食品毒理學實驗講義

1、實驗一 毒物損害的形態(tài)表現(xiàn)一、實驗目的1. 通過本實驗，掌握毒物的形態(tài)損害作用；2. 學會毒物形態(tài)損害的表現(xiàn)及如何記錄相關實驗現(xiàn)象。二、實驗原理有關重金屬銅、鋅、鉻、鎘對魚類的急性毒性研究國內(nèi)已有許多報道，魚類早期發(fā)育是整個生活史中對各種污染物最為敏感的階段， 用以作為急性毒性試驗具有快速、敏感、經(jīng)濟有效等特點，是生物測試保護天然水體的重要方法。 鯽魚是我國重要的經(jīng)濟魚類, 其分布面廣而數(shù)量大, 個體生長快, 性成熟時間短, 繁殖季節(jié)長, 在人工控制飼養(yǎng)條件下可常年繁殖, 選擇鯽魚進行重金屬離子毒性實驗, 具有一定代表性。本實驗以鯽魚為研究對象，向其生長環(huán)境中加入重金屬硫酸銅，觀察其形態(tài)損傷，

2、希望在形態(tài)方面，有利于水體污染的觀察。三、實驗試劑、儀器及動物1. 實驗動物鯽魚幼魚, 購自魚市場。 實驗魚在水族箱中馴養(yǎng)7 d 以上， 暫養(yǎng)期間活動正常， 無病， 死亡率低于5%； 實驗前1 d 停止投餌， 選擇身體健康，反應靈敏，大小基本一致的幼魚隨機分組。2. 實驗試劑CuSO4, 先配制成質(zhì)量濃度為3000 mg/ L 的母液, 再根據(jù)需要稀釋成各質(zhì)量濃度。3. 實驗儀器聚乙烯塑料水族箱，小型魚類充氧機。四、實驗方法與步驟1. 實驗動物的馴養(yǎng)實驗魚在水族箱中馴養(yǎng)7 d 以上， 暫養(yǎng)期間活動正常， 無病， 死亡率低于5%； 實驗前1 d 停止投餌。2. 實驗動物的分組采用隨機實驗進行分組

3、，將21只鯽魚隨機分成7組，其中一組為空白對照組，另外六組為實驗組。3. 實驗動物的染毒采用靜水法生物測試，實驗期間不更換實驗液， 全天充氣。為防止餌料影響， 實驗期間不喂食。 為確定質(zhì)量濃度的大致范圍, 先作預實驗, 估計CuSO4的7個質(zhì)量濃度值, 在每一個質(zhì)量濃度的水族箱內(nèi)放入3 尾鯽魚, 分別觀察24 h、48h、96h, 找出各金屬的100% 致死質(zhì)量濃度和最大耐受質(zhì)量濃度。 再根據(jù)預實驗結果設6個質(zhì)量濃度組及1個對照組, 每一質(zhì)量濃度放魚5尾, 在曝露的過程中觀察它們的形態(tài)損傷。五、中毒癥狀觀察染毒后認真觀察中毒發(fā)生、發(fā)展過程，中毒特點和毒作用靶器官，記錄各組幼魚24、48、96

4、h 的形態(tài)損傷。中毒癥狀的觀察現(xiàn)象填入附錄中的表格中。六、注意事項1. 防止操作者中毒。2. 剩余受試化學物應在教師指導下銷毀實驗一 附錄：預實驗實驗結果：（在實驗報告上所有的圖表自己手寫）CuSO4濃度（mg/L）24 h形態(tài)損傷48 h形態(tài)損傷96 h形態(tài)損傷游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)6.3是（0）是（1）是（1）14.4是（0）是（1）是（1）23.4是（1）是（1）是（2）32.4是（1）是（1）是（2）43.2是（2）是（2）是（3）54.0是（2）是（3）是（3）0（對照

5、）無（0）無（0）無（0）正式實驗實驗結果：CuSO4濃度（mg/L）24 h形態(tài)損傷48 h形態(tài)損傷96 h形態(tài)損傷游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)游動是否活躍皮膚是否出現(xiàn)潰爛是否死亡及死亡個數(shù)濃度1濃度2濃度3濃度4濃度5濃度60（對照）經(jīng)上述實驗可得，重金屬銅對鯽魚的形態(tài)損傷表現(xiàn)為：實驗二 毒物的急性毒性試驗一、實驗目的1. 掌握急性毒性試驗的基本步驟及如何設計染毒的劑量與分組；2. 掌握LD50的測定方法及計算方法。二、實驗原理急性毒性是機體一次接觸或24h內(nèi)多次接觸大劑量外源化學物后所引起的快速劇烈的中毒效應。硫酸銅是常見的

