細(xì)胞化學(xué)染色法

1、細(xì)胞化學(xué)染色細(xì)胞化學(xué)染色一、概念一、概念 細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合的一門科學(xué)。細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合的一門科學(xué)。以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)原理對血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（酶應(yīng)原理對血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等）類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。作定性、定位、半定量分析的方法。二、臨床應(yīng)用二、臨床應(yīng)用輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類型 僅從細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察白血病的診斷僅從細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察白血病的診斷正確率約正確率約50-70%，如結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色，如結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色則可提到則可提到

2、90%以上。以上。輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷觀察疾病療效和預(yù)后觀察疾病療效和預(yù)后發(fā)病機(jī)制的探討發(fā)病機(jī)制的探討三、基本步驟三、基本步驟固定固定顯示顯示復(fù)染復(fù)染固固 定定目的：保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分不變。目的：保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分不變。方法：方法：1.物理法物理法 干燥、火焰固定干燥、火焰固定2.化學(xué)法化學(xué)法 蒸汽固定、液體固定蒸汽固定、液體固定 （甲醛、乙醇、丙酮等）（甲醛、乙醇、丙酮等）顯示顯示偶氮偶聯(lián)法偶氮偶聯(lián)法聯(lián)苯胺法聯(lián)苯胺法普魯士藍(lán)反應(yīng)普魯士藍(lán)反應(yīng)雪夫反應(yīng)雪夫反應(yīng)金屬沉淀法金屬沉淀法復(fù)復(fù) 染染目的：使各種細(xì)胞顯示出來便于觀察目的：使各種細(xì)胞顯示

3、出來便于觀察染核：中性紅、甲基綠、蘇木精、核固染核：中性紅、甲基綠、蘇木精、核固紅、沙黃等紅、沙黃等染漿：伊紅、剛果紅、光綠等染漿：伊紅、剛果紅、光綠等四、種類四、種類過氧化物酶染色過氧化物酶染色、蘇丹黑染色蘇丹黑染色、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色過碘酸過碘酸-雪夫反應(yīng)雪夫反應(yīng)-醋酸奈酚酯酶染色醋酸奈酚酯酶染色酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色鐵染色鐵染色過氧化物酶染色過氧化物酶染色(POX)過氧化物酶：過氧化物酶： 是中性粒細(xì)胞含量最多的一種酶是中性粒細(xì)胞含量最多的一種酶 主要存在于線粒體和溶酶體中主要存在于線粒體和溶酶體中 主要功能是破壞生物氧化過程中有劇毒主要功能是破壞生物

4、氧化過程中有劇毒的過氧化物，使其放出氧，參加細(xì)胞內(nèi)的過氧化物，使其放出氧，參加細(xì)胞內(nèi)氧化還原過程。氧化還原過程。原理原理Washburn 法法四甲基聯(lián)苯胺法四甲基聯(lián)苯胺法改良改良pereira 染色法染色法四甲基聯(lián)苯胺法四甲基聯(lián)苯胺法H2O2溶酶體顆粒溶酶體顆粒中的中的H2OO2四甲基聯(lián)苯胺四甲基聯(lián)苯胺O2聯(lián)苯胺藍(lán)聯(lián)苯胺藍(lán)聯(lián)苯胺藍(lán)亞硝基鐵氰化鈉聯(lián)苯胺藍(lán)亞硝基鐵氰化鈉O2藍(lán)色物質(zhì)藍(lán)色物質(zhì)（沉淀）（沉淀）正常細(xì)胞的染色反應(yīng)正常細(xì)胞的染色反應(yīng)粒細(xì)胞系統(tǒng)粒細(xì)胞系統(tǒng)原粒（可為陰性）分葉（陽性程原粒（可為陰性）分葉（陽性程度逐漸增強(qiáng)）度逐漸增強(qiáng)）嗜酸陽性最強(qiáng)嗜酸陽性最強(qiáng)嗜堿陰性嗜堿陰性單核細(xì)胞系統(tǒng)陰性或弱

