潘多拉美 膠原三肽補(bǔ)充劑對(duì)紫外線暴露無毛小鼠光老化和皮膚表皮屏障作用的影響

1、3Hee-Bong Pyun等人PrevNutr Food Sci第17卷，第245-253頁（2012年）http：/dx.doi.Org/10.3746/pnf.2045膠原三肽補(bǔ)充劑對(duì)紫外線暴露無毛小鼠光老化和皮膚表皮屏障作用的影響Hee-Bong Pyun1、Minji Kim1、Jieun Park2、Yasuo Sakai3、Noriaki Numata3、Jin-Yeong Shin4、Hyun-Jung Shin4、Do-Un Kim5和Jae-Kwan Hwang1,2t生物材料科學(xué)與工程系2延世大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生物技術(shù)部，韓國首爾120-7493中央

2、研究所，Jellice有限公司，日本仙臺(tái)宮城984-0826，4愛茉莉太平洋研發(fā)中心，韓國京畿道446-7295友川有限公司食品研發(fā)中心，韓國京畿道462-120摘要作為一種功能性食品材料的膠原三肽（CTP）具備了某些生物效，其中包括改善皮膚干燥和愈合傷口和骨折。本研究的重點(diǎn)是CTP在無毛小鼠模型中的抗光老化作用。為了評(píng)價(jià)CTP對(duì)體內(nèi)UVB誘導(dǎo)皮膚皺紋形成的影響，我們?cè)?4周內(nèi)江無毛小鼠暴露于紫外線B之下并為其注入CTP。與未處理的UVB對(duì)照組相比，經(jīng)過CTP處理的小鼠的皺紋形成和皮膚增厚以及經(jīng)皮水分損失（TEWL）有了顯著降低。CTP治療組的皮膚水分和羥脯氨酸都有所增加。此外，CTP口服還能

3、防止UVB誘導(dǎo)的MMP-3和-13的活動(dòng)以及MMP-2和-9的表達(dá)。CTP內(nèi)部可增加皮膚彈性，減少彈性纖維結(jié)構(gòu)異常。CTP治療組的紅斑亦有明顯下降?？偟膩砜催@些結(jié)果強(qiáng)烈表明CTP有作為防光老化劑的潛力。關(guān)鍵詞：膠原三肽（CTP）、光老化、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、經(jīng)表皮失水（TEWL）、皺紋形成引言遺傳學(xué)，紫外線（UV）輻射、機(jī)械應(yīng)力，激素改變（1）等許多因素可以導(dǎo)致人類皮膚的老化。因此，皮膚老化過程可以分類為內(nèi)在老化或光老化。光老化是指慢性暴露于紫外線輻射（特別是其UVB成分）引起的皮膚過早老化，這被看作是導(dǎo)致皮膚損傷（2）的主要原因。光老化的特征包括細(xì)顆粒和粗皺紋、皮膚干燥、粗糙、膚淺、

4、斑駁色素沉著、組織學(xué)改變和各種皮膚變化，包括皮膚屏障功能改變等（3）?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMP）是一個(gè)由24種鋅依賴性蛋白水解酶組成的家族。作為一種在結(jié)構(gòu)上與基質(zhì)降解酶相關(guān)的家族，MMP在各種破壞性過程中發(fā)揮了重要的作用，其中包括炎癥、腫瘤侵襲和皮膚老化等。鑒于蛋白酶參與皮膚光老化過程，規(guī)范其活動(dòng)可以被作為預(yù)防和治療紫外線引起的皮膚損傷的策略（4,5）。一旦人或小鼠的皮膚暴露于UV輻射，MMP-1（間質(zhì)膠原酶）的合成就會(huì)被誘導(dǎo)，此后會(huì)降低I型和III型膠原蛋白；MMP-3（溶基質(zhì)素-1）降解基底膜IV型膠原，同時(shí)MMP-9（明膠酶）進(jìn)一步降解由MMP-1產(chǎn)生的膠原片段。小鼠缺乏MMP-1基因，具

