考博分子生物學(xué)歷年真題匯總

1、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院考博分子生物學(xué)（專業(yè)基礎(chǔ)）簡(jiǎn)答題歷年試題匯總1 .順式作用元件有哪些，并加以解釋。2015,2012考2 .人類基因組計(jì)劃的4張圖，各自的意義是什么？3 .癌基因激活的主要途徑？問(wèn)答：1.什么是基因治療，基因治療的主要策略是什么？基因治療的技術(shù)及主要內(nèi)容，2015,2014,2013考問(wèn)答2.蛋白質(zhì)組學(xué)的主要技術(shù)有哪些并解釋？2015,2012考2014簡(jiǎn)問(wèn)答題1. PCR原理，步驟，寫(xiě)出6種PCR衍生技術(shù)2013,2014,2009考2 .何謂基因克隆？簡(jiǎn)述其基本過(guò)程。09年3 .重組DNA技術(shù)，問(wèn)答題20分，14年考4 .舉例說(shuō)明基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。題目太大，原核調(diào)控

2、，真核調(diào)控？13年問(wèn)答5.人類基因定位的常用方法及原理。12年，09年考簡(jiǎn)問(wèn)6.簡(jiǎn)述反式作用因子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及作用方式09年簡(jiǎn)問(wèn)7.簡(jiǎn)述逆轉(zhuǎn)錄病毒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)09年考問(wèn)答：真核細(xì)胞中基因表達(dá)的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子是指什么？根據(jù)他們的結(jié)構(gòu)特征可以分為哪些類型？它們和DNA相互識(shí)別的原理是什么？2013年考問(wèn)答：試述大腸桿菌中表達(dá)蛋白質(zhì)產(chǎn)物的步驟。2013年考試比較克隆載體、原核載體和真核載體的特點(diǎn)2012年考2016年真題英譯中名詞解釋（20分）反義RNA;操縱子；限制性核酸內(nèi)切酶；選擇性剪切；抑癌基因；基因診斷；RNA干擾；質(zhì)粒；genemaping；管家基因簡(jiǎn)答題。真核基因組的結(jié)構(gòu)和功能特點(diǎn)20分

3、人類基因組的結(jié)構(gòu)特征15分原癌基因的特點(diǎn)15分蛋白質(zhì)組研究常用技術(shù)有那些，簡(jiǎn)介其作用。15分當(dāng)前基因治療技術(shù)面臨的技術(shù)問(wèn)題有哪些？15分以下為2001-2004年試題及網(wǎng)上答案一、若要獲得IL-2的基因工程產(chǎn)品，你應(yīng)該怎么做？基因工程是在分子水平上對(duì)基因進(jìn)行操作的復(fù)雜技術(shù)，是將外源基因通過(guò)體外重組后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)，使這個(gè)基因能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯表達(dá)的操作，又叫分子克隆，DNA重組技術(shù)。1 .在GENBANK中檢索IL-2的mRNA序列；在genecard里檢索IL-2高表達(dá)的組織；同時(shí)檢索一下有關(guān)文獻(xiàn)；2 .如果考慮使用原核表達(dá)系統(tǒng)（通常是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)）,將IL-2的成熟肽的基因

4、序列找出（呵呵，我沒(méi)有檢索，不清楚是否有信號(hào)肽）進(jìn)行分析；3 .根據(jù)表達(dá)載體，設(shè)計(jì)含有合適酶切位點(diǎn)的、對(duì)應(yīng)成熟肽編碼區(qū)的引物；4 .提取IL-2高表達(dá)的組織的mRNA,RT-PCR,T載體克隆或直接酶切克隆至表達(dá)載體中、測(cè)序。二、試述反式作用因子的結(jié)構(gòu)特征及作用方式（20分）Trans-actingfactor是一類細(xì)胞核內(nèi)的蛋白質(zhì)因子，能夠與順式作用元件和RNA-pol相互作用，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性。一般含有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域。DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域：（1）Helix-turn-helix含有3個(gè)helix,其中helix3與DNA識(shí)別結(jié)合，helixl和helix2與其它蛋白質(zhì)結(jié)合。（