5、陽性，（顆粒單核細(xì)胞系統(tǒng)陰性或弱陽性，（顆粒少而細(xì)）少而細(xì)）其他細(xì)胞陰性其他細(xì)胞陰性臨床評價：臨床評價：輔助診斷急性白血病細(xì)胞類型首輔助診斷急性白血病細(xì)胞類型首選、最重要的細(xì)胞化學(xué)染色。選、最重要的細(xì)胞化學(xué)染色。、幫助鑒別診斷急性白血病的類型、幫助鑒別診斷急性白血病的類型急性粒細(xì)胞白血?。杭毙粤＜?xì)胞白血?。涸？沙赎栃栽？沙赎栃?粗大，局限性分布），粗大，局限性分布），陰性不可排除。陰性不可排除。急性淋巴細(xì)胞白血?。杭毙粤馨图?xì)胞白血?。阂?guī)定陽性率。規(guī)定陽性率。急性單核細(xì)胞白血?。杭毙詥魏思?xì)胞白血?。涸瓎慰蔀殛幮?，少數(shù)可弱陽性，（少而細(xì)原單可為陰性，少數(shù)可弱陽性，（少而細(xì)小，常彌散分布）小，常

6、彌散分布）。急性早幼粒細(xì)胞白血病與急性單核細(xì)胞急性早幼粒細(xì)胞白血病與急性單核細(xì)胞白血病鑒別白血病鑒別AML-M3 強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性 組織細(xì)胞白血病、惡性組織細(xì)胞病與急組織細(xì)胞白血病、惡性組織細(xì)胞病與急單單前兩者陰性前兩者陰性2. 成熟中性粒細(xì)胞過氧化物酶活性的變化成熟中性粒細(xì)胞過氧化物酶活性的變化活性增高：再生障礙性貧血、感染、急活性增高：再生障礙性貧血、感染、急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血性淋巴細(xì)胞白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病病活性減低：急粒、慢粒、急單、活性減低：急粒、慢粒、急單、MDS、放射病、退化性中性粒細(xì)胞放射病、退化性中性粒細(xì)胞蘇丹黑染色蘇丹黑染色原理：能溶解于細(xì)胞內(nèi)含脂結(jié)構(gòu)中，使

7、原理：能溶解于細(xì)胞內(nèi)含脂結(jié)構(gòu)中，使脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色。脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色。正常細(xì)胞的染色反應(yīng)同（染色）正常細(xì)胞的染色反應(yīng)同（染色）臨床評價臨床評價染色特異性高于染色染色特異性高于染色染色敏感性高于染色染色敏感性高于染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（）（） 原理：中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的原理：中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的堿性磷酸酶堿性磷酸酶在在PH9.6的的堿性條件下堿性條件下能水解能水解磷酸奈酚磷酸奈酚鈉鈉底物，生成底物，生成奈酚奈酚，后者與，后者與偶氮鹽偶氮鹽偶聯(lián)偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀定位于胞質(zhì)中的形成不溶性的有色沉淀定位于胞質(zhì)中的酶活性處。酶活性處。中

8、性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（）原理：原理： 磷酸奈酚鈉底物磷酸奈酚鈉底物 PH9.6 堿性磷酸酶堿性磷酸酶(中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中) 奈酚奈酚+偶氮鹽偶氮鹽 (有色沉淀有色沉淀)正常血細(xì)胞染色反應(yīng)正常血細(xì)胞染色反應(yīng) NAP主要存在于中性成熟粒細(xì)胞主要存在于中性成熟粒細(xì)胞(桿桿狀狀分葉分葉) 參考值：成人參考值：成人NAP陽性率陽性率10%-40%； NAP積分積分 40-80分分積分增加：積分增加： 細(xì)菌性感染細(xì)菌性感染、再生障礙性貧血再生障礙性貧血、骨骨髓增殖性疾病髓增殖性疾病、慢性粒細(xì)胞白血?。?、慢性粒細(xì)胞白血?。铀倨?、急變期）、急性淋巴細(xì)胞白血病、速期、

9、急變期）、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、惡性淋巴瘤、骨慢性淋巴細(xì)胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌、腎上腺糖皮質(zhì)激素及雄激素髓轉(zhuǎn)移癌、腎上腺糖皮質(zhì)激素及雄激素治療后等。治療后等。積分下降：積分下降：慢性粒細(xì)胞白血?。云冢?、陣發(fā)性慢性粒細(xì)胞白血?。云冢?、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、骨髓增生異常綜合睡眠性血紅蛋白尿、骨髓增生異常綜合癥、惡性組織細(xì)胞病等。癥、惡性組織細(xì)胞病等。疾病的鑒別疾病的鑒別1.類白血病反應(yīng)慢性粒細(xì)胞性白類白血病反應(yīng)慢性粒細(xì)胞性白血病血病2.細(xì)菌性感染病毒性感染細(xì)菌性感染病毒性感染3.急粒急淋急粒急淋4.惡性淋巴瘤惡性組織細(xì)胞病惡性淋巴瘤惡性組織細(xì)胞病5. 惡性組織