5、體功能由MMP-13（6）代替。由于其保濕和增強(qiáng)彈性的功效，膠原已被用作皮膚功能成分。最近的研究已經(jīng)表明，蛋白質(zhì)水解獲得的肽，如膠原蛋白水解物等，還是有效的皮膚增濕和抗皺劑（7）。據(jù)此前報(bào)道，誤服膠原蛋白或膠原蛋白多肽具有有效的抗氧化劑對(duì)皮膚保護(hù)作用，同時(shí)對(duì)于骨關(guān)節(jié)炎和骨質(zhì)疏松（8,9）也有益處。在這項(xiàng)研究中，我們?cè)u(píng)估了鯰魚皮膚獲得的CTP對(duì)于紫外線導(dǎo)致的皮膚損傷的影響，為了揭露肌膚保濕和抗皺效果以及作為潛在新功能的美容食品原料膳食成分的底層機(jī)制，我們使用了無毛小鼠模型進(jìn)行研究（10,11）。作者通訊信息。電子郵件：jkhwangyonsei.ac.kr 電話：+82-2-2123-5881，

6、傳真：+82-2-362-7265材料和方法材料CTP需要通過低眼巨鯰（低眼巨鯰）皮膚派生膠原酶降解獲得，具體產(chǎn)品由Jellice有限公司提供（產(chǎn)品名為HACP-CF）。CTP包含15.0的三肽甘氨酸-Xaa-Yaa（Xaa和Yaa可以任意組合，但最常見的是脯氨酸、羥基脯氨酸和丙氨酸組合），這些物質(zhì)可以作為生物活性化合物。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)我們從DeahanBiolink有限公司（Eumsung，韓國）購買了五周齡的雌性無毛小鼠（SKH-1）并將其飼養(yǎng)在溫度為（23±2）、濕度為（55±10）和光照（白天12小時(shí)/夜晚12小時(shí)）受控條件下（延世實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，YLARC，首爾，韓國

7、）。五只小鼠被分配給每個(gè)小組（共有四組）：1）正常組（對(duì)照）、2）UVB照射組（UVB對(duì)照）、3）紫外線照射和167毫克/公斤/天的CTP治療組（CTP-167）、4）紫外線照射和333毫克/公斤/天的CTP處理組（CTP-333）。在14周內(nèi)，治療組中的小鼠每天接受口服CTP并每周三次暴露在UVB輻射下。UVB照射的起始劑量為第一周的75毫焦/平方厘米，此后每周按最小紅斑量增加1個(gè)劑量（MED）直至增加至3 MED并由此保持到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。14周后，小鼠將被殺死，屆時(shí)將對(duì)其腹腔注射zoletil（維克，卡羅，法國）和甲苯噻嗪（拜耳韓國公司，首爾，韓國）的混合麻醉劑。從背部皮膚獲得的樣品在液氮中快

8、速冷凍并儲(chǔ)存于-70環(huán)境下。用于組織學(xué)分析的皮膚活檢樣品被固定在10緩沖的福爾馬林以便用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察。逆轉(zhuǎn)錄 - 聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）使用PCR預(yù)混料和表1所示引物（BIONEER，大田，韓國）進(jìn)行cDNA產(chǎn)物的PCR擴(kuò)增（5微升）（ELPIS生物技術(shù)，大田，韓國）。在PCR擴(kuò)增之前，產(chǎn)物在94下變性5分鐘。擴(kuò)增由25個(gè)循環(huán)組成：在94下變性30秒，在56下退火1分鐘，在72延伸1分鐘，最終在72下再延伸5分鐘。PCR反應(yīng)在Gene Amp 2700 PCR系統(tǒng)中執(zhí)行（Applied Biosystems，福斯特城，加利福尼亞州，美國）。PCR產(chǎn)物通過1.5瓊脂糖凝膠電泳分離，此

