ELISA試劑盒問題解答手冊(cè)

1、技術(shù)問題問答技術(shù) 問題 問答序后為了更好的讓廣大客戶了解ELISA試齊I盒操作過程中出現(xiàn)問題及原因，特將大家普遍認(rèn)為比較容易出現(xiàn)的問題進(jìn)行歸納、技術(shù)問題問答整理成冊(cè)，弁回饋給廣大的客戶。本手冊(cè)提到的問題均為分析手段， 弁未牽涉到具體實(shí)例，您 可以根據(jù)相應(yīng)的具體問題進(jìn)行具體分析。 在具體實(shí)驗(yàn)操作中，如 本手冊(cè)中未體現(xiàn)，希望大家及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。貴州勤邦食品安全科學(xué)技術(shù)有限公司技術(shù)問題問答問題與解答1 .藥物殘留實(shí)驗(yàn)前處理過程中實(shí)驗(yàn)耗材（如離心管、玻璃管）重復(fù)使用最 理想的洗滌方法是什么？實(shí)驗(yàn)完成后，先用流動(dòng)自來(lái)水沖洗干凈，再加入洗滌劑超聲 2h,然后再用自來(lái)水沖洗干凈，最后用去離子水清洗1到2

2、次，60c完全烘干后待用。建議：超高陽(yáng)性樣本所使用的離心管或玻璃試管不再重復(fù)使用。2 .藥物殘留檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中對(duì)水質(zhì)的要求：三蒸水、蒸儲(chǔ)水、純凈水還是去離 子水？理論來(lái)說這幾種水都可以滿足分析要求，但對(duì)于某些項(xiàng)目來(lái)說還是有一定的區(qū)別，最好使用去離子水和三蒸水，蒸儲(chǔ)水和純凈水一般僅用于洗滌液的配置。3 .器具污染所造成的途徑有那幾種？檢樣過程中出現(xiàn)含量較高的陽(yáng)性樣品；實(shí)驗(yàn)器具沒有清洗干凈；高濃度標(biāo)品貯備液保存不當(dāng)造成污染。建議：容易被污染或者使用周期較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)器具，定期（3-5個(gè)月）更新一次。4 . ELISA方法可用于檢測(cè)藥粉樣品嗎？針對(duì)不同成分的樣品，通過對(duì)應(yīng)的樣品前處理方法 ，消除干擾后，可以

3、用ELISA方 法進(jìn)行檢測(cè)，但應(yīng)防止與藥殘實(shí)驗(yàn)交叉污染。5 .同樣一個(gè)樣品，稱取兩個(gè)樣檢測(cè)兩次，兩次值差別較大，是取樣原因還是板間的變異？正常情況下，板孔間的變異不會(huì)對(duì)樣本的檢測(cè)結(jié)果造成絕對(duì)的影響；樣品的取樣、前處理過程和分析過程中的操作誤差是影響結(jié)果差別較大的主要原因。技術(shù)問題問答6 .藥物殘留實(shí)驗(yàn)前處理樣品過程中所用的氮?dú)馐遣皇强蓳Q用壓縮空氣？空氣中的氧氣是否會(huì)對(duì)藥物產(chǎn)生氧化作用，進(jìn)而影響試驗(yàn)結(jié)果？一般情況下需要檢測(cè)的目標(biāo)物是非常穩(wěn)定的藥物，可以用壓縮空氣替換氮?dú)?，藥物的氧化在此不?huì)產(chǎn)生，如有特殊藥物有氧化情況，說明書上會(huì)有明確標(biāo)注。7 .將肉中藥物殘留成份轉(zhuǎn)移到提取液中，最佳的離心力、離

