實(shí)驗(yàn)一、分子生物學(xué)的基本操作及常用儀器的介紹

1、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1、掌握分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本方法和技能、掌握分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本方法和技能 2、熟悉分子生物學(xué)常見實(shí)驗(yàn)儀器的基本操作、熟悉分子生物學(xué)常見實(shí)驗(yàn)儀器的基本操作 3、了解分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)、了解分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn) 4、學(xué)會(huì)正確書寫定量實(shí)驗(yàn)報(bào)告、學(xué)會(huì)正確書寫定量實(shí)驗(yàn)報(bào)告二、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn)二、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的特點(diǎn) 1、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)主要應(yīng)用化學(xué)原理和方法所設(shè)計(jì)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)主要應(yīng)用化學(xué)原理和方法所設(shè)計(jì)的科學(xué)實(shí)驗(yàn)，也滲進(jìn)了一些相關(guān)學(xué)科的理論知識(shí)與的科學(xué)實(shí)驗(yàn)，也滲進(jìn)了一些相關(guān)學(xué)科的理論知識(shí)與方法。方法。 2、由于研究對象為生物體，所以標(biāo)本的來源不易，、由于研究對象為生物

2、體，所以標(biāo)本的來源不易，微量微量和和定量定量是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的一大特點(diǎn)。是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的一大特點(diǎn)。 3、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)往往涉及生物大分子和生物材料、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)往往涉及生物大分子和生物材料的檢測，因此取材常為生物體的組織器官，甚至是的檢測，因此取材常為生物體的組織器官，甚至是活的生物體。所以活的生物體。所以很難保證樣品、標(biāo)本的無菌性很難保證樣品、標(biāo)本的無菌性，要注意作好自身防護(hù)要注意作好自身防護(hù)。 4、與臨床醫(yī)學(xué)關(guān)系密切、與臨床醫(yī)學(xué)關(guān)系密切三、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則三、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 1、實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)桌凳勿亂涂寫刻畫；上課須統(tǒng)一穿白、實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)桌凳勿亂涂寫刻畫；上課須統(tǒng)一穿白大衣。這

3、也是為了同學(xué)門自身的衛(wèi)生與安全，因?yàn)閷?shí)大衣。這也是為了同學(xué)門自身的衛(wèi)生與安全，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)過程中會(huì)用到一些有毒或危險(xiǎn)試劑等。驗(yàn)過程中會(huì)用到一些有毒或危險(xiǎn)試劑等。 2、每次實(shí)驗(yàn)課前均要清點(diǎn)實(shí)驗(yàn)桌上自己面前的一套試、每次實(shí)驗(yàn)課前均要清點(diǎn)實(shí)驗(yàn)桌上自己面前的一套試管架上各種儀器是否齊備，如有破損，及時(shí)提出更換。管架上各種儀器是否齊備，如有破損，及時(shí)提出更換。 3、實(shí)驗(yàn)過程中，注意節(jié)約藥品試劑，節(jié)約水電。藥品、實(shí)驗(yàn)過程中，注意節(jié)約藥品試劑，節(jié)約水電。藥品試劑用后即蓋上，廢棄物品不能亂丟，需由值日生統(tǒng)試劑用后即蓋上，廢棄物品不能亂丟，需由值日生統(tǒng)一收集。一收集。 4、實(shí)驗(yàn)課后均要將用過的儀器試管進(jìn)行清洗，并整

4、理、實(shí)驗(yàn)課后均要將用過的儀器試管進(jìn)行清洗，并整理臺(tái)面。臺(tái)面。 四、基本操作四、基本操作 （一）儀器的清洗（一）儀器的清洗 1、一般玻璃儀器：如試管燒杯量筒三角瓶等，先用自、一般玻璃儀器：如試管燒杯量筒三角瓶等，先用自來水洗刷，用毛刷沾少許肥皂粉或去污粉洗刷；再用自來水洗刷，用毛刷沾少許肥皂粉或去污粉洗刷；再用自來水反復(fù)沖洗，去盡肥皂水或去污粉直至無泡沫，最后來水反復(fù)沖洗，去盡肥皂水或去污粉直至無泡沫，最后用蒸餾水淋洗用蒸餾水淋洗23次，干燥備用。次，干燥備用。 2、做定量實(shí)驗(yàn)或要求嚴(yán)格時(shí)，除了用去污劑外，還需、做定量實(shí)驗(yàn)或要求嚴(yán)格時(shí)，除了用去污劑外，還需以熱洗液洗滌一次（或冷洗液浸泡過夜），而