5、2）Zenicfinger鋅指結(jié)構(gòu)：由相對(duì)保守的一段氨基酸序列和鋅離子結(jié)合，形成相對(duì)獨(dú)立的功能域，像一根手指插入DNA的大溝。兩種類型的DNA結(jié)合蛋白有這樣的模序，一是鋅指蛋白，另一個(gè)是番體受體。（3）LeucineZipper：亮氨酸拉鏈，兩個(gè)蛋白質(zhì)之間相互作用，共同建立一個(gè)轉(zhuǎn)錄復(fù)合體。是一種富含亮氨酸的蛋白質(zhì)形成的二聚體motifo這種motif可以識(shí)別特殊的DNA序列。兩個(gè)亮氨酸拉鏈區(qū)的反式作用因子依靠疏水力量相互結(jié)合，N-端有堿性氨基酸構(gòu)成的a-helix能夠與DNA結(jié)合。Eg:AP1與SV40增強(qiáng)子的結(jié)合（4）helix-loop-helix:兼性a-helix具有疏水面和親水面，兩

6、個(gè)具有這種的motif反式因子可以形成dimer。僅靠helix的N-端有一段富含堿性氨基酸的序列可以與DNA結(jié)合。HLH以同二聚體或者異二聚體作用于順式作用元件。（5）同源異形結(jié)構(gòu)域homeodomain,同源異性盒是一種編碼60aa的序列，長(zhǎng)180bp,幾乎存在于所有真核生物中。轉(zhuǎn)錄激活域：與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用的結(jié)構(gòu)成分。常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域有富含谷氨酰胺結(jié)構(gòu)域，富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域及酸性a螺旋結(jié)構(gòu)域。三、試述2型限制酶的功能與特性（20分）II型酶相對(duì)來(lái)說(shuō)最簡(jiǎn)單，它們識(shí)別回文對(duì)稱序列，在回文序列內(nèi)部或附近切割DNA,產(chǎn)生帶3-羥基和5-磷酸基團(tuán)的DNA產(chǎn)物，需Mg2+的存在才能發(fā)揮活性，相

7、應(yīng)的修飾酶只需SAM。識(shí)別序列主要為4-6bp,或更長(zhǎng)且呈二重對(duì)稱的特殊序列，但有少數(shù)酶識(shí)別更長(zhǎng)的序列或簡(jiǎn)并序列，切割位置因酶而異，有些是隔開(kāi)的。有特異識(shí)別和切割的序列部位DNA分子上兩個(gè)單鏈斷裂的部位通常不是直接相對(duì)的 斷裂所形成的DNA片段常具有堿基互補(bǔ)的單鏈尾巴（粘性末端） 內(nèi)切酶的切割和修飾功能由兩個(gè)不同的酶催化所完成，即內(nèi)切酶活性和甲基化作用活性是分開(kāi)的四、試述影響原核基因轉(zhuǎn)錄的因素（20分）原核基因表達(dá)調(diào)控與真核存在很多共同之處，但因原核生物沒(méi)有細(xì)胞核和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，其基因組結(jié)構(gòu)要比真核生物簡(jiǎn)單，基因表達(dá)的調(diào)控因此而比較簡(jiǎn)單。雖然原核基因的表達(dá)也受轉(zhuǎn)錄起始、轉(zhuǎn)錄終止、翻譯調(diào)控及RNA

8、、蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性等多級(jí)調(diào)控，但其表達(dá)開(kāi)、關(guān)的關(guān)鍵機(jī)制主要發(fā)生在轉(zhuǎn)錄起始。其特點(diǎn)包括以下3方面：（1）6因子決定RNA聚合酶的識(shí)別特異性：原核生物只有一種RNA聚合酶，核心酶催化轉(zhuǎn)錄的延長(zhǎng)，亞基識(shí)別特異啟動(dòng)序列，即不同的因子協(xié)助啟動(dòng)不同基因的轉(zhuǎn)錄。（2）操縱子模型的普遍性：除個(gè)別基因外，原核生物絕大數(shù)基因按功能相關(guān)性成簇地連續(xù)排列在染色體上，共同組成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位即操縱子，如乳糖操縱子等。一個(gè)操縱子含一個(gè)啟動(dòng)序列及數(shù)個(gè)編碼基因。在同一個(gè)啟動(dòng)序列控制下，轉(zhuǎn)錄出多順?lè)醋觤RNAo（3）阻遏蛋白與阻遏機(jī)制的普遍性：在很多原核操縱子系統(tǒng)，特異的阻遏蛋白是控制啟動(dòng)序列活性的重要因素。當(dāng)阻遏蛋白與操縱基因結(jié)合

