動(dòng)物細(xì)胞融合

1、會(huì)計(jì)學(xué)1動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞貼壁過程動(dòng)物細(xì)胞能否融合呢？動(dòng)物細(xì)胞能否融合呢？細(xì)胞細(xì)胞A A細(xì)胞細(xì)胞B B雜種雜種細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞A A細(xì)胞細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞A A細(xì)胞細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞A A細(xì)胞細(xì)胞B B雜種雜種細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞A A細(xì)胞細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞A A細(xì)胞細(xì)胞B B雜種雜種細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞A A細(xì)胞細(xì)胞B B一、動(dòng)物細(xì)胞融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.1.概念：概念：2.2.結(jié)果：結(jié)果：3.3.原理：原理：4.4.誘導(dǎo)方式誘導(dǎo)方式指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。細(xì)胞的過程。形成單核的雜交細(xì)胞形成單核的雜交細(xì)胞細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞

2、膜的流動(dòng)性物理法：離心、振動(dòng)、電激物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇（化學(xué)法：聚乙二醇（PEG)PEG)生物法：滅活的病毒生物法：滅活的病毒5.5.過程：過程：注意：注意：動(dòng)物細(xì)胞的融合也需要把多個(gè)兩種動(dòng)物細(xì)胞的融合也需要把多個(gè)兩種細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再?gòu)闹泻Y細(xì)胞放在一起，讓它們隨機(jī)融合后，再?gòu)闹泻Y選雜交細(xì)胞選雜交細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞A細(xì)胞細(xì)胞B雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞滅活的病毒滅活的病毒物理法、化學(xué)法物理法、化學(xué)法仙臺(tái)病毒仙臺(tái)病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒新城雞瘟病毒細(xì)胞核細(xì)胞核病毒顆粒病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞核用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程病毒顆粒病毒顆粒黏

3、附在細(xì)黏附在細(xì)胞表面胞表面病毒顆病毒顆粒穿通粒穿通細(xì)胞膜細(xì)胞膜細(xì)胞膜連接細(xì)胞膜連接結(jié)束的標(biāo)志結(jié)束的標(biāo)志6.6.意義：意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。（種間、屬間、科間、動(dòng)植物之間）成為可能。7. 7. 應(yīng)用：應(yīng)用： 成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段物新品種培育等的重要手段 特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗特別是利用雜交瘤技術(shù)制造單克隆抗體體比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合的方

4、法細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法用途用途比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、 細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法用途用途比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、 細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法 去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法用途用途比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜

5、交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、 細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法 去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、 細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法

6、 去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體1.1.什么是抗體？什么是抗體？2.2.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？抗體是具有免疫作用的蛋白質(zhì)?？贵w是具有免疫作用的蛋白質(zhì)。 B B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，增殖分化為淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，增殖分化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體。漿細(xì)胞，漿細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體

7、。問問 題題1 1）. . 每一個(gè)每一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。特異性抗體。 2 2）. .每種抗體只能與特定的抗原發(fā)每種抗體只能與特定的抗原發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。生結(jié)合反應(yīng)。3、抗體有哪些特點(diǎn)？、抗體有哪些特點(diǎn)？ 4 4、傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什、傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什 么？么？問問 題題常規(guī)抗體的缺陷常規(guī)抗體的缺陷抗原不純抗原不純抗體不純抗體不純篩選單一漿細(xì)胞篩選單一漿細(xì)胞特異性差、純度低；特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏漿細(xì)胞漿細(xì)胞 抗體抗體動(dòng)物體動(dòng)物體刺激刺激抗原抗原不能增殖產(chǎn)生大量抗體不能增殖產(chǎn)生大量抗體5、怎樣才能獲得單克隆

