微生物限度檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程DOC

1、1 目的規(guī)范微生物限度檢驗(yàn)操作，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。2 依據(jù)中國(guó)藥典2010版。3 范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于微生物限度檢驗(yàn)。4 責(zé)任中心化驗(yàn)室負(fù)責(zé)人：對(duì)本規(guī)程的實(shí)施負(fù)責(zé)。中心化驗(yàn)室檢驗(yàn)人員：嚴(yán)格按照本規(guī)程執(zhí)行檢驗(yàn)操作。5 程序5.1 執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：中國(guó)藥典2010版。5.2 抽樣：照取樣標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。6 細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)方法包括平皿法和薄膜過(guò)濾法。檢查時(shí)，按已驗(yàn)證的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌菌數(shù)的測(cè)定。6.1 設(shè)備、儀器及用具6.1.1 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室室、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30-350C）、生化培養(yǎng)箱（23-280C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、電冰箱、滅菌柜、紫外燈

2、等。6.1.2 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、薄膜過(guò)濾器等。6.1.3 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。6.2 試液6.2.1 消毒液 A0.1% 新潔爾滅溶液：供手消毒、擦拭操作臺(tái)面用。 B75%乙醇溶液6.2.2 稀釋液、試劑及配制 APH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液：取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.3g、蛋白胨1.0g，加純化水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，1210C滅菌15分鐘。 B聚山梨酯80 C吐溫8

3、0D單硬脂酸甘油酯6.3 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基6.4 操作方法6.4.1 試驗(yàn)前準(zhǔn)備6.4.1.1 將供試品及所有已滅菌的平皿、錐形瓶、試管、吸管（1ml、10ml）、量筒、稀釋劑等移至傳遞窗內(nèi)。每次試驗(yàn)所用物品必須事先計(jì)劃，準(zhǔn)備足夠用量，避免操作中出入操作間。6.4.1.2 開(kāi)啟微生物檢測(cè)室紫外燈和空調(diào)凈化系統(tǒng)，并使其工作不低于30min。6.4.1.3 操作人員進(jìn)入一更，用洗手液或肥皂洗手，烘干。進(jìn)入二更，用0.1% 新潔爾滅溶液洗手，穿戴潔凈無(wú)菌服、口罩、手套。6.4.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手，再用乙醇棉球擦拭供試品瓶、盒、袋等的開(kāi)口處周?chē)珊笥脺缇氖中g(shù)鑷

4、或剪將供試品啟封。6.4.2 供試液的制備供試液的制備若需用水浴加溫時(shí)，溫度不宜超過(guò)450C，時(shí)間不得超過(guò)30分鐘。除另有規(guī)定外，常用的供試液制備方法如下：6.4.2.1 液體供試品取供試品10ml，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，作為1:10的供試液。油劑可加入適量的無(wú)菌聚山梨酯80使供試品分散均勻。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。6.4.2.2 固體、半固體或粘稠性供試品取供試品10g，加pH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，用適宜的方法，混勻，作為1:10的供試液。必要時(shí)加入適量的無(wú)菌聚山梨酯80，并置水浴中適當(dāng)加溫使供試品分散均勻。6.

5、4.2.3 乳膏劑取供試品5g（或5ml），加至含溶化的（溫度不超過(guò)45）的吐溫80、3g單硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80無(wú)菌混合物的燒杯中，用無(wú)菌玻璃棒攪拌成團(tuán)后，慢慢加入45的PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為1:20供試液。6.4.2.4 栓劑取供試品10g，加適量稀釋液，置45水浴保溫10分鐘，使溶，加入無(wú)菌聚山梨酯80 5-8ml，振搖使之乳化，再加稀釋液（稀釋液和聚山梨酯80的總量為100ml），搖勻，作為1:10的供試液。6.4.2.5 腸溶制劑取供試品10g，加PH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖液至100ml，45水浴中，振搖，使溶解，作

