菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測定

1、精選ppt菌落總數(shù)與大腸菌群數(shù)測定精選ppt主要內(nèi)容菌落總數(shù)測定大腸菌群測定MPN法原理（拓展內(nèi)容）精選ppt菌落總數(shù)測定掌握菌落總數(shù)測定方法實驗原理 不同稀釋度的樣品，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，36 ，48h（水產(chǎn)品30 ，72h ），菌落數(shù)精選ppt菌落總數(shù)測定器材與試劑： 樣品，無菌生理鹽水，平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，1ml吸管，培養(yǎng)皿精選ppt菌落總數(shù)測定精選ppt傾注培養(yǎng)精選ppt培養(yǎng)結(jié)果精選ppt菌落總數(shù)測定實驗步驟 5.菌落計數(shù)： 肉眼觀察，可用放大鏡，可標(biāo)記 必要時分區(qū)計數(shù)，菌落成片者作廢計算方法 某稀釋度的菌落數(shù)：兩平板菌落數(shù)取平均值 選擇菌落數(shù)在30-300之間的稀釋度 （1）僅有一個稀釋

2、度在此范圍： 菌落數(shù)稀釋倍數(shù)精選ppt菌落總數(shù)測定計算方法： （2）有兩個稀釋度在30-300之間 菌落數(shù)之比2，選較小值 菌落數(shù)之比300 取稀釋倍數(shù)最大者 （4）所有稀釋度均30 取稀釋倍數(shù)最小者 （5）沒有任何稀釋度在30-300之間 選最接近該范圍者結(jié)果單位：CFU/ml（g）精選ppt菌落總數(shù)測定注意事項： 1.無菌操作 2.標(biāo)記 3.何時更換吸管 4.吸吹混勻 5.瓊脂培養(yǎng)基保溫 6.安全常識精選ppt大腸菌群數(shù)測定實驗?zāi)康膶嶒炘?36 ，48h，產(chǎn)氣（小倒管） 三步法：初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵器材與試劑 樣品、無菌生理鹽水、LST肉湯，BGLB肉湯 1ml吸管、10ml吸管、試管、小倒管

3、精選ppt初發(fā)酵器材與試劑樣品、225ml無菌生理鹽水、9ml無菌生理鹽水、雙料LST肉湯，單料LST肉湯，10ml吸管、1ml吸管、吸球精選ppt大腸菌群數(shù)測定實驗步驟： 1.初發(fā)酵 精選ppt精選ppt精選ppt吸取樣品方法精選ppt加注樣品精選ppt初發(fā)酵結(jié)果右邊為陽性結(jié)果，小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生。精選ppt實驗步驟 3.復(fù)發(fā)酵 （1）選取產(chǎn)氣試管 （2）接種至10mlBGLB肉湯中 （3）培養(yǎng)：36，48h （4）觀察指標(biāo)：若產(chǎn)氣則報告大腸菌群陽性。精選ppt大腸菌群數(shù)測定實驗步驟 2.分離培養(yǎng) （1）制備伊紅美藍平板： 45 ，無菌，傾注，15ml （2）選產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管 （3）接種至

4、伊紅美藍平板 分區(qū)劃線法 （4）培養(yǎng)： 36，48h精選ppt分離培養(yǎng)器材與試劑 初發(fā)酵結(jié)果（4只發(fā)酵管）、酒精燈、接種環(huán)、伊紅美蘭平板培養(yǎng)基精選ppt分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)精選ppt分區(qū)劃線法操作要點 1.劃下一個區(qū)前必須滅菌接種環(huán) 2.劃線時接種環(huán)同平板呈30-40角 3.每次劃線應(yīng)該壓到上一個區(qū)域的2-3條線 4.用接種環(huán)的“面”而不是“弧”在平板上滑動精選ppt大腸菌群數(shù)測定實驗步驟 2.分離培養(yǎng)： （5）菌落特征： 深紫黑色、有金屬光澤 紫黑色、無或略有金屬光澤 淡紫紅色、中心

5、顏色深 （6）革蘭染色、鏡檢：選特征菌落精選ppt革蘭染色法器材與試劑 結(jié)晶紫、盧戈碘液、95%乙醇、酸性復(fù)紅、生理鹽水、酒精燈、載玻片、濾紙精選ppt革蘭染色法涂片：接種環(huán)，挑取菌落， 生理鹽水一滴，涂勻熱固定：通過火焰若干次初染：結(jié)晶紫一滴，1min，水洗媒染：盧戈碘液一滴，1min，水洗脫色：95%乙醇，30s或至無色為止復(fù)染：復(fù)紅一滴，30s精選ppt涂片精選ppt熱固定精選ppt初染精選ppt媒染精選ppt脫色精選ppt復(fù)染精選ppt革蘭氏染色陰性革蘭氏染色陽性革蘭染色法精選ppt復(fù)發(fā)酵器材與試劑 培養(yǎng)24小時后的伊紅美蘭平板、酒精燈、接種環(huán)、復(fù)發(fā)酵管精選ppt大腸菌群數(shù)測定實驗步驟

6、 3.復(fù)發(fā)酵 （1）選取鑒定為無芽孢G-桿菌的菌落1-3個 （2）接種至10ml乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 （3）培養(yǎng)：37，24h （4）觀察指標(biāo)：產(chǎn)酸，產(chǎn)氣精選ppt液體接種精選ppt復(fù)發(fā)酵復(fù)發(fā)酵陽性結(jié)果，培養(yǎng)基變成黃色，小倒管內(nèi)有氣體產(chǎn)生精選ppt大腸菌群數(shù)測定注意事項： 1.無菌操作 2.吸管使用 3.洗去染液的方法 4.顯微鏡保養(yǎng) 5.液體接種精選pptMPN法原理MPN法（Most Probable Number Method）目的：對某種細(xì)菌進行選擇性計數(shù)核心思想：泊松分布實施方法：多次稀釋直至無菌，每個稀釋度分別接種若干培養(yǎng)管，根據(jù)陽性管數(shù)估算MPN值精選pptMPN法原理MPN法（Most Probable Number Method）1.細(xì)菌進入發(fā)酵管的概率近似服從泊松分布: P(x=k)=e-x xk/k! x:細(xì)菌濃度，k:進入發(fā)酵管的細(xì)菌數(shù)2.若在n管發(fā)酵中，令接種水樣量為Vi，陽性管數(shù)為Pi，陰性管數(shù)為Qi，則該檢驗結(jié)果發(fā)生的概率為： 其中C為常系數(shù) V為總水樣量，x為細(xì)菌個數(shù)/1( )(1)()iinV x VV x VPiQiiy xCee1()!/(!)niCPiQiPi Qi精選pptMPN法原理3.當(dāng)y(x)max，XMPN4.由于y(x)為單極值函數(shù)，令dy/dx=0,即5.解此方程，得x=MPN6.該方程為超越方程，一