《發(fā)酵工程》第8章工業(yè)發(fā)酵染菌的防治

1、第八章第八章 工業(yè)發(fā)酵染菌的防治工業(yè)發(fā)酵染菌的防治學(xué)學(xué) 時(shí)：時(shí)：教學(xué)內(nèi)容：教學(xué)內(nèi)容：21.了解染菌對(duì)工業(yè)發(fā)酵的危害了解染菌對(duì)工業(yè)發(fā)酵的危害2.掌握染菌的檢查、判斷方法掌握染菌的檢查、判斷方法3.了解染菌的原因和預(yù)防措施了解染菌的原因和預(yù)防措施第一節(jié)第一節(jié) 染菌對(duì)工業(yè)發(fā)酵的危害染菌對(duì)工業(yè)發(fā)酵的危害 無論單菌發(fā)酵還是混合菌種發(fā)酵，都是純種發(fā)酵，無論單菌發(fā)酵還是混合菌種發(fā)酵，都是純種發(fā)酵，除菌種除菌種以外的其他微生物都應(yīng)視為雜菌。以外的其他微生物都應(yīng)視為雜菌。所謂染菌，是指在發(fā)酵培養(yǎng)所謂染菌，是指在發(fā)酵培養(yǎng)基中侵入了有礙生產(chǎn)的其它微生物?；星秩肓擞械K生產(chǎn)的其它微生物。 我國幾乎所有的發(fā)酵工業(yè)都曾遭

2、受過雜菌的污染，染菌率我國幾乎所有的發(fā)酵工業(yè)都曾遭受過雜菌的污染，染菌率有時(shí)高達(dá)有時(shí)高達(dá)10%。染菌對(duì)發(fā)酵產(chǎn)率、提取收得率、產(chǎn)品質(zhì)量和三。染菌對(duì)發(fā)酵產(chǎn)率、提取收得率、產(chǎn)品質(zhì)量和三廢治理等都有很大影響。染菌的結(jié)果，輕者影響產(chǎn)量或質(zhì)量，廢治理等都有很大影響。染菌的結(jié)果，輕者影響產(chǎn)量或質(zhì)量，重者可引起倒罐，甚至停產(chǎn)，造成原料、人力和設(shè)備、動(dòng)力的重者可引起倒罐，甚至停產(chǎn)，造成原料、人力和設(shè)備、動(dòng)力的浪費(fèi)。因此，防止雜菌和噬菌體污染是保證發(fā)酵正常進(jìn)行的關(guān)浪費(fèi)。因此，防止雜菌和噬菌體污染是保證發(fā)酵正常進(jìn)行的關(guān)鍵之一。鍵之一。 防止染菌的原則：防患重于治理。防止染菌的原則：防患重于治理。一一. 染菌對(duì)不同品

3、種發(fā)酵的影響染菌對(duì)不同品種發(fā)酵的影響二二.感染不同種類和性質(zhì)雜菌對(duì)發(fā)酵的影響感染不同種類和性質(zhì)雜菌對(duì)發(fā)酵的影響三三.不同污染時(shí)間對(duì)發(fā)酵的影響不同污染時(shí)間對(duì)發(fā)酵的影響四四.染菌程度對(duì)發(fā)酵的影響染菌程度對(duì)發(fā)酵的影響五五.染菌對(duì)產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量的影響染菌對(duì)產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量的影響 菌種、培養(yǎng)基、發(fā)酵條件、發(fā)酵周期以及產(chǎn)物性質(zhì)等不同，染菌種、培養(yǎng)基、發(fā)酵條件、發(fā)酵周期以及產(chǎn)物性質(zhì)等不同，染菌造成的危害程度也不同。菌造成的危害程度也不同。一一. 染菌對(duì)不同品種發(fā)酵的影響染菌對(duì)不同品種發(fā)酵的影響 青霉素發(fā)酵青霉素發(fā)酵許多產(chǎn)青霉素酶的雜菌許多產(chǎn)青霉素酶的雜菌任何時(shí)期污染任何時(shí)期污染都可能使青霉素迅速被破壞

