實驗人類ABO血型檢查

1、1實驗實驗9 9 人類人類ABOABO血型檢查與復(fù)血型檢查與復(fù)等位基因的遺傳平衡等位基因的遺傳平衡 羅向東羅向東江西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院江西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2指導(dǎo)書指導(dǎo)書: : 實驗實驗9 (P37)9 (P37) 3一、實驗?zāi)康囊弧嶒災(zāi)康膗通過實驗掌握人類類通過實驗掌握人類類ABOABO血型的檢測方法血型的檢測方法, ,進一步理進一步理解和掌握基因座位（解和掌握基因座位（locuslocus）和基因位點（）和基因位點（sitesite）的關(guān)系，復(fù)等位基因、基因共顯性概念的關(guān)系，復(fù)等位基因、基因共顯性概念u通過實驗進一步理解通過實驗進一步理解Hardy-WeinbergHardy-Wei

2、nberg定律的原理。定律的原理。4血液的組成是： 血漿： 優(yōu)良溶劑，含蛋白質(zhì)、葡萄糖、無機鹽、 代謝產(chǎn)物、 O2、CO2血液紅細(xì)胞：含血紅蛋白，容易和 O2和CO2結(jié)合 血細(xì)胞 白細(xì)胞：具免疫（淋巴細(xì)胞），吞噬機能血小板：止血，凝血血型：指紅細(xì)胞上所含抗原的不同，應(yīng)用抗原與抗體的反應(yīng)，產(chǎn)生凝集與否，對血型進行判斷：二、實驗原理二、實驗原理5血型血型 基因型基因型抗原抗原(紅紅細(xì)胞上細(xì)胞上)抗體抗體(血血清中清中)血清血清血細(xì)胞血細(xì)胞ABIAIBA B不能使任一血型不能使任一血型的紅細(xì)胞凝集的紅細(xì)胞凝集可被可被O,A,B型的型的血清凝集血清凝集AIAIA IAiA 可使可使B及及AB型的型的紅

3、細(xì)胞凝集紅細(xì)胞凝集可被可被O及及B型的型的血清凝集血清凝集BIBIBIBiB 可使可使A及及AB型的型的紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞凝集可被可被O及及A型的型的血清凝集血清凝集Oii 可使可使A,B及及AB型型的紅細(xì)胞凝集的紅細(xì)胞凝集不能被任一血不能被任一血型的血清凝集型的血清凝集人類ABO血型的表型和基因型及其凝集反應(yīng)輸血時，紅細(xì)胞的性質(zhì)比血清的性質(zhì)更為重要，因為血清中的抗體不僅可被不親和的組織吸收，同時可被受血者的血漿稀釋，使供血的濃度大大降低，不足以發(fā)生凝血反應(yīng)。6輸血原則：輸血原則：同血型者可以輸血；同血型者可以輸血；O型血者可以輸給任何血型的個體；型血者可以輸給任何血型的個體；AB型的人可以接受

4、任何血型的血液；型的人可以接受任何血型的血液；AB型的血液只能輸給型的血液只能輸給AB型的人。型的人。7 參試人員的手指毛細(xì)管血液兩滴參試人員的手指毛細(xì)管血液兩滴 三、實驗材料三、實驗材料顯微鏡、載玻片、抗顯微鏡、載玻片、抗A A、抗、抗B B、消毒藥棉、消毒藥棉、7070乙醇、一次性采血針乙醇、一次性采血針?biāo)?、儀器藥品四、儀器藥品81.1.在載玻片上劃分兩格，分別標(biāo)明在載玻片上劃分兩格，分別標(biāo)明A A與與B B，如下圖：，如下圖：2. 2. 用用70%70%酒精藥棉消毒手指采血部位（一般為無酒精藥棉消毒手指采血部位（一般為無名指末端），再用此藥棉消毒一次性采血針；名指末端），再用此藥棉消毒一

5、次性采血針；3.3.用采血針刺手指，擠出血液；一滴血液滴在用采血針刺手指，擠出血液；一滴血液滴在A A處，處，另一滴血液滴在另一滴血液滴在B B處；處；五、實驗步驟五、實驗步驟 A B94.4.在在A A處滴加抗處滴加抗A A標(biāo)準(zhǔn)血清一滴，在標(biāo)準(zhǔn)血清一滴，在B B處加抗處加抗B B標(biāo)準(zhǔn)血清一滴；標(biāo)準(zhǔn)血清一滴；5. 5. 分別用采血針調(diào)勻，調(diào)勻一處血液后揩擦分別用采血針調(diào)勻，調(diào)勻一處血液后揩擦采血針，再調(diào)另一處；采血針，再調(diào)另一處；6.6.兩分鐘內(nèi)肉眼觀察反應(yīng)結(jié)果，或用最低倍兩分鐘內(nèi)肉眼觀察反應(yīng)結(jié)果，或用最低倍顯微鏡觀察其凝聚的情況，反之可能產(chǎn)生顯微鏡觀察其凝聚的情況，反之可能產(chǎn)生假凝集現(xiàn)象。假

