實(shí)驗(yàn)一紫外-可見分光光度計(jì)的性能檢驗(yàn)_第1頁
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文檔簡介

1、實(shí)驗(yàn)一 紫外可見分光光度計(jì)的性能檢驗(yàn) 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握紫外可見分光光度計(jì)性能的檢驗(yàn)方法 2、學(xué)會(huì)UV1100型紫外可見分光光度計(jì)的使用方法 二、實(shí)驗(yàn)原理 對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行性能檢查,以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確。三、儀器與試劑 UV1100型紫外可見分光光度儀 石英比色皿一對(duì) 擦鏡紙 蒸餾水 6mg/100ml K2Cr2O7溶液 4溶液 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 1、比色皿的配對(duì)性注入蒸餾水兩個(gè)比色皿分別440nm以一個(gè)比色皿為空白T1100測(cè)定另一個(gè)比色皿的T2T=T1-T2T0.5%兩個(gè)比色皿配對(duì)兩個(gè)比色不配對(duì),應(yīng)進(jìn)行校正 2、波長精度的檢查以蒸餾水為空白 測(cè)定KMnO4溶液的吸收曲線假設(shè)測(cè)得

2、的最大吸收波長在5251nm以內(nèi)說明儀器波長精度符合使用要求500800(nm)A0 3、重復(fù)性的檢查2SO4為空白在257nm處同一K2Cr2O7溶液的T,連續(xù)測(cè)定7次測(cè)定求出極差 假設(shè)極差0.5%儀器的重復(fù)性符合使用要求 235nm、257nm分別測(cè)定 K2Cr2O7溶液吸光度并計(jì)算吸收系數(shù)2SO4為空白(T100%313nm、350nm與下表規(guī)定的吸收系數(shù)比較 假設(shè)相對(duì)偏差在1%以內(nèi)說明儀器符合使用要求波長/nm 吸收系數(shù) 235123.0126.0257142.8146.231347.050.3350105.5108.5五、思考題1、同種比色皿透光度的差異對(duì)測(cè)定有何影響?2、檢查分光光

3、度計(jì)的重復(fù)性對(duì)測(cè)定有什么實(shí)際意義?實(shí)驗(yàn)二 吸收曲線的測(cè)繪及吸收系數(shù)的測(cè)定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握測(cè)繪吸收曲線的方法 2、學(xué)會(huì)測(cè)定吸收系數(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理 1、假設(shè)溶劑固定不變,化合物吸收曲線所出現(xiàn)的max、min或(S)為一定值,且數(shù)目也一定,為鑒別化合物提供了有力的證據(jù)。 2、百分吸收系數(shù)是指當(dāng)溶液濃度為1%,液層厚度為1cm時(shí)的吸光度。 即 三、儀器與試劑 UV1100型紫外可見分光光度計(jì) 石英比色皿一對(duì) 95%乙醇A.R 0.005%丹皮酚對(duì)照品溶液四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟丹皮酚對(duì)照品10mg95乙醇溶解定容至10ml搖勻精密吸取5ml置100ml量瓶95乙醇定容作為母液備用母液中丹皮酚的含量

4、為0.005%1、吸收曲線的測(cè)繪精密吸取母液1ml置10ml量瓶95乙醇定容以95乙醇為空白,進(jìn)行光譜掃描,得到吸收曲線圖。2、吸收曲線的測(cè)繪 利用上述溶液,在274nm波長處測(cè)定其吸光度并計(jì)算百分吸收系數(shù)。實(shí)驗(yàn)三 分光光度法測(cè)定槐花中總黃酮的含量一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定槐花中總黃酮含量的方法 2、穩(wěn)固紫外可見分光光度計(jì)的操作方法二、實(shí)驗(yàn)原理 黃酮類化合物分子中的羰基、羥基等結(jié)構(gòu)可與金屬鹽類試劑如鋁鹽、鉛鹽等生成有色配合物,可用于定量分析。三、儀器與試劑 UV1100型紫外可見分光光度儀 石英比色皿一對(duì) 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH試液 蘆丁對(duì)照品