4、而一無所獲。都可能使青霉素迅速被破壞而一無所獲。 疫苗深層培養(yǎng)疫苗深層培養(yǎng)一旦受污染，全部廢棄。一旦受污染，全部廢棄。 檸檬酸發(fā)酵檸檬酸發(fā)酵產(chǎn)酸后產(chǎn)酸后pH值很低，一般雜菌不易生長值很低，一般雜菌不易生長防止前期染菌。防止前期染菌。 谷氨酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵周期短，生產(chǎn)菌繁殖快，加之培養(yǎng)基不太周期短，生產(chǎn)菌繁殖快，加之培養(yǎng)基不太豐富豐富極少污染，但噬菌體危害大。極少污染，但噬菌體危害大。 肌苷、肌苷酸發(fā)酵肌苷、肌苷酸發(fā)酵生產(chǎn)菌是多種營養(yǎng)缺陷型，生長能生產(chǎn)菌是多種營養(yǎng)缺陷型，生長能力差，培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富等力差，培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富等易染菌易染菌 總之，無論何種發(fā)酵，染菌后都會(huì)造成糖及其他營養(yǎng)基質(zhì)總之，無論何

5、種發(fā)酵，染菌后都會(huì)造成糖及其他營養(yǎng)基質(zhì)被消耗，而影響發(fā)酵產(chǎn)物的合成，使產(chǎn)量大大地降低。被消耗，而影響發(fā)酵產(chǎn)物的合成，使產(chǎn)量大大地降低。二二.不同染菌對(duì)發(fā)酵的影響不同染菌對(duì)發(fā)酵的影響 在工業(yè)發(fā)酵中，不同種類的雜菌對(duì)發(fā)酵造成的危害是不同的。在工業(yè)發(fā)酵中，不同種類的雜菌對(duì)發(fā)酵造成的危害是不同的。 例如，在抗生素發(fā)酵中，青霉素發(fā)酵污染細(xì)短產(chǎn)氣桿菌比例如，在抗生素發(fā)酵中，青霉素發(fā)酵污染細(xì)短產(chǎn)氣桿菌比污染粗大桿菌危害更大；鏈霉素發(fā)酵污染細(xì)短桿菌、假單胞桿污染粗大桿菌危害更大；鏈霉素發(fā)酵污染細(xì)短桿菌、假單胞桿菌和產(chǎn)氣桿菌比污染粗大桿菌更嚴(yán)重，而四環(huán)素發(fā)酵最怕污染菌和產(chǎn)氣桿菌比污染粗大桿菌更嚴(yán)重，而四環(huán)素發(fā)酵

6、最怕污染雙球菌、芽孢桿菌和莢膜桿菌。雙球菌、芽孢桿菌和莢膜桿菌。 谷氨酸發(fā)酵最危險(xiǎn)的是污染噬菌體，因?yàn)槭删w蔓延迅谷氨酸發(fā)酵最危險(xiǎn)的是污染噬菌體，因?yàn)槭删w蔓延迅速，難以防治，容易造成連續(xù)污染。速，難以防治，容易造成連續(xù)污染。三三.不同染菌時(shí)期對(duì)發(fā)酵的影響不同染菌時(shí)期對(duì)發(fā)酵的影響 菌體濃度低，培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，易染菌菌體濃度低，培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，易染菌先滅菌后棄去，先滅菌后棄去，同時(shí)還要對(duì)種子罐、管道進(jìn)行檢查、徹底滅菌。同時(shí)還要對(duì)種子罐、管道進(jìn)行檢查、徹底滅菌。1.種子培養(yǎng)期染菌種子培養(yǎng)期染菌2.發(fā)酵前期染菌發(fā)酵前期染菌 易染菌。雜菌與生產(chǎn)菌爭奪營養(yǎng)成分，干擾生產(chǎn)菌的繁易染菌。雜菌與生產(chǎn)菌爭奪營養(yǎng)

