生化自動化與標準化ppt課件

1、2022/7/101自動生化分析檢測方法的現(xiàn)狀及進展 蚌醫(yī)一附院檢驗科李興武.2022/7/102一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測定方法三、校準與質(zhì)控四、測定工程間的順序安排.2022/7/103一、生化分析儀的現(xiàn)狀自動化釋義：自動化即由機械化的儀器設(shè)備取代人的手工操作過程。.2022/7/104主要組成：計算機前處置反響模塊監(jiān)測計算模塊機械手模塊.2022/7/105.2022/7/106分類：延續(xù)流動式或管道式分立式常用離心式干片式急診常用.2022/7/107功能：隨計算機與電子技術(shù)的開展：向通用化、全自動、微量化、組合式模塊方向開展。即：測定技術(shù)與反響類型增多、測試速度快、通道多

2、、軟件功能強、自動化程度高、樣品與試劑用量少、人工干涉少。.2022/7/108功能：采用生物技術(shù)與機電控制技術(shù)有機交融，集生物技術(shù)、機械設(shè)計、精細儀器、工業(yè)控制、電機技術(shù)、傳感技術(shù)、通訊技術(shù)、計算機技術(shù)于一體自動化分析儀任務(wù)站.2022/7/109任務(wù)站：采用模塊化設(shè)計的思緒，實現(xiàn)良好的可擴展性。結(jié)合條碼技術(shù)，再經(jīng)過實驗室信息系統(tǒng)與醫(yī)院信息系統(tǒng)相連，可到達整個數(shù)據(jù)共享，乃至遠程共享(如獨立實驗室)。.2022/7/1010全實驗室自動化(Total Laboratory Automation, TLA)是指將臨床實驗室相互有關(guān)或互不相關(guān)的自動化儀器串聯(lián)起來,構(gòu)成流水線作業(yè)的組合,構(gòu)成大規(guī)模的

3、全檢測過程的自動化.上世紀80年代末，日本Dr.Sasaki建立了世界上第一個組合式自動化實驗室.2022/7/1011全實驗室自動化表達以下幾個方面：1.提升快速報答結(jié)果的才干2.將檢驗報告的誤差減少到最?。簛碓从跇颖镜?0%，來源于分析的不到30%。3.全面提升臨床檢驗的管理.2022/7/1012生化分析儀在國內(nèi)的運用1.1980-1984：半自動及小型全自動為主，以美國儀器為主，國內(nèi)開場研制試劑2.1984-1990：型號多樣，日本儀器增多，與自動化儀器配套的試劑盒投入消費3.1990-今：高速高質(zhì)量的儀器，一些方法學淘汰，從大醫(yī)院開場逐漸建立Lis系統(tǒng)，實現(xiàn)數(shù)據(jù)共享，逐漸實現(xiàn)全實驗室

4、自動化.2022/7/1013未來實驗室組織及檢驗手段將向兩極化開展：一方面是實驗室全自動化或全程自動化，自動化儀器將生化、免疫、血液、尿液及藥物檢測等合為一體。另一方面是實驗室儀器的小型化，快速、即時、簡易的檢驗手段，用于現(xiàn)場檢驗、床邊檢驗、醫(yī)師診所和家庭。.2022/7/1014一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測定方法三、校準與質(zhì)控四、測定工程間的順序安排.2022/7/1015二、生化分析儀的測定方法終點法 一點終點法 二點終點法 免疫比濁法 雙波長法.2022/7/1016一點終點法的設(shè)置：以R和S混合之前的空氣空白、水空白或試劑空白的吸光度值為測定計算基點，以反響到達平衡的吸光度

5、讀數(shù)減去空白讀數(shù)，校準曲線經(jīng)過零點且成直線，對于反響速度快的多用：如TP、ALB等二、測定方法.2022/7/1017二、測定方法一點終點法反響曲線Al T時間AS+R(吸光度.2022/7/1018二點終點法的設(shè)置：常用單試劑分析：當測定波長與干擾物的吸收光譜有重疊時(如脂血、溶血、黃疸)，消除樣本空白的干擾。如GLU 500nm,Hb500nm(整個過程OD不變),經(jīng)過雙波長可消除其干擾。二、測定方法.2022/7/1019二點終點法的設(shè)置：常用雙試劑法：除可消除樣本空白的干擾外，還可消除內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。二、測定方法.2022/7/1020AmTAR2AlS+R1(吸光度時間兩點終點Ax