6、為1:10的供試液。6.4.3 供試液的稀釋取1支1ml滅菌吸管吸取1:10均勻供試液1ml，加入裝有9mlPH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液的試管中混勻，即為1:100供試液。（此時(shí)操作一般為：左手執(zhí)試管并將塞打開(kāi)、傾斜，右手執(zhí)10ml吸管吸量，注意：勿在乙醇燈焰峰正上方操作，以免燈焰將供試液中菌細(xì)胞殺滅）以此類(lèi)推，根據(jù)供試品污染程度，可稀釋至1:1000、1:10000等適宜稀釋級(jí)。每遞增1稀釋劑，必須另?yè)Q一支吸管。稀釋時(shí)，吸管插入第1級(jí)稀釋液內(nèi)不低于液面2.5cm，反復(fù)吸吹約10次。吸液時(shí)，應(yīng)先吸至高于吸管上部刻度少許，然后提起吸管，貼于試管內(nèi)壁調(diào)整液量至刻度，吸管移至第2級(jí)稀釋管的內(nèi)壁

7、近液面處（勿接觸液面）緩慢地放出全部供試液（吸管內(nèi)應(yīng)無(wú)黏附或殘留液體）。6.4.4 檢查法6.4.4.1 平皿法 在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時(shí)，以該稀釋級(jí)吸管，吸取每級(jí)稀釋級(jí)供試液各1ml置每個(gè)滅菌平皿中，每一稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少注23個(gè)平皿（一般為左手執(zhí)平皿，將蓋半開(kāi)，右手執(zhí)吸管），注平皿時(shí)，將1ml供試液慢慢全部注入平皿中，管內(nèi)無(wú)殘留液體，防止反流至吸管尖端部。6.4.4.1.2 陰性對(duì)照 用1支1ml吸管吸取試驗(yàn)用稀釋液（PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液）各1ml，分別注入4個(gè)平皿中。其中兩個(gè)作細(xì)菌數(shù)陰性對(duì)照：另兩個(gè)作霉菌、酵母菌數(shù)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。6.4.4.1.3 傾注

8、培養(yǎng)基 將預(yù)先配制好的培養(yǎng)基（細(xì)菌計(jì)數(shù)用營(yíng)養(yǎng)瓊脂，霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基）熔化，置45。C水浴中，備用。將45。C左右的瓊脂傾注上述各個(gè)平皿約15ml，以順時(shí)針或反時(shí)針?lè)较蚩焖俎D(zhuǎn)動(dòng)平皿（勿使培養(yǎng)基溢出）使供試液與培養(yǎng)基混勻，放置，待凝。6.4.4.1.4 培養(yǎng)細(xì)菌計(jì)數(shù)平板倒置于30-35培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天。霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)平板倒置于23-28培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天，必要時(shí)可延長(zhǎng)至7天。逐日觀察菌落生長(zhǎng)情況，點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)， 6.4.4.1.5 菌落計(jì)數(shù)將平板置觀察臺(tái)上用標(biāo)記筆點(diǎn)計(jì)，以透射光襯以暗色背景，仔細(xì)觀察，計(jì)數(shù)。必要時(shí)借助于放大鏡和顯微鏡觀察。菌落蔓延生長(zhǎng)成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)

9、后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級(jí)兩個(gè)平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。一般營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細(xì)菌計(jì)數(shù)；玫瑰紅納瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)；酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于酵母菌計(jì)數(shù)。在特殊情況下，若營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)有霉菌和酵母菌、玫瑰紅納瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)有細(xì)菌，則應(yīng)分別點(diǎn)計(jì)霉菌和酵母菌、細(xì)菌菌落數(shù)。然后將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上的霉菌和酵母菌數(shù)或玫瑰紅納瓊脂培養(yǎng)基上的細(xì)菌數(shù)，與玫瑰紅納瓊脂培養(yǎng)基中的霉菌和酵母菌數(shù)或營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的細(xì)菌數(shù)進(jìn)行比較，以菌落數(shù)高的培養(yǎng)基中的菌數(shù)為計(jì)數(shù)結(jié)果。6.4.4.1.6 菌數(shù)報(bào)告規(guī)則細(xì)菌、酵母菌

10、宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu、霉菌宜選取平均菌落數(shù)小于100cfu的平板計(jì)數(shù)，作為菌數(shù)報(bào)告（取兩位有效數(shù)字）的依據(jù)。以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告1g、1ml或10 c 供試品中所含的菌數(shù)。如各稀釋級(jí)的平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，或僅最低稀釋級(jí)的平板有菌落生長(zhǎng)，但平均菌落數(shù)小于1時(shí)，以1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。6.4.4.2 薄膜過(guò)濾法6.4.4.2.1 采用薄膜過(guò)濾法，濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45µm，直徑約為50mm。選擇濾膜材質(zhì)時(shí)應(yīng)保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。水溶性供試液過(guò)濾前先將少

