抗腫瘤藥物評價技術(shù)上課講義

1、抗腫瘤藥物抗腫瘤藥物(yow)評評價技術(shù)價技術(shù)南京(nn jn)凱基生物科技發(fā)展公司聯(lián)系電話025-52880812第一頁，共36頁。第二頁，共36頁。第三頁，共36頁?？鼓[瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)(zhdo)原則原則細胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究細胞毒類抗腫瘤藥物非臨床研究(ynji)技術(shù)指導(dǎo)原則技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物一般藥理學(xué)研究化學(xué)藥物一般藥理學(xué)研究(ynji)技術(shù)指技術(shù)指導(dǎo)原則導(dǎo)原則中藥、天然藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中藥、天然藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則指導(dǎo)原則指導(dǎo)原則第四頁，共36頁。 體內(nèi)抗腫瘤試驗必須選用三種以上腫瘤模型，其中至體內(nèi)抗腫

2、瘤試驗必須選用三種以上腫瘤模型，其中至 少一種為人癌裸小鼠移植少一種為人癌裸小鼠移植(yzh)模型或其它人癌小鼠模型。模型或其它人癌小鼠模型。 試驗結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效試驗結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效 體外實驗選用(xunyng)10-15株人癌細胞株 ，至少重復(fù)一次23抗腫瘤藥物藥效學(xué)研究抗腫瘤藥物藥效學(xué)研究(ynji)的要求的要求 體內(nèi)、體外實驗方法相結(jié)合；以體內(nèi)實驗為主體內(nèi)、體外實驗方法相結(jié)合；以體內(nèi)實驗為主1南京凱基生物科技發(fā)展公司聯(lián)系電話025-52880812第五頁，共36頁。體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn

3、) 對候選化合物進行初步篩選對候選化合物進行初步篩選了解候選化合物的抗瘤譜了解候選化合物的抗瘤譜為隨后進行的體內(nèi)抗腫瘤試驗提供參考為隨后進行的體內(nèi)抗腫瘤試驗提供參考試驗?zāi)康脑囼災(zāi)康牡诹摚?6頁。體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)試驗方法試驗方法 選用選用10-1510-15株人癌細胞株株人癌細胞株 試驗還應(yīng)考察受試物對耐藥腫瘤細胞系和正常人源細胞的作用和影響試驗還應(yīng)考察受試物對耐藥腫瘤細胞系和正常人源細胞的作用和影響 使用使用(shyng)MTT(shyng)MTT還原法、磺酰羅丹明還原法、磺酰羅丹明B(SRB)B(SRB)染色法染色法 藥物與細胞共培養(yǎng)時間一般為藥物與細胞共

4、培養(yǎng)時間一般為48-72 48-72 小時，貼壁細胞需先貼壁小時，貼壁細胞需先貼壁24 24 小時小時后再給藥。后再給藥。 試驗應(yīng)設(shè)陰性、陽性、溶媒對照組，陽性對照用一定濃度的標準抗腫瘤試驗應(yīng)設(shè)陰性、陽性、溶媒對照組，陽性對照用一定濃度的標準抗腫瘤藥。藥。 試驗至少應(yīng)重復(fù)一次試驗至少應(yīng)重復(fù)一次 第七頁，共36頁。 四氮唑鹽還原法體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)替替率。率。值。值。-第八頁，共36頁。 磺酰羅丹明染色法體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)(j su第九頁，共36頁。 染料(rnlio)排斥法體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)在在第十頁，共

5、36頁。 阿拉( l)馬藍法體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)為為第十一頁，共36頁。 集落形成(xngchng)法體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)第十二頁，共36頁。 生長(shngzhng)曲線測定法體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)和和1N0數(shù)。數(shù)。第十三頁，共36頁。體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)白血病（白血?。?株）：株）：CCRF-CEM、HL-60、K562、MOLT-4、RPMI-8226、SR肺癌（肺癌（9株）：株）：A549、EKVX、HOP-62、HOP-92、NCI-H23、NCI-H226、NCI-H322