4、心時(shí)間是多少 （不同的試劑盒離心時(shí)間不一樣）？一般情況下，轉(zhuǎn)速 4500r/min,離心時(shí)間5min到10 min，離心力大于 3000g即可。8 .吠喃四項(xiàng)檢測(cè)是衍生化孵育時(shí)間和孵育溫度多少為最佳？37 c過夜孵育14到16h為最佳孵育環(huán)境，有實(shí)驗(yàn)證明過最低可以縮短至12小時(shí)，但對(duì)于高陽(yáng)性樣本來(lái)說可能會(huì)出現(xiàn)差異，建議使用14-16h.60c孵育3h需嚴(yán)格遵守孵育時(shí)間。若時(shí)間允許的情況下，建議使用37c過夜孵育， 以便使藥物沖分衍生化，能有效提高高陽(yáng)性樣本檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性9 .添加回收率的測(cè)定方法是什么？添加回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，添加濃度多少為好？添加回收實(shí)驗(yàn)是驗(yàn)證整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度。不同的試

5、劑盒的不同種類的樣本，按照說明書中對(duì)應(yīng)的樣本前處理方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在添加的時(shí)候盡量避免在最低檢測(cè)限以內(nèi)或者超出試劑盒曲線外的添加，建議添加的最適濃度參照所需檢測(cè)目標(biāo)藥物在相應(yīng)組織中的判定限或定量限。 同時(shí)，添加時(shí)根據(jù)具體的添加濃度對(duì)添加的高標(biāo)進(jìn)行 適當(dāng)?shù)南♂專ＷC添加的準(zhǔn)確性。如硝基吠喃類藥物組織的定量限為0.5ppb ,添加回收時(shí)0.5ppb為最適添加濃度。添加回收的體積公式：V=C*1000M/P，其中:V為添加的高標(biāo)準(zhǔn)體積（ul） ,C為添加的濃 度,P為高標(biāo)準(zhǔn)的濃度（ppb）,M為樣本的質(zhì)量（g）。10 .脂肪存在為什么會(huì)造成試驗(yàn)的假陽(yáng)性率比較高？在提取過程中，容易造成乳化，對(duì)樣本進(jìn)行不

6、正常的濃縮，易與雜質(zhì)混合難以分離。乳化后一般利用60 C水浴加熱半小時(shí)，最好是先把上層有機(jī)相去除后再利用水浴加熱較 好.第二種解乳化的方法是把整個(gè)乳化后的樣本全部放入冰箱-20C急凍室急凍30min或更長(zhǎng)，回溫后去除上層有機(jī)相再次離心后去上清液，取下層進(jìn)行分析。技術(shù)問題問答如氯霉素或其他在加入正已烷再加入復(fù)溶液進(jìn)行操作時(shí)，可在加入正已烷后充分渦動(dòng)1-2分鐘，然后加入復(fù)溶液后渦動(dòng)5-10S,即可在一定程度上防止乳化造成。又如硝基吠喃類代謝物的前處理中加入乙酸乙酯后形成乳化層，不易取到相應(yīng)的量，可以在加入乙酸乙酯時(shí)，放大加入的量，然后取液相應(yīng)增加，保證稀釋倍數(shù)不變，也可在一定程度上防止乳化形成。1

7、1 .樣品OD值落在藥殘標(biāo)準(zhǔn)曲線的那一區(qū)間值精確度最高？一般在第三和第四標(biāo)準(zhǔn)之間精確度較高，但是不同的試劑盒曲線的局部差異，精確區(qū)間會(huì)稍有變化。一般在曲線上的近似直線段范圍內(nèi)較為準(zhǔn)確.12 . OD值偏低由什么因素引起的？整板OD值偏低：） 反應(yīng)溫度偏低；） 反應(yīng)時(shí)間不夠；, 洗板時(shí)間過長(zhǎng)或次數(shù)過多；） 點(diǎn)板時(shí)環(huán)境溫度過低；, 酶標(biāo)儀故障波長(zhǎng)錯(cuò)誤；鴇光燈壽命將近，導(dǎo)致光強(qiáng)變?nèi)酰? 試劑盒有效期已過或?qū)⑦^；, 某些試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品需要稀釋才能使用或試劑稀釋倍數(shù)錯(cuò)誤（如四環(huán)素類）；, 試劑盒中的某些試劑變質(zhì)或污染；, 不同試劑盒混用，, 試劑盒的回溫時(shí)間較短；, 試劑盒保存未按規(guī)定的方法或環(huán)境保存；