6、=樣本空白A2 - kAl液量校正系數(shù)k =S+VlS+Vm二、測定方法.2022/7/1021免疫比濁法經(jīng)過物質(zhì)對光的散射來測定物質(zhì)含量的方法。散射比濁：特定蛋白分析儀透射比濁：自動生化分析儀通常作兩點終點法分析，多采用多點校準。運用：用Ab測定Ag主要為微量蛋白：IG、C、APOA/B、ASO、RF、CRP等，要求Ab過量，此時Ag-Ab復合物的生成量隨Ag的添加而遞增，光散射強度與抗原量成正比。二、測定方法.2022/7/1022雙波長法消除樣品中對測定有干擾的物質(zhì)的影響；1.脂血：吸收光譜300600nm呈下降趨勢2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm吸收峰3.膽紅素

7、：300500nm有吸收峰可見它們的吸收峰都較寬，且同測定波長有重疊景象。二、測定方法.2022/7/1023輔助波長的選擇：根據(jù)測定波長選擇輔助波長，要求干擾物質(zhì)在測定波長同輔助波長有一樣的吸光度。如鉬酸銨法測P3用340nm，而Hb在340及380nm均有較高吸收峰，選380nm作為輔助波長。二、測定方法.2022/7/1024延續(xù)監(jiān)測法屬于動態(tài)監(jiān)測法，或叫速率法，適用酶活性和代謝產(chǎn)物檢測，測定產(chǎn)物生成或底物耗費速度，多有酶參與，此法測酶的活力而不是酶的濃度質(zhì)量。在零級反響期單位時間內(nèi)的吸光度變化(反響速率A/min)才與酶活力呈正比。二、測定方法.2022/7/1025測定時間的選擇：監(jiān)

8、測時間應(yīng)根據(jù)所用儀器不影響檢測速度和結(jié)果的準確性選在時間反響進程曲線的線性期。通常： 延遲時間：30-60秒 監(jiān)測時間：120秒二、測定方法.2022/7/1026酶活力計算有兩種方法1、絕對法：酶活力(U/L)=A(反響液體積/樣品體積) (1000/消光系數(shù))2、相對法：(U/L或mmol/L)=A(測定)/A(規(guī)范)規(guī)范物的活力或濃度二、測定方法.2022/7/10271.延續(xù)監(jiān)測法 即零級反響速率法,亦稱斜率法在較長反響時間區(qū)段內(nèi)(90-180秒)，每隔一定時間(530秒)讀取一次吸光度值，至少讀取4點，得到3個以上A，最后算出反響速率A/min。二、測定方法.2022/7/10282

9、.兩點速率法主要用于其反響過程不成線性，這樣只留意其反響的起始點和終止點，而忽視其中間過程的線性變化。如：測定苦味酸法測Cr，反響過程中Vit C、丙酮酸、蛋白質(zhì)等均可與苦味酸生成紅色化合物而干擾反響，通常選擇1min內(nèi)的兩點進展測定。二、測定方法.2022/7/1029AlTAS+R1R2A2(吸光度時間速率法A/min=(A2-A1 )-(空白)/(t2-t1)二、測定方法.A2TAS+R1A1R2(吸光度時間兩點速率 Ax=A2-A1tt.2022/7/1031速率B法1.一個通道內(nèi)一次進展兩項反響相關(guān)的速率法測定2.用于干擾或及樣品空白自動補償：在第一反響(干擾反響)不斷維持線性的前提

10、下，可以從第二反響(主反響)速率中扣除第一反響速率的延續(xù)影響。如用于消除膽紅素轉(zhuǎn)化為膽綠素吸光度下降、對肌酐苦味酸法測定的負干擾等二、測定方法.2022/7/1032雙項同測法：指在不同時間向同一個比色杯參與幾種試劑，(一個通道內(nèi)一次進展兩項反響相關(guān)的終點法) 。比好像測游離脂肪酸和甘油三酯。二、測定方法.3.空白校正：a.Ax=某點吸光度-比色杯水空白b.Ax=(終點測定吸光度-終點空白吸光度)一(始點測定吸光度-始點空白吸光度)c.終點法(帶試劑空白) =終點吸光度-R1點吸光度(試劑空白)d.終點法(不帶試劑空白) =終點吸光度-比色杯水空白e.兩點法(本身空白) =(加R2后測定點讀數(shù)