7、成分，干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物合成殖和產(chǎn)物合成應(yīng)特別防止發(fā)酵前期染菌。應(yīng)特別防止發(fā)酵前期染菌。 可重新滅菌，補(bǔ)充必要營養(yǎng)，重新接種?？芍匦聹缇?，補(bǔ)充必要營養(yǎng)，重新接種。3.發(fā)酵中期染菌發(fā)酵中期染菌 嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的代謝和產(chǎn)物的合成嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌的代謝和產(chǎn)物的合成。有的雜菌繁殖后產(chǎn)生。有的雜菌繁殖后產(chǎn)生酸性物質(zhì)，酸性物質(zhì)，pH值下降，糖、氮消耗迅速，菌體自溶，發(fā)酵液粘值下降，糖、氮消耗迅速，菌體自溶，發(fā)酵液粘性增加，產(chǎn)生大量泡沫，代謝產(chǎn)物的積累迅速減少或停止，有的性增加，產(chǎn)生大量泡沫，代謝產(chǎn)物的積累迅速減少或停止，有的已生成的產(chǎn)物也會(huì)被利用或破壞，有的發(fā)酵液變臭。已生成的產(chǎn)物也會(huì)被利用或破壞，有的

8、發(fā)酵液變臭。挽救處理困難，危害性很大。挽救處理困難，危害性很大。 如抗生素發(fā)酵，可將另一罐發(fā)酵正常、單位高的部分發(fā)如抗生素發(fā)酵，可將另一罐發(fā)酵正常、單位高的部分發(fā)酵液輸入染菌罐中，以抑制雜菌繁殖，同時(shí)采取低通風(fēng)，降酵液輸入染菌罐中，以抑制雜菌繁殖，同時(shí)采取低通風(fēng)，降低流加糖量的措施。低流加糖量的措施。又如檸檬酸發(fā)酵中期染菌，可根據(jù)所染雜菌的性質(zhì)分別處理：又如檸檬酸發(fā)酵中期染菌，可根據(jù)所染雜菌的性質(zhì)分別處理：加大通氣量，加速產(chǎn)酸，必要時(shí)加入鹽酸調(diào)節(jié)加大通氣量，加速產(chǎn)酸，必要時(shí)加入鹽酸調(diào)節(jié)pH，抑制雜菌，抑制雜菌污染細(xì)菌：污染細(xì)菌：可加入可加入0.0250.035gL的硫酸銅，抑制酵母生長的硫酸銅

9、，抑制酵母生長污染酵母：污染酵母：加入另一罐接近成熟的發(fā)酵液，降低加入另一罐接近成熟的發(fā)酵液，降低pH值，使黃曲霉自溶值，使黃曲霉自溶。污染黃曲霉：污染黃曲霉：青霉在青霉在pH值較低時(shí)也能生長，可考慮提前放罐。值較低時(shí)也能生長，可考慮提前放罐。污染青霉：污染青霉：4.發(fā)酵后期染菌發(fā)酵后期染菌如雜菌量不大，可繼續(xù)發(fā)酵，如污染嚴(yán)重，可提前放罐如雜菌量不大，可繼續(xù)發(fā)酵，如污染嚴(yán)重，可提前放罐。四四.染菌程度對(duì)發(fā)酵的影響染菌程度對(duì)發(fā)酵的影響 染菌程度越大，對(duì)發(fā)酵的危害就愈大。當(dāng)生產(chǎn)菌已迅速染菌程度越大，對(duì)發(fā)酵的危害就愈大。當(dāng)生產(chǎn)菌已迅速繁殖，在發(fā)酵液中占有優(yōu)勢(shì)，污染極少數(shù)雜菌繁殖，在發(fā)酵液中占有優(yōu)勢(shì)，