6、一種化學毒物，魚類早期發(fā)育是整個生活史中對各種污染物最為敏感的階段，用以作為急性毒性試驗具有快速、敏感、經(jīng)濟有效等特點，是生物測試保護天然水體的重要方法。本實驗以鯽魚為研究對象，向其生長環(huán)境中加入重金屬硫酸銅，觀察硫酸銅急性毒性反應的特征。三、實驗試劑、儀器及動物1. 實驗試劑硫酸銅，先配制成質(zhì)量濃度為3 000 mg/ L 的母液, 再根據(jù)需要稀釋成各質(zhì)量濃度。2. 實驗儀器聚乙烯塑料水族箱，小型魚類充氧機。3. 實驗動物鯽魚幼魚, 購自魚市場。 四、實驗方法及步驟1. 實驗動物馴養(yǎng)及分組實驗動物馴養(yǎng)及分組見實驗一。2. 預試驗采用靜水法生物測試，實驗期間不更換實驗液， 全天充氣。為防止餌料

7、影響， 實驗期間不喂食， 估計硫酸銅的7個質(zhì)量濃度值，求出受試化學物的大致致死范圍（0-100%）。3. 正式試驗根據(jù)預備實驗結果設6個質(zhì)量濃度組及一個對照組, 每一質(zhì)量濃度放魚5尾, 在曝露的過程中觀察它們死亡效應。中毒后, 多次刺激無反應判斷為死亡個體, 從水中隨時撈出。 五、LD50的計算記錄各組幼魚24、48、96 h 死亡數(shù), 計算死亡率, 畫出硫酸銅濃度與死亡率的曲線. 找出各重金屬的半數(shù)致死質(zhì)量濃度( LD50)。實驗數(shù)據(jù)填寫在附錄中的表格中。六、注意事項1. 不要一味將注意力集中在高劑量組的動物，因為這些動物往往死亡很快，反而不容易觀察到中毒的發(fā)展過程。2.觀察記錄應盡量完整、

8、具體。實驗二 附錄：CuSO4濃度（mg/L）24 h死亡率48 h死亡率96 h死亡率死亡個數(shù)死亡率死亡個數(shù)死亡率死亡個數(shù)死亡率濃度1濃度2 濃度3濃度4濃度5濃度6對照實驗數(shù)據(jù)：依據(jù)上述實驗數(shù)據(jù)分別畫出染毒24h、48h、72h及96h后的劑量-反應曲線，得染毒24h、48h、72h及96h后的LD50，各曲線如下所示：（ 此區(qū)域畫曲線）由上述曲線可得，染毒24h、48h及96h后的LD50分別為：實驗三 毒物的安全濃度實驗一、實驗目的1. 掌握安全濃度的概念；2. 掌握安全濃度測定的基本步驟及計算方法。二、實驗原理安全質(zhì)量濃度即為某一毒物對動物體不造成損傷的質(zhì)量濃度范圍，通常由LC50

9、×0.1計算出。硫酸銅是常見的一種化學毒物，魚類早期發(fā)育是整個生活史中對各種污染物最為敏感的階段，用以作為急性毒性試驗具有快速、敏感、經(jīng)濟有效等特點，是生物測試保護天然水體的重要方法。本實驗以鯽魚為研究對象，向其生長環(huán)境中加入重金屬硫酸銅，計算硫酸銅對鯽魚的安全質(zhì)量濃度。三、實驗動物、試劑及儀器1. 實驗動物鯽魚幼魚, 購自魚市場。 實驗魚在水族箱中馴養(yǎng)7 d 以上， 暫養(yǎng)期間活動正常， 無病， 死亡率低于5%； 實驗前1 d 停止投餌， 選擇身體健康，反應靈敏，大小基本一致的幼魚隨機分組。2. 實驗試劑CuSO4,先配制成質(zhì)量濃度為3000 mg/ L 的母液, 再根據(jù)需要稀釋成各

10、質(zhì)量濃度。3. 實驗儀器聚乙烯塑料水族箱、小型魚類充氧機。四、實驗步驟1. 實驗動物馴養(yǎng)及分組實驗動物馴養(yǎng)及分組見實驗一。2. 染毒步驟與方法采用靜水法生物測試，實驗期間不更換實驗液， 全天充氣。為防止餌料影響， 實驗期間不喂食。 為確定質(zhì)量濃度的大致范圍, 先作預備實驗, 估計CuSO4的7個質(zhì)量濃度值, 在每一個質(zhì)量濃度的水族箱內(nèi)放入3 尾鯽魚, 分別觀察24 h、48h、96h，找出各金屬的100% 致死質(zhì)量濃度和最大耐受質(zhì)量濃度。 再根據(jù)預實驗結果設6個質(zhì)量濃度組及一個對照組, 每一質(zhì)量濃度放魚5尾, 在曝露的過程中觀察它們的行為、中毒癥狀、死亡等效應。中毒后， 多次刺激無反應判斷為死亡個體, 從水中隨時撈出。 五、安全質(zhì)量濃度的計算記錄各組幼魚24、48、96 h 死亡數(shù), 計算死亡率, 畫圖 求出各重金屬的半數(shù)致死質(zhì)量濃度( LC50) ，由公式LC50 ×0.1計算出