11、量的沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。油類(lèi)供試品，其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml。總沖洗量不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。6.4.4.2.2 取相當(dāng)于每張濾膜含1g或1ml供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過(guò)濾。若供試品每1g或1ml所含的菌數(shù)較多時(shí)，可取適宜稀釋級(jí)的供試液1ml,過(guò)濾。用PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或其他適宜的沖洗液沖洗濾膜。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅那瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂

12、培養(yǎng)基上培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。濾膜貼于平板上是不得有空隙或氣泡，否則影響微生物的生長(zhǎng)。6.4.4.2.3 陰性對(duì)照 取試驗(yàn)用的稀釋液1ml照上述薄膜過(guò)濾法操作，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。6.4.4.2.4 培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 培養(yǎng)條件和計(jì)數(shù)方法同平皿法，每片濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過(guò)100cfu。6.4.4.2.5 菌數(shù)報(bào)告規(guī)則 以相當(dāng)于1g或1ml供試品的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù)；若濾膜上無(wú)菌落生長(zhǎng)，以<1報(bào)告菌數(shù)（每張濾膜過(guò)來(lái)1g或1ml供試品），或<1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。6.4.4.3 培養(yǎng)基稀釋法取低稀釋級(jí)供試液（原液或1:10供試液或其他供試液）2份，每份各1m

13、l，分別注入平皿中（每皿0.5ml、0.2ml或<0.2ml），每1個(gè)平皿傾注培養(yǎng)基約15ml，混勻，凝固后，倒置培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。每份供試液所加注平板點(diǎn)計(jì)的菌落之和，即為每1ml菌落數(shù)，公的2組數(shù)據(jù)。以兩份低稀釋級(jí)供試液菌落數(shù)的平均值乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告。6.4.4.4 結(jié)果報(bào)告6.4.4.4.1 菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)據(jù)報(bào)告。6.4.4.4.2 菌落數(shù)大于100時(shí)，取兩位有效數(shù)字報(bào)告，第三位按數(shù)字修約規(guī)則處理。6.4.4.5 復(fù)試供試品細(xì)菌數(shù)、霉菌及酵母菌數(shù)其中一項(xiàng)一次檢驗(yàn)不合格，應(yīng)從同一批樣品中隨機(jī)重新取2倍包裝量供試品，依法作單項(xiàng)復(fù)試兩份，以三次檢驗(yàn)結(jié)果的均值報(bào)告。若3次結(jié)果的平均

14、值超過(guò)該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定：否則，判供試品符合規(guī)定。控制菌檢查控制菌檢查是用于檢查某些特定微生物（控制菌或其他致病菌），按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再?gòu)?fù)試。檢查時(shí)，按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行供試品的控制菌檢查。7 大腸埃希菌7.1 設(shè)備、儀器及用具7.1.1 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室室、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30-350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、電冰箱、滅菌柜、紫外燈等。7.1.2 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過(guò)濾器等。7.1.3 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪

15、刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。7.2 試液指示液PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、PH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖溶液、靛基質(zhì)試液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。7.3 培養(yǎng)基 膽鹽乳糖培養(yǎng)基（BL）、4-甲基傘形酮葡萄糖苷酸培養(yǎng)基（MUG）、曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB）或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基等。7.4 操作方法7.4.1 增菌培養(yǎng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基（BL）2瓶，每瓶各100ml，1瓶加入供試液10ml(相當(dāng)于供試品1g、1ml、10cm2)，1瓶加入10ml的稀釋液作陰性對(duì)照。30-350C培養(yǎng)18-24h，必要時(shí)可延至48h。陰性對(duì)照應(yīng)

16、無(wú)菌生長(zhǎng)。取上述培養(yǎng)物0.2ml，接種至5mlMUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)，培養(yǎng)，于5小時(shí)、24小時(shí)在366nm紫外線下觀察，同時(shí)用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對(duì)照。若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光，為MUG陽(yáng)性；不呈現(xiàn)熒光，為MUG陰性。觀察后，沿培養(yǎng)管的管壁加入數(shù)滴靛基質(zhì)試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質(zhì)陽(yáng)性；呈試劑本色，為靛基質(zhì)陰性。本底對(duì)照應(yīng)為MUG陰性和靛基質(zhì)陰性。如MUG陽(yáng)性（有熒光）、靛基質(zhì)陽(yáng)性（玫瑰紅色），判供試品檢出大腸埃希菌；如MUG陰性（無(wú)熒光）、靛基質(zhì)陰性（無(wú)色），判供試品未檢出大腸埃希菌。7.4.2 分離培養(yǎng)7.4.2.1 如MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陰性或MUG陰性、靛基質(zhì)陽(yáng)性時(shí)，將上述供試品BL增