8、） 試劑盒處于極端條件下，比如放在貼著冰箱壁，試劑凍傷。樣本的OD值偏低：? 樣本的陽(yáng)性太高（可做空白樣本及陽(yáng)性樣本對(duì)照試驗(yàn)），? 某些試劑盒的樣本需要調(diào)節(jié)P H的沒有調(diào)節(jié)到需要的P H范圍；? 某些試劑盒的復(fù)溶液需要稀釋后才能使用的沒有經(jīng)過稀釋；? 樣本前處理時(shí)沒有去掉上層有機(jī)相，加樣吸取到上層有機(jī)相；? 樣本被污染;技術(shù)問題問答? 樣本與標(biāo)準(zhǔn)品的溫度相差太多（樣本溫度低）；? 樣本前處理時(shí)使用的水質(zhì)量不合格；? 樣本前處理過程中所使用的試劑質(zhì)量有問題（可做試劑空白對(duì)照）；13 .樣本的吸光度值為什么會(huì)超出曲線上最大OD值？? 標(biāo)準(zhǔn)品回溫時(shí)間不夠；? 樣本中含有非樣本基質(zhì)的物質(zhì)，如有機(jī)溶劑；

9、? 樣本復(fù)溶液稀釋錯(cuò)誤或直接利用去離子水作為復(fù)溶液；? 標(biāo)準(zhǔn)1被污染；? 反應(yīng)時(shí)間錯(cuò)誤，導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品的OD值不上升而樣本的OD值繼續(xù)上升，注：此種情況下，樣本的抑制率在100%-110%范圍內(nèi)，一般可以初步判斷樣本為陰性樣本。若大部分樣本的抑制率遠(yuǎn)超過110%,建議電話咨詢或者重復(fù)實(shí)驗(yàn)。14 .氮吹儀為什么需要水浴或者鐵浴？氮?dú)饣蚩諝庵饕抵饕黾恿艘后w與氣體的接觸面積，水浴或者鐵浴加熱是為了 使有機(jī)溶劑揮發(fā)的速度更快一些，以達(dá)到節(jié)約時(shí)間的目的。15 .樣本檢測(cè)結(jié)果在曲線之外如何判定？把處理好的樣本液用復(fù)溶液進(jìn)行梯度稀釋后，再進(jìn)行檢測(cè).使之OD值在曲線近似直線段范圍內(nèi)為最佳。16 .氮吹儀吹干步

10、驟為什么要 50-60C進(jìn)行水浴或鐵?。坑袡C(jī)溶劑的沸點(diǎn)一般在60-90C不等，而水浴的溫度一般較溶劑的沸點(diǎn)略低為佳，故對(duì)于一般的有機(jī)溶劑，可以選用50-60 C的水浴進(jìn)行加熱.但對(duì)于某些沸點(diǎn)較高的試劑，比如乙睛等沸點(diǎn)在 80c以上的有機(jī)溶劑吹干的時(shí)候可選用65-70 C水浴進(jìn)行加熱.但是溫度不宜過高.注：對(duì)于混合有機(jī)溶劑一般來(lái)說沸點(diǎn)會(huì)有所降低.相應(yīng)的水浴溫度也應(yīng)稍微降低。17 .勤邦公司ELISA試劑盒的洗板液是否可以通用？勤邦ELISA試劑盒內(nèi)20X洗滌液成份是相同的，不同試劑盒之間可以通用。 但是,技術(shù)問題問答建議不使用相隔時(shí)間較長(zhǎng)的洗液，同時(shí)配置好的洗液在室溫下放置一周后需重新配置。建議

