基本理論1試驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則藥理研究的目的是通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)

1、基本理論（一）1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則藥理研究的目的是通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)認(rèn)識(shí)藥物作用的特點(diǎn)和規(guī)律，為開(kāi)發(fā)新藥和評(píng)價(jià)藥物提供科學(xué)依據(jù)。由于生物個(gè)體之間存在著差異性，要取得精確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)論必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)必須遵循R.A.Fischer的三原則，即：隨機(jī)、對(duì)照、重復(fù)。1.1 隨機(jī)1.2 對(duì)照1.3 重復(fù)2常用的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)分組設(shè)計(jì)2.1 單純隨機(jī)設(shè)計(jì)2.2 簡(jiǎn)化分層隨機(jī)法2.3 配對(duì)隨機(jī)法3藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中常用劑量換算法1.由藥物劑量mg/kg及藥液百分濃度換算成每kg體重注射藥液量ml,進(jìn)而計(jì)算出每只動(dòng)物應(yīng)該注射多少ml。扁肝惴，娘學(xué)甫gkg肥布峭液容量ml/kgH妹®叼!版哪蟒物

2、濃度3.百分濃度與摩爾/升濃度之間的換算：初篩|基本理論（二）“一一新藥的發(fā)現(xiàn)、新藥及其腐活牲無(wú)活性1 .藥物的定義*2 .新藥內(nèi)H褊分臨床前藥理制劑部分3 .新藥巾分類T一、丁甘政結(jié)'劑型、合量標(biāo)準(zhǔn)、3.1 q箭、然藥物注冊(cè)分類穩(wěn)定性、溶出度質(zhì)沙雅菊必學(xué)一般藥理學(xué)毒理學(xué)菊動(dòng)學(xué)田?3.2 化學(xué)藥品注冊(cè)分類外生物利用度3.3生物制品注冊(cè)分類、新藥研究的一般程序臨床試驗(yàn)評(píng)價(jià)三、臨床前藥理學(xué)的研究?jī)?nèi)容1、與治療作用有關(guān)的主要藥效學(xué)研究2、一般藥理學(xué)研究3、藥代動(dòng)力學(xué)研究4、毒理學(xué)研究(1)急性毒性試驗(yàn)(2)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)(3)特殊毒性試驗(yàn)四、臨床前藥理學(xué)研究對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的要求1 .選才¥

3、;2-3種動(dòng)物，以排除種屬差異。2 .選擇多種公認(rèn)可靠的動(dòng)物模型。3 .以整體實(shí)驗(yàn)為主，配合以體外離體實(shí)驗(yàn)。4 .劑量3-5個(gè)，確定量效關(guān)系。5 .給藥途徑與臨床一致。6 .設(shè)對(duì)照組：陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照。五、臨床藥理學(xué)的研究?jī)?nèi)容1 I期臨床研究人體對(duì)新藥的耐受程度，了解新藥在人體的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程。2 II期臨床確定藥物的適應(yīng)證及不良反應(yīng)，對(duì)其安全有效性作初步評(píng)價(jià)。3 III期臨床在較大范圍內(nèi)進(jìn)行西藥療效和安全性評(píng)價(jià)。4 IV期臨床上市后監(jiān)察。錄像1動(dòng)物捉拿與給藥方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私飧鞣N動(dòng)物的捉拿與給藥方法。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、大鼠、小鼠、豚鼠、家兔、貓、犬、猴的捉拿和固定。二、大鼠、小鼠、豚鼠、家兔、貓、犬、