9、或解離時(shí)，結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄被阻遏或去阻遏。原核生物在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)錄和翻譯同時(shí)進(jìn)行。五、試述病毒核酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（10分）（1）病毒內(nèi)的核酸結(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單，其遺傳物質(zhì)可以是DNA或者RNA,也有阮粒病毒以蛋白質(zhì)作為遺傳物質(zhì)，成熟的病毒內(nèi)只有一種遺傳物質(zhì)，要么是DNA,要么是RNA。（2）病毒基因可以連續(xù)也可以中斷，很少有重復(fù)序列。病毒基因組大部分是用來(lái)編碼蛋白質(zhì)的，具編碼區(qū)大于90%。非編碼區(qū)較少。非編碼區(qū)通常是基因表達(dá)的調(diào)控區(qū)（3）有重疊基因存在，使得較小的基因片段可以攜帶較多的遺傳信息。（4）病毒基因組是單倍體，功能相關(guān)的蛋白質(zhì)基因常常叢集于基因組的一個(gè)或者多個(gè)特定部位，形成一個(gè)功能單元或者轉(zhuǎn)

10、錄單元。六、真核細(xì)胞中基因表達(dá)的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子是指什么？根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)特征可以分為哪些類型？它們和DNA相互識(shí)別的原理是什么？特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子是指是除基本轉(zhuǎn)錄因子之外，與轉(zhuǎn)錄核心區(qū)以外的順式作用元件相結(jié)合，影響基因轉(zhuǎn)錄的因子，分為DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域。與GGGCGG結(jié)合的特異性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子叫Sp1。與CCAAT結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子叫CBF。大多數(shù)類固醇激素與受體結(jié)合之后，構(gòu)成特異性轉(zhuǎn)錄因子，與順式作用元件結(jié)合，激活基因轉(zhuǎn)錄。也有轉(zhuǎn)錄調(diào)控抑制因子，可以覆蓋轉(zhuǎn)錄活化區(qū)，覆蓋轉(zhuǎn)錄起始區(qū)。還有HSP。與DNA的識(shí)別模式有：（1）螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋，helix3識(shí)別結(jié)合DNA,helix1,h

11、elix2結(jié)合其它蛋白質(zhì)因子。（2）Zenicfinger與DNA大溝相結(jié)合，可以與RNA-pol3及其它轉(zhuǎn)錄因子相互作用。（3）亮氨酸拉鏈：N-末端由堿性氨基酸構(gòu)成的a-helix可以與DNA相結(jié)合.（4）helix-loop-helix兼性a-helix具有疏水側(cè)面和親水側(cè)面，兩個(gè)具有這種motif的反式因子可以形成dimer。緊靠helixN-末端的堿性氨基酸組成的序列可以結(jié)合DNA。轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合區(qū)都有特定的空間構(gòu)型和帶電性質(zhì)?？梢院徒Y(jié)構(gòu)和電荷量相匹配的DNA結(jié)合。七、簡(jiǎn)述細(xì)胞內(nèi)癌基因激活的方式？（1）點(diǎn)突變：基因中單個(gè)堿基替換，引起表達(dá)的蛋白質(zhì)氨基酸序列改變。例如，結(jié)腸癌中常有

12、k-ras基因的點(diǎn)突變。（2）插入啟動(dòng)子：多見(jiàn)于癌癥的起始階段。某些病毒（ALV）的長(zhǎng)末端重復(fù)序列（LTR）含有啟動(dòng)子，轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞之后，插入到原癌基因周圍或內(nèi)部，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，活化。例如ALV的LTR插入到c-myc周圍，可以使其表達(dá)水平提高20-76倍。（3）基因擴(kuò)增：見(jiàn)于癌癥進(jìn)展期。癌基因不斷復(fù)制，拷貝數(shù)增多。在染色質(zhì)中有淺染區(qū)，均質(zhì)染色質(zhì)。具不斷復(fù)制擴(kuò)增，可以脫離染色體，形成雙微體。例如，在小細(xì)胞肺癌中，c-myc擴(kuò)增，膠質(zhì)瘤中ERBB1擴(kuò)增，神經(jīng)纖維瘤中，n-myc擴(kuò)增。（4）染色體易位和重排：染色體易位時(shí),如果斷裂點(diǎn)發(fā)生在原癌基因周圍，可以改變癌基因的結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)，使之激活。

13、例如，在Burket淋巴瘤中，有t（8;14）,（q24;q32）易位。慢性粒細(xì)胞白血病中有BCL/ABL融合基因，使絡(luò)氨酸蛋白激酶激活，不受生長(zhǎng)因子/受體的調(diào)控，使c-ABL活化，導(dǎo)致CML。八、簡(jiǎn)述基因治療中轉(zhuǎn)移外源基因至體內(nèi)的非病毒和病毒途徑的主要原理非病毒途徑有（1）直接注射法：將含有裸DNA的溶液直接對(duì)患者肌肉注射，DNA轉(zhuǎn)入肌組織，并向全身表達(dá)目的基因的產(chǎn)物。可以持續(xù)幾個(gè)月到1年多。但是，轉(zhuǎn)入效率很低。僅限于肌肉組織。（2）電穿孔法：在高壓電脈沖作用下，使細(xì)胞膜打孔，讓外源DNA迅速導(dǎo)入宿主細(xì)胞。主要與電壓和脈沖時(shí)間有關(guān)。（3）脂質(zhì)體轉(zhuǎn)移法：用磷脂雙分子層包裹目的基因，與細(xì)胞膜有類

