填料培訓(xùn)教材

1、http:/填料培訓(xùn)教材http:/填料v正相：硅膠，或者是硅膠鍵合基團CN(腈基)、DIOL（二醇基）、NH2（氨基）等。 正相固定相是極性的，用來保留極性物質(zhì)v反相：C18（十八烷基）、C8（辛烷基）、C2（乙基）、CH（環(huán)己烷基）、PH（苯基）都是反相固定相。 反相固定相用來保留非極性或弱極性的分析物v大孔樹脂 一般用于天然產(chǎn)物的初步分離。在進(jìn)行天然產(chǎn)物提取分離時，一般流程為：溶劑提取初處理（過大孔樹脂、萃取、結(jié)晶等）高純度精制（過硅膠柱、C18柱等）v離子交換樹脂 離子交換樹脂主要用與生物堿的富集v氧化鋁 一般用于堿性化合物的分離 http:/柱子填料的選擇柱子填料的選擇v正相硅膠:微

2、酸性介質(zhì),用于中等極性及弱極性(不含酸堿)化合物分離vC18反相硅膠:用于純化中等至高極性物質(zhì):碳水化合物,酸 性化合物,肽類,雜環(huán)化合物,離子化合物v氨基取代填料:用于堿性化合物的分離(不能用于醛/酮以及能與氨基反應(yīng)的化合物).v氧化鋁填料:堿性、中性、酸性v硅酸鎂填料：用于純化酸敏感性化合物和弱堿性化合物，特別是保護(hù)基團（如TMS）v氰基取代填料v雙羥基（二醇）填料http:/正相硅膠v微酸性介質(zhì)v活性基團 Si-OH氫離子很容易解離實際活性基團Si-O-v使用壽命較短，通常用于一次性柱http:/正相硅膠的不足v正相硅膠的酸性 pH可能會使酸性或堿性物質(zhì)的分離困難 v要求對流動相進(jìn)行修飾

3、堿性物質(zhì)用TEA酸性物質(zhì)用AcOHv分辨率低v從TLC到柱色譜重現(xiàn)性不好v修飾引起額外的不便分離前必須先更換和沖填溶劑分離后必須去除TEA 和AcOH v用適當(dāng)?shù)娜軇┻M(jìn)行額外的抽提和洗滌v將混合物濃縮至油狀，放在真空中過夜v修飾劑可能與化合物反應(yīng)http:/C-18 反相填料v用于純化中等至高極性物質(zhì): 碳水化合物, 酸性化合物, 肽類, 雜環(huán)化合物, 離子化合物v典型溶劑系統(tǒng): Water/Acetonitrile, Water/Methanolv需要更長的平衡時間v流速比正相柱低v如果未變干而且保存在80%有機溶劑+20%水溶液中，可重復(fù)使用http:/其他介質(zhì)v氨基取代介質(zhì)v堿性氧化鋁v

4、中性氧化鋁v離子交換（SCX，SAX）v氰基取代http:/氨基取代介質(zhì)v氨基基團連接在硅上，取代酸基團v堿性固定性v不需使用TEAv減少了由于酸/堿反應(yīng)引起的副反應(yīng)v對于含有堿性組分的化合物有更好的分離效果v既可用于正相，又可用于反相條件v無需從組分中去除溶劑，減少了過程時間v如果不使用時保存在異丙醇中，可重復(fù)使用SiNH2http:/堿性化合物的分離Normal Phase ColumnSolvents: Hexane/EtOAchttp:/堿性化合物的分離Amine ColumnSolvents: Hexane/EtOAchttp:/堿性氧化鋁v堿性固定相v無需流動相修飾劑v用于純化有堿

5、性特性的化合物http:/堿性化合物的分離Normal Phase ColumnSolvents: Hexane/EtOAcNON3-(1-Piperidinylmethyl)-4(3H)-QuinazolinoneNNN5,6-Dimethyl-1-(Piperidinomethyl)Benzimidazolehttp:/堿性化合物的分離Basic Alumina ColumnSolvents: Hexane/EtOAcNON3-(1-Piperidinylmethyl)-4(3H)-QuinazolinoneNNN5,6-Dimethyl-1-(Piperidinomethyl)Benzi

6、midazolehttp:/中性氧化鋁v用于純化對酸敏感的化合物http:/SCXSiSOHOOvSCX = Strong Cation Exchangev保留堿性化合物http:/SCX 柱:2 個可能的用途v除雜工具: 純化含有堿性雜質(zhì)的中性化合物v被吸附的堿性化合物可以用含5%NH3的MeOH進(jìn)行洗脫v純化具有堿性性質(zhì)的化合物http:/堿性化合物的分離Normal Phase ColumnSolvents: Dichloromethane/methanolOOChromoneNNN1-(1-Piperidinylmethyl)-1H-Benzimidazolehttp:/堿性化合物的分