17、菌培養(yǎng)液輕輕搖動(dòng)，以接種環(huán)沾取1-2環(huán)培養(yǎng)液劃線于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂（EMB）或麥康凱瓊脂平板上，培養(yǎng)18-24h，觀察EMB平板或麥康凱瓊脂平板有無(wú)可疑大腸埃希菌菌落生長(zhǎng)。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)，或生長(zhǎng)的菌落不同于下表所列特征，可判供試品未檢出大腸埃希菌。 大腸埃希菌菌落形態(tài)特征培養(yǎng)基菌落形態(tài)曙紅亞甲藍(lán)瓊脂呈紫黑色、淺紫色、藍(lán)紫色或粉紅色，菌落中心呈深紫色或無(wú)明顯暗色中心，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)，常有金屬光澤。麥康凱瓊脂鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)。7.4.2.2 若曙紅亞甲藍(lán)瓊脂（EMB）或麥康凱瓊脂平板上生長(zhǎng)的菌落與表中所列菌落形態(tài)特

18、征相符或疑似者，應(yīng)挑取可疑菌落進(jìn)行分離、純化、革蘭染色、鏡檢及IMViC試驗(yàn)。7.4.3 純培養(yǎng)如生長(zhǎng)菌落與上表所列特征相符合或疑似者，以接種針輕輕接觸單個(gè)疑似菌落的表面中心，沾取培養(yǎng)物，應(yīng)挑選23個(gè)以上疑似菌落，分別接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，培養(yǎng)18-24h，作以下檢查。如平板上無(wú)單個(gè)可疑菌落，但有可疑菌團(tuán)（紫黑色，或有金屬光澤），應(yīng)沾取可疑菌團(tuán)培養(yǎng)物少許，或重新取增菌培養(yǎng)液分區(qū)劃線接種于EMB瓊脂平板，培養(yǎng)18-24h，再挑選單個(gè)疑似菌落，純培養(yǎng)，作以下檢查。7.4.4 革蘭染色、鏡檢7.4.4.1 以接種環(huán)沾取無(wú)菌水于潔凈載玻片上,取上述疑似菌落的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物少許,制成均勻涂片,自然或

19、微溫干燥,再通過(guò)火焰23次(載玻片不燙手)固定。滴加結(jié)晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以濾紙吸干余水。滴加95%乙醇,脫色2030s,水洗。滴加沙黃染液,復(fù)染1min,待干后,鏡檢。7.4.4.2 染色結(jié)果 革蘭陽(yáng)性菌呈藍(lán)紫色;革蘭陰性菌呈紅色,大腸埃希菌為革蘭陰性短桿菌,或球桿菌狀,亦有桿菌狀。7.4.4.3 注意事項(xiàng)7.4.4.3.1 玻片必須潔凈，涂片菌量宜少，菌不可濃。否則，菌細(xì)胞成堆或連成片。染色反應(yīng)難于判斷，菌細(xì)胞形態(tài)難于觀察。7.4.4.3.2 培養(yǎng)物的菌齡以16-24h為宜。培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)的革蘭陽(yáng)性菌易染成紅色。7.4.4.3.3 脫色是關(guān)鍵，脫色時(shí)間

20、不足，菌細(xì)胞易染成陽(yáng)性，脫色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易染成陰性。7.5 結(jié)果判斷7.5.1 當(dāng)陰性對(duì)照試驗(yàn)呈陰性，供試品MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陽(yáng)性，報(bào)告檢出大腸埃希菌。MUG陰性、靛基質(zhì)陰性，報(bào)告供試品未檢出大腸埃希菌。7.5.2 MUG陽(yáng)性、靛基質(zhì)陰性、革蘭陰性桿菌，報(bào)告供試品檢出大腸埃希菌；MUG陰性、靛基質(zhì)陽(yáng)性、革蘭陰性桿菌，報(bào)告供試品檢出大腸埃希菌。7.5.3 供試品培養(yǎng)物檢查不符合二項(xiàng)中的任一項(xiàng)，報(bào)告供試品未檢出大腸埃希菌。7.5.4 當(dāng)陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)不能作出檢驗(yàn)報(bào)告。8 大腸菌群8.1 設(shè)備、儀器及用具8.1.1 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室室、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30-350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱

21、、電冰箱、滅菌柜、紫外燈等。8.1.2 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過(guò)濾器等。8.1.3 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。8.2 試液、指示液 PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、PH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖溶液8.3 培養(yǎng)基 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基（EMB）或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基等8.4 操作方法8.4.1 增菌培養(yǎng)取含10ml的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入1:10的供試

22、液1ml（含供試品0.1g或0.1ml）、1:100的供試液1ml（含供試品0.01g或0.01ml）、1:1000的供試液1ml（含供試品0.001g或0.001ml），另取1支乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管加入稀釋液1ml作為陰性對(duì)照。培養(yǎng)1824小時(shí)。加供試品的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管若無(wú)菌生長(zhǎng)或有菌生長(zhǎng)但不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，判該管未檢出大腸菌群；若乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，應(yīng)進(jìn)一步分離培養(yǎng)。8.4.2 分離培養(yǎng)將上述產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管中的培養(yǎng)物，分別劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基或麥康凱瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)1824小時(shí)。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)，或生長(zhǎng)的菌落與下表所列的菌落形態(tài)特征不符或?yàn)榉歉锾m陰性無(wú)芽孢桿

23、菌，判該管未檢出大腸菌群；若平板上生長(zhǎng)的菌落與下表所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似，且為革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌，應(yīng)進(jìn)行確證試驗(yàn)。培養(yǎng)基菌落形態(tài)曙紅亞鉀藍(lán)瓊脂呈紫黑色、紫紅色、紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)。麥康凱瓊脂鮮桃紅色或粉紅色，圓形，扁平或稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤(rùn)。8.4.3 確證試驗(yàn) 從上述分離平板上挑選45個(gè)疑似菌落，分別接種于乳糖發(fā)酵管中，培養(yǎng)2448小時(shí)，若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，判該乳糖膽鹽發(fā)酵管檢出大腸菌群，否則判未檢出大腸菌群。8.5.4 結(jié)果判斷 根據(jù)大腸菌群的檢出管數(shù)，按下表報(bào)告1g或1ml供試品中的大腸菌群數(shù)。各供試品量的檢出結(jié)果可能的大腸菌群數(shù)N（個(gè)/

24、g或ml）0.1g或0.1ml0.01g或0.01ml0.001g或0.001ml+1000+-100N1000+-10N100-10注：“+”代表檢出大腸菌群；“-”代表未檢出大腸菌群。9 沙門(mén)菌9.1 設(shè)備、儀器及用具9.1.1 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室室、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30-350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、電冰箱、滅菌柜、紫外燈等。9.1.2 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過(guò)濾器等。9.1.3 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試

25、管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。9.2 試液、指示液 PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、PH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖溶液9.3 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基、膽鹽硫乳瓊脂(或沙門(mén)、志賀菌屬瓊脂)培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂（或曙紅亞甲藍(lán)瓊脂）培養(yǎng)基、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基等。9.4 操作方法9.4.1 增菌培養(yǎng) 取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基2瓶，每瓶各100ml，1瓶加入供試品10g或10ml)、，1瓶加入10ml的稀釋液作陰性對(duì)照。30-350C培養(yǎng)18-24h。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。9.4.2 分離培養(yǎng) 取上述培養(yǎng)物1ml，接種于10ml四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基中，培養(yǎng)18-24小時(shí)后，分別劃線接種于膽鹽硫乳

26、瓊脂（或沙門(mén)、志賀菌屬瓊脂）培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂（或曙紅亞甲藍(lán)瓊脂）培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)18-24小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)至40-48小時(shí)）。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落不同于下表所列特征，判供試品未檢出沙門(mén)菌。培養(yǎng)基菌落形態(tài)膽鹽硫乳瓊脂無(wú)色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無(wú)黑色沙門(mén)、志賀菌屬瓊脂無(wú)色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中心有時(shí)帶黑褐色曙紅亞甲藍(lán)瓊脂無(wú)色至淺橙色，透明或半透明，光滑濕潤(rùn)的圓形菌落麥康凱瓊脂無(wú)色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時(shí)為暗色9.4.3 初步鑒別試驗(yàn) 若平板上生長(zhǎng)的菌落與上表所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似，用接種針挑選2-3個(gè)菌落分別于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基高層斜