14、似的結(jié)構(gòu)，通過(guò)內(nèi)吞作用，進(jìn)入細(xì)胞，可以防止細(xì)胞內(nèi)核酸酶的降解目的基因。陽(yáng)離子多聚體：陽(yáng)離子聚胺與陰離子DNA形成復(fù)合物，與細(xì)胞表面帶負(fù)電的受體結(jié)合，通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。沒(méi)有細(xì)胞特異性，沒(méi)有靶向性，基因轉(zhuǎn)移效率低。（5）同源重組法：外源基因?qū)Ｒ坏恼系绞荏w細(xì)胞的特定部位，基因修正。病毒途徑：病毒載體的要求：可以有效地進(jìn)入靶細(xì)胞，具有可插入治療基因的較大空間和篩選標(biāo)記，具有控制治療基因表達(dá)的順式作用元件。（1）逆轉(zhuǎn)錄病毒：反轉(zhuǎn)錄病毒雖是RNA病毒，但有反轉(zhuǎn)錄酶，可使RNA轉(zhuǎn)錄為DNA,再整合到宿主細(xì)胞基因組。具有穿透細(xì)胞的能力，可使近100%的受體細(xì)胞被感染，轉(zhuǎn)化細(xì)胞效率高。無(wú)嚴(yán)格的組織特異性，

15、隨機(jī)整合的病毒可長(zhǎng)期存留，對(duì)細(xì)胞無(wú)害。這種載體只能把其DNA整合到能旺盛分裂細(xì)胞的染色體，而不適合于那些不能正常分裂的細(xì)胞，如神經(jīng)元。由于病毒自身含有病毒癌基因，就有使宿主細(xì)胞感染病毒和致癌的危險(xiǎn)性。人們有目的地將病毒基因及其癌基因除去，僅留它們的外殼蛋白，以保留其穿透細(xì)胞的功能，試圖避免上述缺點(diǎn)。這種改造后的病毒稱為缺陷型病毒（defectivevirus）。這樣的病毒中的反轉(zhuǎn)錄酶可將RNA轉(zhuǎn)化為DNA,有助于該DNA順利進(jìn)入宿主細(xì)胞的基因組，而該病毒則死亡(2)DNA病毒介導(dǎo)載體(DNAviralmediatedvector)：DNA病毒包括腺病毒、SV40、牛乳頭瘤病毒、皰疹病毒等，一般

16、認(rèn)為這類病毒難于改造成缺陷型病毒。牛乳頭瘤病毒重組后，可不插入宿主染色體中引起插入突變，又可在宿主染色體外獨(dú)立復(fù)制，并表達(dá)出基因產(chǎn)物。美國(guó)設(shè)計(jì)了一個(gè)新的腺病癥載體，它是用一個(gè)化學(xué)連接器即賴氨酸鏈（lysinechain）將DNA栓在病毒外殼上，這樣組成的運(yùn)輸器，通過(guò)一個(gè)表面抗體而進(jìn)入細(xì)胞核，使宿主基因與治療基因共同表達(dá)。這個(gè)新病毒載體稱為腺病毒多賴氨酸DNA復(fù)合體（adenovirus-polylysineDNA-complex）。九、請(qǐng)你評(píng)價(jià)一下人類基因組計(jì)劃（HGMP）完成的意義對(duì)人類疾病基因研究的貢獻(xiàn)：人類疾病相關(guān)的基因是人類基因組中結(jié)構(gòu)和功能完整性至關(guān)重要的信息。對(duì)于單基因病，采用“定