10、細(xì)胞病反應(yīng)性組織細(xì)胞增惡性組織細(xì)胞病反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥多癥6. 真性紅細(xì)胞增多癥繼發(fā)性紅細(xì)胞增真性紅細(xì)胞增多癥繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥多癥7.原發(fā)性血小板增多癥繼發(fā)性血小板原發(fā)性血小板增多癥繼發(fā)性血小板增多癥增多癥8. 再生障礙性貧血再生障礙性貧血 陣發(fā)性睡眠性血紅蛋陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿白尿過碘酸過碘酸-雪夫反應(yīng)雪夫反應(yīng)原理：原理：乙二醇基（多糖類物質(zhì)中）乙二醇基（多糖類物質(zhì)中）過碘酸過碘酸雙醛基無色品紅雙醛基無色品紅紫紅色化合物紫紅色化合物正常血細(xì)胞染色反應(yīng)正常血細(xì)胞染色反應(yīng)粒細(xì)胞系統(tǒng)粒細(xì)胞系統(tǒng)原粒原粒（可為陰性）（可為陰性）分葉（陽性程度逐漸增分葉（陽性程度逐漸增強(qiáng)）強(qiáng)）嗜酸胞質(zhì)呈紅色嗜酸胞

11、質(zhì)呈紅色,顆粒不著色顆粒不著色嗜堿反之嗜堿反之紅細(xì)胞系統(tǒng)紅細(xì)胞系統(tǒng) 陰性陰性單核細(xì)胞系統(tǒng)單核細(xì)胞系統(tǒng) 原單原單（可為陰性）（可為陰性）,其他為陽性。其他為陽性。淋巴：大多陰性，少數(shù)陽性。淋巴：大多陰性，少數(shù)陽性。巨核及血小板：陽性巨核及血小板：陽性臨床評價臨床評價紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中幼紅細(xì)胞可陽性（均勻紅色或塊狀）征中幼紅細(xì)胞可陽性（均勻紅色或塊狀）白細(xì)胞系統(tǒng)疾?。喊准?xì)胞系統(tǒng)疾?。?急淋：（原幼淋細(xì)胞陽性率升高，呈粗急淋：（原幼淋細(xì)胞陽性率升高，呈粗顆?；驂K狀）顆?；驂K狀） 急粒：少數(shù)原粒呈陽性急粒：少數(shù)原粒呈陽性 急單：可呈陽性急單：可呈陽

12、性M5 PAS(+)AML-M6AML-M7M7 PAS(+)-醋酸萘酚酯酶染色醋酸萘酚酯酶染色原理原理 -醋酸萘酚醋酸萘酚 PH中性中性 -醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶 -萘酚萘酚+重氮鹽重氮鹽(堅牢藍(lán)堅牢藍(lán)B) (黑色或灰黑色黑色或灰黑色) 正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞（均可單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞（均可+）單核細(xì)胞的陽性可被氟化鈉抑制。單核細(xì)胞的陽性可被氟化鈉抑制。氟化鈉抑制率氟化鈉抑制率=抑制前的陽性率抑制前的陽性率/積分積分-抑制后的抑制后的 抑制前的陽性率抑制前的陽性率/積分積分 100% 臨床評價：臨床評價：1、鑒別白血病類型、鑒別白血病類型急

13、單急單急粒急粒急性早幼粒細(xì)胞白血?。◤?qiáng)陽性，不急性早幼粒細(xì)胞白血?。◤?qiáng)陽性，不被抑制）被抑制）急性粒單細(xì)胞白血病急性粒單細(xì)胞白血病其他脂酶染色其他脂酶染色氯乙酸氯乙酸AS-D奈酚脂酶染色奈酚脂酶染色 幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞、特異性高。幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞、特異性高。 臨床意義：臨床意義： 急性粒細(xì)胞白血病有一定數(shù)量白血病細(xì)急性粒細(xì)胞白血病有一定數(shù)量白血病細(xì)胞陽性，可以肯定白血病細(xì)胞中有粒系成分，胞陽性，可以肯定白血病細(xì)胞中有粒系成分，陰性不排除急粒。陰性不排除急粒。 醋酸醋酸AS-D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色 染色結(jié)果染色結(jié)果 、臨床意義基本同、臨床意義基本同-NAE染色。染色。 -丁酸萘酚酯酶染色丁

