組培實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)建

1、 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建 組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計 常用設(shè)備和器材配置 附：器皿的選擇與清洗 附：組培室的衛(wèi)生與滅菌組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計主要內(nèi)容： 實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計 儀器設(shè)備和器皿用具配置（一）設(shè)計規(guī)模和原則原則1.1.設(shè)計規(guī)模：取決于工作的目的。 以工廠化生產(chǎn)為目的；以科研為目的；2.設(shè)計原則設(shè)計原則：1 1）. .保證無菌操作：保證無菌操作： 植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無菌的條件下進(jìn)行的。要做到無菌的條件，需要一定的環(huán)境、設(shè)備、器材和用具。2 2）. .工作方便工作方便：按組織培養(yǎng)程序來沒計，避免某些環(huán)節(jié)倒排，引起日后工作混亂。3 3）. .培養(yǎng)條件：人工控制溫度、光照、濕度等。一、實(shí)

2、驗(yàn)室設(shè)計一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計（二）、組培實(shí)驗(yàn)室組成： 標(biāo)準(zhǔn)組織培養(yǎng)室包括: 藥品區(qū) 洗滌區(qū) 制備區(qū) 滅菌區(qū) 儲放區(qū) 無菌操作區(qū) 培養(yǎng)區(qū)可以根據(jù)自可以根據(jù)自己的實(shí)際條己的實(shí)際條件進(jìn)行合并件進(jìn)行合并準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室 分區(qū)：藥品區(qū)、洗滌區(qū)、制備區(qū)、滅菌區(qū)、儲放區(qū) 主要任務(wù)主要任務(wù)： 1. 1. 藥品的貯備、稱量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝。藥品的貯備、稱量、溶解、配制、培養(yǎng)基分裝。 2. 2. 器具的洗滌、干燥、保存、培養(yǎng)基的滅菌等。器具的洗滌、干燥、保存、培養(yǎng)基的滅菌等。 主要設(shè)備主要設(shè)備：藥品柜、防塵櫥（放置培養(yǎng)容器）、冰：藥品柜、防塵櫥（放置培養(yǎng)容器）、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計、箱、天平、蒸餾水器、酸度

3、計、水池、操作臺、高水池、操作臺、高壓滅菌鍋、干燥滅菌器（如烘箱）壓滅菌鍋、干燥滅菌器（如烘箱）及常用的培養(yǎng)基及常用的培養(yǎng)基配制用玻璃儀器配制用玻璃儀器. . 詳見下圖詳見下圖酸度計立式高壓自動滅菌鍋 主要任務(wù)：主要任務(wù)：主要用于植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼代、原生質(zhì)體的制備以及一切需要進(jìn)行無菌操作的技術(shù)程序。 主要設(shè)備：紫外光源、超凈工作臺、消毒器、酒精燈、接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針）等。無菌操作室（接種室）無菌操作室超凈工作臺 接種室宜小不宜大，一般78平米，要求地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑，易于清潔和消毒。配置拉動門，以減少開關(guān)門時的空氣擾動。 接種室

4、要求干爽安靜，清潔明亮。在適當(dāng)位置吊裝12盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。最好安裝一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可使門窗緊閉，減少與外界空氣對流。 接種室應(yīng)設(shè)有緩沖間，面積1m2為宜。進(jìn)入無菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進(jìn)出時帶入接種室雜菌。緩沖間最好也安一盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。 培養(yǎng)室培養(yǎng)室：是將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)生長的場所。是將接種的材料進(jìn)行培養(yǎng)生長的場所。 大小大?。焊鶕?jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而定。其設(shè)計以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。高度比培定。其設(shè)計以充分利用空間和節(jié)省能源為原則。高度比培養(yǎng)架略高為宜，周圍墻壁要求有絕熱

