微生物思考題及參考答案

1、微生物思考題及參考答案1 .用油鏡觀察時應注意哪些問題？在載玻片和鏡頭之間加滴什么油？起什么作用？答：應該先用擦鏡紙將鏡頭擦干凈，以防上次實驗的污染.操作時，先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油，作用是增加折光率，也就是增加了顯微鏡的分辨率.油的折光率和分辨率成反比（有公式），同時與波長成正比.2 .什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？答：在一般情況下，當物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進行觀察時，物像將保持基本準焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細調(diào)節(jié)器即可對物像清

2、晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。3 .影響顯微鏡分辨率的因素有哪些？答：物鏡的NA值（物鏡的數(shù)值孔徑）與照明光源的波長.4 .美藍染色液作用時間的不同，對酵母菌死細胞數(shù)量有何影響，試分析原因答：會造成更多的死細胞，在顯微鏡下觀察，活的是透明無色，衰老的是淡藍色，死亡的是藍色，如果美藍染色液作用時間過長，會造成細胞脫水死亡并滲透染液，影響實驗結(jié)果。5 .鏡檢時如何區(qū)分放線菌基內(nèi)菌絲，氣生菌絲以及抱子絲一般氣生菌絲顏色較深，直生或分枝絲狀，比基內(nèi)菌絲粗；而基內(nèi)菌絲色淺、發(fā)亮，可看到橫隔膜，繼而斷裂成球狀或桿狀小體。6 .在進行細菌涂片時應注意哪些環(huán)節(jié)1、載玻片應該

3、冷卻后再涂片。2、如果是涂布液體，可以用毛細管或接種環(huán)滴一小滴，然后輕輕抹開，一圈足夠。3、如果是涂布菌落或菌苔，應該在載玻片上先滴一滴水，再將菌落或菌苔涂布上去，接種環(huán)的尖蘸一點點即可。4、為了節(jié)省時間，可以將干燥和熱固定合并成一步。但是應該避免高溫，因為溫度一高，細菌會變形。5、染色時間視染色液種類而定。如結(jié)晶紫只需幾十秒，亞甲基藍則需一到兩分鐘。6、沖洗時，水流不能太大，而且盡量避免水流直接沖在涂片上。7、沖洗后干燥，可以用酒精燈加熱以節(jié)省時間，同樣的，應該避免高溫，因為溫度一高，細菌會變形。7 .進行細菌制片時為什么要進行加熱固定？在加熱固定時應注意什么？固定的目的有三個：1）殺死微生

4、物，固定細胞結(jié)構(gòu)。2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標本被水沖洗掉。3）改變?nèi)玖蠈毎耐ㄍ感?，因為死的原生質(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。固定時應注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火過3次（手指觸摸玻片反面，不燙手為宜）：固定時應盡可能維持細胞原有形態(tài)，防止細胞膨脹或收縮。8 .為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察1.因為用油鏡觀察時，鏡頭離玻片會很近.如果未完全干燥，載玻片上的液體會污染油鏡鏡頭.鏡頭非常精密，被污染后不利于下次觀察.2、若未完全干燥，水滴會影響油與玻璃之間折光率，造成視野不夠清晰。9 .哪些環(huán)節(jié)會影響革蘭色染色結(jié)果的正確性？其中最關鍵的環(huán)節(jié)是什么？答：涂片環(huán)節(jié)、加熱固定環(huán)節(jié)、

5、脫色環(huán)節(jié)；其中最關鍵的環(huán)節(jié)是脫色環(huán)節(jié)。10 .進行革蘭氏染色時，為什么特別強調(diào)菌齡不能太老，用老齡細菌染色會出現(xiàn)什么問題？答：菌齡太老，細胞壁通透性改變。著色不均，染色效果不好。陰性陽性不明顯分不太清楚，問題是：不便于顯微鏡下觀察是陽性菌還是陰性菌。11 .革蘭氏染色中那一步是關鍵？為什么？你是如何操作的？革蘭氏染色的關鍵步驟是：乙醇脫色（是脫色時間）。如果脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而被誤認為是革蘭氏陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也可被脫色而被誤認為是革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片的厚薄，脫色是玻片晃動的快慢及乙醇用量的多少等因素的影響，難以嚴格規(guī)定（脫色是應當控制速度，脫色