6、、 MNCI-H460、NCI-H522乳腺癌：乳腺癌：BT-549、HS578T、MCF-7、MCF-7/ADR、MDA-MB-231、ATCC、 MDA-MB-435、MDA-N、T-47D卵巢癌：卵巢癌：IGROV1、OVCAR-3、OVCAR-4、OVCAR-5、OVCAR-8、SK-OV-3腎癌：腎癌：786-0、A498、ACHN、CAKI-1、RXF-393、SN12C、TK-10、UO-31前列腺癌：前列腺癌：DU-145、PC-3中樞神經(jīng)系統(tǒng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(xtng)腫瘤：腫瘤：SF-268 、SF-295 、SF-539、 SFB-19 、SFB-75、U251黑色素瘤：黑色

7、素瘤：M14、MALME-3M、SK-MEL-2、SK-MEL-5、SK-MEL-28、UACC-62、 UACC-257、LOCIMV美國美國NCI抗腫瘤藥物體外篩選抗腫瘤藥物體外篩選(shixun)使用的使用的60種人類細胞種人類細胞第十四頁，共36頁。體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)瘤譜細胞株結(jié)合我國瘤譜細胞株結(jié)合我國實際情況實際情況呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、婦科腫瘤血液系統(tǒng)、婦科腫瘤選用人正常細胞株選用人正常細胞株初步確定受試樣品對初步確定受試樣品對正常組織和腫瘤組織正常組織和腫瘤組織的選擇性的選擇性選用耐藥細胞株選用耐藥細胞株考察受試樣品的抗耐

8、考察受試樣品的抗耐藥作用藥作用國內(nèi)國內(nèi)體外體外篩選篩選的細的細胞株胞株選擇選擇選用人血管內(nèi)皮細胞選用人血管內(nèi)皮細胞株進行同步考察株進行同步考察細胞株有相當一部分細胞株有相當一部分是國內(nèi)自己建株是國內(nèi)自己建株胃癌、肝癌胃癌、肝癌體外初篩經(jīng)典三株細胞體外初篩經(jīng)典三株細胞A549HepG-2HCT-116兼顧兼顧(jing)選擇使用動物（小鼠）腫瘤與人的腫瘤細胞；選擇使用動物（小鼠）腫瘤與人的腫瘤細胞；篩選實驗以快速生長的細胞為主；篩選實驗以快速生長的細胞為主；兼顧兼顧(jing)選擇使用貼壁生長細胞與懸浮生長細胞選擇使用貼壁生長細胞與懸浮生長細胞樣品初篩時應(yīng)該樣品初篩時應(yīng)該(ynggi)注意三點注

9、意三點第十五頁，共36頁。體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)藥物與細胞共培養(yǎng)時間一般藥物與細胞共培養(yǎng)時間一般(ybn)為為48-72 小時，貼壁細小時，貼壁細胞需先貼壁胞需先貼壁24 小時后再給藥。小時后再給藥。第十六頁，共36頁。體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)評價評價(pngji)標準標準以同一樣品以同一樣品(yngpn)不同濃度對腫瘤細胞抑制率作圖可得到劑量不同濃度對腫瘤細胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線采用效應(yīng)曲線采用Logit法計算半數(shù)有效濃度法計算半數(shù)有效濃度(IC50值或值或EC50值值)合成化合物或植物提取純品的合成化合物或植物提取純品的IC5010

10、 gm1或植物粗提物的或植物粗提物的IC5020 gm1時，則判斷樣品時，則判斷樣品(yngpn)在體外對腫瘤細胞有在體外對腫瘤細胞有殺傷作用。殺傷作用。體外試驗至少重復(fù)一次體外試驗至少重復(fù)一次第十七頁，共36頁。體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn)體外篩選其他方法：體外篩選其他方法：MTS法、刃天青法法、刃天青法以線粒體為作用靶點的受試物不宜采用四氮唑鹽還原法以線粒體為作用靶點的受試物不宜采用四氮唑鹽還原法 溶媒對照組與陰性對照組比較，溶媒對照組與陰性對照組比較，OD值應(yīng)在值應(yīng)在5%，且無統(tǒng)計學(xué)差異，且無統(tǒng)計學(xué)差異應(yīng)考慮到受試物在水溶液中的穩(wěn)定性，比如環(huán)磷酰胺在水溶液中的半衰應(yīng)考

