第二章食用菌制種技術(shù)五次

1、 第二章 食用菌制種技術(shù) 第一節(jié) 食用菌菌種概述教學(xué)要點：培養(yǎng)基配制，消毒滅菌。目標(biāo)：通過學(xué)習(xí)，使學(xué)生學(xué)會母種培養(yǎng)基的制備方法、滅菌過程。 參考書標(biāo)本等。組織教學(xué): 檢查出勤人數(shù)及假條 （1分鐘） 導(dǎo)入新課: 上次理論講過菌種是食用菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)，共分三個級別。 （3分鐘） 知識、能力培養(yǎng)目標(biāo)：了解培養(yǎng)基配制，消毒滅菌。教學(xué)難點：培養(yǎng)基配制，消毒滅菌。 （2分鐘） 新課內(nèi)容: （82分鐘） 布置作業(yè)： （2分鐘） 第二章 食用菌制種技術(shù)第一節(jié) 食用菌菌種概述一、菌種食用菌菌種：經(jīng)人工培養(yǎng)用于繁殖的菌絲體或孢子。根據(jù)來源、繁殖的代數(shù)及生產(chǎn)目的，將菌種分為母種、原種和栽培種三個級別。也稱一級種（母種

2、）、二級種（原種）、三級種（栽培種）1、一級種 又稱母種、試管種是將經(jīng)孢子分離法或組織分離法行到的純培養(yǎng)物，移接到試管斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)而得到的純種。除單孢子分離外，一般獲得的母種純菌絲具有結(jié)實性由于獲得母種數(shù)量有限。常將菌絲再次轉(zhuǎn)接到新的斜面培養(yǎng)基上，可獲得更多的母種，稱為再生母種。一支母種可轉(zhuǎn)成10多支再生母種。2、二級種 又稱原種由母種轉(zhuǎn)接到裝有麥粒等固體培養(yǎng)基的菌種瓶中，經(jīng)過培養(yǎng)后形成的菌。原種可采用750ml菌種瓶或500ml罐頭瓶作為培養(yǎng)容器。一支母種可擴(kuò)繁6-8瓶原種。原種可用于擴(kuò)繁成栽培種，也可直接用于生產(chǎn)。3三級種 又稱栽培種是由二級種進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖而得的菌種。栽培種的培養(yǎng)基與

3、二級種相似更接近于栽培基質(zhì)。為固體培養(yǎng)基質(zhì)，用聚乙烯塑料袋或玻璃瓶作培養(yǎng)容器。一瓶原種可繁殖30-50袋栽培種。4制種程序培養(yǎng)材料準(zhǔn)備基質(zhì)配備分裝滅菌接種培養(yǎng)檢驗貯藏。二、制作菌種常用儀器設(shè)備配料設(shè)備、滅菌設(shè)備、接種設(shè)備、培養(yǎng)設(shè)備、菌種保藏設(shè)備。（一）配料設(shè)備切片機(jī)（1500kg/h）粉碎機(jī)、攪拌機(jī)(100kg/h)過篩機(jī)(200kg/h)裝瓶機(jī)(400瓶/h)裝袋機(jī)(500袋/h)裝瓶裝袋兩用機(jī)(300個/h)。（二）滅菌設(shè)備高壓滅菌鍋、常壓滅菌灶、電熱干燥箱1、高壓滅菌鍋加熱使密閉鍋內(nèi)的水蒸氣壓力升高，從而使蒸氣溫度提到100以上達(dá)到滅菌效果（滅菌效果好）類型：手提式、立式、臥式。手提式、

4、臥式容積小，主要用于一級菌種制作。立式容積大主要用于二級、三級菌種和栽培瓶袋的制作滅菌。2常壓滅菌灶在自然壓力下產(chǎn)生100蒸汽進(jìn)行滅菌的爐灶，主要用于栽培料滅菌和三級菌種制作。容積大，一次可裝500kg以上栽培料。3電熱干燥箱通過電熱加溫干燥滅菌，主要用于容器、培養(yǎng)皿、試管、三角瓶等滅菌。（三）接種設(shè)備無菌室、超凈工作能、接種箱、半自動接種機(jī)、接種工具。1、無菌室用于大量接種的場所（室內(nèi)設(shè)超凈工作能或直接進(jìn)行接種）。內(nèi)外兩間，內(nèi)間大為接種室，外間小為緩沖間，存放工作服、拖鞋、口罩、消毒藥品。門采用拉門，室內(nèi)頂部設(shè)小型排氣扇。安裝照明燈，紫外線釘殺菌燈。2、超凈工作臺通過鼓風(fēng)機(jī)吹動空氣，穿過二層