10、污染極少數(shù)雜菌(12個(gè)雜菌個(gè)雜菌/ 1L)，對(duì)發(fā)酵不會(huì)造成影響，因?yàn)檫@些雜菌需要時(shí)間繁殖才，對(duì)發(fā)酵不會(huì)造成影響，因?yàn)檫@些雜菌需要時(shí)間繁殖才能達(dá)到危害發(fā)酵的程度，而且環(huán)境對(duì)雜菌的繁殖已不利。能達(dá)到危害發(fā)酵的程度，而且環(huán)境對(duì)雜菌的繁殖已不利。 但是污染幅度較大時(shí)，特別是發(fā)酵前期和中期污染，將但是污染幅度較大時(shí)，特別是發(fā)酵前期和中期污染，將造成嚴(yán)重的危害。造成嚴(yán)重的危害。五五.染菌對(duì)產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量的影響染菌對(duì)產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量的影響菌體大多自溶菌體大多自溶由于發(fā)酵不徹底，基質(zhì)的殘留濃度增加由于發(fā)酵不徹底，基質(zhì)的殘留濃度增加大幅度降低過濾效率大幅度降低過濾效率發(fā)酵液粘加大，甚至發(fā)臭。發(fā)酵液粘加大，

11、甚至發(fā)臭。造成影響：造成影響：過濾時(shí)間拉長，影響設(shè)備周轉(zhuǎn)使用，破壞生產(chǎn)平衡過濾時(shí)間拉長，影響設(shè)備周轉(zhuǎn)使用，破壞生產(chǎn)平衡對(duì)過濾的影響：對(duì)過濾的影響：有機(jī)溶劑萃取工藝：有機(jī)溶劑萃取工藝：染菌的發(fā)酵液含有更多染菌的發(fā)酵液含有更多的水溶性蛋白，易發(fā)生乳化，使水相和溶劑相難于的水溶性蛋白，易發(fā)生乳化，使水相和溶劑相難于分開分開離子交換工藝：離子交換工藝：雜菌易粘附在離子交換樹脂表雜菌易粘附在離子交換樹脂表面或被離子交換樹脂吸附，大大降低離子交換樹脂面或被離子交換樹脂吸附，大大降低離子交換樹脂的交換量的交換量對(duì)提取的影響：對(duì)提取的影響：對(duì)內(nèi)在質(zhì)量：對(duì)內(nèi)在質(zhì)量：染菌的發(fā)酵液含有較多的染菌的發(fā)酵液含有較多的蛋

12、白質(zhì)和其它雜質(zhì)蛋白質(zhì)和其它雜質(zhì)產(chǎn)品純度產(chǎn)品純度對(duì)產(chǎn)品外觀：對(duì)產(chǎn)品外觀：一些染菌發(fā)酵液經(jīng)過處理一些染菌發(fā)酵液經(jīng)過處理過濾后得到澄清的發(fā)酵液，放置后會(huì)出現(xiàn)渾過濾后得到澄清的發(fā)酵液，放置后會(huì)出現(xiàn)渾濁，影響外觀濁，影響外觀對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響：對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響：第二節(jié)第二節(jié) 染菌的檢查和原因分析染菌的檢查和原因分析二二.染菌的檢查與判斷染菌的檢查與判斷三三.染菌的原因分析染菌的原因分析四四.雜菌污染的途徑和預(yù)防雜菌污染的途徑和預(yù)防五五.染菌的拯救與處理染菌的拯救與處理一一.種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?，F(xiàn)象種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異常現(xiàn)象 1、種子培養(yǎng)異常、種子培養(yǎng)異常 其表現(xiàn)及原因：其表現(xiàn)及原因：（1）菌體生長緩慢：）菌