11、：首先明確該試劑盒說明書上是否是20X洗滌液。18 .樣本吹干后保存問題。樣本吹干后建議立即進(jìn)行復(fù)溶后點(diǎn)板，盡量不進(jìn)行保存，如果確實(shí)需要進(jìn)行保存的，首先請(qǐng)電話咨詢，若能保存，最好是選擇吹干后放置于2-8C冰箱進(jìn)行保存，如果是已經(jīng)復(fù)溶好的樣本，需要用封口膜進(jìn)行封口后方可放置于2-8C冰箱保存。另外有些樣本是不能放置在玻璃里面進(jìn)行保存的，如唾諾酮類藥物吹干后不能進(jìn)行保存，如果需要保存，則要復(fù)溶后轉(zhuǎn)移到塑料瓶中方可放置于2-8 C冰箱進(jìn)行保存。一般說來(lái)，樣本保存時(shí)間不超過12小時(shí)。19 .試劑盒在保質(zhì)期內(nèi)OD值偏低，但標(biāo)準(zhǔn)品有梯度，可否繼續(xù)使用？試劑盒在保質(zhì)期內(nèi) OD值偏低可能是保存環(huán)境影響所致。若

12、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品有梯度、 標(biāo)準(zhǔn)品1的OD值大于0.5,可以分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但是實(shí)驗(yàn)結(jié)果只可做為相對(duì)判定依據(jù)， 而不能做為定量檢測(cè)結(jié)果。20 .回收率長(zhǎng)期偏高或偏低，是否正常？國(guó)家對(duì)試劑盒的回收率范圍要求較寬(40%-130% ),如果在穩(wěn)定的前提下出現(xiàn)試劑盒的回收率長(zhǎng)期偏高或偏低是正常的，也可以做為判定依據(jù)。需要在檢測(cè)結(jié)果的檢測(cè)值除上回收率即是該樣本的相對(duì)準(zhǔn)確檢測(cè)結(jié)果。如果有陽(yáng)性樣本的情況下，最好是使用確證后的陽(yáng)性樣本進(jìn)行復(fù)核實(shí)驗(yàn)為佳。21 . ELISA方法在方法及操作均無(wú)問題的情況下，能否出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性？ELISA方法本身的特點(diǎn)是具有半定量的性質(zhì)，一般允許有一定比例的假陽(yáng)性(國(guó) 家要求在1

13、0%以下)，但是不能出現(xiàn)假陰性檢測(cè)結(jié)果。22 .樣本處理過程中出現(xiàn)稀釋倍數(shù)問題時(shí)，如何計(jì)算？樣本處理過程中出現(xiàn)的稀釋均為：在無(wú)損失的情況下， 每毫升樣本液中溶解的樣本質(zhì)量或體積，如2g樣本在無(wú)損失的情況下處理完成后溶解于1ml樣本液中，則表示該技術(shù)問題問答方法的稀釋倍數(shù)為 0.5倍，如0.5g樣本在無(wú)損失的情況下處理完成后溶解于1ml樣本液中，則表示該方法的稀釋倍數(shù)為2倍，如2g樣本在無(wú)損失的情況下處理完成后溶解于0.5ml樣本液中，則表示該方法的稀釋倍數(shù)為0.25倍。23 .沒有結(jié)晶水的試劑在配置溶液時(shí)，該如何換算？沒有結(jié)晶水的試劑在配置溶液時(shí)，應(yīng)該取該試劑需要的物質(zhì)的量乘上分子量后才是需要