5、后再用蒸以熱洗液洗滌一次（或冷洗液浸泡過夜），而后再用蒸餾水淋洗餾水淋洗23遍。洗液由濃硫酸遍。洗液由濃硫酸重鉻酸鉀重鉻酸鉀水按一定水按一定比例根據(jù)不同需要配成。比例根據(jù)不同需要配成。3、比色杯：用畢立即用自來水反復(fù)沖洗，洗不干凈、比色杯：用畢立即用自來水反復(fù)沖洗，洗不干凈時(shí)，用稀鹽酸沖洗，再用自來水沖，勿用試管刷或時(shí)，用稀鹽酸沖洗，再用自來水沖，勿用試管刷或粗糙的布或紙擦。粗糙的布或紙擦。4、對于新使用的玻璃儀器，其表面附有堿質(zhì)，可先、對于新使用的玻璃儀器，其表面附有堿質(zhì)，可先用肥皂水刷洗，再用自來水沖凈后，需用用肥皂水刷洗，再用自來水沖凈后，需用12稀稀鹽酸浸泡過夜，再用自來水反復(fù)沖洗，蒸

6、餾水淋洗。鹽酸浸泡過夜，再用自來水反復(fù)沖洗，蒸餾水淋洗。5、上述所有玻璃一起清洗干凈后，以倒置后器壁不、上述所有玻璃一起清洗干凈后，以倒置后器壁不掛有水珠為干凈標(biāo)準(zhǔn)。掛有水珠為干凈標(biāo)準(zhǔn)。（二）吸量管的使用與選擇（二）吸量管的使用與選擇1、吸管為精密吸量器，其規(guī)格有：、吸管為精密吸量器，其規(guī)格有：0.1ml、0.25ml、1ml、2ml、5ml、10ml等，有的吸量管上有兩個(gè)環(huán)，上面的數(shù)字標(biāo)示最等，有的吸量管上有兩個(gè)環(huán)，上面的數(shù)字標(biāo)示最大體積，下面的是最小分刻度體積。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇合大體積，下面的是最小分刻度體積。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，選擇合適規(guī)格的吸量管。如吸取適規(guī)格的吸量管。如吸取1.5ml溶液

7、，以選溶液，以選2 ml為宜；若用為宜；若用1 ml吸兩次，則會(huì)增大誤差。另外還應(yīng)注意，在一組實(shí)驗(yàn)中，吸兩次，則會(huì)增大誤差。另外還應(yīng)注意，在一組實(shí)驗(yàn)中，吸量同一種試劑，應(yīng)盡量選用一支移液管，以減少系統(tǒng)誤差。吸量同一種試劑，應(yīng)盡量選用一支移液管，以減少系統(tǒng)誤差。2、注意吸量管刻度方向，有讀數(shù)從上而下，也有從下而上的。、注意吸量管刻度方向，有讀數(shù)從上而下，也有從下而上的。3、執(zhí)吸量管時(shí)，不要觸及吸管尖端，盡量拿上部，刻度朝向自、執(zhí)吸量管時(shí)，不要觸及吸管尖端，盡量拿上部，刻度朝向自己，以食指堵住管口（手指不能沾水），控制流量。己，以食指堵住管口（手指不能沾水），控制流量。4、要將吸量管插入到適當(dāng)深度

8、，以免溶液吸入吸耳球內(nèi)或吸空，、要將吸量管插入到適當(dāng)深度，以免溶液吸入吸耳球內(nèi)或吸空，不可用嘴吸。不可用嘴吸。5、讀數(shù)時(shí)，使視線、刻度線及液面凹面三者在同一水平面上。、讀數(shù)時(shí)，使視線、刻度線及液面凹面三者在同一水平面上。6、移液時(shí)，將吸管從液體中取出時(shí)，尤其是粘滯性大的液體時(shí)，、移液時(shí)，將吸管從液體中取出時(shí)，尤其是粘滯性大的液體時(shí)，必須用濾紙將吸管外壁擦干，放液時(shí)，將管尖輕抵容器內(nèi)壁，必須用濾紙將吸管外壁擦干，放液時(shí)，將管尖輕抵容器內(nèi)壁，慢慢放入。慢慢放入。7、對于管尖液體的處理是吸量誤差的主要來源之一：一般、對于管尖液體的處理是吸量誤差的主要來源之一：一般1ml以下的均要用吸耳球?qū)⒐芗獾囊后w

9、吹入容器中。而以下的均要用吸耳球?qū)⒐芗獾囊后w吹入容器中。而1ml以上以上的只有標(biāo)有的只有標(biāo)有“快、吹快、吹”字樣，才需要用吸耳球吹。字樣，才需要用吸耳球吹。8、為了避免管尖殘液處理所帶來的誤差，在吸取溶液體積小于、為了避免管尖殘液處理所帶來的誤差，在吸取溶液體積小于吸量管最大吸量體積時(shí)，一般先吸到最大體積，然后放液到吸量管最大吸量體積時(shí)，一般先吸到最大體積，然后放液到適當(dāng)體積刻度。適當(dāng)體積刻度。9、一支吸量管只能吸一種溶液。、一支吸量管只能吸一種溶液。10、吸過濃硫酸等有腐蝕性液體的吸量管要在用后及時(shí)清洗；、吸過濃硫酸等有腐蝕性液體的吸量管要在用后及時(shí)清洗；吸過血液、血清等粘稠性液體的吸量管，