5、過濾器，使塵埃和細(xì)菌、真菌濾掉，保持臺內(nèi)清潔無雜菌。3、接種箱用木材（鋁合金）與玻璃制成的一種密閉箱。有單人和雙人兩種類型，適于生產(chǎn)。滅菌采用高錳酸鉀與甲醛反應(yīng)產(chǎn)生甲酸蒸汽。四、培養(yǎng)設(shè)備恒溫箱、培養(yǎng)室恒溫箱：用于培養(yǎng)一級菌種和少量二級菌種（可調(diào)溫），容積小。培養(yǎng)室：有加溫設(shè)備的房間，用于大量菌種的培養(yǎng)（三級）。五、菌種保藏設(shè)備電冰箱、保藏室（真空抽氣機(jī)）干燥器。作業(yè)：食用菌常用的菌種有哪些？第二節(jié) 培養(yǎng)基制作與消毒滅菌教學(xué)要點：培養(yǎng)基配制，消毒滅菌。目標(biāo)：通過學(xué)習(xí)，使學(xué)生學(xué)會母種培養(yǎng)基的制備方法、滅菌過程。 參考書標(biāo)本等。組織教學(xué): 檢查出勤人數(shù)及假條 （1分鐘） 導(dǎo)入新課: 上次理論講過菌種

6、是食用菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)，共分三個級別。 （3分鐘） 知識、能力培養(yǎng)目標(biāo)：了解培養(yǎng)基配制，消毒滅菌。教學(xué)難點：培養(yǎng)基配制，消毒滅菌。 （2分鐘） 新課內(nèi)容: （82分鐘） 布置作業(yè)： （2分鐘） 第二節(jié) 培養(yǎng)基制作與消毒滅菌 培養(yǎng)基：采用人工方法，按照一定的比例配制各種營養(yǎng)物質(zhì)，以供食用菌生長繁殖需要的基質(zhì)。按基質(zhì)的物理性狀可分為液體、固體、固化三種。1、液體培養(yǎng)基它是把食用菌生長發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)按一定的比例加水配制而成的培養(yǎng)基。為液體狀態(tài)。2、固體培養(yǎng)基以含纖維素、木質(zhì)素、淀粉等各種碳源物質(zhì)為主添加適量有機(jī)氮、無機(jī)鹽等，再加入適量的水配制而成的培養(yǎng)基。優(yōu)點：原料來源廣泛，價格低廉，配制容易，營養(yǎng)

7、豐富，是食用菌原種和栽培種的主要培養(yǎng)基。3、固化培養(yǎng)基它是將配好的營養(yǎng)液加入適量的凝固劑（2%瓊脂）而成的固態(tài)培養(yǎng)基。（加熱60以上為液態(tài)，冷卻到40以下為固態(tài)）。主要用于母種的生產(chǎn)與保藏。此外按照培養(yǎng)基中的主要原料又可分為：1、馬鈴薯培養(yǎng)基2、棉籽殼培養(yǎng)基3、玉米芯培養(yǎng)基4、木屑培養(yǎng)基5、糞草培養(yǎng)基6、麥粒培養(yǎng)基7、枝條培養(yǎng)基等。一、母種常用培養(yǎng)基母種培養(yǎng)基一般制成斜面，所以又稱斜面培養(yǎng)基，母種又稱斜面試管種。母種培養(yǎng)基常用的基本物質(zhì)：馬鈴薯、葡萄糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、瓊脂和維生素B等。馬鈴薯：營養(yǎng)豐富，主要有20%左右的淀粉，2-3%蛋白質(zhì)，0.2%脂肪，還有多種無機(jī)鹽、維生素及多種酶。

