第四節(jié)金黃色葡萄球菌檢驗PPT課件

1、單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式單擊此處編輯母版文本樣式第二級第三級第四級第五級*單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式單擊此處編輯母版文本樣式第二級第三級第四級第五級*金黃色葡萄球菌檢驗 金黃色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），可引起多種嚴(yán)重感染。有“嗜肉菌的別稱。概況葡萄球菌屬微球菌科，本菌有19個菌種，從人體上可檢出12個種。葡萄球菌屬主要與皮膚腺體和溫血動物的粘膜相關(guān)系，有些種是人及動物的條件致病菌。金黃色葡萄球菌對人類有致病性，通常被稱為病原性球菌。金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥，又稱為化

2、膿性球菌。 革蘭氏陽性球菌，直徑為0.8-1.0微米，鏡檢時呈單個、成對、四聯(lián)或不規(guī)則的簇群，如葡萄。生物學(xué)特性菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征 大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡羅卜素，使細(xì)胞團呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色，色素的產(chǎn)生取決于生長的條件。生物學(xué)特性菌體形態(tài)及培養(yǎng)特征大多數(shù)菌株最適溫度30-37，最適pH為7.0-7.5；兼性厭氧菌，在好氧條件下生長最好；可在15%氯化鈉和40%膽汁中生長。一般用含10%氯化鈉的大豆肉湯增菌或7.5%氯化鈉肉湯增菌。所有的毒株產(chǎn)生凝固酶，人和動物來源的菌株通?？赡掏?、人、馬和豬的血漿。產(chǎn)生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶，大多數(shù)菌株可水解天然的動物蛋白，例如血紅蛋白、纖維蛋白、

3、卵白、酪朊和多肽類如明膠，水解脂類、吐溫類和磷脂蛋白質(zhì)，并釋放脂肪酸；生物學(xué)特性生化特征在血平板上可形成明顯透明的溶血環(huán)。為型溶血。可產(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培養(yǎng)基上形成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅試驗、 VP試驗多為陽性，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，觸酶陽性。致病菌可產(chǎn)生凝血漿酶。觸酶試驗（過氧化氫酶試驗）原理：具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。生物學(xué)特性致病性金黃色葡萄球菌為條件致病菌，菌株致病力的強弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：a.溶血素：外毒素，分、四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死

4、；b.殺白細(xì)胞素：可破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；c.血漿凝固酶：當(dāng)金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細(xì)胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關(guān)；d.脫氧核糖核酸酶：脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌； e.腸毒素：引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素， 分為A、B、C、D、E五種。 金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，臨床表現(xiàn)多種多樣，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。 葡萄球菌皮膚感染致病性葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌腸毒素所引起的疾病，可引發(fā)不同程度的急

5、性胃腸炎癥狀，惡心、嘔吐最為突出而且普遍，腹痛、腹瀉次之。當(dāng)金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經(jīng)8-10小時即可相當(dāng)數(shù)量的腸毒素。分布在自然界中廣泛存在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。作為人和動物的常見病原菌，其主要存在于人和動物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機會很多。傳播媒介為被該菌污染的食品，主要為淀粉類(如剩飯、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及魚、肉、蛋類等。被污染的食物在室溫20-22放置5小時以上時，病菌大量繁殖，并產(chǎn)生腸毒素。 流行病學(xué)季節(jié)分布，多見于春夏

6、季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。 流行病學(xué) 金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細(xì)菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。流行病學(xué)腸毒素形成條件： 存放溫度，在37C內(nèi)，溫度越高，產(chǎn)毒時間越短； 存放地點，通風(fēng)不良氧分壓低易形成腸毒素； 食物種類，含蛋白質(zhì)豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。耐受力幾乎所有的消毒試劑以及熱加工過程對金黃色葡萄球菌都

7、有嚴(yán)重的破壞作用腸毒素可耐受100 30分鐘不被破壞。對于加工過的食品或食品加工設(shè)備而言，此菌或其腸毒素的存在通常作為衛(wèi)生條件差的一種指標(biāo)。 檢驗程序與操作方法根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)： 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 GB4789.10-2010 金黃色葡萄球菌檢驗操作流程檢樣25g(mL) +稀釋液225mL，均質(zhì)血漿凝固酶試驗7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂斜面Baird-Parker平板，血平板涂片染色361 ， 18h24h結(jié)果報告361 B-P平板18h24h或45h48h觀察溶血血平板 18h24h檢測步驟增菌利用金黃色葡萄球菌耐鹽的特性（可耐受15%的

8、氯化鈉），用含10%氯化鈉的胰酪胨大豆肉湯增菌。檢測步驟分離血平板：金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生溶血素，因此在血平板上產(chǎn)生明顯的溶血環(huán)。血平板上其典型菌落呈金黃色，有時也為白色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，有溶血圈。 檢測步驟分離BP平板：胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、維生素和痕量礦物元素。丙酮酸鈉是一種生長促進(jìn)劑。亞碲酸鹽對除金黃色葡萄球外的其他能分解卵黃的菌株有毒性，并使菌落產(chǎn)生黑色。卵黃提供營養(yǎng)和有利于觀察卵磷脂環(huán)。甘氨酸和氯化鋰對金黃色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。檢測步驟分離在BP平板上其典型菌落為：圓形，光滑突起，濕潤，直徑2-3mm，顏色呈灰色到黑玉色，邊緣常為

9、淡色（米黃色或灰白色略帶灰色或黃色的白色），周圍為一混濁帶，在其外緣常有一透明圈。用接種針接觸菌落似有黃油樹膠的粘稠感。偶然會遇到不分解脂肪菌株，除無混濁帶及透明圈外，其他外觀基本相同。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落，其黑色常較典型菌落淡些，且外觀可能粗燥，質(zhì)地較干燥。 檢測步驟-鑒定金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生凝固酶，因此對其鑒別的主要實驗是測定其凝固酶。對于凝固不完全的菌株，可以通過一些其他實驗來進(jìn)一步確認(rèn)，例如：厭氧葡萄糖發(fā)酵、溶葡萄球菌酶敏感性實驗、耐熱核酸酶實驗等。所有這些實驗不能作為鑒別其產(chǎn)毒與否的依據(jù)。25g樣品+ 225ml 生理鹽水 5mL樣品勻液（1:10）+ 50mL胰酪胨大豆肉湯血平板36 1 24hr 鏡 檢 營養(yǎng)肉湯血漿凝固酶實驗 報告結(jié)果 定性檢測36 1 24hr 36 1 24hr 36 1 6hr BP平板25g樣品+ 225ml 生理鹽水 選三個連續(xù)梯度，每個梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉湯將有生長的管劃線接種36 1 48hr 鏡 檢 營養(yǎng)肉湯血漿凝固酶實驗 報告結(jié)果 MPN/g(mL)定量檢測（MPN法）36 1 48hr 36 1 24hr 36 1 6hr 適用于檢測可能含有少量金黃色葡萄球菌，卻帶有大量競爭菌的樣品梯度稀釋 25g樣品+ 225ml 生理鹽水 選三個連續(xù)梯度，每個梯度分別取1mL接種之至表面干