14、的試劑的重量。如：說明書上需要n g分子量為M1的有結(jié)晶水的物質(zhì)，如果在沒有的情況下，需要用分子量為M2的沒有結(jié)晶水的物質(zhì)代替時(shí)，則需要的分子量為M2的物質(zhì)重量為 n*M2/M1 。24 .配置好的試劑保存問題。配置好的無(wú)機(jī)試劑一般可以保存2-3個(gè)月，保存環(huán)境可以選擇在室溫，避光，陰涼處進(jìn)行密封保存；洗液、復(fù)溶液等與抗原抗體直接接觸的試劑選擇在2-8 C冰箱里進(jìn)行保存；有機(jī)混合溶液或有機(jī)和無(wú)機(jī)混合溶液保存的時(shí)間原則上不能超過1個(gè)星期，室溫保存，最好是現(xiàn)配現(xiàn)用。25 .標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性要求達(dá)到多少為好？標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性直接反應(yīng)該實(shí)驗(yàn)的優(yōu)劣，理論上應(yīng)該無(wú)限接近1。在實(shí)際操作中主要還是以標(biāo)準(zhǔn)曲線判定為主

15、，相關(guān)系數(shù)判定為輔，在曲線較好的情況下，相關(guān)系數(shù)只要能達(dá)到0.98以上即可做為半定量檢測(cè)結(jié)果判定依據(jù)。如果低于 0.98,如果標(biāo)準(zhǔn)曲線沒 有問題的情況下也是可以作為相對(duì)定性進(jìn)行判定。26 .點(diǎn)板時(shí)，加樣量錯(cuò)誤會(huì)導(dǎo)致結(jié)果如何？由于該方法為生物法， 其反應(yīng)基理非常復(fù)雜， 如果加樣的量錯(cuò)誤， 可能會(huì)導(dǎo)致不可 預(yù)料的結(jié)果，建議具體問題具體分析，可電話咨詢。27 .怎樣降低實(shí)驗(yàn)器材對(duì)實(shí)驗(yàn)帶來(lái)的干擾?嚴(yán)格按照國(guó)家規(guī)定對(duì)相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。技術(shù)問題問答28 .如何根據(jù)顏色深淺進(jìn)行延時(shí)或縮短時(shí)間？對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)員來(lái)說，顏色與OD值的關(guān)系很容易進(jìn)行把握，如果顏色所示的OD值達(dá)到一定的程度即可進(jìn)行終止。

16、如果顏色過早達(dá)到一定的OD值范圍，即可提前進(jìn)行終止，反之則延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，但不得超過10分鐘。29 .多殘留與單殘留試劑盒檢測(cè)的特點(diǎn)。一般來(lái)說，如果對(duì)方要求的是某類藥物總殘留檢測(cè)結(jié)果不得超過某個(gè)值時(shí)，則可以使用多殘留檢測(cè)試劑盒，交叉反應(yīng)率越接近100%越好。如果對(duì)方要求的某種藥物檢測(cè)結(jié)果不得超過某個(gè)值時(shí)，則要使用單殘留檢測(cè)試劑盒，且交叉反應(yīng)率越低越好。對(duì)于不得檢出的藥物來(lái)說一般使用單殘留檢測(cè)試劑盒，避免出現(xiàn)過高的假陽(yáng)性。30 .點(diǎn)板過程中，稀釋好的抗體工作液或酶標(biāo)二抗工作液能存放多長(zhǎng)時(shí)間？嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作，如吠喃妥因代謝物（CA036 ）試劑盒中抗體工作液和酶標(biāo)二抗?jié)饪s液混合后需要室溫平衡

17、30min,又如鏈霉素（CA351 ）試劑盒中抗體工作液和酶標(biāo)二抗?jié)饪s液混合后需要立即加樣。31 .如何避免假陰性，如何提高回收率？一般在試劑盒研發(fā)過程中，前處理方法研究的時(shí)候即會(huì)在假陽(yáng)性與回收率之前取 一個(gè)平衡點(diǎn)，只要在實(shí)驗(yàn)操作過程中嚴(yán)格按照試劑盒說明書所提供的方法進(jìn)行操作時(shí)一 般不出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象。32 .回收率為什么有時(shí)會(huì)超過100%?在前處理樣本的過程中，添加濃度的準(zhǔn)確度、系統(tǒng)操作誤差等因素都對(duì)回收率高 低有影響。同時(shí)，樣本中的雜質(zhì)也會(huì)對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)產(chǎn)生干擾，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)回收率超過 100%的現(xiàn)象。33 .酶標(biāo)儀中自帶有曲線分析系統(tǒng)，還有必要用試劑盒專用處理軟件嗎？酶標(biāo)儀一般應(yīng)用于醫(yī)院或醫(yī)學(xué)上