4、猴的性別辨認(rèn)。三、大鼠、小鼠、豚鼠、家兔、貓、犬、猴的灌胃、腹腔注射、肌肉注射、皮下注射、靜脈注射方法。錄像2幾類藥物的藥理學(xué)研究方法實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私鈳最愃幬锏乃幚韺W(xué)實(shí)驗(yàn)研究方法。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物的實(shí)驗(yàn)研究方法。二、抗帕金森藥物的實(shí)驗(yàn)研究方法。三、糖皮質(zhì)激素的實(shí)驗(yàn)研究方法。實(shí)驗(yàn)一筒箭毒堿ED50的測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私釫D50的測(cè)定力法、原理、計(jì)算過(guò)程與意義實(shí)驗(yàn)對(duì)象小鼠(昆明種)、雌雄各半儀器和藥品鐵絲網(wǎng).鐵架臺(tái)、天平、注射器、筒箭毒堿(根據(jù)實(shí)際需求配制，一般為0.2m1/10g體重)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容采用點(diǎn)斜法進(jìn)行ED50的測(cè)定。1 .預(yù)實(shí)驗(yàn)；目的是為了找出符合點(diǎn)斜法要求的Dmax和Dmin。陽(yáng)性反

5、應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)：20min內(nèi)小鼠落下鐵絲網(wǎng)3次(注意排除因互相擁擠而落下所造成的假陽(yáng)性)。2 .確定組數(shù)(n)后，根據(jù)Dmax和Dmin,計(jì)算各組應(yīng)給予的劑量，注意公比r應(yīng)在1.1-1.6范圍內(nèi)Dmax=rn-1Dminr工"/力咽舊-11-L6分別計(jì)算出各組應(yīng)注射的劑量，3 .正式實(shí)驗(yàn)：(1)稱重、標(biāo)記；(2)篩選小鼠：將小鼠放在鐵絲網(wǎng)上，觀察10min,能堅(jiān)持不掉落的即為合格，可以參與實(shí)驗(yàn)。此步篩選的目的在于排除假陽(yáng)性。(3)給藥觀察：腹腔注射筒箭毒堿。每組分別給予相應(yīng)的劑量，(4)計(jì)算陽(yáng)性率：陽(yáng)性反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)：給藥店20min如內(nèi)自鐵絲網(wǎng)上掉落3次者為陽(yáng)性。4.計(jì)算：(1) lgED5

6、0=Xm-i(EP-0.5)其中，Xm=1gDmax1 =1grEP：陽(yáng)性率之和因此：ED50=1g-1Xm-i(EP0.5)(2) ED50的95%可信區(qū)間=1g-11gED50±1.96Sx50Sx50=iV(Z2PWP2)/(nT),n為各組動(dòng)物數(shù)以陽(yáng)性率為縱坐標(biāo)，對(duì)數(shù)劑量為橫坐標(biāo)，作圖。思考題1 .點(diǎn)斜法測(cè)定ED50時(shí)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)必須符合哪些條件？2 .測(cè)定ED50、LD50的意義是什么？3 .小鼠腹腔注射簡(jiǎn)箭毒堿的ED50是多少？其95%可信區(qū)間是多少？實(shí)驗(yàn)二磺胺藥的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饣前奉愃幬镌趧?dòng)物體內(nèi)隨時(shí)間變化的代謝規(guī)律，掌握藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算方法。實(shí)驗(yàn)對(duì)象

7、家免儀器和藥品分光光度計(jì)，75g/L(7.5%)三氯醋酸，5g/L(0.5%)亞硝酸鈉，5g/L(0.5%)麝香草酚，0.5g/L(0.05%)磺胺喀噬等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1 .家免稱重麻醉，分離頸總動(dòng)脈。耳緣靜脈注射肝素抗凝后頸動(dòng)脈插管，取動(dòng)脈血備用。2 .取血：先取空白動(dòng)脈血。然后給家免耳緣靜脈注射磺胺喀呢(0.3g/kg),分別于注射后0min、3min、5min、15min、30min、45min、60min、90min時(shí)取動(dòng)脈血。3 .測(cè)定血藥濃度：嚴(yán)格按照下表中的順序加藥：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的藥物濃度及其光密度值，可計(jì)算出樣品管內(nèi)的藥物濃度。公式如下：OD樣/OD標(biāo)=C樣/C標(biāo)將所測(cè)得的血藥濃度值與