17、位克隆”和“定位候選克隆”的全新思路，導(dǎo)致了亨廷頓氏舞蹈癥、遺傳性結(jié)腸癌和乳腺癌等一大批單基因遺傳病致病基因的發(fā)現(xiàn)，為這些疾病的基因診斷和基因治療奠定了基礎(chǔ)。對(duì)于心血管疾病、月中瘤、糖尿病、神經(jīng)精神類疾?。ɡ夏晷园V呆、精神分裂癥）、自身免疫性疾病等多基因疾病是目前疾病基因研究的重點(diǎn)。健康相關(guān)研究是HGP的重要組成部分，1997年相繼提出：“月中瘤基因組解剖計(jì)劃”“環(huán)境基因組學(xué)計(jì)劃”。對(duì)醫(yī)學(xué)的貢獻(xiàn)：基因診斷、基因治療和基于基因組知識(shí)的治療、基于基因組信息的疾病預(yù)防、疾病易感基因的識(shí)別、風(fēng)險(xiǎn)人群生活方式、環(huán)境因子的干預(yù)對(duì)生物技術(shù)的貢獻(xiàn)胚胎細(xì)胞克隆羊一一多利a基因工程藥物：分泌蛋白（多肽激素，生長(zhǎng)因

18、子，趨化因子，凝血和抗凝血因子等）及其受體。b診斷和研究試劑產(chǎn)業(yè)：基因和抗體試劑盒、診斷和研究用生物芯片、疾病和篩藥模型。對(duì)細(xì)胞、胚胎、組織工程的推動(dòng)，胚胎和成年期干細(xì)胞、克隆技術(shù)、器官再造。c對(duì)制藥工業(yè)的貢獻(xiàn)：篩選藥物的靶點(diǎn)：與組合化學(xué)和天然化合物分離技術(shù)結(jié)合，建立高通量的受體、酶結(jié)合試驗(yàn)以知識(shí)為基礎(chǔ)的藥物設(shè)計(jì)：基因蛋白產(chǎn)物的高級(jí)結(jié)構(gòu)分析、預(yù)測(cè)、模擬一藥物作用“口袋”。個(gè)體化的藥物治療：藥物基因組學(xué)。d對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的重要影響：生物產(chǎn)業(yè)與信息產(chǎn)業(yè)是一個(gè)國(guó)家的兩大經(jīng)濟(jì)支柱；發(fā)現(xiàn)新功能基因的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益；轉(zhuǎn)基因食品；轉(zhuǎn)基因藥物（如減肥藥，增高藥）e對(duì)生物進(jìn)化研究的影響:生物的進(jìn)化史，都刻寫(xiě)在各基因

19、組的“天書(shū)”上；草履蟲(chóng)是人的親戚一13億年；人是由300400萬(wàn)年前的一種猴子進(jìn)化來(lái)的；人類第一次“走出非洲”一200萬(wàn)年的古猿；f帶來(lái)的負(fù)面作用：侏羅紀(jì)公園不只是科幻故事；種族選擇性滅絕性生物武器；基因?qū)＠麘?zhàn)；基因資源的掠奪戰(zhàn)；基因與個(gè)人隱私。十、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中所涉及的引物有哪幾種，各有什么用途和特點(diǎn)？1）純粹的用于擴(kuò)增目的基因片段的引物，這種引物一般都是成對(duì)出現(xiàn)。2）用于基因測(cè)序用的引物，一般如果所測(cè)的片段長(zhǎng)度短的話（小于800bp）,可以用一條，當(dāng)然兩條正反通測(cè)也可以。3）用于篩選的引物，比如平時(shí)常見(jiàn)的SSP,RFLP等引物，這種引物也是成對(duì)出現(xiàn)的，但主要用于基因多態(tài)性篩選的，針對(duì)單位

20、點(diǎn)多態(tài)性來(lái)說(shuō)。十一、什么是分子克隆技術(shù)？它的主要步驟是什么？在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過(guò)轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式，引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增，然后再?gòu)暮Y選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。十二、真核細(xì)胞和原核細(xì)胞基因表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控的特點(diǎn)。原核細(xì)胞：1.轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控：（1）。因子與啟動(dòng)子的作用模式原核細(xì)胞的RNA-pol只有一種，組成成分為a2?因子與啟動(dòng)子結(jié)合。在原核生物分化發(fā)育過(guò)程中，不同基因有序表達(dá)也是不同6因子在不同時(shí)間產(chǎn)生并發(fā)揮作用