14、酸萘酚酯酶染色 臨床意義同臨床意義同-NAE染色，特異性低染色，特異性低于于-NAE染色染色酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色原理：原理：偶氮偶聯(lián)法：偶氮偶聯(lián)法：Gomori硫化鉛法硫化鉛法抗酒石酸酸性磷酸酶染色抗酒石酸酸性磷酸酶染色臨床評價：臨床評價：診斷多毛細(xì)胞白血病診斷多毛細(xì)胞白血病 毛細(xì)胞呈陽性，陽性反應(yīng)不被毛細(xì)胞呈陽性，陽性反應(yīng)不被L-酒石酒石酸抑制。酸抑制。鐵染色鐵染色1、原理：、原理： 鐵鐵+亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鉀酸性環(huán)境酸性環(huán)境 亞鐵氰化鐵（蘭色）亞鐵氰化鐵（蘭色）2、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)貯存鐵部位：巨噬細(xì)胞和幼紅細(xì)胞貯存鐵部位：巨噬細(xì)胞和幼紅細(xì)胞細(xì)胞外鐵細(xì)胞外鐵

15、：骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中：骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中呈彌散藍(lán)色、顆粒狀、小珠狀或塊狀呈彌散藍(lán)色、顆粒狀、小珠狀或塊狀可將細(xì)胞外鐵分為（可將細(xì)胞外鐵分為（-）、（）、（+）、（）、（+）（+）、（）、（+）。）。細(xì)胞內(nèi)鐵細(xì)胞內(nèi)鐵：指存在于中幼紅、晚幼紅、：指存在于中幼紅、晚幼紅、成熟紅細(xì)胞中的鐵。成熟紅細(xì)胞中的鐵。鐵粒幼紅細(xì)胞鐵粒幼紅細(xì)胞：胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒：胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。的幼紅細(xì)胞。環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞：幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)色：幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)色顆粒在顆粒在 10(6)顆以上，圍核周顆以上，圍核周2/3(1/2)以以上者。上者。細(xì)胞外鐵細(xì)胞外鐵細(xì)胞內(nèi)鐵細(xì)胞內(nèi)鐵環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞環(huán)形

16、鐵粒幼細(xì)胞結(jié)果判讀：結(jié)果判讀：細(xì)胞外鐵：細(xì)胞外鐵： 可分五級標(biāo)準(zhǔn)可分五級標(biāo)準(zhǔn) (-)：無顆粒：無顆粒 (+)：有少數(shù)鐵顆?；蚺家婅F小珠：有少數(shù)鐵顆?；蚺家婅F小珠(顆粒體積顆粒體積大于嗜酸性粒細(xì)胞的顆粒者稱為鐵珠大于嗜酸性粒細(xì)胞的顆粒者稱為鐵珠)。 (+)：有較多的鐵顆粒和小珠。：有較多的鐵顆粒和小珠。 (+)：有很多的鐵顆粒、小珠和少數(shù)小塊：有很多的鐵顆粒、小珠和少數(shù)小塊狀。狀。 (+)：有極多鐵顆粒、小珠，有很多的?。河袠O多鐵顆粒、小珠，有很多的小塊，密集成堆。塊，密集成堆。 細(xì)胞內(nèi)鐵：細(xì)胞內(nèi)鐵： 用油鏡計數(shù)用油鏡計數(shù)100個中、晚幼紅細(xì)胞，記錄胞漿個中、晚幼紅細(xì)胞，記錄胞漿中含有藍(lán)色鐵粒的細(xì)胞中含有藍(lán)色鐵粒的細(xì)胞(鐵粒幼紅細(xì)胞鐵粒幼紅細(xì)胞)的百分率。的百分率。 根據(jù)細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒的數(shù)目、大小、染色深淺和根據(jù)細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒的數(shù)目、大小、染色深淺和顆粒分布情況，將鐵粒幼紅細(xì)胞分為四型：顆粒分布情況，將鐵粒幼紅細(xì)胞分為四型： I 型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒1-2粒；粒； 型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒3-5粒；粒； 型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒610粒；粒； 型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒型：幼紅細(xì)胞內(nèi)含鐵粒10粒。粒。參考范圍參考