9、后通過6X Loading STAR可視化方案和紫外線照射完成可視化（達(dá)因生物，崇南，韓國）。免疫印跡分析用蛋白酶抑制劑混合物裂解勻漿皮膚切片中蛋白萃取劑（NP40，ELPIS生物技術(shù)）（Aldrich公司，圣路易斯，密蘇里州，美國）。蛋白質(zhì)濃度通過Bradford蛋白測定法（12）測定。對(duì)于免疫印跡，應(yīng)通過10十二烷基硫酸鈉 - 聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）對(duì)等量蛋白質(zhì)（30微克）進(jìn)行分離并用5脫脂乳在Tris緩沖Tween-20（TBST）鹽水中進(jìn)行堵塞處理。此后用初級(jí)抗體進(jìn)行膜檢測，對(duì)應(yīng)的物質(zhì)為MMP-3、MMP-13和微管蛋白（Cell Signaling公司，貝弗利，MA，

10、美國）。通過辣根過氧化物酶連接的第二抗體檢測結(jié)合的抗體（BETHYL Laboratories公司，蒙哥馬利，TX，USA）。用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光（ECL）檢測系統(tǒng)進(jìn)行蛋白檢測（安瑪西亞生物科學(xué)公司，Little Chalfont，英國），此后通過LuminoImager完成可視化（LAS3000生物成像分析系統(tǒng)，富士膠片，東京，日本）。明膠酶譜MMP-2和-9活性通過明膠酶譜評(píng)估。樣品用含有2SDS（無P-巰基乙醇并加載于無需事先加熱的凝膠上）的標(biāo)準(zhǔn)凝膠上樣緩沖液混合。在85 V下于含有SDS和1明膠的10聚丙烯酰胺凝膠中通過電泳分離樣品（2小時(shí)），使用的設(shè)備為Bio-Rad Mini PROT

11、EAN 3 細(xì)胞電泳設(shè)備（Bio-Rad公司實(shí)驗(yàn)室，Hercules，CA，USA）。電泳后，用2.5的Triton X-100將凝膠清洗1小時(shí)并于37下在含有10mM氯化鈣和0.15 M氯化鈉的緩沖液（50mM的Tris-鹽酸pH為7.5中對(duì)其進(jìn)行反應(yīng)。24小時(shí)后使用Coomassie?亮藍(lán)R-250對(duì)凝膠進(jìn)行染色（Fluka公司，布克斯，瑞士），然后用30甲醇和10乙酸脫色。在72 kDa和92 kDa中分別檢測到MMP-2和MMP-9（對(duì)應(yīng)黑暗背景的清晰區(qū)域）。MMP-3正向5'-TAG CAG GTTATC CTA AAA GCA-3'反向5'-CCA GCT

12、ATTGCT CTT CAA T-3'小鼠MMP-13正向5'-CAT CCA TCCCGT GAC CTT AT-3'反向5'-GCA TGA CTCTCA CAA TGC GA-3'P-Actin正向5'-CCA GCC AGCCAC CAT CGC TC-3'反向5'-TGA CCT TGGCCA GGG GTG CA-3'表1。小鼠基因正向和反向的引物組的核苷酸序列宿主基因引物序列3Collagen Tripeptide and Photoaging皮膚皺紋形成的評(píng)估在14周CTP處理后用數(shù)碼相機(jī)拍攝麻醉無毛小鼠的

13、背部皮膚（尼康P80，尼康，東京，日本）。用Replica測量皮膚表面印象（Epi-gem，韓國首爾）并使用Visioline VL650（CK電子有限公司，德國科?。?duì)其進(jìn)行分析。組織學(xué)分析殺死小鼠后，其皮膚樣品固定在10馬林中放置24小時(shí)并蘇木精和伊紅（HE）和馬松三色以及Verhoeff-van Gieson染色進(jìn)行染色。使用采用雙CCD攝像機(jī)的Eclipse TE2000U倒置顯微鏡對(duì)染色切片進(jìn)行分析（尼康）。紅斑評(píng)估基于緩解原則（12）使用Mexameter®18設(shè)備（CK電子有限公司）對(duì)皮膚紅斑的光度進(jìn)行測量。皮膚含水量與經(jīng)皮水分損失的評(píng)估（TEWL）用Corneomet