21、引起的。（2）轉(zhuǎn)錄起始的負(fù)調(diào)控最典型的是乳糖操縱子的調(diào)節(jié)（3）轉(zhuǎn)錄起始的正調(diào)控典型例子是阿拉伯糖操縱子，araC基因產(chǎn)物AraC起著關(guān)鍵作用，當(dāng)環(huán)境中有阿拉伯糖時(shí)，AraC形成dimer與I1、I2結(jié)合，激活BAD基因轉(zhuǎn)錄。（4）轉(zhuǎn)錄起始的復(fù)合調(diào)控葡萄糖代謝產(chǎn)物的分解阻遏負(fù)調(diào)控和CAP-cAMP復(fù)合物的正調(diào)控。2.轉(zhuǎn)錄終止調(diào)控：（1）依賴于p因子的轉(zhuǎn)錄終止，色氨酸操縱子中有衰減子（2）不依賴于P因子的轉(zhuǎn)錄終止，識(shí)別發(fā)夾結(jié)構(gòu)，使轉(zhuǎn)錄停止。真核細(xì)胞：1.轉(zhuǎn)錄前調(diào)控：（1）染色體結(jié)構(gòu)對(duì)轉(zhuǎn)錄的影響：疏松的染色質(zhì)轉(zhuǎn)錄活躍（2）DNA的修飾：真核基因CpGisland中的C通常被甲基化，阻礙某些基因轉(zhuǎn)錄。

22、2.順式作用元件：真核基因非編碼區(qū)中調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列，包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、沉默子。3.反式作用因子：一類細(xì)胞核內(nèi)的蛋白質(zhì)因子，可以與RNA-pol和順式作用元件相互作用，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。（1）基本轉(zhuǎn)錄因子：在真核基因啟動(dòng)子上，參與組裝轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的蛋白質(zhì)因子。TFII有6種。（2）特異性轉(zhuǎn)錄因子：結(jié)合在核心轉(zhuǎn)錄原件以外的其它上游順式作用元件的蛋白質(zhì)因子，通過(guò)DNA-蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，可以對(duì)環(huán)境變化迅速作出反應(yīng)。與GGGCGGbox結(jié)合的激活蛋白稱為SP1;與CCAATbox結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子稱為CBF。SP1和CBF都能夠與特異性的DNA序列結(jié)合，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄。多種類固醇激素也是特

23、異轉(zhuǎn)錄因子，與相應(yīng)受體結(jié)合后，作用于激素應(yīng)答序列，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄。止匕外，在真核基因中也存在轉(zhuǎn)錄抑制因子，可以覆蓋轉(zhuǎn)錄活化區(qū)，或者覆蓋轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，與基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子相互作用，抑制轉(zhuǎn)錄。2.反式作用因子與DNA相互作用的模式：helix-turn-helix,Zenicfinger,leucinezipper,helix-loop-helix.十三、就你所知RNA研究領(lǐng)域中，理論和技術(shù)方面的進(jìn)展有哪些。RNA具有生物功能多樣性，在遺傳信息的翻譯中起決定作用，mRNA有信使和模板的作用，轉(zhuǎn)運(yùn)RNA可以轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸和信息交換，rRNA有裝配和催化作用。1992年Holler等證明轉(zhuǎn)肽反應(yīng)有核糖體大亞基催化。核酶

24、的發(fā)現(xiàn)一RNA具有催化功能和持家功能。RNA編輯：RNA編碼序列的改變稱為RNA編輯。hnRNAsnRNA戴帽加尾防止降解。反義RNA:與mRNA序列互補(bǔ)的一段RNA,可以沉默mRNA的翻譯(1) RNA剪切是真核生物基因表達(dá)過(guò)程中一個(gè)非常重要的機(jī)制，經(jīng)過(guò)RNA的剪切、連接以后即可產(chǎn)生具有編碼信息功能的mRNA。RNA剪切機(jī)制在生物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中至關(guān)重要。RNA剪切就是將基因組中轉(zhuǎn)錄出來(lái)的RNA前體中的內(nèi)含子剪切出去，然后再在相應(yīng)酶的作用下將剪切后的RNA重新連接起來(lái).RNA的剪切位谿主要依賴于剪切位點(diǎn)的判定，剪切位點(diǎn)一般都具有其專屬特定的序列。麻省理工學(xué)院的研究人員開(kāi)發(fā)出一種新的計(jì)算方法來(lái)

25、預(yù)測(cè)遺傳材料中的哪些序列轉(zhuǎn)錄為RNA時(shí)會(huì)象電影剪接室中被剪掉的膠片一樣被剪切掉，哪些會(huì)最終幸運(yùn)地成為生命的藍(lán)圖。(2) RNA測(cè)序分析中的最新進(jìn)展使用一種叫做RNA-seq的技術(shù)，最新的高通量DNA測(cè)序技術(shù)現(xiàn)在能夠被大規(guī)模地應(yīng)用于捕獲一個(gè)細(xì)胞中整套的mRNA轉(zhuǎn)錄本。盡管RNA-seq才僅僅兩歲，但是它已經(jīng)迅速蔓延到基因組學(xué)領(lǐng)域，并且它現(xiàn)在正在被用于分析從細(xì)菌到靈長(zhǎng)類生物的轉(zhuǎn)錄組。測(cè)序的深度允許研究者定量基因表達(dá)水平，以在真核生物物種中發(fā)現(xiàn)選擇性異構(gòu)體，甚至描述細(xì)菌基因組的操縱子結(jié)構(gòu)(3) RNA干擾技術(shù)研究新進(jìn)展：RNA干擾(RNAinterference,RNAi)是由雙鏈RNA介導(dǎo)的序列特