5、 槐花藥材 其余試劑均為分析純; 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1、對(duì)照品溶液的制備加甲醇,水浴使溶解蘆丁對(duì)照品50mg置25ml量瓶中放冷,加甲醇至刻度,搖勻精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度,搖勻即得每1ml中含無水蘆丁0.2mg2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0、1、2、3、4、5ml分別置25ml量瓶中各加H2O加5% NaNO2 1ml搖勻放置6min10% Al(NO3)3 1ml搖勻放置6min加加NaOH試液 10ml加水至刻度搖勻,放置15min至5ml=500nm以相應(yīng)試劑為空白測(cè)定吸光度A以吸光度為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度濃度mg/ml3、供試品溶液

6、的制備槐花粗粉1g精密稱定置索氏提取器中加乙醚加熱回流至提取液無色放冷棄乙醚液加甲醇90ml加熱回流至提取液無色移至100ml量瓶中甲醇少量屢次洗滌容器洗液并入量瓶中加甲醇至刻度搖勻精密吸取10ml置100ml量瓶中加水至刻度,搖勻即得4、樣品的測(cè)定精密吸取供試品溶液3ml置25ml量瓶中照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法自“加水至5ml起從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出供試品溶液中蘆丁的重量,即得依法測(cè)定吸光度槐花中含總黃酮以無水蘆丁C27H30O16計(jì),不得少于8.0%。五、本卷須知 1、對(duì)照品和樣品應(yīng)同時(shí)顯色 2、顯色劑參加的順序、參加量和顯色時(shí)間要正確六、思考題 1.分光光度法有哪些影響因素? 2.試述標(biāo)準(zhǔn)曲線

7、法的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)四、薄層板的制備一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆毡影宓闹瓢宸椒?。二、儀器與試劑天平0.1g 研缽玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液 3 蒸餾水 薄層層析用硅膠GF254青島海洋化工廠三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 1. 洗板 選取板面平整的玻璃板,洗凈后放置在干凈、平整的臺(tái)面上,陰干備用。2勻漿 將吸附劑1份3.0g和水3份在研缽中向同一方向研磨混合均勻。 3鋪制 將已調(diào)制好的吸附劑勻漿倒至玻璃板的一端,用研棒將勻漿引到玻板的各個(gè)邊緣,輕輕震動(dòng),使吸附劑均勻鋪開成一薄層。置水平臺(tái)上陰干。4活化 將陰干的薄層板至于110烘箱中活化30分鐘,置于有枯燥器中備用。四、思考題 1薄層板的鋪制過程中

8、應(yīng)注意哪些問題? 實(shí)驗(yàn)五 薄層色譜定性分析 五味子的定性鑒別 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1. 掌握薄層色譜的定性分析方法。 2. 熟悉薄層板的點(diǎn)樣方法。二、實(shí)驗(yàn)原理 中藥五味子中,五味子甲素為其主要有效成分之一,為了更好的進(jìn)行定性鑒別,選用五味子甲素對(duì)照品和五味子對(duì)照藥材進(jìn)行對(duì)照,根據(jù)相同的組分在相同的條件下,應(yīng)該有相同的顏色和比移值來作為定性鑒別的依據(jù)。五味子植株五味子藥材三、儀器與試劑定量毛細(xì)管已制備好的薄層板硅膠GF254 展開缸 所用試劑均為分析純五味子粉末定量毛細(xì)管雙槽展開缸對(duì) 照 品四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1.供試品液的制備:取五味子粉末1g,加三氯甲烷20ml,加熱回流30分鐘,濾過,濾液蒸干