27、面上進(jìn)行斜面和高層穿刺接種，培養(yǎng)18-24小時(shí)，如斜面未見(jiàn)紅色、底層未見(jiàn)黃色，斜面黃色、底層無(wú)黑色或斜面及底層均為紅色，判供試品未檢出沙門(mén)菌。否則應(yīng)取三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基斜面的培養(yǎng)物進(jìn)行適宜的鑒定試驗(yàn)，確認(rèn)是否為沙門(mén)菌。10 銅綠假單胞菌10.1 設(shè)備、儀器及用具10.1.1 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室室、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30-350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、電冰箱、滅菌柜、紫外燈等。10.1.2 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過(guò)濾器等。10.1.3 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、

28、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。10.2 試液、指示液PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、PH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖溶液、1%二鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試液、三氯甲烷、1molL鹽酸試液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。10.3 培養(yǎng)基膽鹽乳糖培養(yǎng)基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基、PDP瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基等。 10.4 操作方法10.4.1 增菌培養(yǎng)取膽鹽乳糖培養(yǎng)基（BL）2瓶，每瓶各100ml，1瓶加入供試液10ml(相當(dāng)于供試品1g、1ml、10cm2)，1瓶加入10ml的稀釋液作陰性對(duì)照。30-350C培養(yǎng)18-24h，必要時(shí)可延至48h。陰性

29、對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。10.4.2 分離培養(yǎng)取上述培養(yǎng)物，劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)18-24小時(shí)。銅綠假單胞菌在該培養(yǎng)基平板上的典型菌落為扁平、圓形或無(wú)定形、邊緣不齊，表面光滑濕潤(rùn)，呈灰白色，周邊略呈擴(kuò)散現(xiàn)象，在菌落相鄰處常有融合現(xiàn)象。菌落周?chē)Ｓ兴苄运{(lán)綠色素?cái)U(kuò)散，使培養(yǎng)基顯藍(lán)綠色，但亦有不產(chǎn)色素的菌株。如平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出銅綠假單胞菌。10.4.3 純培養(yǎng)如平板生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選2-3個(gè)菌落，分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)18-24小時(shí)。取營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色、鏡檢。 10

30、.4.4 革蘭染色鏡檢10.4.4.1 革蘭染色以接種環(huán)沾取無(wú)菌水于潔凈載玻片上,取上述疑似菌落的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物少許,制成均勻涂片,自然或微溫干燥,再通過(guò)火焰23次(載玻片不燙手)固定。滴加結(jié)晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以濾紙吸干余水。滴加95%乙醇,脫色2030s,水洗。滴加沙黃染液,復(fù)染1min,待干后,鏡檢。10.4.4.2 鏡檢 銅綠假單胞菌為革蘭陰性、無(wú)芽孢桿菌，單個(gè)，成對(duì)或成短鏈排列。10.4.5 氧化酶試驗(yàn) 取潔凈濾紙片置于平皿中，用無(wú)菌玻棒取斜面培養(yǎng)物涂于濾紙片上，滴加新配制的1%二鹽酸二甲基對(duì)苯二胺試液，在30秒內(nèi)若培養(yǎng)物呈粉紅色并逐漸

31、變?yōu)樽霞t色為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，若培養(yǎng)物不變色或僅顯粉色為陰性。若斜面培養(yǎng)物為非革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌或氧化酶試驗(yàn)陰性，均判供試品未檢出銅綠假單胞菌。否則，應(yīng)進(jìn)行綠膿菌素試驗(yàn)。10.4.6 綠膿菌素試驗(yàn) 取營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物接種于PDP瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)24小時(shí)，加三氯甲烷3-5ml至培養(yǎng)管中，攪碎培養(yǎng)基并充分振搖。靜置片刻，將三氯甲烷相移至另一試管中，加入1molL鹽酸試液約1ml，振搖后，靜置片刻，觀察。若鹽酸溶液呈粉紅色，為綠膿菌素試驗(yàn)陽(yáng)性，否則為陰性。同時(shí)用未接種的PDP瓊脂培養(yǎng)基斜面同法作陰性對(duì)照，陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)呈陰性。10.5 若上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性及綠膿菌素試驗(yàn)陽(yáng)