13、體生長緩慢：原料質(zhì)量、菌體老化、供氧不足、原料質(zhì)量、菌體老化、供氧不足、溫度、酸堿度，種子冷藏時(shí)間長或接種量過低。溫度、酸堿度，種子冷藏時(shí)間長或接種量過低。（2）菌絲結(jié)團(tuán)：）菌絲結(jié)團(tuán)：菌絲團(tuán)中央結(jié)實(shí)，內(nèi)部菌絲的營養(yǎng)吸收菌絲團(tuán)中央結(jié)實(shí)，內(nèi)部菌絲的營養(yǎng)吸收和呼吸受到影響，不能正常生長。原因多而且復(fù)雜。和呼吸受到影響，不能正常生長。原因多而且復(fù)雜。（3）代謝不正常：）代謝不正常：接種物質(zhì)量和培養(yǎng)基質(zhì)量、培養(yǎng)環(huán)境接種物質(zhì)量和培養(yǎng)基質(zhì)量、培養(yǎng)環(huán)境差，接種量小、雜菌污染等有關(guān)差，接種量小、雜菌污染等有關(guān)一一. .種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?，F(xiàn)象種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?，F(xiàn)象2、發(fā)酵異常、發(fā)酵異常 其表現(xiàn)及原因：其表現(xiàn)及

14、原因：（1）菌體生長差：）菌體生長差：種子質(zhì)量的影響；導(dǎo)致代謝緩慢。種子質(zhì)量的影響；導(dǎo)致代謝緩慢。（2）pH不正常：不正常：培養(yǎng)基質(zhì)量、滅菌效果、補(bǔ)糖等影響；培養(yǎng)基質(zhì)量、滅菌效果、補(bǔ)糖等影響；是所有代謝反應(yīng)的綜合反映。是所有代謝反應(yīng)的綜合反映。（3）溶解氧異常）溶解氧異常 染菌：染好氧菌，染厭氧菌染菌：染好氧菌，染厭氧菌（4）泡沫過多）泡沫過多 泡沫的消長不符合規(guī)律；培養(yǎng)基滅菌時(shí)溫度過高或時(shí)泡沫的消長不符合規(guī)律；培養(yǎng)基滅菌時(shí)溫度過高或時(shí)間過長，葡萄糖變成氨基糖會(huì)引起泡沫。間過長，葡萄糖變成氨基糖會(huì)引起泡沫。（5）菌體濃度過高或過低）菌體濃度過高或過低 罐溫長時(shí)間偏高；溶氧不足；營養(yǎng)條件差；種子

15、質(zhì)量罐溫長時(shí)間偏高；溶氧不足；營養(yǎng)條件差；種子質(zhì)量差；菌體自溶。差；菌體自溶。（1）顯微鏡檢查法（最簡單、最直接、最經(jīng)常）顯微鏡檢查法（最簡單、最直接、最經(jīng)常）（2）平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法；）平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法； 平板制好后，應(yīng)先保溫平板制好后，應(yīng)先保溫24小時(shí)，確定無菌小時(shí)，確定無菌（3）肉湯培養(yǎng)基檢查法（酚紅變色）肉湯培養(yǎng)基檢查法（酚紅變色pH6.8-8.4）1 1、染菌的檢查、染菌的檢查二二.染菌的檢查與判斷染菌的檢查與判斷 以上以上3種檢查法未發(fā)現(xiàn)染菌，還不能肯定未被種檢查法未發(fā)現(xiàn)染菌，還不能肯定未被染菌；染菌； 原因是以上檢查法只能檢查雜菌濃度較大的原因是以上檢查法只

16、能檢查雜菌濃度較大的染菌情況（染菌情況（1個(gè)個(gè)/ml）2、以上、以上3種檢查法的不足種檢查法的不足（l）溶解氧水平異常變化顯示染菌溶解氧水平異常變化顯示染菌 如谷氨酸發(fā)酵，在發(fā)酵初期，菌體處于適應(yīng)期，耗氧量很少，如谷氨酸發(fā)酵，在發(fā)酵初期，菌體處于適應(yīng)期，耗氧量很少，溶解氧基本不變；當(dāng)菌體進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，耗氧量增加，溶解氧溶解氧基本不變；當(dāng)菌體進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，耗氧量增加，溶解氧濃度很快下降，并且維持在一定水平濃度很快下降，并且維持在一定水平(5%飽和度以上飽和度以上)，這階段，這階段由于操作條件由于操作條件(pH、溫度、加料等溫度、加料等)變化，溶解氧有波動(dòng)但變化不變化，溶解氧有波動(dòng)但變化不大；