10、用后也要及時(shí)沖洗，吸過血液、血清等粘稠性液體的吸量管，用后也要及時(shí)沖洗，以免凝固而日后不易清洗。以免凝固而日后不易清洗。（三）溶液的混勻（三）溶液的混勻1、旋轉(zhuǎn)混勻法：旋轉(zhuǎn)混勻法：手持容器作離心旋轉(zhuǎn)。該法適用于未盛滿液體手持容器作離心旋轉(zhuǎn)。該法適用于未盛滿液體的試管或小口器皿，如錐形瓶。旋轉(zhuǎn)試管時(shí)宜用手腕旋轉(zhuǎn)。的試管或小口器皿，如錐形瓶。旋轉(zhuǎn)試管時(shí)宜用手腕旋轉(zhuǎn)。2、指彈混勻法：指彈混勻法：用手持容器，手腕用力前后搖動(dòng)使內(nèi)容物混勻；用手持容器，手腕用力前后搖動(dòng)使內(nèi)容物混勻；還可用左手持試管上端，用右手指輕彈試管下部，使管內(nèi)溶還可用左手持試管上端，用右手指輕彈試管下部，使管內(nèi)溶液作旋渦運(yùn)動(dòng)；或用左

11、手持試管上端，在右手掌上打擊的方液作旋渦運(yùn)動(dòng)；或用左手持試管上端，在右手掌上打擊的方法以混勻內(nèi)容物。法以混勻內(nèi)容物。3、顛倒混勻法：顛倒混勻法：適用于有塞的容量瓶及有塞試管內(nèi)容物的混勻。適用于有塞的容量瓶及有塞試管內(nèi)容物的混勻。一般試管內(nèi)容物混勻時(shí)，可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按一般試管內(nèi)容物混勻時(shí)，可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口顛倒混勻。住管口顛倒混勻。4、吸量管混勻法：吸量管混勻法：用吸量管將溶液反復(fù)吸放數(shù)次，使溶液充分用吸量管將溶液反復(fù)吸放數(shù)次，使溶液充分混勻。適用于量少且無沉淀的液體混勻。適用于量少且無沉淀的液體5、攪拌混勻法：攪拌混勻法：適用于大口徑容器燒杯、量筒等所盛溶液的混

12、適用于大口徑容器燒杯、量筒等所盛溶液的混勻，如固體試劑的溶解和混勻。勻，如固體試劑的溶解和混勻。五、分光光度計(jì)的使用五、分光光度計(jì)的使用 1、通電源，打開比色槽暗盒（關(guān)閉光門），電表、通電源，打開比色槽暗盒（關(guān)閉光門），電表指針處機(jī)械指針處機(jī)械“0”位，預(yù)熱位，預(yù)熱20分鐘。分鐘。 2、選擇所需單色光波長和相應(yīng)放大靈敏擋（均已、選擇所需單色光波長和相應(yīng)放大靈敏擋（均已調(diào)好，勿動(dòng)），調(diào)好，勿動(dòng)）， 3、比色槽蓋打開時(shí)調(diào)、比色槽蓋打開時(shí)調(diào)“0”。 4、蓋上比色槽暗盒，調(diào)、蓋上比色槽暗盒，調(diào)100%（用空白對照管）。（用空白對照管）。 5、拉動(dòng)比色槽拉桿，讀取一系列、拉動(dòng)比色槽拉桿，讀取一系列A值。

13、值。分光光度計(jì)使用時(shí)注意事項(xiàng)：分光光度計(jì)使用時(shí)注意事項(xiàng)：1、拿比色杯時(shí)，應(yīng)取比色杯兩毛面，用完后及時(shí)清洗、拿比色杯時(shí)，應(yīng)取比色杯兩毛面，用完后及時(shí)清洗比色杯，避免用手指直接接觸或用粗糙的紙擦拭透光比色杯，避免用手指直接接觸或用粗糙的紙擦拭透光面，以免弄臟或磨毛。面，以免弄臟或磨毛。2、向比色杯中倒液體時(shí)，注意勿過多或過少，一般占、向比色杯中倒液體時(shí)，注意勿過多或過少，一般占2/33/4體積，以和槽架的橫檔持平為準(zhǔn)。比色杯倒體積，以和槽架的橫檔持平為準(zhǔn)。比色杯倒完液后，用擦鏡紙將外杯身液體擦干。（由下往上，完液后，用擦鏡紙將外杯身液體擦干。（由下往上，以免將杯口液體帶出）。以免將杯口液體帶出）。3、不準(zhǔn)將比色槽拿出。比色時(shí)不要將比色杯放置在儀、不準(zhǔn)將比色槽拿出。比色時(shí)不要將比色杯放置在儀器上，以免液體漏出腐蝕儀器。器上，以免液體漏出腐蝕儀器。4、不測量時(shí)要打開暗室蓋，以確保光門關(guān)閉，以、不測量時(shí)要打開暗室蓋，以確保光門關(guān)閉，以免加快光敏元件的老化（比色計(jì)暗