32、性，判供試品檢出銅綠假單胞菌。若上述疑似菌為革蘭陰性桿菌、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性及綠膿菌素試驗(yàn)陰性，應(yīng)綣續(xù)進(jìn)行適宜的生化試驗(yàn)，確認(rèn)是否為銅綠假單胞菌。11 金黃色葡萄球菌11.1 設(shè)備、儀器及用具11.1.1 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室室、凈化工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱（30-350C）、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、電冰箱、滅菌柜、紫外燈等。11.1.2 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過(guò)濾器等。11.1.3 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾

33、膜等。11.2 試液、指示液PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、PH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖溶液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。11.3 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基等。11.4 操作方法11.4.1 增菌培養(yǎng)取營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基2瓶，每瓶各100ml，1瓶加入供試液10ml(相當(dāng)于供試品1g、1ml、10cm2)，1瓶加入10ml的稀釋液作陰性對(duì)照。30-350C培養(yǎng)18-24h，必要時(shí)可延至48h。陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。11.4.2 分離培養(yǎng)取上述培養(yǎng)物，劃線接種于卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)24-72小時(shí)。若平板上

34、無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落不同于下表所列特征，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。培養(yǎng)基菌落形態(tài)甘露醇氯化鈉瓊脂金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃色環(huán)，菌落直徑0.7-1mm卵黃氯化鈉瓊脂金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有卵磷脂分解的乳啄圈，菌落直徑1-2mm11.4.3 純培養(yǎng)若平板上生長(zhǎng)的菌落與表5所列的菌落特征相符或疑似，應(yīng)挑選2-3個(gè)菌落，分別接種與營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面上，培養(yǎng)18-24小時(shí)。取營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)物進(jìn)行革蘭染色、鏡檢。 11.4.4 革蘭染色鏡檢11.4.4.1 革蘭染色以接種環(huán)沾取無(wú)菌水于潔凈載玻片上,取上述疑似菌落的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物少許,制成均勻涂片,自然或微溫干燥,

35、再通過(guò)火焰23次(載玻片不燙手)固定。滴加結(jié)晶紫染液,染色1min,水洗,滴加碘液,媒染1min,水洗,以濾紙吸干余水。滴加95%乙醇,脫色2030s,水洗。滴加沙黃染液,復(fù)染1min,待干后,鏡檢。11.4.4.2 鏡檢 金黃色葡萄球菌為革蘭陽(yáng)性球菌、無(wú)芽孢，一般不產(chǎn)生莢膜。排列呈不規(guī)則的葡萄狀，亦可呈，單個(gè)，成對(duì)或成短鏈排列。 若上述疑似菌為非革蘭陽(yáng)性球菌、血漿凝固酶試驗(yàn)陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。12 梭菌12.1 設(shè)備、儀器及用具12.1.1 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室室、凈化工作臺(tái)、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、電冰箱、滅菌柜、紫外燈、厭氧培養(yǎng)箱等。12.1.2 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平

36、、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過(guò)濾器等。12.1.3 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。12.2 試液、指示液PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、PH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖溶液、3%過(guò)氧化氫試液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。12.3 培養(yǎng)基 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、梭菌增菌培養(yǎng)基、哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基（含慶大霉素20mg/L和不含慶大霉素）營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、卵黃氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基等。12.4 操作方法1

37、2.4.1 增菌培養(yǎng)取供試液10ml（相當(dāng)于供試品1g、1ml）2份，其中1份置80保溫10分鐘后迅速冷卻。上述2份供試液直接或處理后分別接種至100ml的梭菌增菌培養(yǎng)基中，置厭氧條件下培養(yǎng)48小時(shí)。12.4.2 增菌培養(yǎng)取上述每一培養(yǎng)物0.2ml，分別涂抹接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，在厭氧條件下培養(yǎng)48-72小時(shí)。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)，判供試品未檢出梭菌；若平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)挑選2-3個(gè)菌落分別進(jìn)行革蘭染色和過(guò)氧化酶試驗(yàn)。12.4.3 革蘭染色鏡檢 取疑似菌落涂片，作革蘭染色、鏡檢，觀察染色及菌體特征。培養(yǎng)后形成的芽孢，初呈“火柴頭”狀卵圓形，繼而膨大呈球形，在菌體末端如鼓槌