26、異的基因沉默現(xiàn)象，它在轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平上阻斷基因的表達(dá)，具有高效性和高特異性的特點(diǎn)。小干擾RNA(smallinterferingRNA或shortinterferingRNA,siRNA)是RNAi作用中的效應(yīng)分子，作為引導(dǎo)序列，按照堿基互補(bǔ)原則識(shí)別靶基因轉(zhuǎn)錄出的信使RNA(mRNA),并引導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNAinducedsilencingcomplex,RISC)復(fù)合體結(jié)合mRNA。隨后siRNA與mRNA在復(fù)合體中換位，核酸酶Dicer將mRNA切割成2123核甘酸的片段，從而可以破壞特定目的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA,使其功能沉默。應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，月中瘤治療，白血病治療，抗

27、病毒。十四、簡(jiǎn)述PCR技術(shù)中引物設(shè)計(jì)的要點(diǎn)。首先引物與模板的序列要緊密互補(bǔ)，其次引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，再次引物不能在模板的非目的位點(diǎn)引發(fā)DNA聚合反應(yīng)。（1）原則：用于PCR反應(yīng)的引物需要有兩條被擴(kuò)增目的基因的兩端，并分別與模板正負(fù)鏈序列互補(bǔ)；引物長(zhǎng)度一般以18-25個(gè)核甘酸為宜；兩條引物之間（尤其在3端）的序列不能有互補(bǔ)，以免形成引物二聚體；引物的堿基組成應(yīng)平衡，避免出現(xiàn)喋吟、喀呢堿基堆積。PCR擴(kuò)增中得退火溫度是根據(jù)引物的Tm值決定的，兩條引物的Tm值不能差別太大；根據(jù)需要，可以在合成引物時(shí)于其5端加修飾成分。a.長(zhǎng)度：1530bp,其有效長(zhǎng)度Ln=2（G十C）十（

28、A十T）一般不大于38,否則PCR的最適延伸溫度會(huì)超過(guò)Taq酶的最佳作用溫度（74度），從而降低產(chǎn)物的特異性。B.G十c含量：應(yīng)在45%55%之間，PCR擴(kuò)增中的復(fù)性溫度一般是較低Tm值引物的Tm值減去510度。引物長(zhǎng)度小于20時(shí)，其Tm恒等于4X（G十C）十2X（A十T）。C.堿基分布的隨機(jī)性：應(yīng)避免連續(xù)出現(xiàn)4個(gè)以上的單一堿基。尤其是不應(yīng)在其3端出現(xiàn)超過(guò)3個(gè)的連續(xù)G或C,否則會(huì)使引物在G十C富集序列區(qū)錯(cuò)誤引發(fā)。D.引物自身：不能含有自身互補(bǔ)序列，否則會(huì)形成發(fā)夾樣二級(jí)結(jié)構(gòu)。E.引物之間：兩個(gè)引物之間不應(yīng)有多于4個(gè)的互補(bǔ)或同源堿基，不然會(huì)形成引物二聚體，尤應(yīng)避免3端的互補(bǔ)重疊。十五、試述真核基因

29、組結(jié)構(gòu)的基本特點(diǎn)。（20分）1 .真核生物基因組DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合形成染色體，儲(chǔ)存于細(xì)胞核內(nèi)，除配子細(xì)胞外，體細(xì)胞內(nèi)的基因的基因組是雙份的（即雙倍體，diploid）,即有兩份同源的基因組。2.真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋?。一個(gè)結(jié)構(gòu)基因經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯生成一個(gè)mRNA分子和一條多肽鏈。3.存在重復(fù)序列，重復(fù)次數(shù)可達(dá)百萬(wàn)次以上。4.基因組中不編碼的區(qū)域多于編碼區(qū)域。5.大部分基因含有內(nèi)含子，因此，基因是不連續(xù)的。6.基因組遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于原核生物的基因組，具有許多復(fù)制起點(diǎn)，而每個(gè)復(fù)制子的長(zhǎng)度較小。原核生物基因組特點(diǎn)：1 .基因組多數(shù)由環(huán)狀雙鏈DNA分子組成2.具有類核結(jié)構(gòu)3.操縱子結(jié)構(gòu)（operon）:

30、功能上相關(guān)的幾個(gè)結(jié)構(gòu)基因往往串聯(lián)排列在一起，受上游共同的調(diào)控區(qū)和下游轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)所構(gòu)成的基因表達(dá)單位.轉(zhuǎn)錄時(shí),幾個(gè)基因轉(zhuǎn)錄在一條mRNA鏈上，再分別翻譯成各自不同的蛋白質(zhì).4.結(jié)構(gòu)基因中無(wú)內(nèi)含子，與真核細(xì)胞的主要區(qū)別.編碼區(qū)基因占基因組比例約50%左右，存在間隔區(qū).5.DNA絕大部分用于編碼蛋白質(zhì)，結(jié)構(gòu)基因多為單拷貝,6.結(jié)構(gòu)基因中無(wú)重疊現(xiàn)象（一段DNA序列編碼幾種蛋白質(zhì)多肽鏈）7.基因組中存在重復(fù)序列8.基因組中存在可移動(dòng)的DNA序列，如轉(zhuǎn)座子和質(zhì)粒等十六、試述重組DNA的基本過(guò)程。（20分）DNA重組（DNArecombination）指DNA分子內(nèi)或分子間發(fā)生的遺傳信息的重新共價(jià)組合過(guò)程

31、。包括同源重組、特異位點(diǎn)重組和轉(zhuǎn)座重組等類型，廣泛存在于各類生物。體外通過(guò)人工DNA重組可獲得重組體DNA,是基因工程中的關(guān)鍵步驟.十七、試述基因治療研究的主要內(nèi)容或策略。（20分）基因治療（genetherapy）是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療目的。也就是將外源基因通過(guò)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將其插入病人的適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞中，使外源基因制造的產(chǎn)物能治療某種疾病。包括體細(xì)胞治療和生殖細(xì)胞治療。一般程序：1.治療基因的選擇：正?；虼嬷虏』?，在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生有正常功能的蛋白質(zhì)。2 .治療基因?qū)胨拗骷?xì)胞內(nèi)：非病毒導(dǎo)入和病毒導(dǎo)入3.靶細(xì)胞的選擇：一般為體細(xì)胞，病

32、變細(xì)胞或者正常免疫細(xì)胞。禁用生殖細(xì)胞。成功的有造血干細(xì)胞，皮膚成纖維細(xì)胞，肝細(xì)胞，肌細(xì)胞。策略有基因矯正，基因置換，基因增補(bǔ)，基因沉默基因治療的策略（一）基因矯正糾正致病基因中的異常堿基，而正常部分予以保留。（二）基因置換指用正?；蛲ㄟ^(guò)同源重組技術(shù)，原位替換致病基因，使細(xì)胞內(nèi)的DNA完全恢復(fù)正常狀態(tài)。（三）基因增補(bǔ)把正常基因?qū)塍w細(xì)胞，通過(guò)基因的非定點(diǎn)整合使其表達(dá)，以補(bǔ)償缺陷基因的功能，或使原有基因的功能得到增強(qiáng)，但致病基因本身并未除去（四）基因失活將特定的反義核酸（反義RNA、反義DNA）和核酶導(dǎo)入細(xì)胞，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平阻斷某些基因的異常表達(dá)，而實(shí)現(xiàn)治療的目的。（五）“自殺基因”在某些病毒或細(xì)菌中的某基因可產(chǎn)生一種酶，它可將原無(wú)細(xì)胞毒或低毒藥物前體轉(zhuǎn)化為細(xì)胞毒物質(zhì)，將細(xì)胞本身殺死，此種基因稱為“自殺基因”。（六）免疫基因治療免疫基因治療是把產(chǎn)生抗病毒或月中瘤免疫力的對(duì)應(yīng)與抗原決定族基因?qū)霗C(jī)體細(xì)胞，以達(dá)到治療目的。如細(xì)胞因子（cytokine）基因的導(dǎo)入和表達(dá)等。（七）耐藥基因治療耐藥基因治療是在月中瘤治療時(shí)，為提高機(jī)體耐受化療藥物的能力，把產(chǎn)生抗藥物毒性的基因?qū)肴梭w細(xì)胞，以使機(jī)體耐受更大劑量的化療。如向骨髓干細(xì)胞導(dǎo)入多藥抗性基因中的mdr-1。十八、癌基因在信號(hào)傳導(dǎo)中的分類1 .表達(dá)生長(zhǎng)因子樣物質(zhì)：某些癌基因可以編碼生長(zhǎng)因子樣的活性物質(zhì)，例如，