6、時間一般為2030s）o12 .革蘭氏染色中，哪個步驟可以省略？在什么情況下采用媒染目的是在所有的細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復合物。脫色后使革蘭氏陰性菌變?yōu)闊o色。復染使革蘭氏陰性菌染成紅色。所以鑒別細菌的革蘭氏陰陽性只須媒染，復染的目的是為了看清革蘭氏陰性菌。13 .你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來區(qū)分四種不同的霉菌曲霉：具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生抱子梗，頂端膨大成球狀頂囊，表面輻射出一層或兩層小梗，小梗上著生成串的球形分生抱子。分生抱子梗生于足細胞上，并通過足細胞與營養(yǎng)菌絲相連。根霉：菌絲無隔、多核、分枝狀，有匍匐菌絲和假根。在假根的上方直立地生長出一至數(shù)根抱囊梗，其頂端

7、膨大成球形抱子囊。囊的基部有囊托，中間有球形或半球形囊軸。毛霉：菌絲無隔、多核、分枝狀，無假根或匍匐菌絲。菌絲體上直接生出單生、總狀分枝或假軸狀分枝的抱囊梗。各分枝頂端著生球形抱子囊，無囊托。青霉：菌絲有橫隔，分生抱子梗亦有橫隔，光滑或粗糙?；繜o足細胞，頂端不形成膨大的頂囊，其分生抱子梗經(jīng)過多次分枝，產(chǎn)生幾輪對稱或不對稱的小梗，形如掃帚，稱為帚狀體。抱子顏色：黑曲霉是黑色，青霉是青色，根霉是白菌絲黑抱子，毛霉則是淡黃色。以上為實驗室觀察1）菌絲特征：青菌與曲霉菌絲與膈；毛霉與根霉則無；2）菌絲的特化結(jié)構(gòu)：曲霉有足細胞，其它霉菌無；根霉有假根與匍匐枝，其它霉菌無;3）抱子頭特征：青霉的抱子頭為

8、掃帚狀；根霉與毛霉的抱子頭為囊狀；曲霉為菊花狀抱子頭。14 .為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？目鏡測微尺中每小格代表的實際長度是不固定的，它是隨所使用目鏡和物鏡的放大率的不同而改變的，故在測量前必須先用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正，以得出在顯微鏡的特定放大倍率下，目鏡測微尺每小格所代表的相對長度。15 .在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細菌的大小時，其測定結(jié)果是否相同？為什么？答：相同；目鏡測微尺是一塊圓形玻片，其中央刻有精確等分的刻度，有把毫米刻成為50等分或把10毫米長度刻成100等分。測量時，將其放在接目鏡

9、中的隔板上來測量經(jīng)顯微鏡放大后的細胞物象。由于在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍數(shù)的物鏡來測定同一細菌的大小時，物象的放大倍數(shù)與每小格目鏡測微尺所代表的長度在變化比例上是同步的，故而測定結(jié)果相同。16 .哪些因素會造成血細胞計數(shù)板的計數(shù)誤差，應如何避免？操作時沒有先蓋蓋玻片再滴加懸液，導致體積不準確。避免：先蓋蓋玻片再滴加懸液。細胞密度太高。避免：稀釋溶液。溶液不均勻。避免：滴加溶液前混勻懸液。1、儀器誤差：所用器材均應清潔干凈，并且計數(shù)板計數(shù)區(qū)不應該有擦痕。2、計數(shù)室內(nèi)可能有氣泡。因為酵母細胞并沒有染色，看起來是透明的，有氣泡很容易被計入，使數(shù)值偏高；并且，氣泡會影響菌懸液的隨機分布

