實(shí)驗(yàn)三離體蛙心灌流PPT課件

1、實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 電刺激和化學(xué)因素電刺激和化學(xué)因素對(duì)心臟活動(dòng)的影響對(duì)心臟活動(dòng)的影響一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康? 1. .學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)離體蛙心灌流方法。離體蛙心灌流方法。2 2. .觀察觀察在心臟在心臟活動(dòng)周期內(nèi)給予活動(dòng)周期內(nèi)給予刺激所引起的期前收刺激所引起的期前收縮和代償間歇?？s和代償間歇。3 3. .觀察觀察NaNa+ +、K K+ +、CaCa2+2+、AdrAdr（腎上腺素）、（腎上腺素）、AchAch（乙酰（乙酰膽堿）對(duì)膽堿）對(duì)心臟活動(dòng)的影響，理解內(nèi)環(huán)境理化因素相心臟活動(dòng)的影響，理解內(nèi)環(huán)境理化因素相對(duì)恒定對(duì)維持心臟正?；顒?dòng)的重要性。對(duì)恒定對(duì)維持心臟正?；顒?dòng)的重要性。1 1、心肌的生理特性：、心肌

2、的生理特性：2 2、兩棲類動(dòng)物的心起搏點(diǎn)：、兩棲類動(dòng)物的心起搏點(diǎn)：3 3、心肌興奮性的周期性變化：、心肌興奮性的周期性變化：二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理自律性、興奮性、傳導(dǎo)性、收縮性。自律性、興奮性、傳導(dǎo)性、收縮性。靜脈竇。靜脈竇。有效不應(yīng)期；有效不應(yīng)期；相對(duì)不應(yīng)期；相對(duì)不應(yīng)期；超常期。超常期。有效不應(yīng)期有效不應(yīng)期 = = 收縮期收縮期 + + 舒張?jiān)缙谑鎻堅(jiān)缙谄谇笆湛s：期前收縮：給予心室肌一次有效刺激，給予心室肌一次有效刺激，產(chǎn)生一次正常節(jié)律以外的收縮反應(yīng)，該產(chǎn)生一次正常節(jié)律以外的收縮反應(yīng)，該收縮先于下一次正常竇房結(jié)興奮引起的收縮先于下一次正常竇房結(jié)興奮引起的收縮。收縮。 1 1、心臟的正常節(jié)律

3、性活動(dòng)需要一個(gè)適宜的內(nèi)環(huán)境、心臟的正常節(jié)律性活動(dòng)需要一個(gè)適宜的內(nèi)環(huán)境（離子濃度、（離子濃度、pHpH等），內(nèi)環(huán)境的變化直接影響到等），內(nèi)環(huán)境的變化直接影響到心臟的正常節(jié)律性活動(dòng)。心臟的正常節(jié)律性活動(dòng)。2 2、因此可用人工灌流的方法，觀察灌流液成分的、因此可用人工灌流的方法，觀察灌流液成分的改變對(duì)離體心臟活動(dòng)的影響。改變對(duì)離體心臟活動(dòng)的影響。無無CaCa2+2+任氏液；任氏液；任氏液（任氏液（1% KCl1% KCl；1% CaCl1% CaCl2 2；2% CaCl2% CaCl2 2) )。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理1 1、神經(jīng)調(diào)節(jié)：在、神經(jīng)調(diào)節(jié)：在體心臟受交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)的雙重體心臟受交感

4、神經(jīng)和迷走神經(jīng)的雙重支配。支配。交感神經(jīng)交感神經(jīng)末梢末梢釋放釋放NENE（去甲腎上腺素），（去甲腎上腺素），使心肌收縮力加強(qiáng)，傳使心肌收縮力加強(qiáng)，傳導(dǎo)速度加快，心率導(dǎo)速度加快，心率加快，即產(chǎn)生加快，即產(chǎn)生正性變時(shí)、變力、變傳導(dǎo)作用正性變時(shí)、變力、變傳導(dǎo)作用；迷走神經(jīng)迷走神經(jīng)末梢末梢釋放釋放AchAch（乙酰膽堿），（乙酰膽堿），使心肌收縮力減弱，心肌傳使心肌收縮力減弱，心肌傳導(dǎo)速度減慢，心率導(dǎo)速度減慢，心率減慢，即產(chǎn)生減慢，即產(chǎn)生負(fù)負(fù)性變時(shí)、變力、變傳導(dǎo)作用性變時(shí)、變力、變傳導(dǎo)作用 。2 2、體液調(diào)節(jié)、體液調(diào)節(jié)0.01% 0.01% AdrAdr（腎上腺素）（腎上腺素）0.01% 0.01%