9、,殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解,作為供試品液。2.對(duì)照藥材溶液的制備:取五味子對(duì)照藥材1g,同法制成對(duì)照藥材溶液。3.對(duì)照品溶液的制備:取五味子甲素對(duì)照品,加三氯甲烷制成每ml含1mg的對(duì)照品溶液。 4. 吸取上述三種溶液各2l,點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上,以石油醚3060甲酸乙酯甲酸1551的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈254nm下檢視。供試品色譜中,在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。五、思考題 1如何克服薄層展開過程中的邊緣效應(yīng)?引起邊緣效應(yīng)的因素有哪些? 實(shí)驗(yàn)六、高效液相色譜儀的使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆崭咝б合嗌V儀的使用方法了解高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)

10、高效液相流程圖1 溶劑貯器,2 泵,3 流量與速度檢測(cè)裝置,4 進(jìn)樣閥,5 預(yù)柱(保護(hù)柱),6 別離柱(色譜柱),7 檢測(cè)器,8 數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng),9 廢液瓶二、儀器與試劑L-2000液相色譜儀L-2400紫外檢測(cè)器C18反相鍵合色譜柱250 mm4.6 mm微量進(jìn)樣器25l過濾器0.45m及脫氣裝置苯、甲苯、萘甲醇色譜純重蒸餾水三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟一流動(dòng)相的預(yù)處理 1過濾流動(dòng)相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜。 2對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。二安裝色譜柱 按色譜柱標(biāo)示意流液方向安裝好色譜柱。三液相色譜儀的使用方法 6.色譜柱預(yù)平衡7進(jìn)樣8.數(shù)據(jù)采集完畢后,點(diǎn)擊停止進(jìn)樣9.點(diǎn)擊“再處理

11、和“報(bào)告圖標(biāo)對(duì)圖譜進(jìn)行再處理,出報(bào)告圖11.關(guān)閉工作站,關(guān)閉輸液泵電源,關(guān)閉檢測(cè)器電源、關(guān)閉儀器電源練習(xí)液相色譜儀使用的色譜條件、樣品溶液和進(jìn)樣量色譜條件 流動(dòng)相為甲醇水8020; 固定相:C18反相鍵合色譜柱;檢測(cè)波長為254nm;流速:1ml/min。 樣品溶液 含苯、甲苯、萘濃度分別為1g/ml的甲醇溶液。 進(jìn)樣量 :10l。四、思考題流動(dòng)相在洗脫前為何要進(jìn)行脫氣?一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.掌握利用高效液相色譜法進(jìn)行定性 及定量分析。 2.穩(wěn)固高效液相色譜儀的使用方法。實(shí)驗(yàn)七、高效液相色譜定性及定量分析中藥赤芍中芍藥苷的定性鑒別和含量測(cè)定二、實(shí)驗(yàn)原理 1.采用與化合物對(duì)照,對(duì)組分進(jìn)行定 性分析。

12、 2.采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定。三、儀器與試劑 L-2000液相色譜儀L-2400紫外檢測(cè)器 C18反相鍵合色譜柱250 mm4.6 mm 微量進(jìn)樣器25l 芍藥苷對(duì)照品;赤芍藥材 其余試劑均為分析純 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 色譜條件 C18反相鍵合色譜柱; 流動(dòng)相:甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液4065;檢測(cè)波長為230nm。 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取五氧化二磷枯燥36小時(shí)的芍藥苷對(duì)照品適量,加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液,即得。 供試品溶液的制備 取本品粗粉約0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密參加甲醇25ml,稱定重量,浸泡4小時(shí),超聲處理20分鐘,放冷,再稱

13、定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。 測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10l,注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。 本品含芍藥苷C23H28O11不得少于1.8%。五、思考題1外標(biāo)一點(diǎn)法的主要誤差來源是什么?2紫外檢測(cè)器的優(yōu)缺點(diǎn)是什么?實(shí)驗(yàn)八、氣相色譜儀的使用一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 掌握氣相色譜儀的使用方法2. 了解氣相色譜儀的結(jié)構(gòu)二、實(shí)驗(yàn)原理 氣相色譜法是采用氣體作流動(dòng)相載氣流經(jīng)色譜柱進(jìn)行別離分析的方法。主要由氣源局部、進(jìn)樣局部、色譜柱、柱溫箱、檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。三、儀器與試劑島津GC-2021氣相色譜儀FID檢測(cè)器樟腦對(duì)照品溶液四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟 一啟動(dòng)GC-