11、慮到受試物在水溶液中的穩(wěn)定性，比如環(huán)磷酰胺在水溶液中的半衰 期為期為3h脂溶性的受試物常用脂溶性的受試物常用DMSO助溶，但助溶，但DMSO終濃度終濃度(nngd)不低于不低于0.1%測出的測出的OD值有事會出現(xiàn)假陰性（加值有事會出現(xiàn)假陰性（加MTT等染色劑時更換培養(yǎng)基）等染色劑時更換培養(yǎng)基）注意事項注意事項第十八頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗舉舉例例(j l)HepG-2 72hGroupMeanSDInhibitive RateNegative Control 0.9550.010Positive Control 0.9520.0100.29%Solvent

12、 Control 0.1650.00782.74%化合物XXXIC50=22.588uM100M0.0510.00594.66%80M0.1010.00989.47%60M0.1520.00884.08%40M0.2850.00470.16%20M0.6620.01330.72%10M0.7660.02019.81%5M0.8470.01111.31%2.5M0.9180.0103.92%1.25M0.9400.0101.59%表表 化合物化合物XXX對人肝癌細胞對人肝癌細胞HepG-2體外增殖體外增殖(zngzh)的影響的影響第十九頁，共36頁。體外抗腫瘤活性試驗體外抗腫瘤活性試驗(shyn

13、)第二十頁，共36頁。體內(nèi)抗腫瘤試驗結(jié)果是評價體內(nèi)抗腫瘤試驗結(jié)果是評價(pngji)候選化合物有效性的最重要指候選化合物有效性的最重要指標標體內(nèi)抗腫瘤試驗必須選用三種以上腫瘤模型，其中至少一種為人體內(nèi)抗腫瘤試驗必須選用三種以上腫瘤模型，其中至少一種為人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。試驗結(jié)果三種模型均為癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。試驗結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效，評定該化合物對這些實驗性腫瘤具有效，再重復(fù)一次也為有效，評定該化合物對這些實驗性腫瘤具有治療作用。有治療作用。通常情況下，以人癌異體移植模型試驗結(jié)果來評價通常情況下，以人癌異體移植模型試驗結(jié)果來評價(pngji

14、)細胞毒細胞毒類抗腫瘤藥物的有效性。類抗腫瘤藥物的有效性。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗第二十一頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗小鼠腫瘤模型小鼠腫瘤模型(mxng)大鼠腫瘤模型大鼠腫瘤模型(mxng)人源異種移植腫瘤模型人源異種移植腫瘤模型(mxng)動物模型動物模型第二十二頁，共36頁。實驗實驗(shyn)動物動物體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗動物要求健康，符合等級動物要求，三證動物要求健康，符合等級動物要求，三證 裸鼠：裸鼠：SPF級，小鼠：清潔級、級，小鼠：清潔級、SPF級級 實驗動物質(zhì)量合格證實驗動物質(zhì)量合格證 實驗動物

15、生產(chǎn)許可證實驗動物生產(chǎn)許可證 實驗動物使用實驗動物使用許可證許可證雌雄均可，但同一批實驗中動物性別必須相同雌雄均可，但同一批實驗中動物性別必須相同 婦科腫瘤使用雌性小鼠、前列腺癌等使用雄性小鼠婦科腫瘤使用雌性小鼠、前列腺癌等使用雄性小鼠小鼠鼠齡為小鼠鼠齡為5-6周，體重為周，體重為18-22克克 裸鼠裸鼠6周齡以后，會產(chǎn)生體液周齡以后，會產(chǎn)生體液(ty)免疫、免疫、NK細胞、細胞、B淋巴細淋巴細胞免疫，成瘤率會下降胞免疫，成瘤率會下降 同批動物體重相差不超過同批動物體重相差不超過20%評價同一物質(zhì)的活性時，不同批次的實驗必須采用同一品系的小評價同一物質(zhì)的活性時，不同批次的實驗必須采用同一品系的