8、抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？?jī)H用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú) 限增殖的？限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使有什么方法能使B B細(xì)胞產(chǎn)生抗體細(xì)胞產(chǎn)生抗體 的能力和腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖能的能力和腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖能 力同時(shí)具備呢？力同時(shí)具備呢？5、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案： 一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 只分泌一種特異性抗體只分泌一種特異性抗體 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 能無(wú)限增殖能無(wú)限增殖 雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞既能產(chǎn)生一種特異性既能產(chǎn)生一種特異性抗

9、體，又能無(wú)限增殖抗體，又能無(wú)限增殖二、單克隆抗體二、單克隆抗體由單個(gè)由單個(gè)B B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無(wú)性繁殖（克淋巴細(xì)胞經(jīng)過無(wú)性繁殖（克隆），形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體的抗體稱為單克隆抗體。稱為單克隆抗體。 1 1、單克隆抗體的概念、單克隆抗體的概念雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體單克隆抗體 2 2、單克隆抗體制備過程、單克隆抗體制備過程篩選篩選, ,繼續(xù)培養(yǎng)繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選骨髓瘤骨髓瘤細(xì)

10、胞細(xì)胞體體外外培培養(yǎng)養(yǎng)注注射射到到小小鼠鼠腹腹腔腔B B淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞注射抗原注射抗原具有兩個(gè)親本的特性，具有兩個(gè)親本的特性，即能迅速大量增殖，即能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的單一抗體。單一抗體。免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理胞培養(yǎng)原理1.1.本過程利用了哪些原理？本過程利用了哪些原理？2.2.為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B B細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞分泌特異性抗體的能力，而且還

11、有無(wú)限增分泌特異性抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的本領(lǐng)，因而可獲得大量單克隆抗體殖的本領(lǐng)，因而可獲得大量單克隆抗體思考：思考：三、單克隆抗體的應(yīng)用三、單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高2、用于、用于運(yùn)載藥物：運(yùn)載藥物：制成制成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈” 治療疾病：治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療主要用于癌癥治療優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：療效高、毒副作用小療效高、毒副作用小1、作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與、作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)，并與 抗原特異性結(jié)合抗原特異性結(jié)合小結(jié)小結(jié)兩個(gè)過程兩個(gè)過程動(dòng)物

12、細(xì)胞融合過程動(dòng)物細(xì)胞融合過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性 強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)1、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）、動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）A動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合B胚胎移植胚胎移植C動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)D核移植核移植在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）確的是（）A結(jié)果是相同的結(jié)果是相同的B雜種細(xì)胞的形成過程基本相同雜種細(xì)胞的形成過程基

13、本相同C操作過程中酶的作用相同操作過程中酶的作用相同D誘導(dǎo)融合的手段相同誘導(dǎo)融合的手段相同. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 A B C D C5、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細(xì)

14、胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？?jī)H用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú) 限增殖的？限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使有什么方法能使B B細(xì)胞產(chǎn)生抗體細(xì)胞產(chǎn)生抗體 的能力和腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖能的能力和腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖能 力同時(shí)具備呢？力同時(shí)具備呢？5、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案： 一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 只分泌一種特異性抗體只分泌一種特異性抗體 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 能無(wú)限增殖能無(wú)限增殖 雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞既能產(chǎn)生一種特異性既能產(chǎn)生一種特異性抗體，又能無(wú)限增殖抗體，又能無(wú)限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體單克隆抗體 2 2、單克隆抗體制備過程、單克隆抗體制備過程篩選篩選, ,繼續(xù)培養(yǎng)繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選骨髓瘤骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞體體外外培培養(yǎng)養(yǎng)注注射射到到小小鼠鼠腹腹腔腔B B淋巴淋巴細(xì)胞細(xì)胞注射抗原注射抗原具有兩個(gè)親本的特性，具有兩個(gè)親本的特性，即能迅速大量增殖，即能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的又能產(chǎn)生足夠數(shù)量的單一抗體。單一抗體。免疫原理，細(xì)胞融合原理和動(dòng)物細(xì)免疫原理