17、發(fā)酵后期，菌體衰老，耗氧量減少，溶解氧濃度又上升。大；發(fā)酵后期，菌體衰老，耗氧量減少，溶解氧濃度又上升。3、發(fā)酵過程的異常現(xiàn)象來判斷染菌、發(fā)酵過程的異?，F(xiàn)象來判斷染菌 當(dāng)感染噬菌體時(shí)，生產(chǎn)菌的呼吸作用受抑制，溶解氧濃度很當(dāng)感染噬菌體時(shí)，生產(chǎn)菌的呼吸作用受抑制，溶解氧濃度很快上升。其溶氧變化比菌體濃度變化更快速靈敏?？焐仙?。其溶氧變化比菌體濃度變化更快速靈敏。（2）排氣中）排氣中CO2異常變化顯示染菌異常變化顯示染菌 好氣性發(fā)酵排氣中好氣性發(fā)酵排氣中CO2含量與糖代謝有關(guān)，可以根據(jù)含量與糖代謝有關(guān)，可以根據(jù)CO2含量來控制發(fā)酵工藝（如流加糖、通風(fēng)量等）。含量來控制發(fā)酵工藝（如流加糖、通風(fēng)量等）。

18、 對(duì)于某種發(fā)酵，在工藝一定時(shí)，對(duì)于某種發(fā)酵，在工藝一定時(shí)，排氣中排氣中CO2含量變化是有含量變化是有規(guī)律的規(guī)律的。在染菌后，糖的消耗發(fā)生變化（加快或減慢），引起。在染菌后，糖的消耗發(fā)生變化（加快或減慢），引起CO2含量的異常變化。如污染雜菌，糖耗加快，含量的異常變化。如污染雜菌，糖耗加快，CO2含量增加；含量增加；感染噬菌體，糖耗減慢，感染噬菌體，糖耗減慢，CO2含量減少。因此，可根據(jù)含量減少。因此，可根據(jù)CO2變變化來判斷染菌?；瘉砼袛嗳揪?。三三.染菌的原因分析染菌的原因分析1.發(fā)酵染菌率發(fā)酵染菌率 發(fā)酵的總?cè)揪剩褐敢荒陜?nèi)發(fā)酵染菌的批次與總投料發(fā)酵批次發(fā)酵的總?cè)揪剩褐敢荒陜?nèi)發(fā)酵染菌的批次

19、與總投料發(fā)酵批次數(shù)之比的百分率：數(shù)之比的百分率：發(fā)酵染菌率是在發(fā)酵罐中發(fā)生的染菌率，包括染菌后引起倒罐發(fā)酵染菌率是在發(fā)酵罐中發(fā)生的染菌率，包括染菌后引起倒罐的批數(shù)，的批數(shù)，但種子罐培養(yǎng)的染菌不接入發(fā)酵罐，不導(dǎo)致發(fā)酵染菌但種子罐培養(yǎng)的染菌不接入發(fā)酵罐，不導(dǎo)致發(fā)酵染菌的另行計(jì)算。的另行計(jì)算?？?cè)揪士側(cè)揪?發(fā)酵染菌批數(shù)發(fā)酵染菌批數(shù)總投料批數(shù)總投料批數(shù)100% 除總?cè)揪释?，還有：除總?cè)揪释猓€有：設(shè)備染菌率：設(shè)備染菌率：某一設(shè)備缺陷某一設(shè)備缺陷不同發(fā)酵階段的染菌率：不同發(fā)酵階段的染菌率：前、中、后期前、中、后期季節(jié)染菌率：季節(jié)染菌率：操作染菌率：操作染菌率：操作工操作工 染菌率高低與發(fā)酵的菌種