16、小鼠鼠第二十三頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗?zāi)[瘤腫瘤(zhngli)瘤株瘤株用體外試驗敏感細胞株進行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗。用體外試驗敏感細胞株進行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗。 模型建立和模型建立和使用應(yīng)注意：使用應(yīng)注意：(1) 移植瘤一般由相應(yīng)的細胞株移植而建立，對細胞株和移植瘤的化療移植瘤一般由相應(yīng)的細胞株移植而建立，對細胞株和移植瘤的化療敏感性應(yīng)予了解。敏感性應(yīng)予了解。(2) 移植瘤復(fù)蘇后一般應(yīng)傳移植瘤復(fù)蘇后一般應(yīng)傳2-3代后再用于體內(nèi)抗腫瘤試驗。代后再用于體內(nèi)抗腫瘤試驗。(3) 對模型生長情況應(yīng)全面對模型生長情況應(yīng)全面(qunmin)了解，尤其是生長

17、快的模型了解，尤其是生長快的模型(4) 為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于應(yīng)少于 15-20代代 第二十四頁，共36頁。呼吸系統(tǒng)腫瘤婦科腫瘤人肺癌 NCI-H460小鼠宮頸癌 U14人肺腺癌 A549人乳腺癌 MDA-MB-435消化系統(tǒng)腫瘤小鼠胃癌 MFC人乳腺癌 MDA-MB-231人胃癌 BGC-803人乳腺癌 MX-1人胃癌 HGC-27人乳腺癌 BCaP-37人低分化胃癌 BGC-823人宮頸癌 SiHa人低分化胃癌 MGC-803人宮頸癌 Hela人低分化胃癌 MKN-45人卵巢癌 A2780人

18、中分化胃癌 SGC-7901人卵巢癌 SK-OV-3人高分化胃癌 MKN-28生殖系統(tǒng)腫瘤人腎癌 Ketr-3小鼠肝癌 H22人膀胱癌 EJ人肝癌 QGY-7701人膀胱癌 T24人肝癌 SMMC-7721人前列腺癌 PC-3人肝癌 Bel-7402人前列腺癌 PC-3M人肝細胞性肝癌 IM3白血病人白血病 HL-60人肝癌 HepG-2人白血病 K562人結(jié)腸癌 Ls-174-T人耐阿霉素白血病 K562/Adr人結(jié)腸癌 CL187皮膚腫瘤小鼠黑色素瘤 B16F1人結(jié)腸癌 HCT-116小鼠黑色素瘤 B16F10人結(jié)腸癌 SW1116小鼠黑色素瘤 B16BL6人結(jié)腸癌 HT-29人黑色素瘤

19、A375人胰腺癌 BxPC-3人黑色素瘤 M14頭頸部腫瘤人喉表皮癌 Hep-2其它腫瘤小鼠肉瘤 S180第二十五頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗小鼠腫瘤模型小鼠腫瘤模型優(yōu)點：潛伏期短、移植瘤成活率高、生長均勻、無自發(fā)緩解、試驗優(yōu)點：潛伏期短、移植瘤成活率高、生長均勻、無自發(fā)緩解、試驗周期短、費用低周期短、費用低缺點：動物腫瘤在生物學(xué)和遺傳學(xué)上與臨床不一致，在藥物敏感性缺點：動物腫瘤在生物學(xué)和遺傳學(xué)上與臨床不一致，在藥物敏感性方面與人體腫瘤方面與人體腫瘤 不一致不一致僅可用于候選化合物的初步篩選僅可用于候選化合物的初步篩選常用小鼠腫瘤常用小鼠腫瘤H22、S180、

