花粉管通道法導入PPT課件

1、研究意義利用黑籽南瓜有抗瓜類枯萎病的特性，用作砧木嫁接黃瓜、西瓜、甜瓜等作物，嫁接后的黃瓜，生長勢旺，根系發(fā)達，耐旱耐寒，抗逆力強，高抗黃瓜枯萎病，使黃瓜增產(chǎn)增收，在北方高效節(jié)能日光溫室中栽培，曾創(chuàng)畝產(chǎn)值2萬元的紀錄 第1頁/共11頁黃瓜病害第2頁/共11頁大片段導入法 近年來可轉(zhuǎn)化載體BIBAC2、TAC等已被用于番茄、矮牽牛、擬南芥、水稻、油菜、大豆、甜菜、香蕉等物種基因組文庫或亞庫的構(gòu)建。 而且在擬南芥（Tsujimoto et al., 2003），水稻和馬鈴薯（Kubo et al., 2005）中已經(jīng)實現(xiàn)了大片段DNA的轉(zhuǎn)移。 第3頁/共11頁 Hamilton等通過農(nóng)桿菌介導的方

2、法將克隆在BIBAC2中的完整的150Kb的人類DNA片段轉(zhuǎn)化進了煙草和番茄，而且能在受體基因組中穩(wěn)定，多代沒有發(fā)現(xiàn)基因沉默14。 Liu等（2000）利用TAC載體已分別將80Kb的插入片段轉(zhuǎn)到了擬南芥和水稻中，Qu 等（2003）用TAC將45Kb的片段轉(zhuǎn)入水稻中。 第4頁/共11頁 因此，大片段基因組可轉(zhuǎn)化載體文庫在未來研究中有很好的前景。 第5頁/共11頁研究目標 構(gòu)建第一個高質(zhì)量的云南黑籽南瓜基因組大片段可轉(zhuǎn)化細菌人工染色體文庫。 從文庫中篩選獲得帶黑籽南瓜抗病基因同源片段（STK類、NBS-LRR類）的陽性侯選克隆一批。獲得20個轉(zhuǎn)化用陽性克隆。 獲得有黑籽南瓜大片段基因組DNA的

3、黃瓜20個“插入系”，它們攜帶的黑籽南瓜基因組DNA累計達到1.6Mb(20 X 80kb=1.6Mb)。 獲得一批具有部分黑籽南瓜遺傳性狀，部分抗病能力顯著提高的黃瓜“插入系”，這些“插入系”是黃瓜育種的直接或中間材料，也是研究黑籽南瓜基因及其功能的工具材料。 培養(yǎng)研究生數(shù)名、發(fā)表高檔次學術(shù)論文3篇 第6頁/共11頁一、技術(shù)路線BIBAC載體 藥用野生稻基因組DNA 提取Plug制備 質(zhì)粒的提取純化、酶切線性部分酶切消化，脈沖電脈選擇片段化、去磷酸化（60100kb)連接、轉(zhuǎn)化、克隆, -700保存文庫參照已報道植物抗病基因保守序列,設計合成簡并引物 PCR法篩選克隆20個帶抗病同源序列的B

4、IBAC克隆 第7頁/共11頁回收PCR產(chǎn)物 提取質(zhì)粒，花粉管通道法導入黃瓜 測序,設計合成特異引物PCR檢測 獲得插入系 表型和抗病鑒定 分析抗病基因進入栽培稻的類型和數(shù)量 黃瓜創(chuàng)新性材料 收獲黃瓜種子，發(fā)芽，種植第8頁/共11頁創(chuàng)新點 云南的黑籽南瓜遺傳資源非常豐富，具有許多優(yōu)良遺傳特性，目前還沒有關(guān)于其基因組大片段可轉(zhuǎn)化載體文庫的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化應用的報道。 本項目的創(chuàng)新之處，第一，首次用新型可轉(zhuǎn)化細菌人工染色體為載體構(gòu)建云南黑籽南瓜基因組大片段文庫。第9頁/共11頁 第二，探索性地用植物抗病基因的保守結(jié)構(gòu)域設計的簡并引物快速簡便地篩選文庫中黑籽南瓜的抗病基因同源片段的大片段克隆用于轉(zhuǎn)化，在大片段文庫的篩選上建立一種新方法。 第三，摸索利用黑籽南瓜染色體大片段轉(zhuǎn)化到黃瓜中獲得穩(wěn)定的“插入系”，為今后全面采用此方法有效快速地使黑籽南瓜全基因組以許多大片段分別進入黃瓜后形成一整套“插入系”而建立新方法。該套“插入系”將是