8、時(shí)間通過(guò)計(jì)算機(jī)進(jìn)行曲線擬臺(tái)，得到時(shí)量曲線，表達(dá)公式如下：Ct=Ae-h+Be-Bt在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上以時(shí)間(t)為橫坐標(biāo)，實(shí)測(cè)的光密度值換算而得的血藥濃度的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制時(shí)量曲線圖。思考題1 .二室模型的藥物的體內(nèi)過(guò)程有哪些特點(diǎn)？2 .藥物消除動(dòng)力學(xué)分為哪兩類、各自的特點(diǎn)是什么？3 .簡(jiǎn)述藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)的測(cè)定方法。實(shí)驗(yàn)三新斯的明對(duì)琥珀酰膽堿和筒箭毒堿肌松作用的影響肌松藥分為去極化型和非去極化型兩種。去極化型肌松藥的代表藥為琥珀酰膽堿，該藥與神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜上的N2受體結(jié)合后，可使突觸后膜持久去極化，受體不能再對(duì)乙酰膽堿起反應(yīng)，從而使骨骸肌松弛、抗膽堿酯酶藥新斯的明不能對(duì)抗其肌松作用

9、，反而使其肌松作用加重。非去極化型肌松藥的代表藥為筒箭毒堿，該藥與乙酰膽堿競(jìng)爭(zhēng)神經(jīng)肌肉接頭處突觸后膜的N2受體，其肌松作用能被新斯的明解救。實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .觀察新斯的明對(duì)去極化(琥珀酰膽堿)和非去極化(筒箭毒堿)兩種肌松藥肌松作用的影響2 .學(xué)習(xí)大鼠排神經(jīng)一腸的肌標(biāo)個(gè)的制作方法及共在肌松藥研究中的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠(150200g)儀器和藥品PowerLab一套，0.05g/L(0.005%)氯化筒箭毒堿，0.3g/L(0.03%)氯化琥珀酰膽堿，0.1g/L(0.01%)澳化新斯的明，200g/L(20%)烏拉坦，20g/L(2%)鹽酸普魯卡因，生理鹽水，手術(shù)器械一套，棉線，橡皮泥，大頭釘，鐵

10、架臺(tái)等。實(shí)驗(yàn)方法1 .安裝并設(shè)定Powerlab記錄肌張力的chart文件，調(diào)定刺激器有關(guān)參數(shù)(刺激強(qiáng)度2V左右，刺激間隔990ms,波寬4ms)2 .大鼠體重，麻醉，20%烏拉坦腹腔注射(0.2-1.5g/kg)。數(shù)分鐘后翻正反射消失，即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3 .分離坐骨神經(jīng)4 .分離腓神經(jīng)5 .分離脛前肌6 .連接儀器：將脛前肌與PowerLab的張力換能器相連接，腓神經(jīng)處安放刺激電極。7 .給藥(1)：腹腔注射0.005%氯化筒箭毒堿(0.2mg/kg),待收縮振幅被抑制了20%時(shí)，立即由舌靜脈勻速注射0.01%演化新斯的明(0.1mg/kg)。8 .給藥(2):肌肉收縮恢復(fù)后，腹腔注射0.03

11、%氯化琥珀酰膽堿(1.2-2.4mg/kg),待收縮振幅被抑制了20%時(shí)，立即由舌靜脈勻速注射0.01%澳化新斯的明(0.1mg/kg)。9 .對(duì)所記錄的脛前肌收縮圖形進(jìn)行分析，討論分析結(jié)果思考題根據(jù)作用機(jī)制，肌松藥分為哪兩類？它們的區(qū)別是什么？實(shí)驗(yàn)四苯巴比妥鈉和放線菌素D對(duì)小鼠肝臟細(xì)胞色素P450含量的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)肝勻漿中肝臟細(xì)胞色素P450含量的簡(jiǎn)易測(cè)定方法，理解肝藥酶的誘導(dǎo)劑、抑制劑的作用。實(shí)驗(yàn)對(duì)象小鼠（昆明種）儀器和藥品分光光度計(jì)，扭力大平，制冰機(jī)，生理鹽水，0.75%苯巴比妥鈉，0.002%放線菌素D（A.D.）,0.25mol/L蔗糖溶液,Tris-HCl緩沖液，玻璃勻漿器，漏