20、、培養(yǎng)基、產(chǎn)品性質(zhì)、發(fā)酵周染菌率高低與發(fā)酵的菌種、培養(yǎng)基、產(chǎn)品性質(zhì)、發(fā)酵周期、生產(chǎn)環(huán)境條件、設(shè)備和管理技術(shù)水平有關(guān)。期、生產(chǎn)環(huán)境條件、設(shè)備和管理技術(shù)水平有關(guān)。2. 染菌原因分析染菌原因分析 總結(jié)經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，防患于未然，是積極防止發(fā)酵染菌的最重要措總結(jié)經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，防患于未然，是積極防止發(fā)酵染菌的最重要措施。施。 原因很多，歸納起來主要有：原因很多，歸納起來主要有：種子帶菌種子帶菌無菌空氣帶菌無菌空氣帶菌設(shè)備滲漏設(shè)備滲漏滅菌不徹底滅菌不徹底操作失誤操作失誤技術(shù)管理不善技術(shù)管理不善（1）從污染時(shí)間來分析）從污染時(shí)間來分析種子培養(yǎng)階段：種子培養(yǎng)階段：種子，滅菌，操作種子，滅菌，操作發(fā)酵后期：發(fā)酵后期：空氣

21、，補(bǔ)料，設(shè)備滲漏，泡沫頂蓋，操作空氣，補(bǔ)料，設(shè)備滲漏，泡沫頂蓋，操作發(fā)酵前期：發(fā)酵前期：種子，滅菌，操作，空氣種子，滅菌，操作，空氣（2）從污染的雜菌種類來分析）從污染的雜菌種類來分析雜菌是耐熱的芽孢桿菌：滅菌，死角雜菌是耐熱的芽孢桿菌：滅菌，死角不耐熱雜菌：種子帶菌、空氣帶菌、設(shè)備滲漏、操作問題等；不耐熱雜菌：種子帶菌、空氣帶菌、設(shè)備滲漏、操作問題等；真菌：滲漏，無菌室滅菌不徹底，無菌操作，糖液滅菌不徹底；真菌：滲漏，無菌室滅菌不徹底，無菌操作，糖液滅菌不徹底；大批量發(fā)酵罐染菌：大批量發(fā)酵罐染菌： 前期：種子帶菌或連消設(shè)備引起染菌；前期：種子帶菌或連消設(shè)備引起染菌； 中、后期：空氣凈化系統(tǒng)存

22、在系統(tǒng)結(jié)構(gòu)不合理、過濾器失效。中、后期：空氣凈化系統(tǒng)存在系統(tǒng)結(jié)構(gòu)不合理、過濾器失效。（3）從染菌的規(guī)模來分析）從染菌的規(guī)模來分析部分發(fā)酵罐染菌：部分發(fā)酵罐染菌：前期：種子染菌、連消系統(tǒng)滅菌不徹底；前期：種子染菌、連消系統(tǒng)滅菌不徹底；后期：補(bǔ)料染菌（料液本身帶菌或補(bǔ)料管道滲漏）。后期：補(bǔ)料染菌（料液本身帶菌或補(bǔ)料管道滲漏）。個(gè)別發(fā)酵罐連續(xù)染菌：設(shè)備滲漏個(gè)別發(fā)酵罐連續(xù)染菌：設(shè)備滲漏四四.雜菌污染的途徑和預(yù)防雜菌污染的途徑和預(yù)防1.種子帶菌及防止種子帶菌及防止（l）培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底：培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底：防假壓防假壓（2）菌種在移接時(shí)被污染：）菌種在移接時(shí)被污染：操作不當(dāng)，無菌室管理不嚴(yán)操作