10、。改進：若產(chǎn)生氣泡，則用吸水紙吸出。3、菌體在計數(shù)板上分布不均，當用選取5格計數(shù)時，會造成很大誤差。改進：應使菌液自然流入并混勻，進行觀察時盡可能多數(shù)幾個格子。4、配制稀釋液時吸取的濃度過高或過低，導致稀釋液濃度和原液不成正確比例，計算時產(chǎn)生誤差。應將原液搖晃均勻后取中部的液體進行稀釋。5、由于數(shù)菌體數(shù)目時視覺疲勞而導致的視覺誤差。應多人觀察，取記錄平均數(shù)。6、計數(shù)時可能將格四周的菌都計算在內(nèi)了，使數(shù)值偏高。改進：謹遵一個規(guī)則，計上不計下，計左不計右，不可以重復計數(shù)。7、可能出現(xiàn)有出芽的酵母菌，將出芽的酵母菌按兩個計數(shù)了，使數(shù)值偏高。改進：計數(shù)時，只有當芽體于母細胞一樣大的時候，才能計為兩個。

11、17 .培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是否無菌？為什么要倒置培養(yǎng)？答：由于配制培養(yǎng)基的各類營養(yǎng)物質(zhì)和容器等含有各種微生物，因此，已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，如果來不及滅菌，應暫存冰箱內(nèi)，以防止其中的微生物生長系列而消耗養(yǎng)分和改變培養(yǎng)基的酸堿度所帶來的不利影響。將滅菌的培養(yǎng)基放入37c溫箱中培養(yǎng)2448h,無菌生長即可證明滅菌后的培養(yǎng)基無菌。倒置培養(yǎng)的主要目的：1）由于重力的作用使培養(yǎng)基表面及次層能富集微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，利于微生物生長；2）防止空氣中微生物的污染培養(yǎng)基及培養(yǎng)物：倒置時平板內(nèi)的空氣是不流動的，雜菌不會沉降到培養(yǎng)基表面，如果不倒置，很快平板周邊會長

12、起雜菌。3）倒置培養(yǎng)使瓊脂里水分不易蒸發(fā)出去，而充分的保持瓊脂的彈性與細菌容易繁殖和生存的環(huán)境。如果不倒置，大概3天左右培養(yǎng)基就會出現(xiàn)龜裂等水分散失的情況。而一些落菌等試驗，需驗證培養(yǎng)基無菌，就要先倒置培養(yǎng)48小時才可作為模板做落菌，水分散失是很重要的。19.在配制培養(yǎng)基的操作過程中應注意些什么問題？為什么？答：一般而言，培養(yǎng)基的配置要注意如下幾點原則：1）營養(yǎng)成分的配比：碳源和氮源的比例（C/N）要適當；2）適宜的酸堿度（pH值）：配制培養(yǎng)基時pH的調(diào)節(jié)；3）滲透壓：營養(yǎng)物質(zhì)要有適合的濃度；4）培養(yǎng)基不能反復高溫滅菌。5）稱不溶性固形物時，應單獨稱，若量少的可以與無機鹽一起稱，但一定要混勻再

13、分裝；6） 一般情況下培養(yǎng)基用自來水配制。操作細節(jié)上則要注意：1）稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應及時蓋緊瓶蓋2）調(diào)pH值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度3）分裝時注意不要污染棉塞、試管口，以免染菌。4）及時滅菌，以免培養(yǎng)基及容器里的微生物生長繁殖消耗養(yǎng)分、改變酸堿度。1、當然是注意濃度配比不要搞錯2、很多培養(yǎng)基的加料順序有講究，否則會有沉淀產(chǎn)生3、有些培養(yǎng)基會有不溶物質(zhì)，分裝前應搖勻4、不要忘了調(diào)節(jié)pH值（一般細菌都需要，酵母可能自然pH就行，不過不一定）5、加熱溶解時盡量不要煮沸，會損失營養(yǎng)物質(zhì)20 .高壓蒸氣滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么待壓