5、AchAch（乙酰膽堿（乙酰膽堿）心臟活動(dòng)調(diào)節(jié)心臟活動(dòng)調(diào)節(jié)三、實(shí)驗(yàn)器材及藥品三、實(shí)驗(yàn)器材及藥品實(shí)驗(yàn)對(duì)象：蟾蜍實(shí)驗(yàn)對(duì)象：蟾蜍 實(shí)驗(yàn)藥品：實(shí)驗(yàn)藥品： 任氏液任氏液 無無Ca任氏液任氏液 1 % KCl 1 % CaCl2 2 % CaCl2 0.01% Ach 0.01% Adr實(shí)驗(yàn)器材：實(shí)驗(yàn)器材： 張力換能器張力換能器 蛙類手術(shù)器械一套蛙類手術(shù)器械一套 鐵支架鐵支架 雙凹夾雙凹夾 蛙心套管蛙心套管 蛙心夾蛙心夾 刺激電極刺激電極 滴管滴管 燒杯燒杯 四、手四、手術(shù)術(shù)操作操作 1.1.取取蟾蜍，破壞腦和脊髓、暴露心臟。蟾蜍，破壞腦和脊髓、暴露心臟。 （腹面）（腹面） （背面）（背面）（兩棲類動(dòng)物心

6、臟解剖結(jié)構(gòu)示意圖）（兩棲類動(dòng)物心臟解剖結(jié)構(gòu)示意圖） 2. 2. 蛙心插管（操作難點(diǎn)）蛙心插管（操作難點(diǎn)） 蛙心插管步驟小結(jié)：蛙心插管步驟小結(jié)：1 1、在主動(dòng)脈下穿線，備結(jié)扎用；在主動(dòng)脈下穿線，備結(jié)扎用；2 2、在主動(dòng)脈根部剪一斜切口；在主動(dòng)脈根部剪一斜切口；3 3、插管裝任氏液，食指堵住上口；插管裝任氏液，食指堵住上口；5 5、將插管轉(zhuǎn)向插入心室（插入后有血液進(jìn)入插管），將絲線將插管轉(zhuǎn)向插入心室（插入后有血液進(jìn)入插管），將絲線結(jié)扎固定在蛙心套管上。結(jié)扎固定在蛙心套管上。4 4、將插管順著主動(dòng)脈方向插入動(dòng)將插管順著主動(dòng)脈方向插入動(dòng)脈圓錐；脈圓錐；（腹面）（腹面）3.3.游離蛙心游離蛙心1 1、輕

7、提起蛙心插管，剪斷動(dòng)靜脈輕提起蛙心插管，剪斷動(dòng)靜脈( (勿損傷靜脈竇勿損傷靜脈竇），將心臟離體，），將心臟離體，觀察插管內(nèi)液面高度是否隨著心臟觀察插管內(nèi)液面高度是否隨著心臟的收縮和舒張而變化？的收縮和舒張而變化？2 2、用滴管吸凈插管內(nèi)余血，加入新用滴管吸凈插管內(nèi)余血，加入新鮮任氏液，反復(fù)換洗數(shù)次，直至液鮮任氏液，反復(fù)換洗數(shù)次，直至液體完全澄清。體完全澄清。3 3、始終始終保持灌流液面高度恒定保持灌流液面高度恒定（1-2cm1-2cm）。五、儀器連接五、儀器連接將插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住將插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住少許心尖部肌肉，再將蛙心夾上的系線與張力傳

8、感器少許心尖部肌肉，再將蛙心夾上的系線與張力傳感器相連。相連。不可夾得過多，不可夾得過多，以免因夾破心以免因夾破心室而漏液室而漏液勿使灌流液滴到勿使灌流液滴到傳感器上傳感器上儀器連接注意事項(xiàng)儀器連接注意事項(xiàng)六、軟件操作六、軟件操作1.1.描記描記正常蛙心收縮曲線正常蛙心收縮曲線曲線疏密疏密：代表心跳頻率。曲線的規(guī)律性規(guī)律性：代表心室的節(jié)律性。曲線的頂點(diǎn)頂點(diǎn)水平：代表心室收縮的程度。曲線的基線基線：代表心室舒張的程度。七、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目觀察與記錄七、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目觀察與記錄2.2.期前收縮和期前收縮和代償間歇代償間歇3.3.改變灌流液成分改變灌流液成分對(duì)心臟活動(dòng)的影響對(duì)心臟活動(dòng)的影響 對(duì)心臟活動(dòng)的影響對(duì)心臟