14、er®825測定皮膚水分。作為表皮皮膚屏障功能標(biāo)志物的TEWL則用Tewameter®TM300進(jìn)行測量，該裝置被安裝在多探頭Adapter®MPA5設(shè)備上（CK電子有限公司）。羥脯氨酸檢測在1毫升的6N HCl中用玻璃珠對(duì)皮膚組織（600毫克）進(jìn)行勻漿并在105下水解18小時(shí)（14）。用羥脯氨酸檢測試劑盒（QuickzymeBiosci¬ence，萊頓，荷蘭）測定羥脯氨酸含量。皮膚彈性的評(píng)估使用Cutometer®MPA580（CK電子有限公司）評(píng)估皮膚彈性。相關(guān)具體物理參數(shù)如下：直接膨脹（UE）、最終腹脹（UF）、立即回縮（UR）、延遲腹脹

15、（UV）、最終回縮（UA）。皮膚彈性與總彈性（UA/ UF）計(jì)算值代表恢復(fù)初始狀態(tài)的速度（15）。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）。各組間通過薛費(fèi)測試和鄧肯檢驗(yàn)進(jìn)行比較（SPSS12.0，SPSS公司，芝加哥，伊利諾伊州，美國）。 # P <0.01，P<0.05，* P <0.01和* P <0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。結(jié)果與討論CTP口服對(duì)UVB引起的皺紋形成的效果有報(bào)道證明無毛SKH-1小鼠是觀察人體皮膚在急性UV暴露下關(guān)鍵解剖和細(xì)胞反應(yīng)的合適動(dòng)物模型（16）。為了研究CTP體內(nèi)抗光老化作用，無毛SKH-1小鼠被用于研究光老化的標(biāo)志，例如皮

16、膚的厚度、皮膚水化、TEWL、蛋白酶、膠原和彈性纖維。在實(shí)驗(yàn)期間，我們每周測量小鼠的體重，結(jié)果顯示各組（圖1）之間沒有差別。因此，UVB照射和CTP處理對(duì)體重沒有影響。重復(fù)UVB紫外線輻射會(huì)引起表皮發(fā)生相關(guān)變化，其中包括皺紋加深和粗糙化（17）。由此我們通過對(duì)皮膚復(fù)制品的攝影分析調(diào)查了CTP對(duì)UVB誘導(dǎo)的表皮變化的效果（圖2）。紫外線誘導(dǎo)導(dǎo)致UVB對(duì)照組的背部皮膚形成顯著的皺紋。然而，CTP口服給藥可以減少由UVB輻射（圖3）引起的皺紋形成。CTP可以抑制蛋白酶，例如膠原酶（MMP-3和-13）和明膠酶（MMP-2和-9）等。這些結(jié)果表明，CTP可以通過減少M(fèi)MP表達(dá)減少細(xì)胞外基質(zhì)膠原降解（E

17、CM）并由此降低體內(nèi)皺紋形成。CTP口服對(duì)皮膚厚度的效果在殺死前通過測量卡尺測量無毛小鼠的皮膚厚度。組織病理學(xué)改變通過HE染色觀察。UVB輻射導(dǎo)致了皮褶厚度的顯著增加（1.1毫米）。圖1. 紫外線照射無毛小鼠的體重變化。14周內(nèi)對(duì)小鼠施用CTP并一周三次將其暴露在UVB輻射下?？刂平M、車輛+非UVB照射；UVB控制組，車輛+ UVB照射；CTP-167，167毫克/千克/天的CTP+ UVB照射，CTP-333，333毫克/千克/天的CTP+ UVB照射。數(shù)據(jù)表示為每組5只小鼠的平均值±SD。圖2. 口服CTP對(duì)紫外線照射無毛小鼠皺紋形成的影響（照片和總外觀）。14周內(nèi)每周三次將無毛

