，大手術(shù)，及久置冰箱的標(biāo)本，大手術(shù)，及久置冰箱的標(biāo)本 生理性抗凝蛋白檢驗(yàn)：生理性抗凝蛋白檢驗(yàn)：一、抗凝血酶檢測(cè)一、抗凝血酶檢測(cè) 1、血漿抗凝血酶活性檢測(cè)、血漿抗凝血酶活性檢測(cè) 2、血漿抗凝血酶抗原檢測(cè)、血漿抗凝血酶抗原檢測(cè)二、蛋白二、蛋白C檢測(cè)檢測(cè) 1、血漿蛋白、血漿蛋白C活性檢測(cè)活性檢測(cè) 2、血漿蛋白、血漿蛋白C抗原檢測(cè)抗原檢測(cè)三、血漿蛋白三、血漿蛋白S抗原檢測(cè)抗原檢測(cè)四、組織因子途徑抑制物檢測(cè)四、組織因子途徑抑制物檢測(cè)第四節(jié)第四節(jié) 抗凝物質(zhì)檢驗(yàn)抗凝物質(zhì)檢驗(yàn)病理性抗凝物質(zhì)檢驗(yàn)：病理性抗凝物質(zhì)檢驗(yàn)：一、復(fù)鈣交叉實(shí)驗(yàn)一、復(fù)鈣交叉實(shí)驗(yàn)二二 、