8、葡萄糖：是食用菌菌絲最易吸收利用的碳源，也可用蔗糖來代替。瓊脂：是培養(yǎng)基中的凝固劑，常用濃度為1.5%-2%，低于1%不易凝固。（不提供營養(yǎng)）磷酸二氫鉀：一方面提供磷元素，另一方面作緩沖劑，防止培養(yǎng)基中PH值的急劇變化。磷是核酸組成和能量代謝中的重要成分，缺少時C、N不能被充分吸收。硫酸鎂：提供硫和鎂。常見母培養(yǎng)基：二、原種和栽培種培養(yǎng)基及制作母種原種栽培種原種和栽培種的培養(yǎng)基與栽培料基本相同，均為固體培養(yǎng)基。食用菌類型不同其二級菌種培養(yǎng)基最適材料也不同。木腐菌類：多采用木屑為主料，也可采用小麥?；蛴衩琢Ｗ雠囵B(yǎng)基。（如平菇、鳳尾菇、香菇、木耳猴頭等）草腐菌類：多用鍘碎的作物秸稈或廄肥（如馬糞等

9、做草菇的培養(yǎng)基）。1木屑培養(yǎng)基硬雜木屑78%+麥麩（或米糠）20%+葡萄糖（或蔗糖）1%+石膏（或白灰）1%2麥粒（玉米粒、高梁粒）培養(yǎng)基新麥無破損浸泡（12小時）水煮（透而不破皮）沖洗（2-3次）控水裝瓶（齊肩）封口滅菌（1-1.5h1.5kg/cm2）接種。3稻草培養(yǎng)基稻草85%+麥麩15%+水65%切稻草（1厘米）水浸堆制（1-2天）軟化后+15%麥麩裝瓶滅菌接種。4糞草培養(yǎng)基干糞60%+麥草40%+石膏1%+水65%三、消毒滅菌1滅菌 采用物理或化學(xué)等方法殺死物體上一切微生物的方法，（包括芽孢子、孢子、菌等）2消毒 是指能殺死或消除物體上病原微生物的方法。3防腐 指防止抑制微生物的生長

10、繁殖。滅菌的方法：1、熱力滅菌2、輻射來滅菌3、藥劑滅菌4、過濾滅菌5、滲透滅菌。熱力滅菌干熱滅菌焚燒滅菌烘烤滅菌濕熱滅菌高壓蒸汽滅菌常壓蒸汽滅菌間歇滅菌煮沸滅菌巴氏滅菌輻射滅菌紫外輻射電離輻射藥劑消毒重金屬、氧化劑、還原劑、表面活性劑過濾滅菌滲透滅菌 作業(yè)：菌種常用的培養(yǎng)基？第三節(jié) 菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定教學(xué)要點：培養(yǎng)基配制，菌種的培養(yǎng)。目標(biāo)：通過學(xué)習(xí)，使學(xué)生學(xué)會母種培養(yǎng)基的制備方法、滅菌、菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定過程。 參考書標(biāo)本等。組織教學(xué): 檢查出勤人數(shù)及假條 （1分鐘） 導(dǎo)入新課: 上次理論講過菌種是食用菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)，共分三個級別。 （3分鐘） 知識、能力培養(yǎng)目標(biāo)：菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定。教

11、學(xué)難點：菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定。 （2分鐘） 新課內(nèi)容: （82分鐘） 布置作業(yè)： （2分鐘） 第三節(jié) 菌種培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定一、菌種培養(yǎng)1、溫度種類培養(yǎng)溫度種類培養(yǎng)溫度雙孢菇20-25草菇32-36平菇20-28金針菇22-25香菇24-27黑木耳23-24靈芝25-30培菌期間環(huán)境的溫度應(yīng)比菌絲生長最適溫度低2-3（因菌絲呼吸自身放出熱量）如果只有一間培養(yǎng)室要培養(yǎng)各種品種的菌種時，應(yīng)控制在22-25。2、光線大多數(shù)食用菌的菌絲體都可以在完全黑暗的條件下正常生長，散射光對菌的影響不大；光太強(qiáng)對菌絲體有抑制作用。黑木耳制種時，為了有使子實體形成，培養(yǎng)室平時還需用黑布遮光。3、培養(yǎng)時間不同菌種的菌絲生