18、，其自帶的曲線分析系統(tǒng)主要針對(duì)醫(yī)學(xué)上的需要配備，它的數(shù)學(xué)模型在獸藥殘留檢測(cè)方面不太適用，所以建議使用試劑盒專用分析軟件。技術(shù)問題問答34 .如果檢測(cè)樣本在說明書上未出現(xiàn)，可否采用其他樣本的前處理方法代替？如果檢測(cè)的樣本在說明書上未出現(xiàn)，不可擅自用其它樣本前處理方法代替，建議 先與技術(shù)部進(jìn)行聯(lián)系確證。35 .回收率能否驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)過程以及數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性？在沒有確證樣本對(duì)照的情況下，添加回收率是對(duì)操作準(zhǔn)確性、 操作環(huán)境及分析試劑的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。因此，回收率也是實(shí)驗(yàn)成功與否的一個(gè)重要判定依據(jù)。在ELISA檢測(cè)方法實(shí)際應(yīng)用過程中，回收率只是一個(gè)參考指標(biāo)，其值只要穩(wěn)定在 一定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果即具有參考性。36

19、 .吠喃類藥物代謝物檢測(cè)的前處理過程中，如果取上層2.5ml時(shí)上層不夠取，如何解決？在正常操作情況下，如樣本發(fā)生乳化會(huì)導(dǎo)致上述情況發(fā)生。一方面，可以提高離 心機(jī)轉(zhuǎn)速、延長(zhǎng)離心時(shí)間，以達(dá)到明顯分層的目的；另一方面，可以把加入乙酸乙酯的 量擴(kuò)大到10ml ,離心后取5ml吹干。37 .酶標(biāo)儀的檢測(cè)校正只能由官方部門來(lái)進(jìn)行檢測(cè)嗎？所有儀器的檢測(cè)校正均只能由官方部門來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，并貼上檢驗(yàn)合格標(biāo)志后，方 可用來(lái)做檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。38 .吠喃類藥物代謝物在做添加回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，可否利用已衍生化的標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行添加？吠喃類藥物代謝物在做添加回收實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須經(jīng)過一個(gè)衍生化的過程，使吠喃類藥物代謝物變成其衍生物。建

20、立曲線的標(biāo)準(zhǔn)品均已是衍生物，如果直接用來(lái)添加，則衍生 化過程無(wú)法監(jiān)控，故不能使用已衍生化標(biāo)準(zhǔn)品做添加回收實(shí)驗(yàn)。39 .反應(yīng)時(shí)間是否必須嚴(yán)格按照說明書所示？由于試劑盒檢測(cè)中的反應(yīng)時(shí)間是經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)后得到的，建議最好完全按照說明書所示的時(shí)間進(jìn)行操作分析。技術(shù)問題問答由于受實(shí)驗(yàn)室實(shí)際操作環(huán)境溫度等的影響，試劑盒顯色反應(yīng)時(shí)間可以根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情調(diào)整。40 .如果在做吠喃類藥物代謝物的實(shí)驗(yàn)時(shí)，離心管的體積不夠的情況，怎么 辦?如果遇到離心管的體積不夠的情況，可以在保持稀釋倍數(shù)不變的前提下，把樣本以及加入的試劑的量進(jìn)行減半操作。減半操作后不會(huì)對(duì)樣本的檢測(cè)造成本質(zhì)性的影響。另一種方法，可以在比較大的試管