9、活動(dòng)的影響（心率、收縮力度、基線水平）（心率、收縮力度、基線水平）無鈣任氏液；無鈣任氏液；任氏液內(nèi)分別添加任氏液內(nèi)分別添加:( 1% KCl；1% CaCl2； 0.01% Ach； 0.01% Adr；2% CaCl2； ） （1 1）吸出插管內(nèi)全部任氏液，吸出插管內(nèi)全部任氏液，換入無鈣任氏液，觀換入無鈣任氏液，觀察心縮曲線變化，待效應(yīng)明顯后，吸出灌流液，用察心縮曲線變化，待效應(yīng)明顯后，吸出灌流液，用新鮮任氏液換洗新鮮任氏液換洗3 3次，直至心縮曲線恢復(fù)正常。次，直至心縮曲線恢復(fù)正常。 （2 2）加）加1-21-2滴滴1% KCl1% KCl于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心于新?lián)Q入的任氏液中，觀察

10、心縮曲線的變化。待出現(xiàn)效應(yīng)后，用新鮮任氏液換洗縮曲線的變化。待出現(xiàn)效應(yīng)后，用新鮮任氏液換洗3 3次至曲線恢復(fù)正常。次至曲線恢復(fù)正常。 （3 3）加入）加入1-21-2滴滴1% CaCl1% CaCl2 2于新?lián)Q入的任氏液中，觀于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮曲線的變化。待出現(xiàn)效應(yīng)后，用新鮮任氏液察心縮曲線的變化。待出現(xiàn)效應(yīng)后，用新鮮任氏液換洗換洗3 3次至曲線恢復(fù)正常。次至曲線恢復(fù)正常。（4 4）加入）加入1-21-2滴滴0.01% Adr0.01% Adr于任氏液中，待效應(yīng)出現(xiàn)于任氏液中，待效應(yīng)出現(xiàn)后，用任氏液換洗至曲線恢復(fù)正常。后，用任氏液換洗至曲線恢復(fù)正常。（5 5）加入）加入1-21-2滴

11、滴0.01%Ach0.01%Ach于任氏液中，待效應(yīng)出現(xiàn)于任氏液中，待效應(yīng)出現(xiàn) 后，用任氏液換洗至曲線恢復(fù)正常。后，用任氏液換洗至曲線恢復(fù)正常。（6 6）鈣僵：）鈣僵： 加入加入4-54-5滴滴% CaCl% CaCl2 2于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮于新?lián)Q入的任氏液中，觀察心縮曲線的變化。曲線的變化。八、注意事項(xiàng)八、注意事項(xiàng)1.1.制備標(biāo)本時(shí)，應(yīng)按指導(dǎo)試探著插管，避免損傷心臟制備標(biāo)本時(shí)，應(yīng)按指導(dǎo)試探著插管，避免損傷心臟( (包括靜包括靜脈竇脈竇) )。2.2.每次換液時(shí)，插管內(nèi)的液面均應(yīng)保持恒定高度。每次換液時(shí)，插管內(nèi)的液面均應(yīng)保持恒定高度。3.3.各種試劑的滴管不要混淆各種試劑的滴管不要混

12、淆, ,以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。4.4.藥物作用不明顯時(shí)，可適量增加。每次加藥，心搏曲線出現(xiàn)藥物作用不明顯時(shí)，可適量增加。每次加藥，心搏曲線出現(xiàn)變化后立即將插管內(nèi)液體吸出。變化后立即將插管內(nèi)液體吸出。5.5.滴加任氏液于心臟表面使之濕潤(rùn)。滴加任氏液于心臟表面使之濕潤(rùn)。6.6.固定換能器時(shí)應(yīng)稍向下傾斜，以免自心臟滴下的液體進(jìn)入換固定換能器時(shí)應(yīng)稍向下傾斜，以免自心臟滴下的液體進(jìn)入換能器內(nèi)造成短路。能器內(nèi)造成短路。觀看實(shí)驗(yàn)錄像九、討論分析九、討論分析*分析各觀察結(jié)果的原因。分析各觀察結(jié)果的原因。*心肌有效不應(yīng)期長(zhǎng)的生理意義。心肌有效不應(yīng)期長(zhǎng)的生理意義。*心率過慢，期前收縮后是否有代償間歇？心率過慢，期前收縮后是否有代償間歇？*實(shí)驗(yàn)中套管內(nèi)液面為什么要保持相同高度？實(shí)驗(yàn)中套管內(nèi)液面為什么要保持相同高度？部分結(jié)果分析*無鈣任氏液，心跳減弱 心肌收縮活動(dòng)有Ca2+觸發(fā)，心肌肌漿網(wǎng)不發(fā)達(dá)，因此其收縮強(qiáng)弱依賴于細(xì)胞外Ca2+濃度 灌流液中缺乏Ca2+，心肌細(xì)胞內(nèi)Ca2+大大減少，心肌興奮-收縮藕聯(lián)過程減弱，心肌收縮活動(dòng)減弱*高K+任氏液，心跳明顯減弱甚至停跳于舒張狀態(tài) 部分結(jié)果分析 K+與Ca2+有競(jìng)爭(zhēng)性拮抗作用。細(xì)胞外K+濃度增加可抑制細(xì)胞膜對(duì)Ca2