11、-R1點讀數(shù))-(加R2前測定點讀數(shù)-R1點讀數(shù))2022/7/1033二、測定方法.2022/7/1034一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測定方法三、校準與質(zhì)控四、測定工程間的順序安排.2022/7/1035三、校準與質(zhì)控校準：1.包括設(shè)備本身的校準如波長、溫度、加樣量、空白吸光度等2.測定工程的校準：是常規(guī)的任務(wù)內(nèi)容.工程的校準：多數(shù)工程的測定,其濃度同吸光度變化根本上成線性關(guān)系,選擇低、中、高三個校正點可獲得稱心的準確度。假設(shè)只設(shè)置一個校正點,盡量選擇一個中值校正點。校準.2022/7/1037校準品的問題：測定系統(tǒng)應(yīng)包括測定原理、試劑、儀器、校準品四要素1.校準品與方法、試劑、儀器

12、是相關(guān)聯(lián)的，作用是減少系統(tǒng)誤差，用人血清基質(zhì)，最好采用配套運用，或進展區(qū)域性的一致，有調(diào)查顯示運用一樣校準液后其不同類型儀器測定結(jié)果更接近靶值2.選擇適宜的校準品，包括數(shù)目、類型和濃度校準.3.有能夠校準品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì) 4.校準頻度：通常至少6個月進展一次5.當改換試劑或不同的批號時；質(zhì)控反映出異常的趨勢或偏移；儀器或者檢驗系統(tǒng)進展一次大的預防性維護或者改換了重要部件 6.必需有校準方案：有記錄和分析7.不同廠家消費的定值質(zhì)控血清靶值之間有的相差較大，提示不能用定值質(zhì)控血清替代校準品作校準用 .2022/7/1039線性校準方法K因數(shù)法兩點線性多點線性校準.2022/7/1040

13、K因數(shù)法主要用于酶活性的測定a) 實際K值 b) 實測K值 c) 廠家給的K值 d) 校準K值 校準.2022/7/1041校準K因數(shù)法(一點法)t2C=K*(A2-A1)/(t2-t1)A2t1A1(S1).2022/7/1042校準C2CnAxCxAsS1ABSC1As多點線性36個校準品經(jīng)線性一次回歸制成任務(wù)曲線.2022/7/1043校準非線性校準方法用于免疫比濁等測定常用Logit-logxpExponrenalSplineLinear Graph.2022/7/1044校準Logit-logxp(對數(shù)方法C1C2CxC3CnBA2A3AnAx.2022/7/1045校準Exp(指數(shù)

14、涵數(shù))C1BC2A2A3C3CxCnAxAn.2022/7/1046校準Spline(樣條涵數(shù)C1C2CxCN-1CNBC3A2A3AxAN-1AN.質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控：對儀器的反復性進展監(jiān)控，采用定值或非定值，做標本前或中間做，繪圖，對失控進展分析記錄，查找緣由。可直接傳入LIS系統(tǒng)，還可經(jīng)過網(wǎng)絡(luò)進展遠程質(zhì)控及數(shù)據(jù)圖形的上傳。.2022/7/1048室間質(zhì)評采用PT方案同一質(zhì)評工程延續(xù)三次中有兩次PT80%，那么該工程為不稱心現(xiàn)場質(zhì)評.2022/7/1049一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測定方法三、校準與質(zhì)控四、測定工程間的順序安排.四、測定工程間的順序安排生化分析儀多采用一根針汲取試劑,在

15、汲取不同檢測工程的試劑之間僅有一個短暫的水沖洗的過程,假設(shè)此過程無法到達徹底沖洗的目的,那么能夠會呵斥前后檢測工程之間的交叉污染。.2022/7/1051四、測定工程間的順序安排ALTIFCC，ASTIFCC試劑中含有高活力LDH成分，有能夠會對LDH 的測定帶來干擾。ALPIFCC，CKNAC，CK-MBNAC，CO2PEPC，AMYEPS等試劑中含Mg2+有，能夠會對其后Mg的測定帶來干擾。.2022/7/1052CHEBUTYRYLTHIOCHOLINE，CHOCHODPAP，GLUGODPAP，UAURICASE，HBDHDGKC等試劑運用磷酸緩沖液，也能夠會對P的測定帶來干擾。CK，CK-MB試劑中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的HK反響過程，因此能夠?qū)LU的測定帶來干擾。四、測定工程間的順序安排.2022/7/1053四、測定工程間的順序安排.2022/7/1054四、測定工程間的順序安排.2022/7/1055四、測定工程間的順序安排.2022/7/1056四、測定工