7、離SCX ColumnSolvents: Dichloromethane/methanolOOChromoneNNN1-(1-Piperidinylmethyl)-1H-Benzimidazolehttp:/SAXSiNClvSAX = 強陰離子交換v可結(jié)合酸性性質(zhì)的化合物http:/SAX column:2 個用途v除雜工具: 純化含有酸性雜質(zhì)的中性化合物v被吸附的堿性化合物可以用含5%AcOH的MeOH進(jìn)行洗脫v純化具有酸性性質(zhì)的化合物http:/酸性化合物分離Normal Phase ColumnSolvents: Hexane/EtOAcOOCOOHOHOHChromone2,4-Di

8、hydroxybenzoic acidhttp:/酸性化合物分離SAX ColumnSolvents: Hexane/EtOAcOOCOOHOHOHChromone2,4-Dihydroxybenzoic acidhttp:/氰基取代v當(dāng)使用正相溶劑條件時，氰基取代硅膠的功能與正相硅膠相似v在反相條件下，與C-18功能相似v當(dāng)用常規(guī)固定相分離困難時，可作為替代選擇SiCNhttp:/二醇（雙羥基）v對于正相硅膠分離困難，可用該介質(zhì)代替v比正相硅膠的極性低v與正相硅膠具有不同的選擇性SiOOHOHhttp:/ 1.Phenol2.Catechol3.Resorcinol4.Hydroquinon

9、e5.Pyrogallol6.Phloroglucinol 正相介質(zhì)二醇介質(zhì)30CConditions:Normal phase二醇固定相提高了分離效果http:/HPLC中常用的固定相中常用的固定相類別固定相特點反相(與離子對)固定相C18(十八烷基或ODS)穩(wěn)定性好，保留能力強，用途廣C8(辛基)與C18相似，但保留能力降低C3 、C4保留能力弱，多用于肽類與蛋白質(zhì)分離C1(三甲基硅烷TMS)烷基中保留最弱，最不穩(wěn)定苯基、苯乙基保留適中，選擇性有所不同CN(氰基)保留適中，正反相均可使用NH2(氨基)保留弱，穩(wěn)定性不夠理想聚苯乙烯基在1pH13流動相中穩(wěn)定，某些分離峰形好，柱壽命長http

10、:/類別固定相特點正相色譜固定相CN(氰基)穩(wěn)定性好，極性適中，用途廣OH(二醇基)極性大于CNNH2(氨基)極性強，穩(wěn)定性不夠理想硅膠耐用性好，價廉，操作不夠方便，用于制備色譜較多尺寸排阻色譜固定相硅膠耐用性好，作吸附劑用硅烷化硅膠吸附性弱，溶劑兼容性好，適用于有機溶劑OH(二醇基)不夠穩(wěn)定，在凝膠過濾色譜中應(yīng)用較多聚苯乙烯基廣泛用于凝膠滲透色譜，水和強極性有機溶劑不相溶離子交換色譜固定相鍵合相穩(wěn)定性與重現(xiàn)性均不理想聚苯乙烯基柱效不高，穩(wěn)定，重現(xiàn)性好http:/ODS填料介紹填料介紹vODS-AQ填料vODS-E填料vCOSMOSIL制備填料C18-PREP C18-OPNhttp:/ OD

11、S-AQ填料填料(適用于分離親水性化合物)基本參數(shù)基本參數(shù)載體：多孔硅膠微球粒徑：30-50m鍵合相：C18pH范圍：29特點特點通用型反相色譜柱重復(fù)性好含碳量較高，保留性好對生物樣品適應(yīng)性強性價比高h(yuǎn)ttp:/皂苷類化合物制備圖皂苷類化合物制備圖儀器：EZ Purifier 中壓制備系統(tǒng)；色譜柱：3根12g制備柱串聯(lián)，填料為ODS-AQ（30-50m） ； 流動相：A 0.1甲酸水溶液，B 乙腈，梯度洗脫。 監(jiān)測波長：214nm；收集波長：254nm； 流速：25ml/min。http:/ ODS-E填料填料基本參數(shù)基本參數(shù)載體：多孔硅膠微球粒徑：40-60m鍵合相：C18單封尾適合分離中等堿性以下化合物http:/制備填料提供基于多孔球形硅膠填料的正相和反相填料。硅膠填料采用多孔球形硅膠顆粒，與不規(guī)則硅膠相比具有更高的分離性能，更低的柱壓和更好的