消毒滅菌,腸道致病菌分離培養(yǎng)和抗酸染色

1、整理課件 三三. . 抗酸染色抗酸染色 一一. . 消毒滅菌消毒滅菌 二二. . 腸道致病菌的分離培養(yǎng)腸道致病菌的分離培養(yǎng) 整理課件一、消毒滅菌一、消毒滅菌物理因素對(duì)細(xì)菌的影響物理因素對(duì)細(xì)菌的影響2. 2. 化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響整理課件（一）（一） 物理因素對(duì)細(xì)菌的影響物理因素對(duì)細(xì)菌的影響 高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法 紫外線對(duì)細(xì)菌的影響紫外線對(duì)細(xì)菌的影響整理課件高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌法 原理：原理：蒸汽被限制在密閉容器內(nèi)，隨著熱力蒸汽被限制在密閉容器內(nèi)，隨著熱力 的作用壓力不斷升高，蒸汽的溫度也的作用壓力不斷升高，蒸汽的溫度也 相應(yīng)升高，在相應(yīng)升高，在103.4kPa

2、103.4kPa蒸汽壓力下蒸汽壓力下 時(shí)，溫度可達(dá)時(shí)，溫度可達(dá)121.3121.3。維持。維持15-2015-20分分 鐘后可殺死細(xì)菌包括芽孢在內(nèi)的所有鐘后可殺死細(xì)菌包括芽孢在內(nèi)的所有 微生物。微生物。整理課件高壓蒸氣滅菌器高壓蒸氣滅菌器 1) 構(gòu)造構(gòu)造 高壓蒸氣滅菌器是一個(gè)雙層的金屬圓筒，兩層之間盛水，高壓蒸氣滅菌器是一個(gè)雙層的金屬圓筒，兩層之間盛水，外層堅(jiān)厚，其上或前方有金屬厚蓋。蓋旁附有螺栓，借以緊外層堅(jiān)厚，其上或前方有金屬厚蓋。蓋旁附有螺栓，借以緊閉蓋門，使蒸氣不能外溢。閉蓋門，使蒸氣不能外溢。 高壓蒸氣滅菌器上裝有排氣閥、安全閥，以調(diào)節(jié)器內(nèi)壓高壓蒸氣滅菌器上裝有排氣閥、安全閥，以調(diào)節(jié)

3、器內(nèi)壓力，裝有的溫度計(jì)及壓力表以示內(nèi)部溫度和壓力。力，裝有的溫度計(jì)及壓力表以示內(nèi)部溫度和壓力。 器內(nèi)裝有帶孔的金屬擱板，用以放置欲滅菌對(duì)象。器內(nèi)裝有帶孔的金屬擱板，用以放置欲滅菌對(duì)象。整理課件高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法壓力壓力：1.05kg/ 或103.425KPa溫度溫度: : 121.3時(shí)間：時(shí)間：15-20min完全殺滅細(xì)菌的繁殖體和芽孢完全殺滅細(xì)菌的繁殖體和芽孢用途：適用于耐高溫、高壓，不怕潮濕的物品，用途：適用于耐高溫、高壓，不怕潮濕的物品， 如敷料、如敷料、 手術(shù)器械、藥品、細(xì)菌培養(yǎng)基等。手術(shù)器械、藥品、細(xì)菌培養(yǎng)基等。整理課件2)2)使用方法使用方法 加水至鍋內(nèi)達(dá)規(guī)定的水平面，放

4、入欲滅菌物品，把鍋蓋按對(duì)稱的螺旋先后對(duì)稱用力（切勿單個(gè)依次）扭緊，使鍋蓋確實(shí)均勻密閉。 用電爐加熱，同時(shí)打開排氣閥門，使器內(nèi)冷空氣逸出，待空氣全部排出后，關(guān)閉排氣閥。 繼續(xù)加熱并觀察壓力表，器內(nèi)壓力又逐漸升高，直到壓力表指在所需數(shù)字（例如15磅）即調(diào)節(jié)熱源，維持2030min可完全殺死細(xì)菌的繁殖體和芽胞。 滅菌時(shí)間到達(dá)后，停止加熱，待壓力自行下降至零時(shí)方可徐徐開放排氣閥，排盡余氣，打開鍋蓋，取出滅菌物品。整理課件3)3)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 檢查排氣活塞及安全閥門，特別是壓力表的性能是否正常，以免發(fā)生危險(xiǎn)。 滅菌物品不應(yīng)放置過擠，妨礙蒸氣流通，影響滅菌效果。 滅菌開始時(shí)必須將器內(nèi)冷空氣完全排除，否

