微生物實驗1(1)

1、微生物學(xué)與免疫學(xué)實驗(四)實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容n錄象：微生物學(xué)發(fā)展史錄象：微生物學(xué)發(fā)展史n細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu): 球菌、桿菌、螺形菌球菌、桿菌、螺形菌 莢膜、鞭毛、芽孢莢膜、鞭毛、芽孢n細(xì)菌的培養(yǎng)、生長現(xiàn)象、變異細(xì)菌的培養(yǎng)、生長現(xiàn)象、變異n示教：消毒滅菌器材和方法示教：消毒滅菌器材和方法n操作：操作：革蘭染色法革蘭染色法 細(xì)菌的基本形態(tài)細(xì)菌的基本形態(tài) 細(xì)菌是一類具有細(xì)胞壁的單細(xì)胞微生物，形細(xì)菌是一類具有細(xì)胞壁的單細(xì)胞微生物，形體微小，一般以微米（體微小，一般以微米（mm）作為測量單位。細(xì)菌作為測量單位。細(xì)菌按其外型可分為球菌、桿菌、螺形菌三大類。不按其外型可分為球菌、桿菌、螺形菌三大類。不同種

2、類的細(xì)菌大小不一，大多數(shù)球菌直徑約同種類的細(xì)菌大小不一，大多數(shù)球菌直徑約1m1m，桿菌長桿菌長2 2 5m5m，寬，寬0.30.3 1m1m。球菌球菌 ( coccus )桿菌桿菌( bacillus )螺形菌螺形菌(spiral bacterium)弧菌：一個彎曲弧菌：一個彎曲 螺菌：多個彎曲螺菌：多個彎曲細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu) 莢膜、鞭毛、芽胞、莢膜、鞭毛、芽胞、菌毛菌毛莢膜莢膜(capsule)(capsule) 細(xì)胞壁外的黏液性物質(zhì)細(xì)胞壁外的黏液性物質(zhì) 1 1、組成：多數(shù)為多糖，少數(shù)是蛋白質(zhì)、組成：多數(shù)為多糖，少數(shù)是蛋白質(zhì) 2 2、功能：、功能： A A 抗吞噬作用抗吞噬作用 -

3、重要毒力因子重要毒力因子 B B 粘附作用粘附作用 -與感染有關(guān)與感染有關(guān) C C 抗損傷作用抗損傷作用鞭毛鞭毛(flagellum)(flagellum) 菌體表面的細(xì)長并呈波狀彎曲的絲狀物。菌體表面的細(xì)長并呈波狀彎曲的絲狀物。 鞭毛的功能：鞭毛的功能： 1 1、運(yùn)動、運(yùn)動 2 2、與致病性有關(guān)，如穿過粘液層、與致病性有關(guān)，如穿過粘液層 3 3、細(xì)菌的分類鑒定，具有抗原性、細(xì)菌的分類鑒定，具有抗原性芽胞芽胞( (endosporeendospore, spore) G, spore) G+ +菌菌 1 1、形成：、形成： 內(nèi)因內(nèi)因芽胞基因決定芽胞基因決定 外因外因環(huán)境條件環(huán)境條件 2 2、結(jié)

4、構(gòu)：保存細(xì)菌全部生命必需物質(zhì)：、結(jié)構(gòu)：保存細(xì)菌全部生命必需物質(zhì)： 即完整的核質(zhì)、酶系統(tǒng)和合成菌體組分的結(jié)構(gòu)即完整的核質(zhì)、酶系統(tǒng)和合成菌體組分的結(jié)構(gòu) 3 3、特點(diǎn)：折光性強(qiáng)，壁厚，不易著色。、特點(diǎn)：折光性強(qiáng)，壁厚，不易著色。 芽胞的功能芽胞的功能 （1 1）對熱、干燥、輻射、化學(xué)消毒劑等不利因素）對熱、干燥、輻射、化學(xué)消毒劑等不利因素 的抵抗力強(qiáng)。的抵抗力強(qiáng)。 （2 2）鑒別細(xì)菌。）鑒別細(xì)菌。細(xì)菌的培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)n培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：人工配制而成的，專供微生人工配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合性營養(yǎng)物制品物生長繁殖使用的混合性營養(yǎng)物制品n按物理狀態(tài)分：按物理狀態(tài)分：（1）液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基