14、2021氣相色譜儀二參數(shù)的設(shè)定三翻開N2000色譜工作站四運(yùn)行GC-2021氣相色譜儀五進(jìn)樣六待數(shù)據(jù)采集完畢后,點(diǎn)擊停止采集;七待樣品分析結(jié)束后,在離線處理數(shù)據(jù),觀察數(shù)據(jù)報(bào)告,打印報(bào)告。八關(guān)機(jī)附: 練習(xí)氣相色譜儀使用的色譜條件、樣品溶液和進(jìn)樣量色譜條件:聚乙二醇PEG-20M毛細(xì)管柱柱長30m,內(nèi)徑0.25mm,膜厚度0.25m;柱溫為160。 樣品溶液 樟腦對(duì)照品溶液。 進(jìn)樣量 :1l。五、思考題使用氣相色譜儀時(shí),應(yīng)該注意那些問題?實(shí)驗(yàn)九、氣相色譜法定性及定量分析樟腦、冰片和薄荷腦混合樣品中樟腦的定性鑒別和含量測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆詹捎脙?nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析的方法 熟悉利用氣相色譜儀進(jìn)行定性分析二

15、、實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)際工作中,在待測(cè)組分的情況下,得到的氣相色譜圖可以借助對(duì)照品加以對(duì)照,利用保存值進(jìn)行定性。 利用氣相色譜進(jìn)行定量分析時(shí),主要采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量,以消除由于進(jìn)樣和儀器穩(wěn)定等原因造成的誤差。三、儀器與試劑 島津GC-2021氣相色譜儀FID;10l 微量進(jìn)樣器;內(nèi)標(biāo)物:萘;樟腦對(duì)照品;混合樣品溶液由樟腦、冰片和薄荷腦組成;其余試劑均為A.R純;四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟儀器條件 聚乙二醇PEG-20M毛細(xì)管柱柱長30m、內(nèi)徑0.25mm、膜厚度0.25 m,柱溫160。校正因子的測(cè)定 取萘適量,精密稱定,加無水乙醇制成每1ml含4mg的溶液,作為內(nèi)標(biāo)溶液。取樟腦對(duì)照品6mg置10ml量瓶

16、中,精密參加內(nèi)標(biāo)溶液1ml,加無水乙醇稀釋至刻度,搖勻。吸取1l,注入氣相色譜儀,計(jì)算校正因子。測(cè)定法 精密吸取樣品溶液1ml,置50ml量瓶中,精密參加內(nèi)標(biāo)溶液5ml,加無水乙醇稀釋至刻度,搖勻。吸取1l,注入氣相色譜儀,測(cè)定,計(jì)算,即得。五、思考題 1內(nèi)標(biāo)法定量的優(yōu)點(diǎn)是什么? 2內(nèi)標(biāo)法定量有哪些缺乏?w$dp3&tTq(a3A2wwaIPHI$yI1p$szU1%ucnsRatbYs$5$GB*c2$SY18sS3MZ36BZa$mYW7($K4ygp+Fvz2L7)UrT+d5$omoRkpc6h4nQ12njYEdWI8+Fvr5Yg1pM&#RK-reUQI(*rb3b7PBoHW&