21、中進(jìn)行提取，在加入乙酸乙酯振蕩后， 先靜置一段時(shí)間，然后轉(zhuǎn)移足量的上層有機(jī)相到適合的離心管中進(jìn)行離心。41 .試劑盒分析所用的液體pH值一般要求多少？由于抗體、酶都是生物活性物質(zhì)，強(qiáng)酸強(qiáng)堿都會(huì)導(dǎo)致失活現(xiàn)象，所以試劑盒分析用的液體一般要求為中性環(huán)境，pH值約在7.2-7.4之間。42 .加入終止液后多久進(jìn)行讀數(shù)比較合適？由于ELISA實(shí)驗(yàn)中所用到的都是生物試劑，而終止液為硫酸溶液， 故在加入終止液后最好是在 5min之內(nèi)進(jìn)行讀數(shù)，如果放置時(shí)間過長(zhǎng)，則會(huì)導(dǎo)致OD值呈不規(guī)則降低。 顏色深的孔內(nèi)可能會(huì)出現(xiàn)黑色絮狀物質(zhì)，上述現(xiàn)象是由于生物聚合體在硫酸的作用下碳化造成的。43 .板孔在使用之前孔底部有小顆

22、粒物質(zhì)，正常嗎？一般在板孔底部包被有抗原物質(zhì)，可能會(huì)存在板孔底部有小顆粒的情況，不影響正常檢測(cè)。44 . 47.唯諾酮類藥物、磺胺類藥物多長(zhǎng)時(shí)間能代謝完？每種藥物在不同動(dòng)物體內(nèi)都有一定的代謝周期，具體代謝周期可參閱相關(guān)文獻(xiàn)。45 .如果沒有二氯甲烷時(shí)可否能用三氯甲烷代替？每個(gè)試劑盒的前處理方法都是經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)后確定的，不能簡(jiǎn)單的用三氯甲烷代 替二氯甲烷進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。技術(shù)問題問答46 .加完正己烷和復(fù)溶液渦動(dòng)離心后出現(xiàn)乳化現(xiàn)象怎么辦？建議首選60c水浴5-10min后再離心，同時(shí)提高離心力。此外，可選擇 -20度冷凍10min左右重復(fù)離心47 . 一次檢測(cè)的過程中，其中有一兩個(gè)樣品第一次檢測(cè)時(shí)是高陽(yáng)

23、性樣本，基 本不顯色，第二次檢測(cè)時(shí)是陰性，是什么原因造成的？點(diǎn)樣的過程中出現(xiàn)跳孔板孔出現(xiàn)較大的變異系數(shù)樣本在前處理的過程中被污染樣本混合不均勻建議：出現(xiàn)高陽(yáng)性的樣本后應(yīng)保留該樣本液，與重新處理好的樣本液一起點(diǎn)樣分析。48 . 一次大批量的樣本檢測(cè)過程中發(fā)現(xiàn)所有的樣本都為陽(yáng)性，重復(fù)測(cè)定后發(fā) 現(xiàn)都是陰性，為什么？樣品前處理過程中所用試劑被污染實(shí)驗(yàn)用水被污染標(biāo)準(zhǔn)曲線出現(xiàn)較大的異常建議：做空白對(duì)照。同時(shí)建議大家在進(jìn)行大批量樣本檢測(cè)時(shí)帶上空白對(duì)照。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)中的所用試劑出現(xiàn)變更的時(shí)候，需要針對(duì)每個(gè)項(xiàng)目進(jìn)行空白實(shí)驗(yàn)對(duì)照。49 .當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線6個(gè)點(diǎn)中有一個(gè)點(diǎn)出現(xiàn)明顯的異常時(shí)，影響結(jié)果判斷時(shí)，結(jié) 果怎么處理？建議參照之前的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和試劑盒內(nèi)的質(zhì)控報(bào)告，有選擇性的去掉有異常的點(diǎn)，或者適當(dāng)