12、斗，試管，濾紙，移液管等。實(shí)驗(yàn)方法1 .動(dòng)物分為3組：生理鹽水組，苯巴比妥鈉組及放線菌素D組。2 .苯巴比妥鈉和放線菌素D腹腔注射3天以誘導(dǎo)或抑制肝藥酶。3 .斷頭放血：于第3天（實(shí)驗(yàn)當(dāng)日）將小鼠斷頭放血。4 .制備肝勻漿：將0.25mol/L的蔗糖溶液和0.05mol/L的Tris-HCl緩沖液置于冰塊中預(yù)冷。剪下肝臟（肝組織不得少于400mg;勿破壞膽囊，因膽色素干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果；以濾紙吸去血跡，因血紅蛋白干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果）。扭力天平稱重（墊錫紙，每次加樣或加減法碼時(shí)必須關(guān)上天平）,將肝組織置于勻漿器中，加入預(yù)冷后的0.25mol/L蔗糖（0.5ml/100mg肝組織）冰浴下研磨，直至組織變?yōu)榈?/p>

13、色勻漿。用雙層紗布過(guò)濾勻漿液，取此勻漿液1ml,加入預(yù)冷后的0.05mol/L的Tris-HCl緩沖液9ml,充分混勻。冰浴下充以CO,1-2氣泡/秒，通氣2min。5 .將通氣完畢的溶液傾入2個(gè)比色杯中，一個(gè)作為參照補(bǔ)，另一個(gè)作為樣品杯。向樣品杯中加入連二亞硫酸鈉5mg,充分混勻。參照杯調(diào)零后，在450nm和490nm處測(cè)定樣品杯的吸光度，按下式計(jì)算P450的含量：P450（nmol/g肝臟）=（A450A490）/E-L父50000A=ECLE:P450從490nm到450nm波長(zhǎng)的示差光譜消光系數(shù)，本實(shí)驗(yàn)中E=l04L/cm-mmolL:比色杯厚度（光路長(zhǎng)度）=1cmC:溶液濃度A:吸光

14、度6.計(jì)算(1) P450升高百分率：(PhenoN.S.)/N.S.黑100%,其中Pheno代表苯巴比妥鈉。(2) P450降低百分率：(N.S.A.D.)/N.S.x100%。注意事項(xiàng)1 .操作要快(為了保證酶的活性)。2 .冰浴(為了保證酶的活性)。3 .血要放盡(P450為血紅素蛋白，血紅素影響P450)。4 .膽囊破裂后，膽紅素會(huì)影響P450的測(cè)定。5 .通CO的速度不能過(guò)快或過(guò)慢。6 .研磨，至肝組織由紅色變成淡粉色勻漿為止。7 .分光光度計(jì)上比色時(shí)，先測(cè)定A.D.,再測(cè)定N.S.,最后測(cè)定苯巴比妥鈉(P450由低濃度至高濃度)。思考題1 .肝藥酶的臨床意義。2,藥物的耐受與交叉

15、耐受，聯(lián)合用藥應(yīng)注意的問(wèn)題。3 .P450在藥物轉(zhuǎn)化中的作用。4 .不同實(shí)驗(yàn)組P450含量不同的原因。5 .誘導(dǎo)劑增加P450含量和抑制劑減少P450含量的意義。實(shí)驗(yàn)五傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物對(duì)血壓和血流動(dòng)力學(xué)的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物對(duì)血壓及血流動(dòng)力學(xué)的影響和這些藥物之間的相互作用。掌握麻醉動(dòng)物血壓的記錄方法及動(dòng)物的心導(dǎo)管技術(shù)。實(shí)驗(yàn)對(duì)象家免儀器和藥品多道生理記錄儀，壓力換能器，手術(shù)器械，氣管插管，動(dòng)脈插管，動(dòng)脈夾，靜脈插管，心導(dǎo)管，注射器，兔臺(tái)，絲線，紗布，3%戊巴比妥鈉，0.5%肝素，0.002%腎上腺素，0.003%去甲腎上腺素，0.001%異內(nèi)腎上腺素，0.5%酚妥拉明，0.1%普奈洛