5、：未加任何凝固劑，：未加任何凝固劑， 用于大量擴(kuò)增細(xì)菌。用于大量擴(kuò)增細(xì)菌。（2）半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基：加入少量凝固劑（：加入少量凝固劑（0.3-0.5%瓊脂），瓊脂）， 用于觀察細(xì)菌動力和短期保存菌種。用于觀察細(xì)菌動力和短期保存菌種。（3）固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基：加入一定量凝固劑（：加入一定量凝固劑（1.5%瓊脂），瓊脂）， 用于細(xì)菌的分離、鑒定及菌種保存。用于細(xì)菌的分離、鑒定及菌種保存。 瓊脂斜面、瓊脂平板瓊脂斜面、瓊脂平板培養(yǎng)基分類培養(yǎng)基分類培養(yǎng)基分類培養(yǎng)基分類n按成分不同分：按成分不同分：（1）天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基：由天然有機(jī)物組成，如牛肉湯、：由天然有機(jī)物組成，如牛肉湯、牛奶、血清等

6、牛奶、血清等（2）合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基：是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化：是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、配制的培養(yǎng)基學(xué)物質(zhì)模擬合成、配制的培養(yǎng)基n按用途分：按用途分：（1 1）基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含細(xì)菌生長繁殖所需的基本營：含細(xì)菌生長繁殖所需的基本營 養(yǎng)物質(zhì)，如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。養(yǎng)物質(zhì)，如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。（2 2）營養(yǎng)培養(yǎng)基營養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊的營養(yǎng)物質(zhì)，如血瓊脂培養(yǎng)基。的營養(yǎng)物質(zhì)，如血瓊脂培養(yǎng)基。（3 3）鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：加入特定的能與某種細(xì)菌代謝：加入特定的能與某種細(xì)菌代謝產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)。產(chǎn)物發(fā)生反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)。

7、（4 4）選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：加入特殊化學(xué)物質(zhì)抑制某些細(xì)：加入特殊化學(xué)物質(zhì)抑制某些細(xì)菌生長，促進(jìn)另一些細(xì)菌生長。如菌生長，促進(jìn)另一些細(xì)菌生長。如SSSS平板平板。培養(yǎng)基分類培養(yǎng)基分類細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌的生長現(xiàn)象n細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象與其細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象與其形狀、結(jié)形狀、結(jié)構(gòu)、對氧氣需求程度構(gòu)、對氧氣需求程度等有關(guān)。等有關(guān)。細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌的生長現(xiàn)象n液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：n半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基： 細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌的生長現(xiàn)象混濁生長混濁生長有鞭毛細(xì)菌有鞭毛細(xì)菌觀察細(xì)菌的動力觀察細(xì)菌的動力無無鞭鞭毛毛細(xì)細(xì)菌菌線狀生長線狀生長n固體培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：細(xì)菌的生長現(xiàn)象細(xì)菌的生

8、長現(xiàn)象細(xì)菌的變異細(xì)菌的變異n形態(tài)結(jié)構(gòu)變異形態(tài)結(jié)構(gòu)變異: L型細(xì)菌（細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型型細(xì)菌（細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型 ） 鞭毛變異：鞭毛變異： HO變異變異n生理性狀變異：菌落變異：生理性狀變異：菌落變異： S R變異變異 毒力變異毒力變異 耐藥性變異耐藥性變異 鞭毛變異（鞭毛變異（HO變異）變異）n細(xì)菌的鞭毛在某些情況下（如細(xì)菌的鞭毛在某些情況下（如0.1%0.1%石炭酸）可以消失而變石炭酸）可以消失而變成沒有鞭毛的細(xì)菌。成沒有鞭毛的細(xì)菌。 鞭毛抗原（鞭毛抗原（H H抗原）抗原） 菌體抗原（菌體抗原（O O抗原）抗原）n有鞭毛的細(xì)菌由于鞭毛的動力，可在平板上形成有鞭毛的細(xì)菌由于鞭毛的動力，可在平板上形

9、成遷徙現(xiàn)象遷徙現(xiàn)象，菌落形似薄膜（德語菌落形似薄膜（德語hauchhauch意為薄膜），故稱意為薄膜），故稱H H菌落。菌落。 若若細(xì)菌失去鞭毛，只能在點(diǎn)種處形成不向外擴(kuò)展的單個菌落，細(xì)菌失去鞭毛，只能在點(diǎn)種處形成不向外擴(kuò)展的單個菌落，稱為稱為O O菌落（德語菌落（德語OhneOhne hauchhauch意為無薄膜）意為無薄膜）。（示教平板）（示教平板）n光滑型菌落光滑型菌落( (Smooth,SSmooth,S型型) ) 表面光滑有光澤，表面光滑有光澤，邊緣整齊。邊緣整齊。 粗糙型菌落粗糙型菌落( (RouthRouth, R, R型型) ) 表面粗糙而暗淡，表面粗糙而暗淡，邊緣不整齊。邊