5、防火的性能。養(yǎng)架略高為宜，周圍墻壁要求有絕熱防火的性能。培養(yǎng)室： 主要設(shè)備主要設(shè)備：培養(yǎng)架（控溫控光控濕）、搖床、培養(yǎng)箱、紫外：培養(yǎng)架（控溫控光控濕）、搖床、培養(yǎng)箱、紫外光源等。培養(yǎng)材料放在由金屬制成培養(yǎng)架上培養(yǎng)。光源等。培養(yǎng)材料放在由金屬制成培養(yǎng)架上培養(yǎng)。 培養(yǎng)架一般設(shè)培養(yǎng)架一般設(shè)5 5層，最低一層離地高約層，最低一層離地高約lOcmlOcm，其他每層間隔，其他每層間隔30cm30cm左右，培養(yǎng)架高左右，培養(yǎng)架高1 17m7m左右。其長度根據(jù)日光燈長度而設(shè)左右。其長度根據(jù)日光燈長度而設(shè)計，計， 如采用如采用40W40W日光燈，則長日光燈，則長I I3m3m，30W30W的長的長lmlm，寬度

6、一般，寬度一般為為60cm60cm。 培養(yǎng)室最重要的因子是溫度培養(yǎng)室最重要的因子是溫度，一般保持在，一般保持在20202727左右，具備左右，具備產(chǎn)熱裝置，并安裝窗式或立式空調(diào)機(jī)。產(chǎn)熱裝置，并安裝窗式或立式空調(diào)機(jī)。實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)架實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)架恒溫?fù)u床恒溫?fù)u床 由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度，最好由于熱帶植物和寒帶植物等不同種類要求不同溫度，最好不同種類有不同的培養(yǎng)室。室內(nèi)濕度也要求恒定，相對濕不同種類有不同的培養(yǎng)室。室內(nèi)濕度也要求恒定，相對濕度以保持在度以保持在70%70%80%80%為好，可安裝加濕器?？刂乒庹諘r間為好，可安裝加濕器。控制光照時間可安裝定時開關(guān)鐘，一般需要每天光照可

7、安裝定時開關(guān)鐘，一般需要每天光照10-16h10-16h，也有的需要，也有的需要連續(xù)照明。連續(xù)照明。 現(xiàn)代組培實(shí)驗(yàn)室大多設(shè)計為采用天然太陽光照作為主要能現(xiàn)代組培實(shí)驗(yàn)室大多設(shè)計為采用天然太陽光照作為主要能源，這樣不但可以節(jié)省能源，而且組培苗接受太陽光生長源，這樣不但可以節(jié)省能源，而且組培苗接受太陽光生長良好，馴化易成活。在陰雨天可用燈光作補(bǔ)充。良好，馴化易成活。在陰雨天可用燈光作補(bǔ)充。細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室 該室用于對培養(yǎng)物的觀察分析與培養(yǎng)物的計數(shù)等。主要設(shè)備：雙筒實(shí)體顯微鏡、顯微鏡、倒置顯微鏡等。小型儀器設(shè)備有：分注器、血球計數(shù)器、移液槍、過濾滅菌器、電爐等加熱器具、磁力攪拌器、低速臺式離心機(jī)等。顯微鏡

8、 顯微鏡 第二節(jié) 常用設(shè)備和器材 一高壓蒸汽滅菌鍋：用于進(jìn)行培養(yǎng)基和器械用具的滅菌。 1種類：小型手提式高壓滅菌鍋、大型立式的或臥式的高壓滅菌鍋 2使用方法和原理： 小型手提式高壓滅菌鍋：把分裝好的培養(yǎng)基及所需滅菌的各種用具、蒸餾水等，放入高壓滅菌鍋的消毒桶內(nèi)，將外層鍋內(nèi)加水至水位線。蓋好鍋蓋，上好螺絲，接通電源升溫。待鍋內(nèi)溫度達(dá)100。C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右時，打開排氣閥排凈鍋內(nèi)冷空氣，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱至溫度達(dá)到121。C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）時，維持2030min即可切斷電源，讓鍋內(nèi)氣壓自然下降，當(dāng)壓力降到零點(diǎn)后，打開排氣閥，排出剩

9、余蒸汽，再打開鍋蓋取出培養(yǎng)基及滅菌物品。 3注意事項： 1）滅菌時，鍋內(nèi)冷氣必須排盡，否則會影響滅菌效果。當(dāng)壓力達(dá)到1.05kgf/cm2或0.103MPa時，應(yīng)注意維持時間，時間過長會破壞培養(yǎng)基的化學(xué)成分，時間短則達(dá)不到滅菌效果。 2）鍋內(nèi)滅菌物品不能裝得太滿，要留有30%的空間。 大型立式的高壓滅菌鍋：臥式滅菌鍋立式高壓自動滅菌鍋二、凈化工作臺工作原理： 凈化工作臺一般由鼓風(fēng)機(jī)、濾板、操作臺、紫外光燈和照明燈等部分組成。根據(jù)風(fēng)幕形成的方式，可分為垂直式和水平式兩種。超凈工作臺的工作原理是：鼓風(fēng)機(jī)送入的空氣經(jīng)過細(xì)菌過濾板除去微生物后，再流過工作臺面，并在操作人員和操作臺之間形成風(fēng)障，使雜菌不