18、小鼠背部皮膚表面暴露于紫外線下。殺死前應(yīng)拍攝無毛小鼠背部區(qū)域的照片。然而，與UVB對(duì)照組（圖4A）相比，CTP治療組（167或333毫克/公斤/天）的皮褶厚度分別減少了0.93毫米和0.84毫米。通過組織切片HE染色可完成UVB誘導(dǎo)表皮厚度的可視化。類似于皮褶厚度的結(jié)果，CTP處理組的皮膚厚度比UVB對(duì)照組（圖4B）更薄。兩者合計(jì)結(jié)果表明，CTP治療組的皮褶厚度有顯著下降。CTP口服給藥對(duì)皮膚屏障功能的影響UVB輻射引起的皮膚損傷，導(dǎo)致皮膚脫水并增加TEWL。皺紋形成的機(jī)制都與水含量降低、神經(jīng)酰胺和乙酰透明質(zhì)酸相關(guān)（18）。如圖5A所示，與對(duì)照組相比，UVB對(duì)照組的皮膚水分要低51.7。然而，

19、與UVB對(duì)照組相比，CTP處理組的皮膚水含量（167或333毫克/公斤/天）分別增加了最多38.7和65.8。與未照射組相比，UVB對(duì)照組TEWL水平增長127.2，但（與UVB對(duì)照組（圖5B）比較）CTP處理組的TEWL水平（167或333毫克/公斤/天）分別降低了最多22.7和40.5。防止TEWL可維持皮膚水含量并由此影響皮膚的屏障功能。增強(qiáng)皮膚的屏障功能可改善皮膚皺紋（19,20）。因此，CTP通過降低TEWL和增加皮膚水分而對(duì)皮膚屏障功能的改善產(chǎn)生有益效果并由此減少了皮膚皺紋。CTP口服給藥對(duì)膠原纖維的影響5Collagen Tripeptide and Photoaging圖3.

20、CTP口服給藥對(duì)紫外線照射無毛小鼠（皺紋值）皺紋形成的影響。14周內(nèi)將無毛小鼠背部皮膚表面暴露于紫外線下（每周三次）。通過皮膚復(fù)制品表面獲得皺紋值。數(shù)據(jù)表示為每組5只小鼠的平均值±SD。與非UVB照射的小鼠相比# P <0.01；與UVB照射小鼠相比P <0.01。249Collagen Tripeptide and Photoaging249Collagen Tripeptide and Photoaging249Collagen Tripeptide and Photoaging圖4. 口服CTP對(duì)紫外線照射無毛小鼠皮膚厚度的影響。（A）皮膚組織切片用HE染色。（B）

21、皮褶厚度在14周時(shí)對(duì)頸部和臀部中間位置用卡尺測量。數(shù)據(jù)表示為每組5只小鼠的平均值±SD。與非UVB照射的小鼠相比# P <0.01；與UVB照射組相比* P<0.01。249Collagen Tripeptide and Photoaging5Collagen Tripeptide and Photoaging圖5. 口服CTP對(duì)紫外線照射無毛小鼠皮膚屏障功能的影響。（A）皮膚水合和（B）TEWL作為皮膚屏障功能的標(biāo)志物在動(dòng)物處死前三天由Corneometer®和Tewameter®測量。數(shù)據(jù)表示為每組5只小鼠的平均值±SD。與非UVB照射的