5、則壓力表上所示壓力并非全部是蒸氣壓力，滅菌將不徹底。 滅菌過程中及滅菌完畢，滅菌后切不可排氣過急，突然打開排氣閥門放氣減壓，以免瓶內(nèi)液體外溢或者破裂。整理課件整理課件整理課件整理課件整理課件整理課件紫外線對(duì)細(xì)菌的影響紫外線對(duì)細(xì)菌的影響對(duì)對(duì)病毒也有破壞作用。病毒也有破壞作用。整理課件紫外線對(duì)細(xì)菌的影響紫外線對(duì)細(xì)菌的影響 方法：方法：取一個(gè)平皿，用密涂法將細(xì)菌涂布于培養(yǎng)皿中，取一個(gè)平皿，用密涂法將細(xì)菌涂布于培養(yǎng)皿中，然后按圖所示揭開平皿蓋，置于紫外線下照射然后按圖所示揭開平皿蓋，置于紫外線下照射3030分鐘，分鐘，然后蓋好蓋子，置然后蓋好蓋子，置37培養(yǎng)培養(yǎng)24h后取出觀察結(jié)果。后取出觀察結(jié)果。紙

6、片紙片平皿蓋平皿蓋濾紙片用后需要用火燒掉濾紙片用后需要用火燒掉每個(gè)實(shí)驗(yàn)室每個(gè)實(shí)驗(yàn)室4個(gè)平板個(gè)平板整理課件 分三次接種，分三次接種，每次取一環(huán)。第每次取一環(huán)。第一次密涂接種后一次密涂接種后旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)6060度二次密度二次密涂接種，然后同涂接種，然后同方向旋轉(zhuǎn)方向旋轉(zhuǎn)6060度后度后再次密涂接種。再次密涂接種。整理課件 1. 1. 促進(jìn)菌體蛋白質(zhì)變性或凝固促進(jìn)菌體蛋白質(zhì)變性或凝固; ; 2. 2. 干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝; ; 3. 3. 損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜，影響細(xì)菌的化學(xué)組成，損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜，影響細(xì)菌的化學(xué)組成， 物理結(jié)構(gòu)和生理活動(dòng)。物理結(jié)構(gòu)和生理活動(dòng)。 有些化學(xué)藥品濃度高時(shí)能殺

7、滅病原微生物，稱為化學(xué)消毒劑化學(xué)消毒劑；濃度低時(shí)能抑制細(xì)菌生長，稱為防防腐劑腐劑。（只能外用，對(duì)細(xì)菌的敏感性不同）（二）（二） 化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響化學(xué)因素對(duì)細(xì)菌的影響 整理課件化學(xué)消毒劑分類 高效消毒劑：高效消毒劑：殺滅細(xì)菌芽孢在內(nèi)的所有微生物，適用于殺滅細(xì)菌芽孢在內(nèi)的所有微生物，適用于 不耐熱力滅菌但要進(jìn)入人體內(nèi)部的物品，如內(nèi)窺鏡等。不耐熱力滅菌但要進(jìn)入人體內(nèi)部的物品，如內(nèi)窺鏡等。 如：次氯酸鈉如：次氯酸鈉、過氧化氫過氧化氫、甲醛甲醛、環(huán)氧乙烷等環(huán)氧乙烷等 中效消毒劑：中效消毒劑：不能殺滅芽孢，但能殺滅繁殖體（包括結(jié)不能殺滅芽孢，但能殺滅繁殖體（包括結(jié) 核桿菌），真菌和大多病毒，適用于喉鏡

8、，麻醉器材等。核桿菌），真菌和大多病毒，適用于喉鏡，麻醉器材等。 如：碘酊如：碘酊、乙醇等乙醇等 低效消毒劑：低效消毒劑：能殺滅大多細(xì)菌繁殖體，但不能殺滅芽能殺滅大多細(xì)菌繁殖體，但不能殺滅芽 孢，結(jié)核桿菌及某些抵抗力強(qiáng)的真菌和病毒。孢，結(jié)核桿菌及某些抵抗力強(qiáng)的真菌和病毒。 如：新潔爾滅如：新潔爾滅、洗必泰洗必泰、高錳酸鉀等高錳酸鉀等整理課件化學(xué)消毒劑對(duì)細(xì)菌的影響化學(xué)消毒劑對(duì)細(xì)菌的影響方法方法：取一普通平皿取一普通平皿培養(yǎng)基，一部分寫上培養(yǎng)基，一部分寫上“前前”，另一部分寫，另一部分寫上上“后后”，然后將手，然后將手指在寫有指在寫有“前前”的部的部分沾一下，再將手指分沾一下，再將手指用酒精、碘酒