6、凝集現(xiàn)象。五、實驗步驟五、實驗步驟10血型血型抗抗A A試劑試劑抗抗B B試劑試劑A AB BO OABAB：表示凝集反應(yīng)；：表示無凝集反應(yīng)：表示凝集反應(yīng)；：表示無凝集反應(yīng) 五、實驗步驟五、實驗步驟117. 7. 復(fù)等位基因遺傳平衡的檢驗復(fù)等位基因遺傳平衡的檢驗u本實驗以人類本實驗以人類ABOABO血型為例，說明平衡群體血型為例，說明平衡群體中中3 3個復(fù)等位基因個復(fù)等位基因I IA A、I IB B、i i基因頻率的計算基因頻率的計算和平衡的檢驗。和平衡的檢驗。 設(shè)：復(fù)等位基因設(shè)：復(fù)等位基因I IA A、I IB B、I I的頻率分別為的頻率分別為p p、q q、r r。如果群體平衡如果群體

7、平衡, ,那么其表型、基因型及其頻率那么其表型、基因型及其頻率滿足下表滿足下表12基因型基因型IAIA IAiIBIB IBiIAIBii觀察的表觀察的表型頻率型頻率AB(AB)O預(yù)計的表預(yù)計的表型頻率型頻率P2+2prq2+2qr2pqr2p+q+r=1 p2+q2+r2+2pq+2pr+2qr=113 按下列公式從實際觀察得到的血型（表型）平率按下列公式從實際觀察得到的血型（表型）平率資料中分別計算資料中分別計算p p、q q、r r。 i i基因頻率基因頻率 r= Or= O I IB B基因頻率基因頻率q=1q=1A+OA+O 因為因為A+O=pA+O=p2 2+2pr+r+2pr+r

8、2 2=(p+r)=(p+r)2 2=(1=(1q)q)2 2 所以所以q=A+Oq=A+O 則則q=1q=1A+OA+O14 IA基因頻率p=1B+O 因為B+O=q2+2qr+r2=(q+r)2=(1p)2 所以p=B+O 所以p=1B+O15 現(xiàn)以實例說明某次ABO血型調(diào)查結(jié)果與hardyweinberg平衡相適合的程度。資料來自某城市隨機抽樣6000個中國人的ABO血型的調(diào)查，其分布及其相關(guān)計算如下表 血型 A B AB O 總計 數(shù)目（O）1920 1627 607 1846 6000 頻率 0.320 0 0.2716 0.10116 0.30766 116 基因頻率：r=O=0.

9、30766 =0.55486p=1B+O =10.27116+0.30766 =0.2392 q=1A+O =10.3200+0.30766 =0.2059417 下面就此隨機樣本做檢驗血型 A B AB O理論個體數(shù)理論個體數(shù) N(p2+2pr) N(q2+2qr) N(2pq) N(r2)理論個體數(shù)理論個體數(shù)(C) 1926 1638 594 1842實際測量數(shù)實際測量數(shù) 1920 1627 607 1846 6000 (OC)2 / C 0.019 0.074 0.285 0.009 0.387N=6000, =0.387 查查表，這里要注意，由于計算表，這里要注意，由于計算預(yù)計的中血型

10、頻數(shù)時，需要從實得資料中計算基因預(yù)計的中血型頻數(shù)時，需要從實得資料中計算基因頻率頻率p、q（個基因頻率的變數(shù)中，只有任意兩個是（個基因頻率的變數(shù)中，只有任意兩個是獨立變數(shù)），自由度應(yīng)再減去，所以獨立變數(shù)），自由度應(yīng)再減去，所以df=3-2=1,從表中可以查到從表中可以查到df=1,p=0.05=3.841，而對應(yīng)的，而對應(yīng)的2=0.387的的p值大于值大于0.05，表明此樣本符合，表明此樣本符合hardyweinberg定律。定律。 18六、作業(yè) 1. 1. 確定自己的血型確定自己的血型 2. 2. 表述全班表述全班ABOABO血型頻率血型頻率 3. 3. 檢驗復(fù)等位基因是否平衡檢驗復(fù)等位基因是否平衡。 20082012 20082012 年結(jié)果年結(jié)