14、力降低“0”時才能打開排氣閥，開蓋取物。答：1）在使用高壓蒸汽滅菌時，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓，所以，當水蒸氣中含有空氣時，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。2）壓力未降至“0”便開蓋取物的可能后果：壓力鍋內(nèi)壓力驟然降低，引起容器中的溶液噴出容器口導致污染或?qū)е氯藛T的燙傷。21 .干熱滅菌操作過程中應注意哪些問題為什么1、物品不要擺放太擠，以免妨礙空氣流通2、滅菌物品不要接觸干燥箱內(nèi)壁的鐵板，以防包裝紙烤焦起火3、滅菌時人不能離開4、滅菌結(jié)束后不能忘記關掉電源5、待溫度降到70度以下再打開，否則冷熱空氣交替，玻璃器皿容易炸裂或發(fā)生

15、燙傷事故22 .為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需溫度高時間長？在濕熱條件下，有水蒸汽的作用：a高溫水蒸汽導熱比干空氣要快；b高溫水蒸汽冷凝變水時有放熱過程；c高溫水蒸汽能穿透細菌的細胞膜，直接進入細胞內(nèi)破壞細胞;d高溫水蒸汽能水解一部分細胞結(jié)構(gòu)，加速導熱。（濕熱中細菌菌體吸收水分，蛋白質(zhì)較易凝固，因蛋白質(zhì)含水量增加，所需凝固溫度降低；濕熱的穿透力比干熱大；濕熱的蒸汽有潛熱存在，每1克水在100c時，由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出2.26kJ（千焦）的熱量。這種潛熱，能迅速提高被滅菌物體的溫度，從而增加滅菌效力。）23 .設計實驗方案，比較干熱滅菌和濕熱滅菌的效果。以下試驗方案有關操作均遵循無菌操作條件和等

16、量原則。（一）實驗材料試管鑲子酒精燈嗜熱脂肪芽抱桿菌ATCC7053菌片紙片（與菌片同大小同材料）澳甲酚紫蛋白凍水培養(yǎng)基（已滅菌）等實驗材料（材料有余）。（二）對照組取9支潔凈試管，分為A1B1C1三組（每3支一組），將A1組中放入菌片，B1組中放入紙片，C1組中什么也不加；不經(jīng)滅菌，直接加入澳甲酚紫蛋白凍水培養(yǎng)基（等量）。（三）恒為培養(yǎng)將上述所有試管按分組在56c恒溫條件下培養(yǎng)48小時。24 .如何確定平板上某單個菌落是否為純培養(yǎng)請寫出實驗的主要步驟純培養(yǎng)的確定除觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測個體形態(tài)特征后才能確定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過一系列分離與純化過程和多種特征鑒定才能得到。2

17、5 .配制牛肉膏蛋白月東培養(yǎng)基，有哪些操作步驟？那幾步易出錯，如何防止？稱取藥品一加熱溶化一分裝一加棉塞一包扎一滅菌一擱置斜面易出錯的步驟有：a稱取藥品稱取時鑰匙專用，瓶蓋不要錯蓋，易吸水的藥品要快速稱?。籦加熱溶化加入藥品后要用玻璃棒不停攪拌，以免糊底（在瓊脂熔化過程中，應控制火力，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器，同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。）；c分裝分裝時培養(yǎng)基不能粘在三角瓶（或試管）口，以免接種時染菌；d擱置斜面斜面長度約試管長度一半為宜。26 .平板菌落計數(shù)法的原理是什么？它適用于那些微生物的計數(shù)？平板菌落計數(shù)法是將等測樣品經(jīng)適當稀釋后，其中的微生物充分分散為單個細胞，取一定量的稀