38、狀。染色鏡檢有卵圓形至球形的芽孢，大于菌體，著生于菌體中央、次端或頂端。12.4.4 過(guò)氧化酶試驗(yàn)加一滴3%過(guò)氧化氫溶液至瓊脂表面的單個(gè)分散的菌落，或轉(zhuǎn)移至載玻片上的菌落上。有氣泡產(chǎn)生，為過(guò)氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，梭菌成陰性結(jié)果。12.5 結(jié)果判斷若上述可疑菌落為革蘭陽(yáng)性梭菌，有或無(wú)卵圓形或球形的芽孢，過(guò)氧化酶試驗(yàn)陰性，判供試品檢出梭菌，否則判供試品未檢出梭菌。13 白色念珠菌13.1 設(shè)備、儀器及用具13.1.1 設(shè)備微生物限度檢測(cè)室室、凈化工作臺(tái)、電熱恒溫水浴鍋、烘箱、電冰箱、滅菌柜、紫外燈、生化培養(yǎng)箱（30-350C）等。13.1.2 儀器及器皿顯微鏡、托盤(pán)天平、錐形瓶、研缽、培養(yǎng)皿、量筒、試管

39、及塞、吸管、注射器、注射針頭、載玻片、蓋玻片、薄膜過(guò)濾器等。13.1.3 用具大、小橡皮乳頭，潔凈工作服、口罩、醫(yī)用手套、接種環(huán)、酒精燈、酒精棉球、滅菌剪刀、滅菌鑷子、不銹鋼藥匙、試管架、火柴、記號(hào)筆、薄膜過(guò)濾膜等。13.2 試液、指示液PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、PH6.8無(wú)菌磷酸鹽緩沖溶液、革蘭染色液、碘液、95%乙醇。13.3 培養(yǎng)基沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、念珠菌顯色培養(yǎng)基、1%聚山梨酯80-玉米粉瓊脂培養(yǎng)基等。13.4 操作方法13.4.1 增菌培養(yǎng)取供試液10ml（相當(dāng)于供試品1g、1ml、10cm2）直接或處理后接種至適量（不少于100ml）的沙氏葡萄糖

40、肉湯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4872 小時(shí)。13.4.2 增菌培養(yǎng)取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)2448 小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)至72 小時(shí)）。白色念珠菌在沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈乳白色偶見(jiàn)淡黃色，表面光滑有濃酵母氣味，培養(yǎng)時(shí)間稍久則菌落增大，顏色變深、質(zhì)地變硬或有皺摺。若平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)或生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出白色念珠菌。如平板上生長(zhǎng)的菌落與上述菌落形態(tài)特征相符或疑似，應(yīng)挑選23個(gè)菌落分別接種至念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上，培養(yǎng)2448 小時(shí)（必要時(shí)延長(zhǎng)至72 小時(shí)）。若平板上無(wú)綠色或翠綠色的菌落生長(zhǎng)，判供試品未檢出白色念珠菌。13.4.3 確認(rèn)試驗(yàn)若平

41、板上生長(zhǎng)的菌落為綠色或翠綠色，挑取相符或疑似的菌落接種于1%吐溫80-玉米瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)2448 小時(shí)。取培養(yǎng)物進(jìn)行染色，鏡檢及芽管試驗(yàn)。芽管試驗(yàn) 挑取1%吐溫80-玉米瓊脂培養(yǎng)基上的培養(yǎng)物，接種于加有一滴血清的載玻片上，蓋上蓋玻片，置濕潤(rùn)的平皿內(nèi)，置3537、13 小時(shí)，置顯微鏡下觀察，可見(jiàn)到由孢子長(zhǎng)出短小芽管。若上述疑似菌為非革蘭陽(yáng)性菌，顯微鏡未見(jiàn)厚膜孢子、假菌絲、芽管，判供試品未檢出白色念珠菌。結(jié)果判定供試品檢出控制菌或其他致病菌時(shí)，按一次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再?gòu)?fù)試。供試品的細(xì)菌數(shù)、霉菌和酵母菌數(shù)其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，應(yīng)從同一批樣品中隨機(jī)抽樣，獨(dú)立復(fù)試兩次，以3次結(jié)果的平均值報(bào)告菌數(shù)。眼用制劑檢出霉菌和酵母菌數(shù)時(shí)，須以兩次復(fù)試結(jié)果均不得