9、或新潔用酒精、碘酒或新潔爾滅進(jìn)行消毒，在寫爾滅進(jìn)行消毒，在寫有有“后后”的部分沾一的部分沾一下。放入下。放入3737溫箱培溫箱培養(yǎng)養(yǎng)2424小時(shí)小時(shí)后觀察。后觀察。 （每個(gè)實(shí)驗(yàn)室每個(gè)實(shí)驗(yàn)室4 4個(gè)平皿個(gè)平皿）整理課件二、腸道致病菌的分離培養(yǎng)二、腸道致病菌的分離培養(yǎng) 腸道致病菌的生物學(xué)性狀 SS培養(yǎng)基的特性及用途 分離培養(yǎng)方法整理課件腸道桿菌的生物學(xué)性狀腸道桿菌的生物學(xué)性狀埃希菌屬：大腸埃希菌埃希菌屬：大腸埃希菌沙門菌屬：傷寒沙門菌沙門菌屬：傷寒沙門菌 甲型、乙型副傷寒沙門菌甲型、乙型副傷寒沙門菌志賀菌屬：痢疾志賀菌志賀菌屬：痢疾志賀菌腸桿菌科重要菌屬及代表菌種腸桿菌科重要菌屬及代表菌種整理課件

10、1 1、相似的形態(tài)染色、相似的形態(tài)染色腸道桿菌的生物學(xué)性狀腸道桿菌的生物學(xué)性狀整理課件2 2、活潑的生化反應(yīng)、活潑的生化反應(yīng)腸道桿菌的生物學(xué)性狀腸道桿菌的生物學(xué)性狀乳糖發(fā)酵試驗(yàn)乳糖發(fā)酵試驗(yàn)初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌初步鑒別腸道致病菌和腸道非致病菌腸道致病菌腸道致病菌腸道非致病菌腸道非致病菌多數(shù)不發(fā)酵乳糖多數(shù)不發(fā)酵乳糖 多數(shù)發(fā)酵乳糖多數(shù)發(fā)酵乳糖整理課件腸道桿菌的生物學(xué)性狀腸道桿菌的生物學(xué)性狀 -/+ - +傷寒桿菌 - - +痢疾桿菌 - 大腸桿菌硫化氫乳糖葡萄糖菌名2 2、活潑的生化反應(yīng)、活潑的生化反應(yīng)整理課件SSSS培養(yǎng)基的特性培養(yǎng)基的特性（Salmonella -Shigella M

11、edium） 膽鹽抑制膽鹽抑制G+,+,枸櫞酸鈉和煌綠能部分抑制大枸櫞酸鈉和煌綠能部分抑制大腸桿菌腸桿菌, ,致病的沙門菌和志賀菌能大量生長。致病的沙門菌和志賀菌能大量生長。 中性紅指示劑和乳糖中性紅指示劑和乳糖, ,中性紅遇酸變粉紅。中性紅遇酸變粉紅。 常用于培養(yǎng)腸道致病菌。常用于培養(yǎng)腸道致病菌。牛肉浸粉牛肉浸粉 蛋白胨蛋白胨 乳糖乳糖 硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉 枸櫞酸鈉枸櫞酸鈉 煌綠煌綠 膽鹽膽鹽 中性紅中性紅 瓊脂瓊脂整理課件Salmonella -Shigella Medium主要成分主要成分 基礎(chǔ)營養(yǎng)基礎(chǔ)營養(yǎng) 乳糖乳糖 指示劑指示劑 抑制劑抑制劑分解乳糖分解乳糖不分解乳糖不分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)