12、長處于最佳期，所需時間不同，時間過長菌種易衰退，培養(yǎng)基中的養(yǎng)養(yǎng)分分減少，菌絲由強(qiáng)變?nèi)?。二、菌種質(zhì)量鑒定（一）母種質(zhì)量鑒定1、母種菌絲形態(tài)觀察母種菌絲形態(tài)是否屬于所需培養(yǎng)菌類。（有鎖狀聯(lián)合的菌類應(yīng)看到鎖狀聯(lián)合）。2、菌絲耐干耐濕試驗若能在略多略少的培養(yǎng)基上正常生長，說明適應(yīng)性強(qiáng)，可以用做擴(kuò)大繁殖。3、菌絲生長速度鑒定快、齊、密、壯為優(yōu)，慢、過快、不齊、亂為不良種。4、耐高溫檢驗20-251周3524小時適溫下培養(yǎng)。如恢復(fù)快、菌絲不發(fā)黃、不倒伏、正常生長為優(yōu)種。5、菌絲吃料能力鑒定吃料快為優(yōu)，慢為劣。吃料可擴(kuò)大繁殖6、出菇試驗出菇快，子實體大為優(yōu)，相反為劣。（母種轉(zhuǎn)管次數(shù)：2-4次，最多不能超過4

13、次，平菇可多轉(zhuǎn)1-2次）（二）原種和栽培種的質(zhì)量鑒定（標(biāo)準(zhǔn)）1、所用母種為轉(zhuǎn)管4-5次以內(nèi)2、原種和栽培種，在20左右常溫下保存3個月以內(nèi)。3、原種和栽培種的外觀符合要求（1）菌絲生長健壯，絨狀菌絲多，整齊。（2）菌絲已長滿培養(yǎng)基（銀耳的菌種在培養(yǎng)基上分化出子實體原基）（3）菌絲色澤潔白或符合該菌的顏色。（4）菌種瓶內(nèi)無黃色汁液滲出。（5）菌種培養(yǎng)基不能干勁縮。三、菌種保藏人為創(chuàng)造環(huán)境條件，使優(yōu)良菌株穩(wěn)定地保存。作用：保持優(yōu)良菌株原有特性，使其不死亡，不受污染，能長期在生產(chǎn)上應(yīng)用。原理：采用低溫、缺氧、干燥等技術(shù)，使菌體生長繁殖受到抑制，延緩代謝速度，使生命活動處于休眠狀態(tài)，以減少變異的發(fā)生，

14、從而達(dá)到即保持菌種純正，又延長保藏時間的目的。保藏方法：斜面冰箱保藏法、礦油保藏法、濾紙保藏法、自然基質(zhì)保藏法、載體保藏法、液氮超低溫保藏法。1、斜面冰箱保藏法將長滿菌絲的斜面菌種放在4的冰箱中保藏試管棉塞要用硫酸低包扎（用無菌膠塞代替棉塞效果更佳）。 2、礦油保藏法向長滿菌絲的斜面菌種試管內(nèi)注入石蠟油或液體石蠟油，以隔絕空氣，抑制微生物（菌絲）代謝，活動，達(dá)到長期保存的目的。3、濾紙保藏法用無菌濾紙吸附食用菌孢子進(jìn)行保藏的方法。放到無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)收集孢子，濾紙條放入試管中干燥器（2-3天）吸水無菌膠塞封口（可保存2-4年），使用時將紙條放入培養(yǎng)基上。缺點：易感染。 作業(yè)：菌種培養(yǎng)的方法？實

15、驗一 一級菌種制作教學(xué)要點：培養(yǎng)基配制，菌種的培養(yǎng)。目標(biāo)：通過學(xué)習(xí)，使學(xué)生學(xué)會母種培養(yǎng)基的制備方法、滅菌、菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定過程。 參考書標(biāo)本等。組織教學(xué): 檢查出勤人數(shù)及假條 （1分鐘） 導(dǎo)入新課: 上次理論講過菌種是食用菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)，共分三個級別。 （3分鐘） 知識、能力培養(yǎng)目標(biāo)：菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定。教學(xué)難點：菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定。 （2分鐘） 新課內(nèi)容: （82分鐘） 布置作業(yè)： （2分鐘） 實驗一 一級菌種制作一、教學(xué)目的：通過實驗，使學(xué)生學(xué)會一級菌種培養(yǎng)基的制備方法、接種及一級菌種培養(yǎng)技術(shù)。二、材料與用具1用具：天平、高壓鍋、試管、漏斗、鋁鍋、棉花、恒溫箱、冰箱、接種針、酒精燈。