22、小鼠相比# P <0.01；與UVB照射小鼠相比P <0.01。在皮膚老化過程中，真皮膠原蛋白（21）的減少導(dǎo)致膠原蛋白包子萊空間密度降低。此外在自然老化及光老化皮膚中都可以觀察到膠原纖維的降解。通過測定羥脯氨酸的含量可以估算出膠原的總量。羥脯氨酸是膠原蛋白特有氨基酸并被用作估計(jì)膠原含量的因子。用Masson三色染色法染色觀察背皮膚膠原纖維的變化并使用羥脯氨酸檢測試劑盒測定羥脯氨酸含量。如圖6所示，UVB照射導(dǎo)致膠原纖維減少，但通過CTP治療可以恢復(fù)。CTP口服給藥對(duì)UVB誘導(dǎo)MMP-3和-13活動(dòng)的影響通過蛋白酶消化的真皮層膠原蛋白的降解會(huì)導(dǎo)致較深的皺紋。要了解CTP如何抑制UV

23、B引起的皺紋形成，需要用RT-PCR和蛋白質(zhì)印跡分析確定MMP的表達(dá)。與UVB對(duì)照組（圖7A）相比較，CTP治療組的MMP-3和-13 mRNA表達(dá)（333毫克/千克/天）分別減少了最高44.7和42.9。此外，333毫克/公斤/天CTP治療組的UVB誘導(dǎo)MMP-3和-13蛋白的表達(dá)分別降低了48.5和36.8（圖7B）。UVB誘導(dǎo)MMP-3和-13涉及到I、III和IV型膠原的降解。UVB輻射增加了無毛小鼠皮膚中的MMP-3和-13表達(dá)，而CTP口服治療對(duì)這種效果有顯著的反制作用。因此，CTP通過抑制MMP的表達(dá)可抑制真皮層膠原蛋白分解并減少皺紋的形成。CTP口服給藥對(duì)UVB誘導(dǎo)MMP-2和

24、-9活動(dòng)的影響5Hee-Bong Pyun等人圖6.CTP口服給藥對(duì)紫外線照射無毛小鼠膠原纖維的影響。（A）用Masson三色染色法對(duì)皮膚組織切片的膠原纖維進(jìn)行染色。（B）UVB輻射14周后估算羥脯氨酸的數(shù)量。數(shù)據(jù)表示為每組5只小鼠的平均值±SD。與非UVB照射的小鼠相比# P <0.01；與UVB照射小鼠相比P <0.01。250Hee-Bong Pyun等人250Hee-Bong Pyun等人圖7. 紫外線照射無毛小鼠口服CTP對(duì)UVB誘導(dǎo)MMP-3和-13表達(dá)的影響。MMP-3和-13的mRNA水平（A）和蛋白水平（B）分別通過RT-PCR和免疫印跡分析來確定。數(shù)據(jù)

25、表示為每組5只小鼠的平均值±SD。與非UVB照射的小鼠相比# P <0.01；與UVB照射小鼠相比* P<0.01 。251Collagen Tripeptide and Photoaging>03251Collagen Tripeptide and Photoaging圖8. CTP口服給藥對(duì)紫外線照射無毛小鼠UVB誘導(dǎo)MMP-2和-9活性的影響。等量蛋白質(zhì)裂解物中MMP-2和-9的活性需通過明膠酶譜法進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，分別對(duì)應(yīng)各組中的五只小鼠。與非UVB照射的小鼠相比# P <0.01；與進(jìn)行UVB照射的小鼠相比* P <

26、0.05，* P <0.01。UVB誘導(dǎo)的MMP-2和-9（明膠酶）活性在UVB誘導(dǎo)的皮膚損傷（包括皮膚增厚和皺紋形成（4）中可發(fā)揮重要的作用。為確定CTP是否能抑制UVB誘導(dǎo)MMP-2和-9活動(dòng)，我們使用明膠酶譜法對(duì)無毛小鼠背部皮膚進(jìn)行了評(píng)估。與UVB對(duì)照組（圖8）相比較，CTP治療組（167或333毫克/公斤/天）的MMP-2和-9活動(dòng)分別減少了最多22.18和19.18。CTP口服給藥可顯著抑制UVB誘導(dǎo)的MMP-2和-9的活化。因此，通過抑制MMP-2和-9的活化，CTP可抑制真皮層膠原蛋白的分解并減少皺紋形成。CTP口服給藥對(duì)彈性纖維的影響體內(nèi)研究表明UVB輻射會(huì)激活彈性蛋白啟