20、Lewis第二十六頁，共36頁。人癌裸鼠異種移植腫瘤模型人癌裸鼠異種移植腫瘤模型優(yōu)點：實驗結(jié)果與臨床較符合、優(yōu)點：實驗結(jié)果與臨床較符合、可用于研究獲得性藥物抗性可用于研究獲得性藥物抗性缺點：飼養(yǎng)條件要求高、接種成活率低、移植瘤個體差異大、缺點：飼養(yǎng)條件要求高、接種成活率低、移植瘤個體差異大、部分模型部分模型 很難構(gòu)建、生存時間不適合作為試驗終點很難構(gòu)建、生存時間不適合作為試驗終點人癌裸鼠皮下移植瘤操作簡單、易于觀察與結(jié)果判定，但皮下移植瘤缺人癌裸鼠皮下移植瘤操作簡單、易于觀察與結(jié)果判定，但皮下移植瘤缺乏腫瘤最典型的特性乏腫瘤最典型的特性- -轉(zhuǎn)移，是現(xiàn)在評價抗腫瘤藥物活性的主要模型轉(zhuǎn)移，是現(xiàn)在

21、評價抗腫瘤藥物活性的主要模型體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗第二十七頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解(rngji)者，可先用者，可先用小量酸小量酸(0.1-0.5N HCl)或堿或堿(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶解溶解(rngji)，調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)pH在在4.5-9.0的范圍內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫的范圍內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫80、DMSO助溶的藥物，或助溶的藥物，或用吐溫用吐溫60、吐溫、吐溫80、2-3%淀粉、淀粉、0.5%羧甲基纖

22、維素制成混懸液的藥物，羧甲基纖維素制成混懸液的藥物，可腹腔注射或口服，但必須設(shè)相同濃度的溶劑對照組。用注射用花生油可腹腔注射或口服，但必須設(shè)相同濃度的溶劑對照組。用注射用花生油配制的溶液或乳劑可口服、皮下或肌肉注射配制的溶液或乳劑可口服、皮下或肌肉注射藥物藥物(yow)配制配制第二十八頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗試驗設(shè)模型對照組、陽性對照組、治療組。試驗設(shè)模型對照組、陽性對照組、治療組。治療組設(shè)高、中、低三個劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種后次日將治療組設(shè)高、中、低三個劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種后次日將動物隨機分組，裸鼠移植瘤用游標卡尺動物隨機分組，裸鼠移植瘤用

23、游標卡尺(yubio kch)測量移植測量移植瘤直徑，待腫瘤生長至瘤直徑，待腫瘤生長至100300mm3后將動物隨機分組。后將動物隨機分組。動物數(shù)普通小鼠每組動物數(shù)普通小鼠每組10只，裸鼠只，裸鼠6只。只。組別設(shè)置組別設(shè)置(shzh)試驗設(shè)計試驗設(shè)計第二十九頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗治療組設(shè)高、中、低劑量治療組設(shè)高、中、低劑量(jling)治療組，一般按治療組，一般按4:2:1設(shè)置設(shè)置如何確定試驗劑量如何確定試驗劑量(jling)臨床等效劑量臨床等效劑量(jling)（根據(jù)體表面積換算）（根據(jù)體表面積換算）根據(jù)半數(shù)致死量（根據(jù)半數(shù)致死量（1/10-1/20預(yù)

24、摸）或者高劑量預(yù)摸）或者高劑量(jling)使用最使用最大耐受量或大耐受量或LD10的劑量的劑量(jling)根據(jù)文獻估計劑量根據(jù)文獻估計劑量(jling)劑量劑量(jling)設(shè)置設(shè)置試驗設(shè)計試驗設(shè)計第三十頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗?zāi)Ｐ蛯φ战M給予相應(yīng)的溶劑；模型對照組給予相應(yīng)的溶劑；陽性陽性(yngxng)對照藥選用對該動物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物對照藥選用對該動物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物（陽性（陽性(yngxng)組必須作出陽性組必須作出陽性(yngxng)結(jié)果，否則有理由懷結(jié)果，否則有理由懷疑篩選方法和指標的可信度）疑篩選方法和指標的可信度）如