16、2材料：馬鈴薯200g 瓊脂16g 蔗糖20g 水1000ml三、試驗方法一級菌種制作配制培養(yǎng)基滅菌接種培養(yǎng)（一）配制培養(yǎng)基馬鈴薯洗凈支皮稱200g切片加水1000ml煮沸15-30分鐘紗布過濾放入鋁鍋加入瓊脂及其它營養(yǎng)成分，繼續(xù)加熱瓊脂全部溶化補(bǔ)水至1000ml調(diào)PH值（6.0-6.5）分裝試管，塞棉塞。（二）滅菌1加水適量，確保不干鍋2裝鍋：物品放入，立好加蓋擰緊。3加熱排氣：水沸騰后排氣0.5-1分鐘，如果鍋內(nèi)物品過多可加長排氣時間。4保溫保村：當(dāng)壓力升到1.5C溫度121C保持壓力30-40分鐘，斷電。5出鍋：當(dāng)壓力降至“0”時，打開排閥，排盡氣后，擰開螺旋開蓋取出滅菌物品。6做斜面：

17、將試管擺放成25-30度角，培養(yǎng)基成斜面。7放入冰箱保存待用。（三）接種1貼標(biāo)簽：注時菌名，接種日期，接種人姓名。2物品放入接種箱：試管、母種、接種針、酒精燈、火柴。3滅菌：接種葙內(nèi)用高錳酸鉀+甲醛熏蒸0.5小時。4接種：酒精洗耳恭聽手伸入接種箱點燃酒精燈火燒接種針試管口接種蓋棉塞。（四）培養(yǎng)接種后的試管按菌種類型及所要求的適宜溫度分別放入不同溫度的培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。香 菇：24-27平 菇：24-27金針菇：23-25 猴 頭：22-28四、作業(yè)：一級菌種的制作方法？ 作業(yè)：實驗報告實驗二 二級菌種制作教學(xué)要點：培養(yǎng)基配制，菌種的培養(yǎng)。目標(biāo)：通過學(xué)習(xí)，使學(xué)生學(xué)會母種培養(yǎng)基的制備方法、滅菌、菌種

18、的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定過程。 參考書標(biāo)本等。組織教學(xué): 檢查出勤人數(shù)及假條 （1分鐘） 導(dǎo)入新課: 上次理論講過菌種是食用菌生產(chǎn)的基礎(chǔ)，共分三個級別。 （3分鐘） 知識、能力培養(yǎng)目標(biāo)：菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定。教學(xué)難點：菌種的培養(yǎng)與質(zhì)量鑒定。 （2分鐘） 新課內(nèi)容: （82分鐘） 布置作業(yè)： （2分鐘） 實驗二 二級菌種制作一、教學(xué)目的：通過實驗，使學(xué)生學(xué)會二級菌種培養(yǎng)基的制備方法、接種及二級菌種培養(yǎng)技術(shù)。二、材料與用具1用具：天平、高壓鍋、試管、漏斗、鋁鍋、棉花、恒溫箱、冰箱、接種針、酒精燈。2材料：小麥粒87% 石膏粉3% 牛糞10% 少許發(fā)酵過的稻草三、試驗方法二級種制作配制培養(yǎng)基滅菌接種培養(yǎng)（一）配制培養(yǎng)基1浸泡：小麥粒浸泡于水中，使其充分吸水浸16小時后撈出放入清水沖洗瀝干。2煮：置于鍋內(nèi)，水沒過麥粒，加熱煮至無干心、無破皮，用清水沖洗，瀝去多于水分（不沾手、表面潮濕）3拌料：加入石膏和發(fā)酵過牛糞（含水量60%）拌勻。4裝瓶：裝瓶量為瓶高的3/5，再加一層發(fā)酵過稻草（含水量60%）稍壓實壓平清洗瓶口塞棉塞。（二）滅菌：加水適量，確保不干鍋裝鍋：物品放入，立好加蓋擰緊。加熱排氣：水沸騰后排氣0.5-1分鐘，如果鍋內(nèi)物品過多可加長排氣時間。保溫保濕：當(dāng)壓力升到1.5P溫度1