16、爾，生理鹽水等。實(shí)驗(yàn)方法1 .家兔稱重，耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）麻醉（注射不宜過(guò)快，否則易致呼吸肌麻痹）。2 .將家兔背位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪去兩側(cè)腹股溝處的毛。在股動(dòng)脈搏動(dòng)明顯處，沿股動(dòng)靜脈走向縱行剪開(kāi)皮膚約3-4cm,分離右側(cè)股動(dòng)脈，穿線備用（觀測(cè)血壓用），并分離左側(cè)股靜脈.穿線備用（靜脈給藥用）。3 .剪去頸部的毛，正中切開(kāi)頸部皮膚，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，穿線備用（盡量分離出較長(zhǎng)的一段，逆行插管后觀測(cè)左心室內(nèi)壓用）。4 .打開(kāi)多道生理記錄儀，壓力換能器內(nèi)預(yù)充注肝素（注意排盡氣泡并熟悉三通管的方向）。5 .肝素化：股靜脈插管，0.5%肝素靜注抗凝（1ml/kg）06 .股動(dòng)脈

17、插管，觀測(cè)并記錄血壓（BP）。7 .頸總動(dòng)脈逆行插管，觀測(cè)并記錄左心室內(nèi)壓（LVP）和左心室內(nèi)壓變化速率（dLVP/dt）。當(dāng)導(dǎo)管插入一定長(zhǎng)度后（可在插管之前于體外估測(cè)導(dǎo)管大概的進(jìn)入長(zhǎng)度），小心操作。進(jìn)入心室內(nèi)時(shí)，有一種突破感和落空感，同時(shí)血壓波形變成室內(nèi)壓波形（舒張壓更低，收縮壓更高，脈壓增高，波形幅值明顯高于動(dòng)脈血壓波形的幅值）。注意：逆行插管插得過(guò)淺時(shí)易被血流沖出心臟，則波形又恢復(fù)為動(dòng)脈血壓波形；插得過(guò)深時(shí)插管堵在心室壁上則記錄不到波形，甚至刺破心臟。因此在操作時(shí)應(yīng)結(jié)合體外估測(cè)長(zhǎng)度、手感以及血壓波形的變化進(jìn)行判斷。8 .觀測(cè)并記錄一段正常圖形。9 .給藥并進(jìn)行觀察、記錄：（1）腎上腺素t

18、去甲腎上腺素t異內(nèi)腎上腺素t酚妥拉明，5min后T再次給予去甲腎上腺素T腎上腺素T異內(nèi)腎上腺素。（2）腎上腺素T去甲腎上腺素T異內(nèi)腎上腺素T普奈洛爾（0.5ml/kg）,5min后t異內(nèi)腎上腺素t腎上腺素t去甲腎上腺素。說(shuō)明；除普奈洛爾外，其他藥物注射劑量均為0.2ml/kg；每次給藥后可注生理鹽水，將死腔內(nèi)的藥液注入靜脈；每次給藥后，待BP穩(wěn)定后再給另一種藥物。思考題1 .各藥對(duì)血壓、左心室內(nèi)壓和左心室內(nèi)壓變化速率的作用，酚妥拉明和普奈洛爾對(duì)其他藥物作用的影響。2 .影響心功能的因素有哪些？各種影響心功能的約物作用機(jī)制分別是什么？藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)課考試（操作部分）【題目】用扭體法觀察藥物的鎮(zhèn)痛作用?！灸康摹恐饕疾閷W(xué)生對(duì)小鼠標(biāo)記、稱重、捉拿、腹腔注射給藥的操作技能?！驹怼炕瘜W(xué)物質(zhì)刺激腹膜引起持久的痛反應(yīng)，致使小鼠出現(xiàn)“扭體”反應(yīng)（即腹部?jī)?nèi)凹，軀干與后肢伸張，臀部高起）?！緞?dòng)物】小白鼠，2022g,雌雄兼用?！舅?/p>