10、緣不整齊。n不僅菌落形態(tài)發(fā)生變異，生理特性也改變，一般光不僅菌落形態(tài)發(fā)生變異，生理特性也改變，一般光滑型細(xì)菌毒力強(qiáng)；粗糙型細(xì)菌毒力減退或無毒力?；图?xì)菌毒力強(qiáng)；粗糙型細(xì)菌毒力減退或無毒力。 （示教平板）（示教平板）菌落變異（菌落變異（SR變異）變異）光滑型菌落光滑型菌落 粗糙型菌落粗糙型菌落菌落變異（菌落變異（SR變異）變異） 消毒消毒(disinfection)：殺死物體上殺死物體上病原微生物病原微生物的的 方法，并不一定能殺死芽胞或非病原微生物。方法，并不一定能殺死芽胞或非病原微生物。滅菌滅菌(sterilization)：殺滅物體上殺滅物體上所有微生物所有微生物的的 方法，包括殺滅細(xì)菌方

11、法，包括殺滅細(xì)菌芽胞芽胞在內(nèi)的全部病原微生在內(nèi)的全部病原微生 物和非病原微生物。物和非病原微生物。 消毒滅菌法消毒滅菌法抑菌抑菌(bacteriostasis)抑制體內(nèi)活體外細(xì)菌抑制體內(nèi)活體外細(xì)菌 的生長繁殖。的生長繁殖。防腐防腐(antisepsis)防止防止 或抑制體外細(xì)菌生或抑制體外細(xì)菌生 長繁殖的方法。長繁殖的方法。無菌無菌(asepsis)不存在活菌不存在活菌消毒滅菌法消毒滅菌法n物理消毒滅菌法：物理消毒滅菌法： 1）熱力滅菌法）熱力滅菌法 2）輻射殺菌法）輻射殺菌法 3）過濾除菌法）過濾除菌法n化學(xué)消毒滅菌法：化學(xué)消毒滅菌法： 消毒劑消毒劑示教：消毒滅菌器材示教：消毒滅菌器材干熱干

12、熱濕熱濕熱 一、熱力滅菌法一、熱力滅菌法 高溫殺滅細(xì)菌高溫殺滅細(xì)菌焚燒焚燒最徹底的滅菌方法最徹底的滅菌方法燒灼燒灼直接用火焰滅菌方法直接用火焰滅菌方法干烤干烤加熱加熱160 2160 2小時小時紅外線紅外線 產(chǎn)生高熱產(chǎn)生高熱干熱滅菌法干熱滅菌法濕熱滅菌法濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法最有效的滅菌方法最有效的滅菌方法 121.3 1530分鐘分鐘煮沸消毒法煮沸消毒法水煮水煮100 5分鐘分鐘(繁殖體繁殖體) 2小時小時(芽胞芽胞)流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法水蒸汽水蒸汽100 1530分鐘分鐘(繁殖體）繁殖體）間歇蒸汽滅菌法間歇蒸汽滅菌法反復(fù)多次流動蒸汽間歇加熱滅菌反復(fù)多次流動蒸汽間歇加

13、熱滅菌巴氏消毒法巴氏消毒法較低的溫度（較低的溫度（72 15s）殺滅致病菌殺滅致病菌濕熱滅菌與干熱滅菌的比較濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好原因原因1. 濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固2. 濕熱的穿透力比干熱大濕熱的穿透力比干熱大3. 濕熱的蒸汽有潛熱濕熱的蒸汽有潛熱二、輻射殺菌法二、輻射殺菌法 紫外線紫外線殺菌機(jī)理：殺菌機(jī)理：波長波長200300nm200300nm的紫外線具有殺菌作用的紫外線具有殺菌作用 干擾干擾DNADNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄紫外線穿透力較弱紫外線穿透力較弱不耐熱物品的表面消毒不耐熱

14、物品的表面消毒特特 點(diǎn)：點(diǎn)：應(yīng)用范圍：應(yīng)用范圍： 空氣消毒空氣消毒手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實驗室手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實驗室 三、濾過除菌法三、濾過除菌法用物理阻留的方法將液體或空氣中的用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去，以達(dá)到除菌目的細(xì)菌除去，以達(dá)到除菌目的濾菌器濾菌器 含有微細(xì)小孔含有微細(xì)小孔0.220.22微米，只允許液體或氣體微米，只允許液體或氣體過，而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過過，而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過 適用范圍適用范圍 血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌 濾濾菌菌過過程程 革蘭染色法革蘭染色法 材料材料 1. 1. 葡萄球菌與大腸桿菌的混合菌液。葡萄球菌與大腸桿菌的混合菌液。 2. 2. 革蘭染色液一套。革蘭染色液一套。 3. 3. 玻片、生理鹽水、接種環(huán)等。玻片、生理鹽水、接種環(huán)等。操作步驟操作步驟 【涂片涂片】 取載玻片取載玻片 接種環(huán)取混合菌液接種環(huán)取混合菌液1 1環(huán)涂片（直徑環(huán)涂片（直徑約約1cm1cm） 自然干燥自然干燥 固定（通過火焰三次）固定（通過火焰三次