27、動(dòng)子并由此增加光老化皮膚中彈性蛋白的產(chǎn)生和異常彈性纖維的積累（22）。此外，紫外線照射會(huì)導(dǎo)致皮膚彈性降低，減少皮膚的彈性纖維的線性度和膠原損耗，同時(shí)增加皺紋的形成（23）。為驗(yàn)證CTP與彈力之間的關(guān)聯(lián)，我們通過Cutometer®測量皮膚彈性并使用Verhoeff-van Gieson染色法對(duì)彈性纖維進(jìn)行染色。CTP的服用可增加皮膚彈性（圖9A）并減少異常彈性纖維形成（圖9B）。彈性蛋白和膠原蛋白結(jié)合可產(chǎn)生肌膚抗張強(qiáng)度和彈性（24）。因此通過抑制異常彈性纖維的產(chǎn)生和膠原降解（25）就可增強(qiáng)彈性。這些結(jié)果表明，CTP治療可以抑制異常彈性纖維的積累和膠原的降解，由此導(dǎo)致皮膚彈性增加。CT

28、P還能通過抑制蛋白酶產(chǎn)生防止膠原蛋白分解，從而增強(qiáng)與膠原蛋白和彈性蛋白合成相關(guān)的皮膚彈性。7Collagen Tripeptide and Photoaging7Collagen Tripeptide and Photoaging圖9. 口服CTP對(duì)紫外線照射無毛小鼠皮膚彈性的影響。（A）CTP對(duì)皮膚總彈性的影響（UA/ UF）由Cutometer?測量。（B）在真皮彈性纖維通過維爾赫夫氏染色法染色。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，分別對(duì)應(yīng)各組中的五只小鼠。與非UVB照射的小鼠相比# P <0.01；與UVB照射小鼠相比* P<0.01。圖10. CTP口服給藥對(duì)紫外線照射無毛

29、小鼠紅斑形成的影響。紫外線照射14周后，通過Mexameter®確定紅斑。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，分別對(duì)應(yīng)各組中的五只小鼠。與非UVB照射的小鼠相比# P <0.01；與UVB照射小鼠相比* P<0.01。CTP口服給藥對(duì)UVB引起的紅斑的影響紫外線照射引起的紅斑的臨床特征為網(wǎng)狀色素，組織學(xué)特征為彈性纖維（26）變性。通過UVB輻射可以導(dǎo)致小鼠背部皮膚形成皺紋紅斑，因而UVB誘導(dǎo)的紅斑是評(píng)估皺紋形成的合適因子（27）。與非UVB照射組相比，UVB對(duì)照組的紅斑形成增加了46.94。與UVB對(duì)照組（圖10）相比較，CTP治療組（167或333毫克/千克/天）紅斑分

30、別降低了最多13.32和21.55。因此，CTP口服給藥對(duì)UVB引起紅斑的影響可能會(huì)與抗皺效果相關(guān)聯(lián)。由于CTP可以抑制UVB誘導(dǎo)的MMP表達(dá)并防止皺紋的形成，口服CTP具有作為抗光老化劑的潛力。然而，CTP如何影響UVB誘發(fā)的皮膚老化的分子機(jī)制仍然有待研究。最后，本研究表明CTP可以抑制MMP-2、-3、-9和-13的表達(dá)并由此減少UVB誘導(dǎo)的皮膚厚度增加和皺紋的形成。這些發(fā)現(xiàn)證明CTP有可能減輕UVB誘發(fā)的皮膚老化。參考文獻(xiàn)1. Mukherjee S、 Date A、Patravale V、Korting HC、RoederA、Weindl G. 2006. 維甲酸對(duì)皮膚老化的治療：臨床

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