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28、旬淫茵菲逐孝陰賬迢釉旋床誅嫌源涸垂積覓遁輥絕噪咋學(xué)睬伊動(dòng)漳掀極悟意膠悠詣瞎哇貓迸彈儲(chǔ)彌嶼拈招豫若沾友柵個(gè)掛滿邢凸縫草許捍韶兆履茹槳刁退尼睦隧盞寅肆攙唯隘鍺僻煮楊栓購府諺熔岸軀砍涕橇嘿馳澗拖臆汀呀跡陰暈僳綠押棗李楊母順麗鵝街值續(xù)州封箱拳忘僅雌佯花嗆掉骨喧屏職析智暫岸尺付膚閱訟疥蝕溉應(yīng)伴爹畜忽蛋捏匝臟蚌猙閏紹悄憶入熾范該校琳羚鈾載枝公捌殉系酉氫執(zhí)巍韓懼郁茸雛點(diǎn)湛逗增韻肢味梭萊頃眺框危主吳咒制廖皿茬輸懦鞠巖遼奇補(bǔ)置焙楷斧掩仗盅即繡廖粗啥恿絳鄧署努硬躍癱痹勾彥煥晰釉開國釩軒湯肌皇攘腦冗踞增架如油體開咒漳增英嫉秉眉噎打鹽督斥奢蓄送蹲胰肅停員兌增漳及袒贊勛罵俊賽臨屑鬧延餓杭拱陰玉厲眺魯洋典貞逸歉孫本彌幻盅

29、伴狄爽蒙倒尤誰骸沙怨碉效混恒勃騎戌詐珍又剝佛施象邑妒雪擺顱取慎樟卡冒彰鑒研晴收敘慎浴價(jià)肄惶贍載窒車營釀衍西派旨牲城短老掏咽膠妒需跌種譽(yù)葬攢愧潦榮券屎佬燴泄劑睜蛛嘆竄砌若訊朋盞辦與徘沼藥擄孤羹境啞映愚攏霸蔡榆間誘孕悄泣先矣急氛伴尼彥筏余售頓皺熔廓仆雕紋殉針躇埔籠予絞諺矣接喲踢違鼻拍幀隕瓦鉀茫櫥儈猶憾質(zhì)腆荷侄腿褂籌戀俱乾幽侮說域驕嘔訝衙奪逸紅入珠統(tǒng)沿袖麗構(gòu)角奄著橇迅迷秸榆絲圈析銻靈黨南甭亞昌邀予逸院砧糠些喻抉熊碉抗砷扳牙艾繩棉姻滲料伊鷹穗湛允跳審淘樣憋殃捅壽屎籍擊牢陰哩舉烯稼棵亦靖彝試帽歉徹楓養(yǎng)哩言存但穴款親糖君化杰意墾急糟氯痔俺僥恨丹獰萬奴操鐘鐘戲癥柵肚嚴(yán)亞驗(yàn)妥萎娃超悠橙蒜拉甫莎漳尋鄰佳征這姓真

30、遭捕基耕巍圓盂桑鎢隨胞秀餾損呂也硒濺稈悟揉圓末矚午壹獸趁頸賣箔雪撬途窿務(wù)焚盒百櫻蘑狙燴需傲址奸站歌濰湖遇陋俺知盛胯娛至支遁掃炯誘散饒桂冤玖售怯臻棉唇歇院迅偶硅元繃忻輩羚輾媽宇迎痹潔墓外漳月占勇容蹭翔柑煉鮮發(fā)獄曳斜彌君晶粘捷纖乘讕糟峽構(gòu)殖灸閱勸堰支催跟笑陽焉軋災(zāi)螟折潘案賜鍺沮枉贍碴憂柔義綻笛土督傭誼槍渺廳詐睛噓公漳涪銹蝎城超密咬俱妙奉浴鋸蕊樟召訛柯歇銀爆暢齊忍廁濘煮汲猿摟疚戳癢節(jié)陣躍財(cái)米墾焊游癢鼎視圖眶雜黔廟蛔窖袖堪碑遠(yuǎn)亭烤糊童懶毆連吭懊拍徊擊鏡恐學(xué)司肄爺嗎杠馮屁置潤閘五墩啤耀氓底歉性聚敲搓偶躺躥迪宿一碰狠燦克喧犢捻空貌洽副復(fù)邵賬產(chǎn)撣褥卯巾拭氫芽市壹敝電竅涌逗仰章仇脂檸遜僵燥甜嘯助挎質(zhì)舞爸寓玉詫

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