25、受試物為一抗癌藥物的衍生物或類似物時，必須選用該抗癌藥物作如受試物為一抗癌藥物的衍生物或類似物時，必須選用該抗癌藥物作為陽性為陽性(yngxng)對照藥對照藥原型劑對照原型劑對照陽性陽性(yngxng)對照藥選擇原則對照藥選擇原則 療效確切與被試物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)類似；療效確切與被試物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)類似；與被試物質(zhì)有類似的作用機理與被試物質(zhì)有類似的作用機理 對照組設(shè)置對照組設(shè)置(shzh)試驗設(shè)計試驗設(shè)計第三十一頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗分組當日開始給藥，根據(jù)不同藥物的代謝動力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定給藥方案。分組當日開始給藥，根據(jù)不同藥物的代謝動力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定給藥方

26、案。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。 給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較差，靜脈給藥有困難時，可考慮使用腹腔給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較差，靜脈給藥有困難時，可考慮使用腹腔給藥，但在評價藥效給藥，但在評價藥效(yo xio)時要注意這兩種給藥途徑是有差別的。時要注意這兩種給藥途徑是有差別的?？刹扇×鲋?、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑?？刹扇×鲋?、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤試驗時一般不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。腹水瘤試驗時一般不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。給藥方案給藥方案(fng n)和給藥途徑和給藥途徑試驗設(shè)計試驗設(shè)計第三十二頁，共36頁。腹水瘤模型腹水瘤模型接種給

27、藥后，觀察和記錄接種給藥后，觀察和記錄動物動物(dngw)死亡時間，死亡時間，計算生存天數(shù)。如陰性計算生存天數(shù)。如陰性對照組對照組20%動物動物(dngw)存活時間超過存活時間超過4周，表明腹水瘤生長不周，表明腹水瘤生長不良，實驗作廢。良，實驗作廢。檢測(jin c)指標檢測(jin c)指標裸鼠移植瘤模型裸鼠移植瘤模型推薦使用測量瘤徑的方法，推薦使用測量瘤徑的方法，動態(tài)觀察受試物抗腫瘤的動態(tài)觀察受試物抗腫瘤的效應(yīng)。效應(yīng)。腫瘤直徑腫瘤直徑(zhjng)的測量次的測量次數(shù)根據(jù)移植瘤的生長情況數(shù)根據(jù)移植瘤的生長情況而定，一般為每周而定，一般為每周2-3次次,每次測量同時還需稱鼠重。每次測量同時還需

28、稱鼠重。免疫缺陷小鼠皮下移植的腫瘤很少發(fā)生轉(zhuǎn)移，多數(shù)死于原發(fā)腫瘤。而臨床免疫缺陷小鼠皮下移植的腫瘤很少發(fā)生轉(zhuǎn)移，多數(shù)死于原發(fā)腫瘤。而臨床腫瘤病人大多死于腫瘤轉(zhuǎn)移，動物和臨床腫瘤病人的死亡原因不同。因此，腫瘤病人大多死于腫瘤轉(zhuǎn)移，動物和臨床腫瘤病人的死亡原因不同。因此，對于人癌異體移植試驗，生命延長率并不是理想的觀測指標。對于人癌異體移植試驗，生命延長率并不是理想的觀測指標。體內(nèi)抗腫瘤活性試驗體內(nèi)抗腫瘤活性試驗第三十三頁，共36頁。體內(nèi)體內(nèi)(t ni)抗腫瘤活性試驗抗腫瘤活性試驗裸鼠皮下移植裸鼠皮下移植(yzh)瘤模型瘤模型腫瘤體積腫瘤體積(tumor volume,TV)的計算公式的計算公式(gngsh)為：為：V = 1/2ab2 或或/6abc其中其中a、b、c分別表示長寬高。兩公式分別表示長寬高。兩公式(gngsh)的相關(guān)性極好，可采用任一公式的相關(guān)性極好，可采用任一公式(gngsh)。根據(jù)測量結(jié)果計算出相對腫瘤體積（根據(jù)測量結(jié)果計算出相對腫瘤體積（relative tumor volume，RTV），），