23、不當(dāng)，無菌室管理不嚴(yán)（3）菌種在培養(yǎng)、保藏過程中受污染：）菌種在培養(yǎng)、保藏過程中受污染：試管塞，培養(yǎng)和保藏溫試管塞，培養(yǎng)和保藏溫度不宜變化太大。度不宜變化太大。2. 無菌空氣帶菌及防止無菌空氣帶菌及防止無菌空氣帶菌是發(fā)酵染菌的主要原因之一。無菌空氣帶菌是發(fā)酵染菌的主要原因之一。從空氣凈化流程和設(shè)備的設(shè)計(jì)、過濾介質(zhì)的選用和裝填、從空氣凈化流程和設(shè)備的設(shè)計(jì)、過濾介質(zhì)的選用和裝填、過濾介質(zhì)的滅菌和管理等方面完善空氣凈化系統(tǒng)。過濾介質(zhì)的滅菌和管理等方面完善空氣凈化系統(tǒng)。3.培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及防止培養(yǎng)基和設(shè)備滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及防止 （2）實(shí)罐滅菌時(shí)未充分排除罐內(nèi)冷空氣：）實(shí)罐滅菌時(shí)未充分

24、排除罐內(nèi)冷空氣：“假壓假壓”（1）原料性狀：）原料性狀：淀粉質(zhì)原料在升溫過快或混合不均勻時(shí)，容易淀粉質(zhì)原料在升溫過快或混合不均勻時(shí)，容易結(jié)塊，結(jié)塊，“夾生夾生”，包埋的活菌不易殺滅。，包埋的活菌不易殺滅。升溫前攪拌，并升溫前攪拌，并加入一定量加入一定量-淀粉酶。淀粉酶。（3）連續(xù)滅菌時(shí)蒸汽壓力波動(dòng)大，未達(dá)到滅菌溫度：）連續(xù)滅菌時(shí)蒸汽壓力波動(dòng)大，未達(dá)到滅菌溫度：嚴(yán)格嚴(yán)格控制滅菌溫度，最好采用自動(dòng)控制裝置?？刂茰缇鷾囟龋詈貌捎米詣?dòng)控制裝置。（4）設(shè)備、管道存在）設(shè)備、管道存在“死角死角”：“死角死角”：由于操作、設(shè)備結(jié)構(gòu)、安裝或人為造成的屏障等原由于操作、設(shè)備結(jié)構(gòu)、安裝或人為造成的屏障等原因，引

25、起蒸汽不能有效到達(dá)預(yù)定的局部滅菌部位，從而不能達(dá)因，引起蒸汽不能有效到達(dá)預(yù)定的局部滅菌部位，從而不能達(dá)到徹底滅菌的要求。到徹底滅菌的要求。 常見的設(shè)備、管道常見的設(shè)備、管道“死角死角” 發(fā)酵罐的發(fā)酵罐的“死角死角”：不銹鋼襯里破裂造成死角，發(fā)：不銹鋼襯里破裂造成死角，發(fā)酵罐罐底膿皰狀積垢酵罐罐底膿皰狀積垢。圖：不銹鋼襯里破裂造成死角圖：不銹鋼襯里破裂造成死角圖：發(fā)酵罐罐底積垢圖：發(fā)酵罐罐底積垢 管道安裝不當(dāng)形成的死角4.設(shè)備滲漏引起染菌及防止設(shè)備滲漏引起染菌及防止（1）發(fā)酵設(shè)備、管道、閥門的長期使用，由于腐蝕、磨擦和發(fā)酵設(shè)備、管道、閥門的長期使用，由于腐蝕、磨擦和振動(dòng)等原因，往往造成滲漏。振動(dòng)等原因，往往造成滲漏。如：砂眼由于腐蝕逐漸加深，最終導(dǎo)致穿孔。如：砂眼由于腐蝕逐漸加深，最終導(dǎo)致穿孔。冷卻管受攪拌器作用，長期磨損，焊縫處受冷熱和振動(dòng)產(chǎn)冷卻管受攪拌器作用，長期磨損，焊縫處受冷熱和振動(dòng)產(chǎn)生裂縫而滲漏。生裂縫而滲漏。（2）微小滲漏的檢查：可以壓入堿性水，用浸濕酚酞指示劑）微小滲漏的檢查：可以壓入堿性水，用浸濕酚酞指示劑的白布擦，有滲漏時(shí)白布顯紅色。的白布擦，有滲漏時(shí)白布顯紅色。5.操作失誤導(dǎo)致的染