18、釋液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成的肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。（但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞，所以，長成的一個單菌落也可能來自樣品中的23或更多個細胞。因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低?，F(xiàn)在常使用菌落形成單位）。平板計數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個菌落是由一個微生物繁殖而形成的現(xiàn)象進行的，也就是一個菌落可代表一種微生物（并不絕對）。通常用來測定樣品中所含細菌、抱子、酵母菌等單細胞微生物的數(shù)量。8、微量移液器的最小量程太大，在加樣時，容易加多，使蓋玻片鼓起，

19、血球計數(shù)板所技術的體積變大，最終結(jié)果偏大。改進：用量程的小的微量移液器并少加一些。27 .如果一項科學研究內(nèi)容需從自然界中篩選到能產(chǎn)生高溫蛋白酶的菌株，你將如何完成？寫出實驗方案（產(chǎn)蛋白酶菌株在酪素平板上能形成降解酪素透明圈）。以下試驗方案有關操作均遵循無菌操作條件一材料準備1土壤【有機質(zhì)（特別是蛋白質(zhì)）含量豐富的土壤】2滅菌生理鹽水（0.85%NaCl）3滅菌移液管4添加酪素的B4（牛肉膏蛋白月東完全培養(yǎng)基）經(jīng)滅菌5B-4斜面（經(jīng)滅菌）6其他材料：接種環(huán)酒精燈等二操作方法1在盛有10ml滅菌生理鹽水的燒杯中添加1g土壤，配成懸浮液；2稍靜止后，用滅菌移液管移取部分上清液，將其制成10A4-1

20、0A6倍的稀釋液；3用滅菌移液管吸取各稀釋液用稀釋倒平板法（或涂布平板法）將其接入添加酪素的B4平板上；4在5565C下培養(yǎng)12天；5挑取形成降解酪素透明圈的菌落（透明圈直徑D與菌落直徑d之比較大者），轉(zhuǎn)接入B-4斜面上培養(yǎng)；（若無特定菌落形成，則需另取土樣從開始重復試驗）6將B4斜面上的菌落再用平板純培養(yǎng)，依次重復23次后即可得到純培養(yǎng)（鏡檢）；7純培養(yǎng)細菌中蛋白酶的提取及活性鑒定【搖瓶培養(yǎng)（若提取蛋白酶及其活性正常，則純培養(yǎng)成功，否則，重取土樣重復以上實驗）】。28 .為什么熔化后的培養(yǎng)基要冷卻至45c左右才能倒平板？低于這個溫度瓊脂會凝固，溫度過高，如果是做傾倒瓊脂做菌落計數(shù)，會殺死一部

21、分細菌，如果只是只是制備瓊脂平板，那么溫度太高就進行傾倒會導致瓊脂凝固后偏軟，水汽過多。29 .要使平板菌落計數(shù)準確，需要掌握哪幾個關鍵？為什么？1無菌操作2稀釋良好，不會太濃或太稀。3菌落生長時間控制好，不會長的太大不便區(qū)分，也不至于太小影響計數(shù)。30 .當你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認為問題出在哪里？1.太濃2.沒涂勻31 .用傾注法和涂布法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同？為什么要培養(yǎng)較長時間（48h）后觀察結(jié)果？傾注法是在培養(yǎng)皿中接種好樣品之后，傾注瓊脂并培養(yǎng)；而涂布法則是在瓊脂表面接種并使用L型棒涂布。因此，傾注法的菌落將出現(xiàn)在瓊脂的各個部位，包括底層和中層，但涂布法培養(yǎng)后形成的菌落只出現(xiàn)在瓊脂表面。32 .你如何解釋淀粉酶是胞外酶而非胞內(nèi)酶？答：淀粉是大分子物質(zhì)，進入細胞十分困難，甚至需要高耗能的胞吞作用。因而通過胞外酶的作用，將淀粉水解為葡萄糖后運入細胞，較方便高效。試驗中出現(xiàn)透明圈，說明培養(yǎng)基內(nèi)淀粉被水解，可推測是細菌產(chǎn)生的胞外的淀粉酶起的作用。33 .不利用碘液，你能否證明