12、酸PH下降下降指示劑變紅色指示劑變紅色紅色大菌落紅色大菌落大腸桿菌等大腸桿菌等無明顯變化無明顯變化無色半透明小菌落無色半透明小菌落志賀菌、沙門菌志賀菌、沙門菌整理課件大腸桿菌大腸桿菌痢疾桿菌痢疾桿菌整理課件 SSSS平板平板大腸桿菌大腸桿菌 粉紅色大菌落粉紅色大菌落痢疾桿菌痢疾桿菌 無色細(xì)小無色細(xì)小 半透明菌落半透明菌落傷寒桿菌傷寒桿菌 無色細(xì)小無色細(xì)小 半透明菌落半透明菌落SSSS培養(yǎng)基的特性及用途培養(yǎng)基的特性及用途整理課件 將糞便標(biāo)本以分區(qū)劃線法接種到將糞便標(biāo)本以分區(qū)劃線法接種到SSSS培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 ( (每個(gè)實(shí)驗(yàn)室每個(gè)實(shí)驗(yàn)室8 8個(gè)平板，接種好后，做好標(biāo)記，用個(gè)平板，接種好后，做好標(biāo)

13、記，用膠布按班綁好）膠布按班綁好） 注：每個(gè)平板只可操作一次，不可重復(fù)操作注：每個(gè)平板只可操作一次，不可重復(fù)操作 放入放入37溫箱中培養(yǎng)溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)。取出放小時(shí)。取出放4冰箱冰箱中保中保存?zhèn)溆?。存?zhèn)溆谩Ｄc道致病菌的分離培養(yǎng)方法腸道致病菌的分離培養(yǎng)方法整理課件【實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康摹?. 1. 掌握分枝桿菌抗酸染色的操作方法和意義。掌握分枝桿菌抗酸染色的操作方法和意義。2. 2. 熟悉抗酸染色的原理。熟悉抗酸染色的原理。三、三、抗酸染色（抗酸染色（Acid fast stain）整理課件 分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在

14、肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過經(jīng)過加熱和延長染色時(shí)間加熱和延長染色時(shí)間來促使其著色。但分枝桿菌中的來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色抗酸染色。 齊齊- -尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用，用3%3%鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色紅色，而其

15、他細(xì)菌，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色藍(lán)色?！緦?shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理】整理課件 細(xì)菌細(xì)菌：卡介苗：卡介苗 （Bacillus Calmette-Guerin， BCG） 染液染液：石炭酸復(fù)紅液、：石炭酸復(fù)紅液、3%3%鹽酸酒精、堿性美蘭溶液鹽酸酒精、堿性美蘭溶液 其它其它：接種環(huán)、酒精燈、載玻片、玻片夾等：接種環(huán)、酒精燈、載玻片、玻片夾等【實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料】整理課件1.1.細(xì)菌涂片的制備細(xì)菌涂片的制備 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 2.2.染色染色1 1）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3 2-3 滴，在滴，在火焰高處（火焰高

16、處（2-10cm2-10cm）徐徐加熱，）徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開，加熱時(shí)離開，加熱3 35min5min，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，待標(biāo)本免干涸，待標(biāo)本冷卻后冷卻后用水沖洗。用水沖洗。2 2）脫色：）脫色： 3%3%鹽酸酒精鹽酸酒精脫色脫色30s30s1min1min；用水沖洗。；用水沖洗。3 3）復(fù)染：用堿性美蘭溶液）復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染復(fù)染1min1min；用水沖洗后用吸水紙吸干。；用水沖洗后用吸水紙吸干。3. 3. 用油鏡觀察用油鏡觀察【方法與步驟方法與步驟】（與革蘭染色的差別）（與革蘭染色的差別）整理課件【實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果】未染色未染色 初染后初染后 脫色后脫色后 復(fù)染后復(fù)染后初染初染脫色脫色復(fù)染復(fù)染石石炭炭酸酸復(fù)復(fù)紅紅鹽酸酒精鹽酸酒精堿性美堿性美蘭蘭整理課件 結(jié)核桿菌呈結(jié)核桿菌呈紅色紅色，常堆積成團(tuán)，排列無序，偶呈分枝，常堆積成團(tuán)，排列無序，偶呈分枝狀生長。背景及非抗酸性細(xì)菌呈狀生長。背景及非抗酸性細(xì)菌呈藍(lán)色藍(lán)色。整理課件【注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)】1. 1. 無菌操作無菌操作2. 2. 染色時(shí)間要充分染色時(shí)間要充分3. 3. 初染時(shí)掌握好加熱的溫度，勿沸騰、干涸初染時(shí)掌握好加熱的溫度，勿沸騰、干涸4. 4. 初染結(jié)束后需冷卻后再用水沖洗初染結(jié)束后需冷卻后再用水沖洗整理課件實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容