10、能進(jìn)入，形成一個無菌的工作面。 優(yōu)點(diǎn)：是操作方便自如，比較舒適，工作效率高，準(zhǔn)備時間短。開機(jī)10分鐘即可操作，可進(jìn)行長時間使用。超凈工作臺三接種工具：常用的有雙筒實(shí)體顯微鏡、鑷子、剪刀、解剖刀、酒精燈等。 四培養(yǎng)設(shè)備：常用的有空調(diào)機(jī)、定時器、溫度控制器、增濕和去濕機(jī)、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)架、搖床或旋轉(zhuǎn)床、日光燈、光照培養(yǎng)箱等。五化學(xué)實(shí)驗(yàn)及分析設(shè)備：天平、酸度計、蒸餾水器、烘箱、電爐、藥品柜、冰箱、廢污物桶等。六培養(yǎng)物細(xì)胞學(xué)觀察設(shè)備：主要包括顯微觀察設(shè)備、組織切片染色用設(shè)備、照相沖洗設(shè)備。七.微孔過濾器（細(xì)胞過濾器） ：激素用于滅菌。附1：玻璃器皿的選擇與清洗 一玻璃器皿的選擇： 培養(yǎng)用的玻璃器皿：試管

11、、三角瓶、培養(yǎng)皿、果醬瓶等等； 顯微鏡下觀察用的：細(xì)胞微室、載玻片、培養(yǎng)皿等。二玻璃器皿的清洗：1洗滌劑：肥皂、洗潔精、洗衣粉和鉻酸洗滌劑。一般用洗衣粉即可。2新購置的玻璃器皿由于它們或多或少含有游離堿性物質(zhì)，使用前先用1%稀鹽酸內(nèi)浸泡一夜，然后用肥皂水洗凈，清水沖洗，最后用蒸餾水沖淋一便，干后備用。3對已被霉菌等雜菌污染的玻璃器皿則必須現(xiàn)在121高壓蒸汽滅菌30分鐘后再清洗。4洗凈的玻璃器皿應(yīng)透明發(fā)亮、內(nèi)外壁水膜均勻，不掛水珠。 附2 、組培室的衛(wèi)生與滅菌 一、滅菌用品、用具 ：2%新潔爾滅、高錳酸鉀、甲醛、70%酒精、噴霧器、水桶、工作服、口罩和手套 二、滅菌方法 1、打掃衛(wèi)生。 2、地面

12、、墻壁和工作臺的滅菌 ：(1)配方:取新潔爾滅原液20ml，加水980m1，配成2%新潔爾滅溶液。 (2)方法:將配好的2%新潔爾滅溶液倒入塑料桶內(nèi)。把噴霧器的主體插入溶液中，并加壓，握著噴霧器的噴桿進(jìn)行均勻地噴霧。在噴房頂時，要特別小心，防止藥液霧滴掉入眼晴。 3、無菌室和培養(yǎng)室的滅菌 （用甲醛和高錳酸鉀熏蒸） （1）配方:每立方米空間用甲醛l0ml加高錳酸鉀5g的配比液進(jìn)行熏蒸。 （2）方法:首先房子要密封。然后在房子中間放一玻璃器皿，將稱好的高錳酸鉀放入玻璃器皿內(nèi)，再把已稱量的甲醛溶液慢慢倒入，完畢，人迅速離開，并關(guān)上門，密封3天 （3）3天后，開啟房間，搬走玻璃器皿廢液，搞好地面衛(wèi)生 （4）在己經(jīng)熏蒸的房間里，用70%酒精紗布擦洗培養(yǎng)架、玻璃臺面及工作臺 實(shí)驗(yàn)安排： 07生物（1）：雙周星期二 、14-21：00 班長： 電話： 學(xué)習(xí)委員： 電話： 第一組：1-20 組長： 電話： 第二組：21-40 組長： 電話： 第三組：